The authors would like to thank Drs. Helene Salmon and Miriam Merad from Icahn School of Medicine at Mount Sinai for providing the B16-F10-YFP cells and for their expert advice on melanoma mouse models. The authors further thank the Animal Imaging Core Facility, the Radiochemistry and Molecular Imaging Probes Core Facility, and the Molecular Cytology Core Facility at Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) for their support. This work was supported by National Institutes of Health grants NIH 1 R01 HL125703 (W.J.M.M.), R01CA155432 (W.J.M.M.), K25 EB016673 (T.R.) and P30 CA008748 (MSK Center Grant). The authors also thank the Center for Molecular Imaging and Nanotechnology (CMINT) at MSK for their financial support (T.R.).

Prosedür nanopartiküllerin ikili radyoaktif ve floresan etiketleme, in vivo PET-BT görüntüleme, ex vivo biyolojik dağılım ölçümleri ve ex vivo immün oluşur ve analiz akım sitometri. Tüm hayvan deneyleri Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Çift etiketli lipozomların hazırlanması 1. Not: singenik B16 melanoma tümörleri% 2 -isoflurane içeren oksijen teneffüs anestezi altında C57BL / 6 farelerinin arka yanları halinde 300.000 B16-F10 hücreleri enjekte edilerek uyarılabilir. Ameliyat sırasında steril bir çalışma alanında steril reaktifler ve araçları kullanın. Ameliyattan sonra, dikkatlice anesteziden kendi kurtarma kadar hayvanları gözlemlemek. onlar tam bilinç ve hareketlilik yeniden sadece geri hayvanları kafeslerinde koyun. ksenogreflenmiş tümörü olan hayvanlar için steril odalarda onlara ev. boyutta tümörler300 mm 3 bağlı nanopartikül birikimini artırmak bunların belirgin gelişmiş geçirgenlik ve tutma etkileri (EPR) &#39;e nanopartikül karakterizasyonu için idealdir. Ayrıntılı protokoller aşağıda verilmiştir. <ol><li> Yuvarlak tabanlı bir şişe içinde içeren kloroform, 1,2-dipalmitoyl- sn -glisero-3-phophocholine (DPPC), kolesterol, 1,2-disearoyl- sn -glycero- 2 mL lipidlerin 20 mg karışımı çözülür 3-fosfoetanolamin-poli (etilen glikol) 2000 (DSPE-PEG2000) DSPE-deferoksamin (DSPE-DFO) 8 ve 1,1-diododecyl-3,3,3,3-tetramethylindodicarbocyanine-5,5-disülfonik asit ( diIC12 [5], sırasıyla% 61.3,% 33.4, 5,% 0.2 ve% 0.1, molar oranlarda) -ds. NOT: Bu lipit kompozisyonu, şu anda klinik 2&#39;de kullanılan doksorubisin lipozom formülasyonuna benzemektedir. Bizim prosedüründen elde edilen lipozomlar, yakın klinik nanomedic in vivo performansını taklit edecekine. </li><li> organik çözücünün çıkması ve oda sıcaklığında ince bir lipid film oluşturmak için bir döner buharlaştırıcı kullanarak. PBS ile 20 ml ilave edilir ve 30 dakika boyunca ses dalgalarına maruz buz üzerinde yeterli bir soğutma ile, bir 3.8 mm sonikasyon ucu ve 30 W arasında bir genliğe kullanarak lipozomal nano-tanecikleri oluşturmak için. </li><li> Santrifüj agrega kaldırmak ve yıkama PBS santrifüj filtrasyon (molekül ağırlıklı bir kesim (MWCO kullanarak nano-tanecikleri, 10 dakika boyunca 4000 x g&#39;de lipozom solüsyonu: ki olacak, lipozomlar bilgilerini lipidler ve çökelen maddelerin giderilmesi için 100 kDa) konsantre edin. üst bölmede kalır ve yeni bir tüpe aktarın. lipozomlar için sonraki basamaklardan önce 1 hafta kadar PBS içinde buzdolabında saklanır. </li><li> Kalite kontrolü için, dinamik ışık saçılımı (DLS) lipozomlar karakterize etmektedir. Özellikle, PBS 950 uL ile lipozomlar 50 mcL karıştırın ve ardından boyutlandırma küvet içine karışımı aktarın. analizör küvet koyun ve parçacık ölçmekboyutları ve boyut dağılımı. sırasıyla, 0.2, - 120 nm ve 0.1 - parçacık boyutları ve boyut dağılımı (polidispersite indeksi (PDI)) 90 olması beklenmektedir. </li><li> Radyoaktif, (1.5 ml bir tüp içinde, 2 saat boyunca 37 ° C &#39;de 1 mCi 89, Zr-oksalat ile 6.9 ve 7.1 arasında bir pH değerinde toplam hacim PBS lipidlerin 2 mg eşdeğer saflaştırılmış lipozomlar, karışımı: ~ 100 uL). 1.3 adıma benzer santrifüj filtrasyon (MWCO = 100 kDa), serbest, reaksiyona girmemiş 89 Zr çıkarın. steril PBS ile bakiyenin yıkayın ve istenilen hacme seyreltin. % 95 - radyokimyasal verim 80 olmalıdır. DİKKAT! Radyoaktif maddeler ile çalışılırken yüksek düzenlenir. Kurumlar belgeli ve gerekli tesisleri, personel eğitimi ve radyoaktivite kullanımı sıkı izleme sağlıyor olması gerekir. Araştırmacılar yeterli eğitimi almış ve radyoaktivite işlerken kişisel koruyucu donanım ve dozimetre halkaları / rozetleri giymek gerekir. </li><li&gt; Tipik% 98 üzerinde 10 olmalıdır boyut dışlama radyo-HPLC ile radyo etiketli lipozom radyokimyasal saflığı belirleyin. % 95 daha düşük Radyokimyasal saflık adım 1.5 yetersiz yıkama göstergesidir. </li><li> radyo-etiketlenmesi sonra, dinamik ışık saçılımı ile nanopartiküller boyutunu belirler. Büyüklüğü ve PDI 1.4 adım 10&#39;da ölçümleri ile aynı aralıkta olması beklenir. Not: Radyoaktif örnekleri akış sitometresi veya floresan mikroskobu izin verilmez ise, radyoaktif olmayan Alan kulüp Zr-oksalat adım 1.5 lipozomlar etiketlemek için kullanılabilir. Bu radyoaktif olmayan lipozomlar, radyoaktif analoglanna özdeş özelliklere sahiptir. Bu prosedürün bir tasviri, Şekil 2&#39;de sağlanmıştır. </li></ol> Çift etiketli lipozomlar Vivo PET-BT Görüntüleme ve biodistribution 2. <ol><li> W bir ikili-etiketli lipozomların, yaklaşık 100 ul enjektei ölçülü melanom farelere radyoaktivitenin yaklaşık 300 uCi - yaklaşık 10 mCi 89 Zr / kg vücut ağırlığı kendi kuyruk damarlar yoluyla (C57BL / 6 kadın, 10 16 haftalık). </li><li> yarılanma ömrü belirlemek için, 28-G insülin şırınga kullanarak% 2 izofluran içeren oksijen altında anestezi hayvanlardan kuyruk damarından kan çizin. 2 dakika, 15 dakika, 1 saat, 4 saat, 8 saat, 24 saat, ve enjeksiyondan sonra 48 saat daha önceden tartılmış tüplerde - (20 uL 10) kan toplamak. , Farkla kan tartılır, bir gama sayacı kullanılarak radyoaktivite içeriğini belirlemek ve başına enjekte edilen dozun (% ID / g) yüzdesi olarak radyoaktivite konsantrasyonunu hesaplamak. NOT: Bir anestezi sistemi, kurtarma kafesleri, ısıtma ve biyolojik tehlike kaput ile donatılmış bir odada yordamı gerçekleştirin. hayvanlar tamamen iyileşir ve kafesleri tutan kurtarma kafeslerden aktarmadan önce işlem sonrası normal bir hareketlilik kazandırmak emin olun. Ev uygulandığı hayvanlar için belirlenmiş oda tümör taşıyan hayvanlarradyoaktif maddeler. </li><li> 24 veya 48 saat sonra, enjeksiyon Küçük hayvan MicroPET-BT tarayıcısında 10 lipozomlar, görüntü fareler. karnı yatay anestezi hayvan koyun ve anestezi tutmak. Bir burun konisi ile% 2 izofluran-oksijen verin. kurumasını önlemek için taramadan önce gözlerinin oftalmik merhem sürün. </li><li> 15 dakika yaklaşık bir süresi olan bir tüm vücut PET statik tarama kayıt en az 50 milyon tesadüf olaylar gerçekleştirin. sırasıyla 350-700 keV ve 6 ns enerji ve tesadüf zamanlama aralığı ayarlayın. Daha sonra, 5 dk bilgisayarlı tomografi (BT) taraması gerçekleştirin. 80 kV ve 500 uA bir akımının bir voltaj X-ışını tüpü ayarlayın; CT taraması çerçeve 10 için yaklaşık 145 ms, 220 derecelik bir toplam 120 dönme adımları kullanır. </li><li> PET-BT taramadan sonra, hemen Karbondioksit boğulma fareler kurban ve Pinchi tarafından ölümleri onaylamakHayvanların pençeleri ng. teyit sonra, servikal çıkıkları gerçekleştirin. </li><li> Önce, sol ventrikül içine 20 ml PBS enjekte sağ atriyum, açık kesme ve fare dokuları içinde kan çıkarın ve daha sonra, tümör, karaciğer, dalak, akciğer, böbrek, kas ve diğer 16 alakalı dokuların toplar. </li><li> , Doku tartılır 8, 9 sayma gama bunların radyoaktivite içerikleri, ölçebilir ve gramı başına enjekte edilen doz (% ID / g) bir yüzdesi olarak, doku radyoaktivite birikimini hesaplayabilir. </li></ol> 3. Ex Vivo Sitometrisi ve immün Not: vücut ağırlığının her bir kg&#39;ı başına boya, 0.5 mg bir dozda kuyruk damarı yoluyla farelere melanom flüoresan lipozomların, yaklaşık 100 ul enjekte edilir. Radyoaktif örnekleri akış sitometresi ve flöresanlı mikroskop izin verilmez ise, radyoaktif olmayan lipozomlar, kullanılmalıdır. <ol><li> Aşama 2.5 gibi, fareler 24 saat sonra enjeksiyon Kurban ve soğuk PBS depolanmalıdır tümörleri, toplar. </li><li> Flow sitometri için aşağıdaki adımları 17 izleyin: <ol><li> % 0.5 BSA ve 1 (PBS tampon akış sitometrisi saflaştırıldı kolajenaz I ve II (4 U / ml), hiyaluronidaz (60 U / ml) ve DNase I (60 U / mL) içindeki bir karışımından oluşan bir enzim kokteyli elde mM EDTA). </li><li> 1.5 ml bir tüp içinde, enzim kokteyli tamponu 200 uL tümör dokusu, 100 mg karıştırılır ve ince makasla küçük parçalar için doku zar. tüp içine enzim kokteyli bir 1.3 ml ilave edilir ve 6 oyuklu plaka içeriğini aktarın. </li><li> 60 rpm&#39;de, 60 dakika boyunca 37 ° C fırın içine yerleştirilmiştir yatay çalkalayıcı üzerinde 6 oyuklu plaka çalkalayın. </li><li> tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için akış sitometrisi tampon ile 3 kez doku Homojenat yıkayın. </li><li> Belirli CD45, CD11b, LY6C, CD11c dahil biyomarkerların antikorların bir kokteyl ile hücreleri leke,CD64, CD3, MHC II ve CD31 (1: Tüm antikorlar için 200 seyreltme, klon bilgi materyalleri elektronik tablodaki sağlanır). İlgili hücre tiplerini belirlemek ve (5) analiz yazılımı sitometri uygun bir akış ile her bir hücre popülasyonunda -ds diIC12 bunların ortalama floresan yoğunluğu (MFI) belirler. </li></ol></li><li> immün için, şu adımları izleyin: <ol><li> Optimal kesme ortamı (OCT) ile dolu bir kaset içine bir tümör yerleştirin ve kuru buz üzerinde dondurma. </li><li> Tümör dokusu 6 mikron dondurulmuş bölümleri yapmak ve histoloji cam slaytlar üzerine koyun; Bölümler doku üzerinde en iyi temsil eden bilgi tümörün en kesitlere kapsamalıdır. </li><li> Biyobelirteçlerini Leke (örneğin, endotel hücreleri için CD31) karşılık gelen antikorların (örneğin anti-CD31, klon MEC13.3) ile ilgi. paraformaldehid ile bölümleri düzeltmek; Serum sekonder antikor türlerinin kökeni eşleşen onları engellemek; inkubasyon4 ° C&#39;de 12 saat süre ile primer antikorlar ile yedi ve daha sonra 2 saat boyunca sekonder antikor ile; ve nihayet, PBS ile yıkayın ve kapak slipleri ile kaplayın. Görüntü Leica dik konfokal SP5 mikroskop 13, 16 ile boyanmış slaytlar. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Peer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanocarriers+as+an+emerging+platform+for+cancer+therapy.">Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy.</a> Nat Nanotechnol. 2, 751-760 (2007).</li><li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxil(R)--the+first+FDA-approved+nano-drug:+lessons+learned.">Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned.</a> J Control Release. 160, 117-134 (2012).</li><li>Green, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abraxane,+a+novel+Cremophor-free,+albumin-bound+particle+form+of+paclitaxel+for+the+treatment+of+advanced+non-small-cell+lung+cancer.">Abraxane, a novel Cremophor-free, albumin-bound particle form of paclitaxel for the treatment of advanced non-small-cell lung cancer.</a> Ann Oncol. 17, 1263-1268 (2006).</li><li>Juliano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine:+is+the+wave+cresting?.">Nanomedicine: is the wave cresting?.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 171-172 (2013).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bankruptcy+filing+worries+developers+of+nanoparticle+cancer+drugs.">Bankruptcy filing worries developers of nanoparticle cancer drugs.</a> Nature. 533, 304-305 (2016).</li><li>Venditto, V. J., Szoka, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+nanomedicines:+so+many+papers+and+so+few+drugs!.">Cancer nanomedicines: so many papers and so few drugs!.</a> Adv Drug Deliv Rev. 65, 80-88 (2013).</li><li>Dunphy, M. P., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiopharmaceuticals+in+preclinical+and+clinical+development+for+monitoring+of+therapy+with+PET.">Radiopharmaceuticals in preclinical and clinical development for monitoring of therapy with PET.</a> J Nucl Med. (50 Suppl 1), (2009).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+Imaging+of+Tumor-Associated+Macrophages+with+89Zr-Labeled+High-Density+Lipoprotein+Nanoparticles.">PET Imaging of Tumor-Associated Macrophages with 89Zr-Labeled High-Density Lipoprotein Nanoparticles.</a> J Nucl Med. 56, 1272-1277 (2015).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+labeling+strategy+for+in+vivo+PET+and+near-infrared+fluorescence+imaging+of+nanoparticle+tumor+targeting.">A modular labeling strategy for in vivo PET and near-infrared fluorescence imaging of nanoparticle tumor targeting.</a> J Nucl Med. 55, 1706-1711 (2014).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoreporter+PET+predicts+the+efficacy+of+anti-cancer+therapy.">Nanoreporter PET predicts the efficacy of anti-cancer therapy.</a> Nature communications. , (2016).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+macrophage+proliferation+suppresses+atherosclerotic+plaque+inflammation.">Inhibiting macrophage proliferation suppresses atherosclerotic plaque inflammation.</a> Science advances. , (2015).</li><li>Priem, B., Tian, C., Tang, J., Zhao, Y., Mulder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+nanoparticles+for+the+accurate+detection+of+drug+delivery.">Fluorescent nanoparticles for the accurate detection of drug delivery.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12, 1881-1894 (2015).</li><li>Gianella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+nanoemulsion+platform+for+imaging+guided+therapy+evaluated+in+experimental+cancer.">Multifunctional nanoemulsion platform for imaging guided therapy evaluated in experimental cancer.</a> ACS Nano. 5, 4422-4433 (2011).</li><li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+with+liposomes+as+pharmaceutical+carriers.">Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 145-160 (2005).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44, 924-938 (2016).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+PET+Imaging+of+HDL+in+Multiple+Atherosclerosis+Models.">In Vivo PET Imaging of HDL in Multiple Atherosclerosis Models.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 9, 950-961 (2016).</li><li>Duivenvoorden, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statin-loaded+reconstituted+high-density+lipoprotein+nanoparticle+inhibits+atherosclerotic+plaque+inflammation.">A statin-loaded reconstituted high-density lipoprotein nanoparticle inhibits atherosclerotic plaque inflammation.</a> Nature communications. 5, 3065 (2014).</li><li>Carney, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+PET+Imaging+of+PARP1+Expression+in+Glioblastoma+Models.">Non-invasive PET Imaging of PARP1 Expression in Glioblastoma Models.</a> Mol Imaging Biol. , (2015).</li><li>Salinas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioiodinated+PARP1+tracers+for+glioblastoma+imaging.">Radioiodinated PARP1 tracers for glioblastoma imaging.</a> EJNMMI Res. 5, 123 (2015).</li><li>Carlucci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Modality+Optical/PET+Imaging+of+PARP1+in+Glioblastoma.">Dual-Modality Optical/PET Imaging of PARP1 in Glioblastoma.</a> Mol Imaging Biol. 17, 848-855 (2015).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+screening+of+a+nanoparticle+library+improves+atherosclerosis+therapy.">Immune cell screening of a nanoparticle library improves atherosclerosis therapy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2016).</li><li>Scott, A. M., Wolchok, J. D., Old, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+therapy+of+cancer.">Antibody therapy of cancer.</a> Nat Rev Cancer. 12, 278-287 (2012).</li><li>Goodwill, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-space+MPI:+magnetic+nanoparticles+for+safe+medical+imaging.">X-space MPI: magnetic nanoparticles for safe medical imaging.</a> Adv Mater. 24, 3870-3877 (2012).</li></ol>

The authors have no disclosure to make.

Protokol çerçevesinde kritik Adımlar: Çift etiketli lipozomların, yüksek kaliteli, uzun bir süre boyunca tutarlı sonuçlar üretmek için bir anahtardır. Free floresan boyalar ya da 89 Zr iyonları tamamen farklı hedefleme desen oluşturabilir tamamen saflaştırma adımı sırasında uzaklaştırılmalıdır. bağışıklık sistemi önemli ölçüde deney kanseri Nanomedicine performansını etkiler, buna ek olarak, bağışıklık sistemi fare modelleri kullanılması, b...

Nanotıp kanser tedavisi geliştirme 1 paradigmasını değiştiriyor. Böyle lipozom ve albümin-temelli nanotherapies 2, 3 olarak önceki kanser nanomedicines, muazzam bir klinik etkisi esinlenerek, birçok yeni formülasyonlar geçtiğimiz on yıl içinde üretildi. Ancak, bu kanser nanomedicines klinik çeviri başarı son analizler bunlardan sadece bir kaç klinik kullanım 4, 5 için onaylanmış olduğunu göstermektedir. Yeni kanser nanomedicines klinik çeviri biri büyük engel ücretsiz terapötik bileşikler 6 doğrudan yönetimi ile karşılaştırıldığında terapötik indeksi sınırlı bir gelişmedir. Klinik öncesi hayvan modellerinde sistemik dokuda nanomedicines ve hücresel seviyelerinin in vivo performans gibi, doğru bir değerlendirme olarak kimliklendirmek esastıry gelecekteki klinik çeviri için optimal terapötik endeksleri olanlar. Nanomalzemeler tüm klinik görüntüleme yöntemleri 7 arasında mükemmel hassasiyet ve tekrarlanabilirlik vardır pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme ile yaşayan hayvanlar kantitatif karakterizasyonu için radyoaktif işaretli olabilir. Örneğin, 89 nanomedicines kanser 8, 9, 10, hem de diğer hastalık modellerinde 11 fare modellerinde karakterize edilmiştir uzun sirkülasyon Zr etiketli. Buna ek olarak, nanomedicines kan yarı ömrü ve biyolojik dağılım yoğun Bireysel dokular 8 ex vivo radyoaktivite ölçümü ile değerlendirilebilir. Bu nedenle, radyo-etiketlenmesi, sistemik ve doku düzeylerinde nanomedicines nicel değerlendirilmesi yapılır. Önemli olarak, Radyoizotopund nanomedicines nedeniyle genellikle radyoaktif sinyalin sınırlı uzaysal çözünürlük tek hücre ya da hücre içi düzeyde analiz edilemez. Bu nedenle, floresan etiketleme gibi flow sitometri ve floresan mikroskobu 12 optik görüntüleme teknikleri ile nanopartiküllerin değerlendirilmesi için tamamlayıcı bir yöntem olduğunu kanıtlamaktadır. Bu amaçla, radyoizotoplar floresan etiketler ile etiketlenmiş nanopartiküller kantitatif nükleer görüntüleme ile in vivo değerlendirilebilir ve ex vivo radyoaktivite sayımı ile ve aynı zamanda geniş bir optik görüntüleme hücresel düzeyde karakterize edilebilir. Daha önce, yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL), 11, lipozomlar 9, 10, polimerik nano partiküllerin, antikor fragmanları ve nanoemu dahil olmak üzere çeşitli nanopartiküller, radyoaktif ya da floresan etiketleri dahil modüler prosedürler geliştirdiklsions 10, 13. Bu etiketli nanopartiküller kendi özel uygulamalar için bu nanomateryallerin optimizasyonu güdümlü farklı düzeylerde ilgili hayvan modellerinde, kantitatif karakterizasyonu için izin vermiş. Bu çalışmada amaç, en köklü nanotıp platformu 14 çift etiketli nanoparçacık oluşturmak için kapsamlı prosedürleri göstermek için bir örnek gibi- ve iyice klasik singeneik melanom B16-F10 fare modelinde 15 bunu karakterize lipozomal-nanopartiküller kullanmaktır . sonuçlardan, bu nanopartikül karakterizasyonu yaklaşım ilgili fare modellerinde diğer kanser nanomedicines değerlendirmek için adapte edilebilir inanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>DPPC</td><td>Avantilipids</td><td>850355</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000</td><td>Avantilipids</td><td>880120P</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-DFO</td><td>Home made</td><td>110634</td><td>Perez-Medina &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, JNM, 2014</td></tr><tr><td>DiIC12[5]-DS</td><td>AAT Bioquest</td><td>22051</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal filter</td><td>Vivaproducts</td><td>VS2061</td><td></td></tr><tr><td>Rotary evaporator</td><td>Buchi</td><td>R-100</td><td></td></tr><tr><td>Radio-HPLC</td><td>Shimadzu HPLC with 2 LC-10AT pumps</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;89&lt;/sup&gt;Zr-oxalate</td><td>MSKCC</td><td>Synthesized in house</td><td>TR19/9 variable beam cyclotron (Ebco Industries Inc.)</td></tr><tr><td>Micro PET-CT</td><td>Siemens</td><td>Inveon Micro-PET/CT</td><td></td></tr><tr><td>Gamma counter</td><td>PerkinElmer</td><td>2470-0150</td><td></td></tr><tr><td>Flow cytometry</td><td>BD Biosciences</td><td>Fortessa</td><td>Any multi-parametric flow cytometry analyzers would suffice</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16-YFP melanoma cells</td><td>Home made</td><td>N/A</td><td>Salmon &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, Immunity, 2016</td></tr><tr><td>Ly6C (clone HK1.4)--APC-Cy7</td><td>128025</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>MHCII (M5/114/152)--APC</td><td>107613</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (30-F11)--BV510</td><td>103137</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD64 (X54-5/7.1)--PE-Cy7</td><td>139313</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11b (M1/70)--BV605</td><td>101237</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (17A2)--BV711</td><td>100241</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3)--PE</td><td>561073</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11c (M418)--PerCP-Cy5.5</td><td>117327</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3) no fluorophore</td><td>550274</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr></tbody></table>

a comprehensive procedure to evaluate the in vivo performance of cancer nanomedicines

Klinikte önceki kanser nanomedicines başarısı esinlenerek, araştırmacılar son on yıl içinde yeni formülasyonların çok sayıda yarattı. tıbbi gelişim altındadır nanomedicines çoğunluğu hayal kırıklığı yaratan sonuçlar vermiştir ise Ancak nanomedicines yalnızca az sayıda, klinik kullanım için onaylanmıştır. Yeni kanser nanomedicines başarılı klinik çeviri için bir büyük engel in vivo performansını doğru anlama olmaması. Bu makalede, pozitron emisyon tomografisi-bilgisayarlı tomografi (PET-BT), radyoaktivite ölçümü yöntemleri entegrasyonu yoluyla sistemik, doku, tek hücre ve hücre içi seviyede tümör taşıyan farelerdeki nanomedicines in vivo hareketinin karakterize edilmesi sıkı bir prosedürle , flow sitometri ve floresan mikroskobu. Bu yaklaşımı kullanarak, araştırmacılar doğru önemsizdir ilgili fare modellerinde yeni nano formülasyonlan değerlendirebilirr. Bu protokoller yüksek öteleme potansiyeli en umut verici kanser nanomedicines belirlemek ya da gelecekteki çeviri için kanser nanomedicines optimizasyonuna yardımcı becerisine sahip olabilir.

Şekil 1 prosedürün bir özetini göstermektedir. Şekil 2, 1. adımda 10&#39;da tarif edilen bir ikili-etiketli lipozomların şematik sentez prosedürü göstermektedir. Şekil aşama 2&#39;de tarif edildiği gibi 3 görüntüleyen Örnek PET BT görüntüsünde (Şekil 3a), PET görüntülemesi (Şekil 3b), kan yarı-ömür (Şekil 3C) ve rad...

Watch this Scientific Journal Video about A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines at JoVE.com

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

Kapsamlı Usulü değerlendirin<em&gt; İn Vivo</em&gt; Kanser Nanomedicines performans

Inspired by the success of previous cancer nanomedicines in the clinic, researchers have generated a large number of novel formulations in the past ...

a-comprehensive-procedure-to-evaluate-vivo-performance-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

8.8K Görüntüleme.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

Video: A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. Photosensitizers selectively accumulate in tumor tissue and lead to tumor cell death in the presence of oxygen and the proper wavelength of light.
To increase the therapeutic effect of PDT, we developed both photosensitizer- and anticancer agent-loaded lung cancer-targeted nanoparticles. Both enhanced permeability and retention (EPR) effect-based passive targeting and hyaluronic-acid-CD44 interaction-based active targeting were applied. CD44 is a well-known hyaluronic acid receptor that is often introduced as a biomarker of non-small cell lung cancer. 
In addition, a combination of PDT and chemotherapy is adopted in the present study. This combination concept may increase anticancer therapeutic effects and reduce adverse reactions. 
We chose hypocrellin B (HB) as a novel photosensitizer in this study. It has been reported that HB causes higher anticancer efficacy of PDT compared to hematoporphyrin derivatives1. Paclitaxel was selected as the anticancer drug since it has proven to be a potential treatment for lung cancer2. 
The antitumor efficacies of photosensitizer (HB) solution, photosensitizer encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-NPs), and both photosensitizer- and anticancer agent (paclitaxel)-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-P-NPs) after PDT were compared both in vitro and in vivo. The in vitro phototoxicity in A549 (human lung adenocarcinoma) cells and the in vivo antitumor efficacy in A549 tumor-bearing mice were evaluated.
The HB-P-NP treatment group showed the most effective anticancer effect after PDT. In conclusion, the HB-P-NPs prepared in the present study represent a potential and novel photosensitizer delivery system in treating lung cancer with PDT.

Photodynamic therapy (PDT) is an alternative choice for lung cancer treatment. To increase the therapeutic effect of PDT, lung cancer-targeted nanoparticles combined with chemotherapy were developed. Both in vitro and in vivo anticancer efficacies of PDT with prepared nanoparticles were evaluated.

Akciğer Kanseri Hedefli Nanopartiküller ile Fotodinamik Tedavi antikanser Etkinliği

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Kanser Araştırmaları

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its therapeutic benefit. Nanoparticle-based drug combination has been shown to mitigate the problems encountered by free drug combination therapy. Our previous studies have shown that the combination of two anticancer drugs, doxorubicin (DOX) and mitomycin C (MMC), produced a synergistic effect against both murine and human breast cancer cells in vitro. DOX and MMC co-loaded polymer-lipid hybrid nanoparticles (DMPLN) bypassed various efflux transporter pumps that confer multidrug resistance and demonstrated enhanced efficacy in breast tumor models. Compared to conventional solution forms, such superior efficacy of DMPLN was attributed to the synchronized pharmacokinetics of DOX and MMC and increased intracellular drug bioavailability within tumor cells enabled by the nanocarrier PLN. 
To evaluate the pharmacokinetics and bio-distribution of co-administered DOX and MMC in both free solution and nanoparticle forms, a simple and efficient multi-drug analysis method using reverse-phase high performance liquid chromatography (HPLC) was developed. In contrast to previously reported methods that analyzed DOX or MMC individually in the plasma, this new HPLC method is able to simultaneously quantitate DOX, MMC and a major cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in various biological matrices (e.g., whole blood, breast tumor, and heart). A dual fluorescent and ultraviolet absorbent probe 4-methylumbelliferone (4-MU) was used as an internal standard (I.S.) for one-step detection of multiple drug analysis with different detection wavelengths. This method was successfully applied to determine the concentrations of DOX and MMC delivered by both nanoparticle and solution approaches in whole blood and various tissues in an orthotopic breast tumor murine model. The analytical method presented is a useful tool for pre-clinical analysis of nanoparticle-based delivery of drug combinations.

This protocol describes an efficient and convenient analytical process of sample extraction and simultaneous determination of multiple drugs, doxorubicin (DOX), mitomycin C (MMC) and a cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in the biological samples from a preclinical breast tumor model treated with nanoparticle formulations of synergistic drug combination.

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Tıp

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being investigated for applications in imaging and therapy. Viral nanoparticles (VNPs) derived from plants can be regarded as self-assembled bionanomaterials with defined sizes and shapes. Plant viruses under investigation in the Steinmetz lab include icosahedral particles formed by Cowpea mosaic virus (CPMV) and Brome mosaic virus (BMV), both of which are 30 nm in diameter. We are also developing rod-shaped and filamentous structures derived from the following plant viruses: Tobacco mosaic virus (TMV), which forms rigid rods with dimensions of 300 nm by 18 nm, and Potato virus X (PVX), which form filamentous particles 515 nm in length and 13 nm in width (the reader is referred to refs. 1 and 2 for further information on VNPs).
From a materials scientist's point of view, VNPs are attractive building blocks for several reasons: the particles are monodisperse, can be produced with ease on large scale in planta, are exceptionally stable, and biocompatible. Also, VNPs are "programmable" units, which can be specifically engineered using genetic modification or chemical bioconjugation methods 3. The structure of VNPs is known to atomic resolution, and modifications can be carried out with spatial precision at the atomic level4, a level of control that cannot be achieved using synthetic nanomaterials with current state-of-the-art technologies.
In this paper, we describe the propagation of CPMV, PVX, TMV, and BMV in Vigna ungiuculata and Nicotiana benthamiana plants. Extraction and purification protocols for each VNP are given. Methods for characterization of purified and chemically-labeled VNPs are described. In this study, we focus on chemical labeling of VNPs with fluorophores (e.g. Alexa Fluor 647) and polyethylene glycol (PEG). The dyes facilitate tracking and detection of the VNPs 5-10, and PEG reduces immunogenicity of the proteinaceous nanoparticles while enhancing their pharmacokinetics 8,11. We demonstrate tumor homing of PEGylated VNPs using a mouse xenograft tumor model. A combination of fluorescence imaging of tissues ex vivo using Maestro Imaging System, fluorescence quantification in homogenized tissues, and confocal microscopy is used to study biodistribution. VNPs are cleared via the reticuloendothelial system (RES); tumor homing is achieved passively via the enhanced permeability and retention (EPR) effect12. The VNP nanotechnology is a powerful plug-and-play technology to image and treat sites of disease in vivo. We are further developing VNPs to carry drug cargos and clinically-relevant imaging moieties, as well as tissue-specific ligands to target molecular receptors overexpressed in cancer and cardiovascular disease.

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Plant viral nanoparticles (VNPs) are promising platforms for applications in biomedicine. Here, we describe the procedures for plant VNP propagation, purification, characterization, and bioconjugation. Finally, we show the application of VNPs for tumor homing and imaging using a mouse xenograft model and fluorescence imaging.

Viral Nanopartiküller<em&gt; In vivo</em&gt; Tümör Görüntüleme

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Biyomühendislik

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory cytokine interleukin-1 alpha (IL-1&#945;) has been evaluated as an anticancer agent in several preclinical and clinical studies. However, dose-limiting toxicities, including flu-like symptoms and hypotension, have dampened the enthusiasm for this therapeutic strategy. Polyanhydride nanoparticle (NP)-based delivery of IL-1&#945; would represent an effective approach in this context since this may allow for a slow and controlled release of IL-1&#945; systemically while reducing toxic side effects. Here an analysis of the antitumor activity of IL-1&#945;-loaded polyanhydride NPs in a head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) syngeneic mouse model is described. Murine oropharyngeal epithelial cells stably expressing HPV16 E6/E7 together with hRAS and luciferase (mEERL) cells were injected subcutaneously into the right flank of C57BL/6J mice. Once tumors reached 3-4 mm in any direction, a 1.5% IL-1a - loaded 20:80 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane:1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane (CPTEG: CPH) nanoparticle (IL-1&#945;-NP) formulation was administered to mice intraperitoneally. Tumor size and body weight were continuously measured until tumor size or weight loss reached euthanasia criteria. Blood samples were taken to evaluate antitumor immune responses by submandibular venipuncture, and inflammatory cytokines were measured through cytokine multiplex assays. Tumor and inguinal lymph nodes were resected and homogenized into a single-cell suspension to analyze various immune cells through multicolor flow cytometry. These standard methods will allow investigators to study the antitumor immune response and potential mechanism of immunostimulatory NPs and other immunotherapy agents for cancer treatment.

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

A standard protocol is described to study the antitumor activity and associated toxicity of IL-1&#945; in a syngeneic mouse model of HNSCC.

Polianhidrit IL-1α Nanopartiküllerinin In vivo Antitümör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same pathway, are likely to fail. Emphasis must be placed upon the inhibition of pathways that are responsible for intrinsic and/or adaptive resistance to therapy. An active field of investigation is the development and testing of DNA repair inhibitors that promote the action of, and prevent resistance to, commonly used chemotherapy and radiotherapy. We used a novel protocol to evaluate the effectiveness of BRCA2 inhibition as a means to sensitize tumor cells to the DNA damaging drug cisplatin. Tumor cell metabolism (acidification and respiration) was monitored in real-time for a period of 72 hr to delineate treatment effectiveness on a minute by minute basis. In combination, we performed an assessment of metastatic frequency using a chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model of extravasation and invasion. This protocol addresses some of the weaknesses of commonly used in vitro and in vivo methods to evaluate novel cancer therapy regimens. It can be used in addition to common methods such as cell proliferation assays, cell death assays, and in vivo murine xenograft studies, to more closely discriminate amongst candidate targets and agents, and select only the most promising candidates for further development.

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Here, real-time monitoring of tumor cell metabolism, combined with an in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane (CAM) model of metastasis, are used to evaluate novel anti-cancer targets/agents for their ability to sensitize tumor cells to DNA damaging chemotherapeutics.

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

<meta charset="utf8"></head><body>Metastatik Meme Kanserini Tedavi Etmek için Onkojenik miRNA-10b'yi Hedefleyen Nano İlaç

Monitoring of Nanodrug Accumulation in Murine Breast Cancer Metastases

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have been shown to be associated with the metastatic potential of breast cancer and are implicated in tumor cell migration, invasion, and viability. However, it can be difficult to deliver an inhibitory RNA molecule to the tissue of interest. To overcome this challenge and deliver active antisense oligonucleotides to tumors, we utilized magnetic iron oxide nanoparticles as a delivery platform. These nanoparticles target tissues with increased vascular permeability, such as sites of inflammation or cancer. Delivery of these nanoparticles can be monitored in vivo by magnetic resonance imaging (MRI) due to their magnetic properties. Translation of this therapeutic approach into the clinic will be more accessible because of its compatibility with this relevant imaging modality. They can also be labeled with other imaging reporters such as a Cy5.5 near-infrared optical dye for correlative optical imaging and fluorescence microscopy. Here, we demonstrate that nanoparticles labeled with Cy5.5 and conjugated to therapeutic oligomers targeting oncogenic miRNA-10b (termed MN-anti-miR10b, or &#34;nanodrug&#34;) administered intravenously accumulate in metastatic sites, opening a possibility for therapeutic intervention of metastatic breast cancer.

<meta charset="utf8"></head><body>Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Here, we describe the protocol for in vivo delivery of magnetic iron oxide nanoparticles carrying RNA oligomers to metastatic breast cancer in animal models, providing a clinically viable approach for the therapeutic silencing of oncogenic nucleic acids.

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have ...

Kapsamlı Usulü değerlendirin

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Akciğer Kanseri Hedefli Nanopartiküller ile Fotodinamik Tedavi antikanser Etkinliği

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Viral Nanopartiküller

Polianhidrit IL-1α Nanopartiküllerinin In vivo Antitümör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi