This project was funded by ARC grant DP0986021 and NHMRC grant 585442. ABB is supported by an ARC Future Fellowship (FT140100452). JAP is supported by an iMQRES scholarship awarded by Macquarie University and by a DAAD-Doktorandenstipendium awarded by the German Academic Exchange Service. JMD is supported by CNRS and University Paul Sabatier.

Harnessed Arılar 1. İlaç İdaresi <ol><li> Oral tedavi <ol><li> 500 ml su ile sükroz 257 g karıştırılarak 1.5 M sukroz çözeltisi hazırlayın (kaynar su içinde sükroz bu miktar erimesi daha kolaydır). kullanılana kadar 4 ° C &#39;de sükroz solüsyonu saklayın. NOT: Sakaroz çözüm bazı mikroorganizmalar için çok misafirperver bir ortam sağlar ve böylece kolayca kontamine ve arılar için tatsız hale gelir. Toplu sukroz çözeltisi bölünüp kullanana kadar -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Uygun bir ilaç dozuna karar (aşağıdaki tartışma bölümünde ele alınmıştır nasıl elde) ve örneğin, 20 ug sunmak için (tercih edilen ilaç dozu 20 uL içinde eritildi şekilde sükroz solüsyon bir çözelti hazırlanmıştır, bir ilacı seyreltik 1 mg / ml oranında). Kablo demeti arı Felsenberg diğ göre yöntem. (2011) 16. O arılar artık vurguladı emin olmak için en az 12 saat önce ilaç tedavisine bu adımı yapmakİlaç çözüm sunulduğunda sokmak gelen ut. NOT: Daha fazla tutarlı sonuçlar için, O / N (34 ° C ve% 70 nemde bir kuluçka harnessed arıların koyarak) arıları açlıktan en iyisidir. </li><li> bir mikropipet kullanarak, bir harnessed arı antenine 1.5 M sukroz bir damla su dokunun. hortum uzatıldığında, arı burnumun doğrudan ilaç içeren 1.5 M sukroz 20 ul damlacık dokunun. arı her şeyi tüketir emin olun. araç kontrolü olarak eklenen ilaçlar olmadan 1.5 M sükroz çözeltisi kullanın. NOT: sakaroz solüsyonu miktarı deneysel planlarına dayanarak ayarlanması gerekebilir. iştah açıcı klima amaçlanan ise, eğitim hemen önce arıları beslemek arıların tepki engel olacaktır. </li><li> Atın veya sakkaroz tüm tüketmeyen arıları bir kenara koyun. NOT: arıların çok sayıda sakaroz çözeltisini içmek için başarısız olursa, beslenme programı ayarlanması gerekebilir. </li></ol></li><li> Toraks içine enjeksiyon <ol><li> Aşağıdaki gibi bal arısı Ringer&#39;a 17 ilaç hazırlayın: <ol><li> Karıştırın ve otoklav 7.45 gr NaCl, 0.448 g KCI, 0.812 g MgCI2, 0.735 g CaCl2, 54.72 g sakroz, 4.95 g D-glikoz, su ve 1000 ml 2.48 g HEPES. kolayca kontamine olarak Zil saklarken dikkatli olun. kullanılana kadar -20 ° C&#39;de kısım ve mağaza Ringer. </li><li> Ringer çözeltisi içinde ilaç çözülür ve daha sonra istenen miktarda 5 ul içinde mevcut olacak şekilde seyreltin. 1 ug / ml bir nihai çözelti Ringer 1000: arı bir ilacın 5 ug ile muamele edilmesi durumunda, bir örnek olarak, 1 gr, ilk 1 seyreltilmeden önce Ringer 1 ml çözündürülebilir. Not: Alternatif olarak, ticari olarak temin edilebilir, PBS (fosfat tamponlu Salin) kullanılarak Ringer çözeltisi kullanılabilir. </li></ol></li><li> iki ucu keskin jilet köşesini kopuşarak Microscalpel yapınBir bıçak tutucu. keskin bir bitiş noktası ile güzel bir bıçak yapar, böylece bir bıçak tutucu bıçak parçası takın. </li><li> Bir stereomikroskop altında, dikkatle yanında bir arı toraks arka kanat sürecine, sadece skutelumdan üzerinde 2 mm delik için Microscalpel kullanın. Bu uçuş kasları zarar edebileceğiniz gibi çok derin kesme kaçının ve kanat menteşeleri önlemek için dikkatli olun. kütikül kanadı daha sonra yaralanma sitesi kapatmak için katlanabilir, böylece İdeal olarak, sadece, üç tarafı kesin. </li><li> toraks deliğin üstünde ilaç içeren bir mikropipet, mevduat 5 μlL Ringer (veya PBS) kullanarak. Dikkatle tüm damla hemolimf emilir sağlamak için mikroskop altında monitör. bir taşıt kontrolü olarak Zil (veya PBS) kullanın. </li><li> Mümkünse, delik üzerine manikür kanadı hareket ettirin. 5-10 saat sonra yeniden bağlayın ve mühür olacak. NOT: Bu tekniğin bir alternatif olarak, daha küçük, açıldıktan sonra bir cam şırınga kullanılarak toraksa ul doğrudan 1 enjektebir şırınga iğnesi ile frenum (scutellum arka bölgesinde enine çizgi) ortasına LL deliği (çap: 0.6 mm, G: 23). Bu ilk neşter ve enjeksiyon yerinde küçük ile toraks kesmek için gereğini circumvents, ancak bu yöntem maruz enjeksiyon yerinde bırakacaktır. </li></ol></li><li> ocellus enjeksiyon NOT: Bu hemolimf içine, baş kapsül boyunca moleküllerini vermek için uygun olan bir yöntemdir. <ol><li> 1.2.1&#39;deki gibi ilaçların hazırlanması, ancak istenen doz Ringer veya PBS ile 1 ul içinde ihtiva edilecek şekilde ilaç konsantrasyonları ayarlayın (daha az hacimli toraks yoluyla daha basit göz delikten absorbe edilebilir). </li><li> 1.2.2 gibi Microscalpel hazırlayın. Bir stereomikroskop altında, balmumu ile boyun çatlak doldurarak yerinde bir harnessed arı başını kilitleyin. Zarar anten koku reseptörleri veya i tabi tutulabilen diğer hücreler önlemek için düşük sıcaklıkta eriyen bir balmumu (örn diş balmumu) kullanarakdavranış (örneğin, koku öğrenme) değerlendirilmesi için mportant. Sonra dikkatlice mercek altında microscalpel ucu sokarak medyan ocellus lensini çıkarıp hafifçe baş kapsülü serbest lensi bölünürler. NOT: hareketini önlemek için anten üzerinde dikkatle balmumu yerleştirmek de mümkündür. </li><li> Dikkatle ocellus delik üzerine ilaç pipetle. Tüm kafa kapsül alınır kadar bekleyin. antenlerden diş balmumu çıkarın ve arı deneysel prosedür devam etmeden önce bir süre dinlenmeye bırakın. bir taşıt kontrolü olarak Zil (veya PBS) kullanın. </li></ol></li><li> Ocellar yolu içine enjeksiyon NOT: ocellar yolu büyük lifler içeren, merkezi beynin 18 en bölgelerine bağlayan. Bu tedavi yöntemi, yalnızca beyin bileşiklerin uygulanması, ancak beynin belirli alt bölgelerini hedef değil kılar. <ol><li> 1.3.2 gibi arı hazırlayın. ve t medyan ocellus lensini çıkarın1.3.3 gibi microscalpel ip. NOT: Bu enjeksiyon öncesinde 2 saat kadar yapılabilir. bizim deneyime dayalı, beslenen arılar açlıktan arılar daha bu ameliyatı ile başa çıkmak için daha iyi edebiliyoruz </li><li> Küçük bir göstergesi ile teçhiz edilmiş 10 ul bir cam şırınga doldurun (örneğin, 33, çap: 210 um) bir ilaç solüsyonu ile iğne 1.3.1 gibi hazırlanmıştır. </li><li> Manuel bir mikromanipülatör kullanarak, 50 um bir derinliğe kadar kafa kapsüle ocellar retina boyunca şırınga ucu yerleştirin ve solüsyonun 250 NL enjekte edilir. </li><li> Kullanımdan sonra, daha sonra damıtılmış su şırınga% 75 etanol ile 3 kez 3 kez yıkayın. </li></ol></li><li> Özellikle beyin yapıları mikroenjeksiyon Not: Yukarıda belirtilen sistematik tedavilere ek olarak, belirli bir beyin yapılarına microinjections gerçekleştirmek mümkündür. etkilenmeyen diğerleri bırakarak bu bir veya daha fazla beyin bölgelerinde farmakolojik müdahale edilebilmesini sağlar. bu çalışırBeyin ön beyin yüzeyinin (örneğin, antennal lob, mantar vücut kalikslerin veya dikey lob veya optik lob) den tanımak kolaydır bölgelerde, ancak diğer bölgelerle iyi hedeflenmiştir. Oryantasyon (ön / arka, dorsal / ventral) Neuraxis 19 daha ziyade, vücut eksenine ifade ettiğini unutmayın. <ol><li> Bir floresan ekleme 1.2.1&#39;deki gibi aynı şekilde Ringer veya PBS ilacın hazırlanması (örneğin, 0.5 mg / ml dekstran, Alexa 546 veya 568 fluor) ya da nonfluorescent boya (örneğin, 1 mM metilen mavisi). NOT: Deney (beyin diseksiyon sonrasında konfokal mikroskopi kullanılarak) bittikten sonra nonfluorescent boyalar deney sırasında doğrudan izlenmesine olanak ise floresan boya ilavesi, enjeksiyon yerinin doğrulama sağlayacaktır. </li><li> Standart tutuş için (bir elektrot çektirmenin sahibi kelepçelere 1.0 mm doğru çap cam kılcal damarları eklemek, enjeksiyon için cam pipetler yapmaker malzemeler listesinde belirtilen mikroenjektör) dahil. yaklaşık 0.5 cm uzunluğunda ucu üretmek için çekme ve ısı ayarlarını yapın (ayarlar aynı modeli kullanılsa bile, her çektirmesi için farklı olacaktır). Not: İdeal olarak, iki pipetler hem de kullanılabilir, böylece, aynı uzunluğa ve şekle sahip olmalıdır, bir cam çıkardı. </li><li> Bir stereomikroskop altında, oküler sokulan bir mercek ağı ile ilgili bir ölçek kullanılarak görsel tahmin göre, yaklaşık 10-15 um bir dış çapa elde etmek için ipuçları bölünürler. ölçekte adımlar üreticisi tarafından tanımlanır ve kullanılan büyütme için düzeltilebilir. </li><li> Ardından, enjekte etmek solüsyonu ile cam pipetler doldurun. filamentler cam kılcal damar kullanılması halinde, aksi Microloader ipuçlarını kullanarak ucu dolgu, ilaç çözeltisi içine arka tarafını yerleştirerek pipet doldurun. </li><li> manuel veya elektronik mi tarafından kontrol edilen bir mikroenjektör kılcal tutucu içine doldurulmuş cam pipet yerleştirincromanipulator. </li><li> (Hedeflenen beyin yapısı boyutuna bağlı olarak, 0.5-2 nl) istenen hacim enjekte Mikroenjektör kalibre. Bunun için, mineral yağ ihtiva eden küçük bir Petri kabı içine doğrudan enjekte etmek ve mercek ağı ile damlacığın çapı ölçülür. istenilen ses ulaşana kadar ayarlarını değiştirin. </li><li> Üç kesim ile, Microscalpel kullanarak, baş kapsül ön kısmında bir açıklık kesilmeden önce, 1.3.2 gibi yumuşak diş mumu kullanarak harnessed arı başını düzeltmek: sadece medyan ocellus altında bir (ventral), bir de anten üzerinde sağ ya da sol gözü ve bir sınır (dorsal) kaynaklanıyor. yerinde açılan flep tutmak için diş balmumu bir parça kullanın. </li><li> Dikkatle bezleri ve bir kenara ince forseps kullanarak beynin üstüne yalan trakea, daha sonra hedeflenen beyin yapısı üzerinde (beyin etrafında çok ince zar) neurilemma içine küçük bir kopma yapmak itin. NOT: Birçok arılar bir kerede tedavi edilmesi durumunda, bu yordamıDaha önce gerçekleştirilebilir; beyinlerinin ayrılacak edebileceğiniz gibi, (en fazla 30 dakika) çok uzun bu durumda arılar bırakmayın için ancak dikkatli olun. </li><li> İstenilen beyin bölgeye ucu yerleştirin ve beyin yüzeye dik derinliğini ayarlamak (örn mantar vücut kalikslerin için 60 mikron). Önceden ayarlanmış hacim enjekte edilir. Lateral beyin bölgelerinde için (yani her yarımkürede bir enjeksiyon yapmak) bilateral enjekte edilir. Bir özelliğine sahip olmayan bir boya kullanıldığında, enjekte ederken gözlem üzerine doğru bölgede meydana enjeksiyon sağlar. bir flüoresan boya kullanılır Bir flüoresan görüntüleme sistemi ile bir stereomikroskop kullanılarak floresan ışığı altında aynı şeyi. </li><li> Daha sonra, geri arı başının üzerinde açık flep yerleştirin. Mikro havya ucu etrafında sarılmış ince tel kullanarak, çapı yaklaşık 1 mm olan eicosane bir kristal, eriyik (erime sıcaklığı 35-37 ° C) ve kesim kapatın. Bu büyük ölçüde mortaliteyi azaltacaktır. </li><li> bırakınörneğin, hortum uzatma refleksi (PER) 20 test - davranışsal analiz için koşum arı (ama tartışmaya bakınız) ya da ölçülü arılar üzerinde deneyler için koşum tutmak. </li><li> Bir floresan boya kullanılmış ise, deney odaklı lazer tarama mikroskobu (Şekil. 1) kullanılarak bittikten sonra enjeksiyon ilgi alanı vurmak emin olun. NOT: (enjeksiyon aşamasında nonfluorescent boya görmek zor olurdu) derin beyin alanları hedefleyen bu özellikle yararlıdır. </li></ol></li></ol> Serbest uçan Bees 2. İlaç İdaresi Yöntemleri <ol><li> Oral tedavi <ol><li> adımda aynı şekilde ilaç hazırlamak 1.1.1-1.1.2. Bir besleyici madde solüsyonu eklenir ve depolama için buzdolabında yerleştirin. NOT: Herhangi bir besleyici böyle bir ters şişe kapağı veya doku kağıt üzerinde ters bir kavanoz gibi yapacağız. </li><li> 1 M veya 0.5 içeren bir yerçekimi besleyici arı yetiştirmekkovanı yakın bir besleyici koyarak M sukroz çözüm. arılar besleyici kazarak başladıktan sonra o (en az 5 m) sokulan önlemek için rahat bir mesafe kadar, yavaş yavaş uzaklaştırın. </li><li> sırayla Boya işareti arılar bireysel bal arıları takip etmek. kullanılacak olan tüm renk kombinasyonları bir listesini yapın. besleyici bir arı toprakları, dikkatlice iki renk ile karın işaretleyin ve kombinasyon alınır listesinde bir not yaptığınızda. </li><li> ilaç / sakaroz çözeltisi içeren bir besleyici için yerçekimi besleyici takas. besleyici ziyaret işaretli arıların not alın. arılar üretken İşverenler gibi besleyici ziyaret herhangi işaretsiz arı ve hızlı bir şekilde kontrolden çıktı alabilirsiniz uyuşturulmuş besleyici ziyaret arıların sayıları yakalamak. Aynı deney birbirini izleyen günlerde yapılması ise saf arılar, artık saf olabilir gibi bu özellikle sorunludur. NOT: Bir besleyici bireysel arıları eğitim, bir önceki yazar bir alternatif olarak23 - s başarıyla tüm kovanı 21 ilaç-bağcıklı sakaroz su beslemiştir. </li></ol></li><li> topikal tedavi Not: Amaç mumsu böcek kütikül nüfuz bir çözücü içinde, ilgi konusu bileşiği çözmek için. Değişik çözücüler bu amaçla kullanılabilmektedir. En yaygın olarak kullanılan, aseton, dimetilformamid (DMF) ve dimetilsülfoksit (DMSO) yer alır. <ol><li> Çözücü eldeki bileşik için en uygun hangi değerlendirin. Güçlü bir fenotip dikkatle farklı çözücülerin her ve içinde çözülmüş aşırı dozda (örn felç ya da ölüm), bir yüksek doz tedavi arılar (adım 2.2.2) (örneğin, 20 ug kokain 7) beklenen ise felç kadar zaman izlemek ya da ölüm. </li><li> 1 uL mikrokapiler (veya mikroenjektör uygun bir tekrarlanan, dağıtıcının üzerine takılabilir) ve mikrokılcal tutucu kullanılarak ilaç çözeltisi 1 ul (örneğin, 3 çizmek81; kılcal içine kokain g / ul). damla sınırdışı ve dikkatle belirgin arının toraks üzerine boya. arı sonra onu damat muhtemel olduğu gibi, bir alanda oldukça sağlam bir damla bırakarak daha, çözüm ile olası bir kadar büyük kapsar. Bileşik kanat menteşeler, ya da bu toraks kapalı çizmek ve hemolimf içine emilmeden buharlaşır kanatları boyunca yapabilirsiniz temas etmesine izin vermemek için dikkatli olun. NOT: Araştırma hedefe bağlı olarak, bu yöntem de arı karın ilaçlar yönetmek için kullanılabilir. Toraks 24 .Bu yönteme işleri uygulanan eşit derecede iyi olan serbest uçan arılar gibi harnessed Ancak, ilaçlar daha hızlı ve büyük miktarlarda MSS ulaşır. </li></ol></li><li> uçucu hale tedavi <ol><li> Ilaçlar çözülür% 100 etanol (daha önce bu yöntem bal arıları 10 kokain teslim etmek için kullanılmıştır). çözünürlüğe sağlamak için, bir hidroklorid ya da diğer tuz formları kullanmayınİlaç eğer mümkünse. miktarı arı teslim edilmesi için bir seyreltme hazırlamak yaparken 100 ul bulunmaktadır. bir taşıt kontrolü olarak saf etanol kullanımı. </li><li> Bir filament oluşturmak için, McClung ve Hirsh 25 ile aynı prosedürü kullanın. <ol><li> Kısaca açıkladı: bir çivi etrafında sıkıca nikrom tel rüzgar ve iki elektrik telleri (filamanın her iki ucunda biri) ekleyin. çivi çıkarın. Kalan nikrom rulo filament olarak adlandırılır. </li><li> Seçilen ısıya dayanıklı olması gereken bir 50 ml santrifüj tüpüne, kapağındaki dikkatle deliklerden geçirilerek iki kabloyu geçirin. Sıvı silikon ile yerine telleri Tutkal. NOT: Bu tüp hava geçirmez yapacak. Bu deneyci ikincil maruz kalmasını önlemek ve arılar uygun doz ile tedavi edilir olmasını sağlamak için gereklidir. </li></ol></li><li> bir güç kaynağı filamanın giden kabloların takın. bir termokupl kullanarak sıcaklığını ölçmek içinFilament, ideal olarak, söz konusu ilaç için uygun bir sıcaklık profilinde sonuçlanır biri, ısıtma ya da daha az 10 saniye sağlar biri kadar farklı gerilim / akım kombinasyonları ile deney. Bu çok önemlidir, (en az 200 ° C&#39;ye kadar ısıtılması gereken uçucu kokain sırayla örneğin, fakat 350 ° C&#39;nin üzerindeki sıcaklıklarda bir sekonder bileşik 26 ayrılmıştır) ilgili literatüre bakınız. </li><li> Dikkatle filaman üzerine etanol çözeltisi ihtiva eden bir ilaç, 100 ul pipetle. Bu buharlaştırma verimliliğini artıracaktır mümkün olduğu kadar filament yüzeyi üzerine sıvı yayın. Tüm etanol buharlaşana kadar oda sıcaklığında maruz filament bırakın. Not: etanol yeterli buharlaştınldı değilse, arı seçim ve etanol ilaç hem de kabul edilecektir. Arılar etanol karşı son derece duyarlıdır ve bazı ilaçlar, hangi edecek önyargı eski etanol ile sinerjik etkileşimleri vardeneysel bir sonuçlanır. </li><li> Etanol tamamen (ilaç çökelti genellikle mikroskop altında kuru filaman üzerinde görülebilir) buharlaştıktan sonra, 50 ml bir tüp içinde bir serbest arasındaki arı yakalamak. Dikkatle filamanın içeren kapağını kapatın. </li><li> 10 saniye boyunca gücünü açın güç kapatmak ve başka bir 50 saniye bekleyin (uçucu bileşik soğutmak ve böylece yoğunlaşmasına veya mevduat için izin). arı bırakın. NOT: Bu tedavi yöntemi serbest uçan arılar için mükemmel bir performans sergiliyor olsa da, tıpkı etkili bir harnessed arılar ile kullanılabilir. Sadece 50 ml&#39;lik bir tüp içinde harnessed arı takın. Arılar arasında 2.3.4 açıklandığı gibi filament yeniden yükleyin. daha yüksek verim için birkaç filamanlar paralel olarak kullanılabilir. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Frisch, K. .. . v. o. n. . B. e. e. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Their Vision, Chemical Senses, and Language. , (1971).</li><li>Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amazing+mini-brain:+lessons+from+a+honey+bee.">The amazing mini-brain: lessons from a honey bee.</a> Bee World. 84 (1), 5-18 (2003).</li><li>Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neural+analysis+of+associative+learning+in+the+honeybee:+a+taste+from+the+magic+well.">Behavioral and neural analysis of associative learning in the honeybee: a taste from the magic well.</a> J. Comp. Physiol. 193 (8), 801-824 (2007).</li><li>Perry, C. J., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honey+bees+selectively+avoid+difficult+choices.">Honey bees selectively avoid difficult choices.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110 (47), 19155-19159 (2013).</li><li>Giurfa, M., Sandoz, J. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invertebrate+learning+and+memory:+Fifty+years+of+olfactory+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honeybees.">Invertebrate learning and memory: Fifty years of olfactory conditioning of the proboscis extension response in honeybees.</a> Learn. Mem. 19 (2), 54-66 (2012).</li><li>Srinivasan, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honey+bees+as+a+model+for+vision,+perception,+and+cognition.">Honey bees as a model for vision, perception, and cognition.</a> Annu. Rev. Entomol. 55, 267-284 (2010).</li><li>S&#248;vik, E., Cornish, J. L., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+tolerance+in+honey+bees.">Cocaine tolerance in honey bees.</a> PLoS One. 8 (5), e64920 (2013).</li><li>S&#248;vik, E., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invertebrate+models+in+addiction+research.">Invertebrate models in addiction research.</a> Brain. Behav. Evol. 82 (3), 153-165 (2013).</li><li>S&#248;vik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reward processing and responses to drugs of abuse in the honey bee, Apis mellifera. , (2013).</li><li>S&#248;vik, E., Even, N., Radford, C. W., Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+affects+foraging+behaviour+and+biogenic+amine+modulated+behavioural+reflexes+in+honey+bees.">Cocaine affects foraging behaviour and biogenic amine modulated behavioural reflexes in honey bees.</a> Peer J. 2, e662 (2014).</li><li>Abramson, C. I., Stone, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+an+ethanol+model+using+social+insects+I:+behavior+studies+of+the+honey+bee+(Apis+mellifera+L.).">The development of an ethanol model using social insects I: behavior studies of the honey bee (Apis mellifera L.).</a> Alcohol. Clin. Exp. Res. 24, 1153-1166 (2000).</li><li>Sauer, S., Kinkelin, M., Herrmann, E., Kaiser, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+sleep-like+behaviour+in+honey+bees.">The dynamics of sleep-like behaviour in honey bees.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 189 (8), 599-607 (2003).</li><li>M&#252;nch, D., Kreibich, C. D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+and+its+modulation+in+a+long-lived+worker+caste+of+the+honey+bee.">Aging and its modulation in a long-lived worker caste of the honey bee.</a> J. Exp. Biol. 216 (Pt 9), 1638-1649 (2013).</li><li>Cheeseman, J. F., Winnebeck, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anesthesia+alters+time+perception+by+phase+shifting+the+circadian+clock.">General anesthesia alters time perception by phase shifting the circadian clock.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. , (2012).</li><li>Schulte, C., Theilenberg, E., M&#252;ller-Borg, M., Gempe, T., Beye, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+integration+and+expression+of+piggyBac-derived+cassettes+in+the+honeybee+(Apis+mellifera).">Highly efficient integration and expression of piggyBac-derived cassettes in the honeybee (Apis mellifera).</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (24), 9003-9008 (2014).</li><li>Felsenberg, J., Gehring, K. B., Antemann, V., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+pharmacology+in+classical+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honeybees+(Apis+mellifera).">Behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (Apis mellifera).</a> J. Vis. Exp. (47), e2282 (2011).</li><li>Burger, H., Ayasse, M., D&#246;tterl, S., Kreissl, S., Galizia, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perception+of+floral+volatiles+involved+in+host-plant+finding+behaviour:+Comparison+of+a+bee+specialist+and+generalist.">Perception of floral volatiles involved in host-plant finding behaviour: Comparison of a bee specialist and generalist.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 199 (9), 751-761 (2013).</li><li>Pan, K. C., Goodman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocellar+projections+within+the+central+nervous+system+of+the+worker+honey+bee,+Apis+mellifera.">Ocellar projections within the central nervous system of the worker honey bee, Apis mellifera.</a> Cell Tissue Res. 176 (4), 505-527 (1977).</li><li>Ito, K., Shinomiya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+nomenclature+for+the+insect+brain.">A systematic nomenclature for the insect brain.</a> Neuron. 81, 755-765 (2014).</li><li>Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Sch&#228;fer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+of+proboscis+extension+in+honeybees+(Apis+mellifera).">Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera).</a> J. Comp. Psychol. 97 (2), 107-119 (1983).</li><li>Barron, A. B., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+modulation+of+task+performance+by+octopamine+in+honey+bee+(Apis+mellifera)+division+of+labour.">Selective modulation of task performance by octopamine in honey bee (Apis mellifera) division of labour.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 191 (7), 659-668 (2005).</li><li>Schulz, D. J., Sullivan, J. P., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Juvenile+Hormone+and+Octopamine+in+the+Regulation+of+Division+of+Labor+in+Honey+Bee+Colonies.">Juvenile Hormone and Octopamine in the Regulation of Division of Labor in Honey Bee Colonies.</a> Horm. Behav. 42 (2), 222-231 (2002).</li><li>Schulz, D. J., Elekonich, M. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenic+amines+in+the+antennal+lobes+and+the+initiation+and+maintenance+of+foraging+behavior+in+honey+bees.">Biogenic amines in the antennal lobes and the initiation and maintenance of foraging behavior in honey bees.</a> J. Neurobiol. 54 (2), 406-416 (2003).</li><li>Barron, A. B., Vander Meer, R. K., Maleszka, J., Robinson, G. E., Maleszka, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+injection,+feeding+and+topical+application+methods+for+treatment+of+honeybees+with+octopamine.">Comparing injection, feeding and topical application methods for treatment of honeybees with octopamine.</a> J. Insect Physiol. 53 (2), 187-194 (2007).</li><li>McClung, C., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotypic+behavioral+responses+to+free-base+cocaine+and+the+development+of+behavioral+sensitization+in+Drosophila.">Stereotypic behavioral responses to free-base cocaine and the development of behavioral sensitization in Drosophila.</a> Curr. Biol. 8 (2), 109-112 (1998).</li><li>Martin, B. R., Lue, L. P., Boni, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrolysis+and+volatilization+of+cocaine.">Pyrolysis and volatilization of cocaine.</a> J. Anal. Toxicol. 13 (3), 158-162 (1989).</li><li>Lefer, D., Perisse, E., Hourcade, B., Sandoz, J. -. C., Devaud, J. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+waves+of+transcription+are+required+for+long-term+memory+in+the+honeybee.">Two waves of transcription are required for long-term memory in the honeybee.</a> Learn. Mem. 20 (1), 29-33 (2012).</li><li>Urlacher, E., Soustelle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honey+Bee+Allatostatins+Target+Galanin/Somatostatin-Like+Receptors+and+Modulate+Learning:+A+Conserved+Function?.">Honey Bee Allatostatins Target Galanin/Somatostatin-Like Receptors and Modulate Learning: A Conserved Function?.</a> PLoS One. 11 (1), e0146248 (2016).</li><li>Stollhoff, N., Menzel, R., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+recovery+from+extinction+depends+on+the+reconsolidation+of+the+acquisition+memory+in+an+appetitive+learning+paradigm+in+the+honeybee+(Apis+mellifera).">Spontaneous recovery from extinction depends on the reconsolidation of the acquisition memory in an appetitive learning paradigm in the honeybee (Apis mellifera).</a> J. Neurosci. 25 (18), 4485-4492 (2005).</li><li>Barron, A. B., Maleszka, R., Helliwell, P. G., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cocaine+on+honey+bee+dance+behaviour.">Effects of cocaine on honey bee dance behaviour.</a> J. Exp. Biol. 212 (2), 163-168 (2009).</li><li>Devaud, J. -. M., Papouin, T., Carcaud, J., Sandoz, J. -. C., Gr&#252;newald, B., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+substrate+for+higher-order+learning+in+an+insect:+Mushroom+bodies+are+necessary+for+configural+discriminations.">Neural substrate for higher-order learning in an insect: Mushroom bodies are necessary for configural discriminations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. , 1-9 (2015).</li><li>Vergoz, V., Roussel, E., Sandoz, J. -. C., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aversive+learning+in+honeybees+revealed+by+the+olfactory+conditioning+of+the+sting+extension+reflex.">Aversive learning in honeybees revealed by the olfactory conditioning of the sting extension reflex.</a> PLoS One. 2 (3), e288 (2007).</li><li>Henry, M., B&#233;guin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+pesticide+decreases+foraging+success+and+survival+in+honey+bees.">A common pesticide decreases foraging success and survival in honey bees.</a> Science. 336 (6079), 348-350 (2012).</li><li>S&#248;vik, E., Perry, C. J., LaMora, A., Barron, A. B., Ben-Shahar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+impact+of+manganese+on+honeybee+foraging.">Negative impact of manganese on honeybee foraging.</a> Biol. Lett. 11 (3), 20140989 (2015).</li><li>Farooqui, T., Vaessin, H., Smith, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Octopamine+receptors+in+the+honeybee+(Apis+mellifera)+brain+and+their+disruption+by+RNA-mediated+interference.">Octopamine receptors in the honeybee (Apis mellifera) brain and their disruption by RNA-mediated interference.</a> J. Insect Physiol. 50 (8), 701-713 (2004).</li><li>Guo, X., Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipe+for+a+Busy+Bee:+MicroRNAs+in+Honey+Bee+Caste+Determination.">Recipe for a Busy Bee: MicroRNAs in Honey Bee Caste Determination.</a> PLoS One. 8 (12), e81661 (2013).</li><li>Cristino, A. S., Barchuk, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroligin-associated+microRNA-932+targets+actin+and+regulates+memory+in+the+honeybee.">Neuroligin-associated microRNA-932 targets actin and regulates memory in the honeybee.</a> Nat. Commun. 5, 5529 (2014).</li><li>Vargaftig, B. B., Coignet, J. L., de Vos, C. J., Grijsen, H., Bonta, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mianserin+hydrochloride:+Peripheral+and+central+effects+in+relation+to+antagonism+against+5-hydroxytryptamine+and+tryptamine.">Mianserin hydrochloride: Peripheral and central effects in relation to antagonism against 5-hydroxytryptamine and tryptamine.</a> Eur. J. Pharmacol. 16 (3), 336-346 (1971).</li><li>Beggs, K. T., Tyndall, J. D. A., Mercer, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honey+bee+dopamine+and+octopamine+receptors+linked+to+intracellular+calcium+signaling+have+a+close+phylogenetic+and+pharmacological+relationship.">Honey bee dopamine and octopamine receptors linked to intracellular calcium signaling have a close phylogenetic and pharmacological relationship.</a> PLoS One. 6 (11), (2011).</li><li>Matsumoto, Y., Menzel, R., Sandoz, J. -. C., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+olfactory+classical+conditioning+of+the+proboscis+extension+response+in+honey+bees:+a+step+toward+standardized+procedures.">Revisiting olfactory classical conditioning of the proboscis extension response in honey bees: a step toward standardized procedures.</a> J. Neurosci. Methods. 211 (1), 159-167 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

yukarıda özetlenen yöntemler serbest uçan veya harnessed bal arılarının birinin basit, etkili ve sağlam bir tedavi sağlar. Bu yöntemler birçok deneysel paradigmalar ve biyolojik sorularınızı (Tablo 1) ile uyumludur. serbest uçan yöntemlerin hepsi kolay koşulmuş arılar için uygulanabilir. Geçici kısıtlama ve invaziv tedavi yöntemleri genellikle arıların uçan yeteneğini tehlikeye beri Ancak, bunun tersi daha az başarılı olur. yöntemler beyin mer...

Karl von Frisch kendi dans dilini 1 açıklanamamıştır beri, bal arıları hayvan davranışları ve nörobiyoloji araştırmacılar için popüler bir çalışma türlerini kalmıştır. Son yıllarda yeni disiplinlerin sayısız bu iki alan, ve onlarla birlikte ortaya çıkan birçok diğer disiplinler (örneğin, moleküler biyoloji, genomik ve bilgisayar bilimi) kesiştiği noktada ortaya çıkmıştır. Bu davranış, sinir sistemi içinde faaliyet kaynaklanır nasıl anlamak için yeni teoriler ve modeller hızla gelişmesine yol açmıştır. Çünkü benzersiz bir yaşam tarzı, zengin davranış repertuarı, deneysel ve farmakolojik manipülasyon kolaylığı, arılar bu devrimin ön planda kalmıştır. Bal arıları gibi bu temel öğrenme ve hafıza 2,3, karar verme 4, koku 5 veya görsel işleme 6 gibi temel nörobiyolojik soruları incelemek için kullanılmaktadır. Son yıllarda, Hon11, uyku 12 13 yaşlanma ya da mekanizmalar anestezi 14 altında yatan - ey arı bile böyle bağımlılık yapan maddelerin 7 etkileri genel olarak tıbbi araştırmalar için ayrılan konular, eğitim için bir model olarak kullanılmıştır. Klasik bir genetik model organizmalar için farklı (örneğin, D. melanogaster, C. elegans, M. musculus), bu şu anda 15 değişiyor olsa da bal arıları sinir işlevlerini denetlemek için mevcut çok az genetik araçlar vardır. Bunun yerine, bal arısı çalışmaları öncelikle farmakolojik manipülasyonlar yararlanmıştır. Bu çok başarılı olmuştur; Bununla birlikte, Arı Araştırma çeşitliliği farmakolojik uygulama için bir dizi yöntem gerekli olacak şekildedir. bal arıları ile Araştırma, farklı disiplinlerden ve kökenden gelen araştırmacılar tarafından incelenmiştir, oldukça çeşitli soruları ele ve deneysel yaklaşımlar çeşitli kullanır. Birçok resekemer sorular özgürce kolonisi, ya da her ikisi de etkileşim, ya olacak serbest uçan arılar gerektirir. Bu zor bireysel deney hayvanlarında takip yapmak ve kısıtlama ya da kanül olanaksız kılar. bal arısı araştırma çeşitliliğini yerleştirmek için, ilaç verme çeşitli yöntemler farmakokinetik ve farmakodinamik profilleri, yöntemin invaziv ve güvenilirliğini, söz konusu paradigma uygun sağlarken sağlam ve esnek uygulama için izin gereklidir. Çünkü bu farklı ihtiyaçların çoğu araştırma grupları kendi benzersiz ilaç uygulama yöntemleri geliştirmişlerdir. Şimdiye kadar, bu arı araştırma topluluğunun bir güç olmuştur; farklı durumlarda aynı ilacın uygulanması için izin yöntem dizilerinin geliştirilmesine yol açmıştır. Burada amacımız arıların farmakolojik manipülasyonlar için tek standart bir yöntem geliştirmek için değil, yöntemleri vurgulamak için olmadığınıözellikle başarılı olduğu kanıtlanmış ve yardım araştırmacılar bu benimsemek var. Biz temel nasıl çalıştıklarını ilkelerini yanı sıra kendi avantajları ve dezavantajları tartışılmıştır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8501</td>
			<td>Any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>49159</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protection Wax</td>
			<td>Dentaurum</td>
			<td>124-305-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethylformamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D4551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>493511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B100F-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G NanoFil needle</td>
			<td>WPI</td>
			<td>NF33BV-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Very fine forsceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>0208-55-PO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode puller</td>
			<td>SRI</td>
			<td>2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet Microinjector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5247 000.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eicosane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>219274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>manual micromanipulator</td>
			<td>Brinkmann Instrumentenbau</td>
			<td>MM-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic micromanipulator</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann Feinmechanik + Elektortechnik</td>
			<td>Junior unit XYZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>soldering iron</td>
			<td>Weller</td>
			<td>WESD51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran, Alexa Fluor 546, 10000 MW</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>D-22911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran, Alexa Fluor 568, 10000 MW</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>D-22912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge tube</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps</td>
			<td>Australian Entomological Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade holder and breaker</td>
			<td>Australian Entomological Supplies</td>
			<td>E130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather double edged razor blade</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>50-949-135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nichrome wire</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical wires</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model paint</td>
			<td>Tamiya USA</td>
			<td>Depends on colour</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repeating dispenser</td>
			<td>Hamilton company</td>
			<td>PB-600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringe</td>
			<td>WPI</td>
			<td>NANOFIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flourescence viewing system</td>
			<td>Nightsea</td>
			<td>SFR-GR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>graticule</td>
			<td>ProSciTech</td>
			<td>S8014-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcapillary with holder</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>1-000-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid silicone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocouple</td>
			<td>Digitech</td>
			<td>QM-1324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

neuropharmacological manipulation of restrained and free-flying honey bees, apis mellifera

Bal arıları şaşırtıcı öğrenme yeteneklerini ve gelişmiş sosyal davranış ve iletişimi göstermektedir. Buna ek olarak, beyin, küçük görselleştirmek için ve çalışma kolaydır. Bu nedenle, arılar uzun, sosyal ve doğal davranış nöral temelini çalışmak için Nörobiyologlar ve neuroethologists arasında bir tercih modeli olmuştur. Bu davranışlar karışmaz arıları incelemek için kullanılan deneysel teknikler çalışılan ki, çok önemlidir. Bu nedenle, bal arılarının farmakolojik manipülasyon teknikleri, bir dizi geliştirmek gerekli olmuştur. Bu yazıda farmakolojik ajanların geniş bir yelpazede ile ölçülü veya serbest uçan bal arılarının tedavi etme yöntemlerini ortaya koymaktadır. Bunlar ya sistemik ya da lokal bir şekilde hassas ilaç verilmesi için izin hem örneğin oral ve topikal tedavisinde olarak, invaziv olmayan yöntemler, hem de daha invazif yöntemler bulunmaktadır. Son olarak, her yöntemin avantajları ve dezavantajları tartışmak ve açıklamakOrtak engeller ve en iyi nasıl bunların üstesinden. Biz biyolojik sorular yerine başka bir yol deneysel yöntemi adapte önemi üzerine bir tartışma yer almaktadır.

Yukarıda açıklanan yöntemler için temsili sonuçların bir seçim öncelikle yöntemler farmakolojik ajanlar beyin ulaşmasına izin ve bal arısı davranışını etkileyen göstermek için gösterilir. Beyin süreçleri belirli etkileri kolayca göğüs enjeksiyonu takiben elde edilebilir. farmakolojik ajanlar vücutta birden fazla hedeflere hareket edebilir, ve...

Watch this Scientific Journal Video about Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera at JoVE.com

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Bu yazının serbest uçan arılar için basit non-invaziv yöntemler yanı sıra ölçülü arıların kesin lokalize tedavi izin daha invaziv varyantları da dahil olmak üzere, bal arıları için farmakolojik ajanların uygulanması için çeşitli protokoller açıklanır.

Ölçülü ve Serbest uçan Bal Arısı Nörofarmakolojik Manipülasyon,<em&gt; Apis mellifera</em

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize ...

neuropharmacological-manipulation-restrained-free-flying-honey-bees

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

9.8K Görüntüleme.  Volda University College.  Bu yazının serbest uçan arılar için basit non-invaziv yöntemler yanı sıra ölçülü arıların kesin lokalize tedavi izin daha invaziv varyantları da dahil olmak üzere, bal arıları için farmakolojik ajanların uygulanması için çeşitli protokoller açıklanır. 

Video: Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the survival of a honeybee colony depends on the exploitation of food sources, forager bees learn and memorize variable flower sites as well as their profitability. Forager bees can be easily trained in natural settings where they forage at a feeding site and learn the related signals such as odor or color. Appetitive associative learning can also be studied under controlled conditions in the laboratory by conditioning the proboscis extension response (PER) of individually harnessed honeybees3,4. This learning paradigm enables the study of the neuronal and molecular mechanisms that underlie learning and memory formation in a simple and highly reliable way5-12. A behavioral pharmacology approach is used to study molecular mechanisms. Drugs are injected systemically to interfere with the function of specific molecules during or after learning and memory formation13-16.
Here we demonstrate how to train harnessed honeybees in PER conditioning and how to apply drugs systemically by injection into the bee flight muscle.

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

We demonstrate how to implement a behavioral pharmacology method in an appetitive olfactory conditioning paradigm in honeybees (Apis mellifera) by systemic application of drugs. This method allows investigation of the mechanisms underlying learning and memory formation in a simple and reliable way.

Bal arısı burnumun Extension Tepki Klasik Koşullanma Davranış Farmakoloji ( Apis mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the ...

Nörobilim

Mechanical Manipulation of Neurons to Control Axonal Development

Cell manipulations and extension of neuronal axons can be accomplished with calibrated glass micro-fibers capable of measuring and applying forces in the 10-1000 &mu;dyne range1,2. Force measurements are obtained through observation of the Hookean bending of the glass needles, which are calibrated by a direct and empirical method3. Equipment requirements and procedures for fabricating, calibrating, treating, and using the needles on cells are fully described. The force regimes previously used and different cell types to which these techniques have been applied demonstrate the flexibility of the methodology and are given as examples for future investigation4-6. The technical advantages are the continuous 'visualization' of the forces produced by the manipulations and the ability to directly intervene in a variety of cellular events. These include direct stimulation and regulation of axonal growth and retraction7; as well as detachment and mechanical measurements on any type of cultured cell8.

Application and direct measurements of forces on neurons in the 2-1000 microdyne range are achieved with high precision using calibrated glass needles. This methodology can be used to control and measure several aspects of axonal development, including axonal initiation, axonal tension, velocity of axonal elongation, and force vectors.

Nöronlar Aksonal Geliştirme Kontrol Mekanik Manipülasyon

Cell manipulations and extension of neuronal axons can be accomplished with calibrated glass micro-fibers capable of measuring and applying forces in the ...

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the olfactory bulb (OB). The molecular mechanisms of OSN axon growth and targeting are not well understood. Manipulating gene expression and subsequent 
visualizing of single OSN axons and their terminal arbor morphology have thus far been challenging. To study gene function at the single cell level within a specified 
time frame, we developed a lentiviral based technique to manipulate gene expression in OSNs in vivo. Lentiviral particles are delivered to OSNs by microinjection 
into the olfactory epithelium (OE). Expression cassettes are then permanently integrated into the genome of transduced OSNs. Green fluorescent protein expression 
identifies infected OSNs and outlines their entire morphology, including the axon terminal arbor. Due to the short turnaround time between microinjection and 
reporter detection, gene function studies can be focused within a very narrow period of development. With this method, we have detected GFP expression within as 
few as three days and as long as three months following injection. We have achieved both over-expression and shRNA mediated knock-down by lentiviral microinjection. 
This method provides detailed morphologies of OSN cell bodies and axons at the single cell level in vivo, and thus allows characterization of candidate gene function 
during olfactory development.

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

We present a lentiviral technique for genetic manipulation and visualization of single olfactory sensory neuron axon and its terminal arborization in vivo.

Koku Duyu Nöronlar lentivirüs aracılı Genetik Manipülasyon ve Görselleştirme In vivo</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees (Apis mellifera L.)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker bees spend the first half of their life inside the dark hive, where they are nursing the larvae or building the regular hexagonal combs for food (e.g. pollen or nectar) and brood3. The antennae are extraordinary multisensory feelers and play a pivotal role in various tactile mediated tasks4, including hive building5 and pattern recognition6. Later in life, each single bee leaves the hive to forage for food. Then a bee has to learn to discriminate profitable food sources, memorize their location, and communicate it to its nest mates7. Bees use different floral signals like colors or odors7, 8, but also tactile cues from the petal surface9 to form multisensory memories of the food source. Under laboratory conditions, bees can be trained in an appetitive learning paradigm to discriminate tactile object features, such as edges or grooves with their antennae10, 11, 12, 13. This learning paradigm is closely related to the classical olfactory conditioning of the proboscis extension response (PER) in harnessed bees14. The advantage of the tactile learning paradigm in the laboratory is the possibility of combining behavioral experiments on learning with various physiological measurements, including the analysis of the antennal movement pattern.

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees Apis mellifera L.

In this protocol we show how to condition harnessed honey bees to tactile stimuli and introduce a 2D motion capture technique for analyzing the kinematics of fine-scale antennal sampling pattern.

Dokunsal İklimlendirme Ve Bal Arısı yılında antennal Örnekleme Stratejileri Hareket Analizi (<em&gt; Apis mellifera</em&gt; L.)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very powerful experimental approach. However, generating novel mouse mutants is often frustratingly slow. It has been shown that access to the mouse brain developing in utero with reasonable post-operatory survival is possible. Still, results with this procedure have been reported almost exclusively for the most superficial and easily accessible part of the developing brain, i.e. the cortex. The thalamus, a narrower and more medial region, has proven more difficult to target. Transfection into deeper nuclei, especially those of the hypothalamus, is perhaps the most challenging and therefore very few results have been reported. Here we demonstrate a procedure to target the entire hypothalamic neuroepithelium or part of it (hypothalamic regions) for transfection through electroporation. The keys to our approach are longer narcosis times, injection in the third ventricle, and appropriate kind and positioning of the electrodes. Additionally, we show results of targeting and subsequent histological analysis of the most recessed hypothalamic nucleus, the mammillary body.

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Despite the functional and medical importance of the hypothalamus, in utero genetic manipulation of its development has rarely been attempted. We show a detailed procedure for in utero electroporation into the mouse hypothalamus and show representative results of total and partial (regional) hypothalamic transfection.

Fare Genetik Manipülasyon yoluyla Hipotalamus geliştirilmesi<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

Bal Arısı RNAi-aracılı Çift Gen demonte ve tat Algı Ölçüm (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow for an in-depth characterization to identify pathways involved in these events. Cerebellar granule neurons (CGNs) that are derived from the developing cerebellum are an ideal model system that allows for morphological analyses. Here, we describe a method of how to genetically manipulate CGNs and how to study axono- and dendritogenesis of individual neurons. With this method the effects of RNA interference, overexpression or small molecules can be compared to control neurons. In addition, the rodent cerebellar cortex is an easily accessible in vivo system owing to its predominant postnatal development. We also present an in vivo electroporation technique to genetically manipulate the developing cerebella and describe subsequent cerebellar analyses to assess neuronal morphology and migration.

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Neuronal morphogenesis and migration are crucial events underlying proper brain development. Here, we describe methods to genetically manipulate cultured cerebellar granule neurons and the developing cerebellum for the assessment of morphology and migratory characteristics of neurons.

Serebellar Granül Nöronlar Genetik Manipülasyon<em&gt; In Vitro</em&gt; Ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Nöronal morfoloji ve Göç Eğitim için

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Juxtacellular Monitoring and Localization of Single Neurons within Sub-cortical Brain Structures of Alert, Head-restrained Rats

There are a variety of techniques to monitor extracellular activity of single neuronal units. However, monitoring this activity from deep brain structures in behaving animals remains a technical challenge, especially if the structures must be targeted stereotaxically. This protocol describes convenient surgical and electrophysiological techniques that maintain the animal&#8217;s head in the stereotaxic plane and unambiguously isolate the spiking activity of single neurons. The protocol combines head restraint of alert rodents, juxtacellular monitoring with micropipette electrodes, and iontophoretic dye injection to identify the neuron location in post-hoc histology. While each of these techniques is in itself well-established, the protocol focuses on the specifics of their combined use in a single experiment. These neurophysiological and neuroanatomical techniques are combined with behavioral monitoring. In the present example, the combined techniques are used to determine how self-generated vibrissa movements are encoded in the activity of neurons within the somatosensory thalamus. More generally, it is straightforward to adapt this protocol to monitor neuronal activity in conjunction with a variety of behavioral tasks in rats, mice, and other animals. Critically, the combination of these methods allows the experimenter to directly relate anatomically-identified neurophysiological signals to behavior.

This protocol describes the design and surgical implantation of a head-restraining mechanism to monitor neuronal activity in sub-cortical brain structures in alert rats. It delineates procedures to isolate single neurons in the juxtacellular configuration and to efficiently identify their anatomical locations.

Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar

There are a variety of techniques to monitor extracellular activity of single neuronal units. However, monitoring this activity from deep brain structures ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be stimulated by neuronally-released transmitter. However, the ability of astrocytic receptors to exhibit plasticity in response to changes in neuronal activity has received little attention. Here we describe a model system that can be used to globally scale up or down astrocytic group I metabotropic glutamate receptors (mGluRs) in acute brain slices. Included are methods on how to prepare parasagittal hippocampal slices, construct chambers suitable for long-term slice incubation, bidirectionally manipulate neuronal action potential frequency, load astrocytes and astrocyte processes with fluorescent Ca2+ indicator, and measure changes in astrocytic Gq GPCR activity by recording spontaneous and evoked astrocyte Ca2+ events using confocal microscopy. In essence, a &#8220;calcium roadmap&#8221; is provided for how to measure plasticity of astrocytic Gq GPCRs. Applications of the technique for study of astrocytes are discussed. Having an understanding of how astrocytic receptor signaling is affected by changes in neuronal activity has important implications for both normal synaptic function as well as processes underlying neurological disorders and neurodegenerative disease.

Here we describe an adaptation of protocols used to induce homeostatic plasticity in neurons for the study of plasticity of astrocytic G protein-coupled receptors. Recently used to examine changes in astrocytic group I mGluRs in juvenile mice, the method can be applied to measure scaling of various astrocytic GPCRs, in tissue from adult mice in situ and in vivo, and to gain a better appreciation of the sensitivity of astrocytic receptors to changes in neuronal activity.

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from flowering plants. Only a few studies have described the gustatory responses of bees toward toxins in food, and these experiments have mainly used the proboscis extension response on restrained honey bees. Here, a new behavioral assay is presented for measuring the feeding responses of freely-moving, individual worker bumble bees to nutrients and toxins. This assay measures the amount of solution ingested by each bumble bee and identifies how tastants in food influence the microstructure of the feeding behavior.
The solutions are presented in a microcapillary tube to individual bumble bees that have been previously starved for 2-4 hr. The behavior is captured on digital video. The fine structure of the feeding behavior is analyzed by continuously scoring the position of the proboscis (mouthparts) from video recordings using event logging software. The position of the proboscis is defined by three different behavioral categories: (1) proboscis is extended and in contact with the solution, (2) proboscis is extended but not in contact with the solution and (3) proboscis is stowed under the head. Furthermore the speed of the proboscis retracting away from the solution is also estimated.
In the present assay the volume of solution consumed, the number of feeding bouts, the duration of the feeding bouts and the speed of the proboscis retraction after the first contact is used to evaluate the phagostimulatory or the deterrent activity of the compounds tested.
This new taste assay will allow researchers to measure how compounds found in nectar influence the feeding behavior of bees and will also be useful to pollination biologists, toxicologists and neuroethologists studying the bumble bee&#39;s taste system.

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

A novel behavioral assay is described for investigating the short term gustatory responses of the mouthparts of freely-moving bumble bees (Bombus terrestris) toward nutrients and toxins in solution.

A Novel Davranış Testi (Bumble Bees Serbestçe hareket eden Bireyin Tat Cevapları, Araştırma<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...