The authors would like to thank Drs. Helene Salmon and Miriam Merad from Icahn School of Medicine at Mount Sinai for providing the B16-F10-YFP cells and for their expert advice on melanoma mouse models. The authors further thank the Animal Imaging Core Facility, the Radiochemistry and Molecular Imaging Probes Core Facility, and the Molecular Cytology Core Facility at Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) for their support. This work was supported by National Institutes of Health grants NIH 1 R01 HL125703 (W.J.M.M.), R01CA155432 (W.J.M.M.), K25 EB016673 (T.R.) and P30 CA008748 (MSK Center Grant). The authors also thank the Center for Molecular Imaging and Nanotechnology (CMINT) at MSK for their financial support (T.R.).

ההליך מורכב של תיוג רדיואקטיבית פלורסנט כפול של חלקיקים, in vivo הדמיה PET-CT, מדידות biodistribution vivo לשעבר, לשעבר vivo immunostaining וזרימה cytometry מנתח. כל הניסויים בבעלי החיים אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש של מרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג. 1. הכנה ליפוזומים שכותרתו הכפולה הערה: גידולים מלנומה B16 syngeneic יכולה להיגרם על ידי הזרקת תאי 300,000 B16-F10 בירכיו האחוריות של C57BL / 6 עכברים בהרדמת משאיפת 2% -isoflurane המכיל חמצן. השתמש ריאגנטים וכלים סטריליים סביבת עבודה סטרילית במהלך הניתוח. לאחר הניתוח, אנא קראו בעיון את החיות עד להחלמה שלהם מן ההרדמה. מכניסים את החיות בחזרה אל תוך הכלובים שלהם רק כשהם להכרתו וניידות מלאה. לשכן אותם בחדרים סטריליים חיות עם גידולים xenografted. גידולים עם גודלשל 300 מ&quot;מ 3 הם אידיאליים לאפיון ננו-חלקיקים בשל התופעות החדירות ושימור המשופר המבוטאות שלהם (EPR), אשר יכול להגביר את הצטברות ננו-חלקיקים. הפרוטוקולים המפורטים מובאים בהמשך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבקבוק מסביב לתחתית, לפזר תערובת של 20 מ&quot;ג של שומנים 2 מ&quot;ל של כלורופורם המכילים 1,2-dipalmitoyl- SN -glycero-3-phophocholine (DPPC), כולסטרול, 1,2-disearoyl- SN -glycero- 3-phosphoethanolamine-פולי (אתילן גליקול) 2000 (DSPE-PEG2000), DSPE-deferoxamine (DSPE-DFO) 8, וחומצה 1,1-diododecyl-3,3,3,3-tetramethylindodicarbocyanine-5,5-disulfonic ( DiIC12 [5] -DS) על יחסים טוחנים של 61.3%, 33.4%, 5, 0.2%, ו -0.1%, בהתאמה. הערה: רכב שומנים זה דומה מאוד לניסוח liposomal של דוקסורוביצין המשמש כיום את המרפאה 2. ליפוזומים נובע ההליך שלנו יעקבו מקרוב לחקות את הביצועים ב vivo של nanomedic הקליניine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מאייד סיבובי כדי להסיר את הממס האורגני ויוצר סרט שומנים דק בטמפרטורת חדר. הוסף 20 מ&quot;ל של PBS sonicate במשך 30 דקות כדי ליצור חלקיקים liposomal באמצעות טיפ sonication 3.8 מ&quot;מ אמפליטודה של 30 וואט, עם קירור מספיק על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הפתרון liposome ב 4000 XG במשך 10 דקות כדי להסיר את אגרגטים לשטוף חלקיקים עם PBS באמצעות סינון צנטריפוגלי (משקל מולקולרי חתוכים (MWCO:. 100 KDA) כדי להסיר שומנים בחינם ממיס אורגני שיורית לרכז את ליפוזומים, אשר יהיה להישאר בתא העליון, ולהעבירם צינור חדש. ניתן לאחסן ליפוזומים בתוך מקרר ב PBS עד 1 שבוע לפני הצעדים הבאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בקרת איכות, לאפיין את ליפוזומים ידי פיזור אור דינאמי (DLS). באופן ספציפי, לערבב 50 μL של ליפוזומים עם 950 μL של PBS, ולאחר מכן להעביר את התערובת לתוך קובט האומדת. מניחים את קובט ב הנתח ולמדוד את החלקיקיםבגדלים והפצת גודלם. גדלי החלקיקים והפצת גודל היישוב (מדד polydispersity (PDI)) צפויים להיות 90 - 120 ננומטר ו -0.1 - 0.2, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת radiolabeling, לערבב את ליפוזומים מטוהרים, שווה ערך ל 2 מ&quot;ג של שומנים, ב- PBS ב- pH בין 6.9 ו -7.1 עם 1 MCI 89 ZR-אוקסלט ב 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות ב צינור 1.5 מ&quot;ל, (הנפח הכולל: ~ 100 μL). הסר את בחינם, unreacted 89 Zr ידי סינון צנטריפוגלי (MWCO = 100 KDA), בדומה לשלב 1.3. שטפו את retentate עם PBS סטרילית לדלל אותו אל העוצמה הרצויה. תשואת radiochemical צריכה להיות 80 - 95%. זְהִירוּת! עבודה עם חומרים רדיואקטיביים הוא פיקוח הדוק. מוסדות חייבים להיות מוסמכים ולספק את המתקנים דרושים, אימון כוח אדם, וניטור קפדני שימוש רדיואקטיביות. חוקרים צריכים לקבל הכשרה מתאימה ללבוש ציוד וטבעות dosimetry מגן אישיים / תגים בעת טיפול רדיואקטיביות. </li><li&gt; קבע את טוהר radiochemical של ליפוזומים radiolabeled ידי הדרת גודל רדיו-HPLC, אשר בדרך כלל צריך להיות מעל 98% 10. purities Radiochemical הנמוך מ -95% מעיד על כביסה מספיק על שלב 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר radiolabeling, לקבוע את הגודל של החלקיקים על ידי פיזור אור דינאמי. הגודל PDI צפויים להיות בתוך אותו טווח המדידות בשלב 1.4 10. הערה: אם דגימות רדיואקטיבי אינם מורשים להיכנס cytometer את הזרימה או מיקרוסקופ פלואורסצנטי, שאינם רדיואקטיביים NAT ZR-אוקסלט ניתן להשתמש בתווית ליפוזומים בשלב 1.5. יש ליפוזומים שאינם רדיואקטיביים אלה מאפיינים זהים אנלוגים רדיואקטיבי שלהם. תיאור של הליך זה מסופק באיור 2. </li></ol> 2. Vivo PET-CT הדמית biodistribution של ליפוזומים כפולים שכותרתו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק כ -100 μL של ליפוזומים כפולים שכותרתו wה- i כ -300 μCi של רדיואקטיביות לעכברים מלנומה מאופק (C57BL / 6, נקבה, 10 - 16 שבועות הישן) בוורידים הזנב שלהם, בסביבות 10 MCI 89 Zr / ק&quot;ג משקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את זמן מחצית החיים, להקיז דם מווריד הזנב מחיות הרדים מתחת 2% isoflurane המכיל חמצן באמצעות מזרקים 28-G אינסולין. אסוף את הדם (10 - 20 μL) צינורות טרום שקל ב -2 דקות, 15 דקות, 1 שעות, 4 שעות, 8 שעות, 24 שעות, ו -48 שעות לאחר ההזרקה. לשקול את הדם על ידי ההבדל, לקבוע תוכן רדיואקטיביות באמצעות מונה גמא, ולחשב ריכוז הרדיואקטיביות כאחוז מהחומר המוזרק לגרם (% מזהה / g). הערה: בצע את ההליך בחדר מצויד במערכת הרדמה, כלובי התאוששות, חימום, וברדס Biohazard. ודא כי בעלי החיים באופן מלא להתאושש ולהשיג ניידות נורמלית לאחר ההליך לפני העביר מכלובי התאוששות כדי להחזיק בכלובים. בית חי נושאות הגידול בחדרים המיועדים לבעלי חיים מנוהלים עםחומרים רדיואקטיביים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 או 48 שעות לאחר ההזרקה של ליפוזומים, תמונה העכברים בתוך סורק MicroPET-CT קטן-חיה 10. מניח את החיה הרדימה אופקי על הבטן שלה ולשמור אותו בהרדמה. נהל 2% חמצן isoflurane באמצעות חרטומו. החל משחת עיניים לעיניים שלה לפני הסריקה כדי למנוע מהם הייבוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע הקלטת סריקת סטטי PET גוף כולו לפחות 50 מיליון אירועים חופפים, עם משך משוער של 15 דק &#39;. הגדר את חלון תזמון אנרגיה ומקריות ב 350-700 קאב 6 ננו-שניות, בהתאמה. לאחר מכן, לבצע טומוגרפיה ממוחשבת של 5 דקות סריקה (CT). הגדר את שפופרת רנטגן למתח של 80 קילו וולט וזרם של 500 מיקרו-אמפר; בדיקת ה- CT משתמשת 120 צעדי סיבוב עבור סכום כולל של 220 מעלות, עם כ 145 מילישניות לכל מסגרת 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סריקת PET-CT, מיד להקריב את העכברים בחנק פחמן דו חמצני לאשר את מותם על ידי pinching הכפות של החיות. לאחר אשר, לבצע לנקעי צוואר רחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הדם ברקמות עכבר על ידי החיתוך הראשון פתוח אטריום ימין ולאחר מכן הזרקת 20 המ&quot;ל PBS לתוך החדר השמאלי, ולאחר מכן לאסוף את הרקמות הרלוונטיות כגון גידולים, כבד, טחול, ריאות, כליות, שרירים, ועוד 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את הרקמות, למדוד תוכן הרדיואקטיביות שלהם על ידי גמא לספור 8, 9, ולחשב את הצטברות רדיואקטיביות רקמות כאחוז מהחומר המוזרק לכל גרם (% מזהה / g). </li></ol> 3. Ex Vivo Cytometry זרימה Immunostaining הערה: להזריק כ -100 μL של ליפוזומים פלורסנט לעכברים מלנומה דרך וריד הזנב שלהם במינון של 0.5 מ&quot;ג של צבע לכל ק&quot;ג ממשקל הגוף. אם דגימות רדיואקטיבי אינם מורשים להיכנס cytometer את הזרימה ואת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ליפוזומים שאינם רדיואקטיביים חייב לשמש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקורבן לאחר ההזרקה h עכברים 24, כמו בשלב 2.5, לאסוף את הגידולים, אשר חייב להיות מאוחסן PBS קר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור cytometry זרימה, בצע את הפעולות הבאות 17: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קוקטייל אנזים המורכב מתערובת של לי collagenase מטוהרים השנייה (4 U / mL), hyaluronidase (60 U / mL), ו DNase אני (60 U / mL) בתזרים cytometry חיץ (PBS עם 0.5% BSA ו 1 mM EDTA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 100 מ&quot;ג של רקמת הגידול עם 200 μL של חיץ קוקטייל האנזים צינור 1.5 מ&quot;ל לקוביות הרקמה לחתיכות קטנות עם מספריים בסדר. הוסף עוד 1.3 מ&quot;ל של קוקטייל האנזים לתוך הצינור ולהעביר את תכולתה צלחת 6 באר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנער את הצלחת 6-היטב על שייקר אופקי המונח בתוך תנור 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות ב 60 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את homogenate רקמות עם זרימת cytometry חיץ 3 פעמים כדי לקבל השעיה תא בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם התאים עם קוקטייל של נוגדנים ספציפיים ביומרקרים כולל CD45, CD11b, Ly6C, CD11c,CD64, CD3, MHCII, ו CD31 (1: 200 דילול לכל נוגדנים; מידע שיבוט מסופק בגיליון האלקטרוני חומרים). זיהוי סוגי תאים רלוונטיים ולקבוע עוצמת הקרינה הממוצעת שלהם (MFI) של DiIC12 (5) -DS בכל אוכלוסיית תאים עם זרימה מתאימה cytometry תוכנת ניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור immunostaining, בצע את הפעולות הבאות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח גידול לתוך קלטת המלאה בינוני חיתוך אופטימלי (OCT) ולהקפיא אותו על קרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך חלקים קפוא 6-מיקרומטר מרקמות גידול ומניח אותם על שקופיות זכוכית היסטולוגיה; הסעיפים צריכים לכסות את בחתכים הגדולים של הגידול, אשר מספקים את מידע הנציג ביותר על הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם הסמנים הביולוגיים (למשל, CD31 בתאי האנדותל) של עניין עם הנוגדנים המתאימים (למשל, אנטי CD31, שיבוט MEC13.3). תקן את החלקים עם paraformaldehyde; לחסום אותם עם סרום ההתאמה ממוצא המינים של נוגדנים משני; incubאכלו עם נוגדנים ראשוניים במשך 12 שעות ב 4 ° C ולאחר מכן עם נוגדנים משני עבור 2 שעות; ולבסוף, לשטוף עם PBS ומכסה תלושים לכסות. תמונת השקופיות מוכתמות מיקרוסקופ SP5 confocal זקוף ליקה 13, 16. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Peer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanocarriers+as+an+emerging+platform+for+cancer+therapy.">Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy.</a> Nat Nanotechnol. 2, 751-760 (2007).</li><li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxil(R)--the+first+FDA-approved+nano-drug:+lessons+learned.">Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned.</a> J Control Release. 160, 117-134 (2012).</li><li>Green, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abraxane,+a+novel+Cremophor-free,+albumin-bound+particle+form+of+paclitaxel+for+the+treatment+of+advanced+non-small-cell+lung+cancer.">Abraxane, a novel Cremophor-free, albumin-bound particle form of paclitaxel for the treatment of advanced non-small-cell lung cancer.</a> Ann Oncol. 17, 1263-1268 (2006).</li><li>Juliano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine:+is+the+wave+cresting?.">Nanomedicine: is the wave cresting?.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 171-172 (2013).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bankruptcy+filing+worries+developers+of+nanoparticle+cancer+drugs.">Bankruptcy filing worries developers of nanoparticle cancer drugs.</a> Nature. 533, 304-305 (2016).</li><li>Venditto, V. J., Szoka, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+nanomedicines:+so+many+papers+and+so+few+drugs!.">Cancer nanomedicines: so many papers and so few drugs!.</a> Adv Drug Deliv Rev. 65, 80-88 (2013).</li><li>Dunphy, M. P., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiopharmaceuticals+in+preclinical+and+clinical+development+for+monitoring+of+therapy+with+PET.">Radiopharmaceuticals in preclinical and clinical development for monitoring of therapy with PET.</a> J Nucl Med. (50 Suppl 1), (2009).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+Imaging+of+Tumor-Associated+Macrophages+with+89Zr-Labeled+High-Density+Lipoprotein+Nanoparticles.">PET Imaging of Tumor-Associated Macrophages with 89Zr-Labeled High-Density Lipoprotein Nanoparticles.</a> J Nucl Med. 56, 1272-1277 (2015).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+labeling+strategy+for+in+vivo+PET+and+near-infrared+fluorescence+imaging+of+nanoparticle+tumor+targeting.">A modular labeling strategy for in vivo PET and near-infrared fluorescence imaging of nanoparticle tumor targeting.</a> J Nucl Med. 55, 1706-1711 (2014).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoreporter+PET+predicts+the+efficacy+of+anti-cancer+therapy.">Nanoreporter PET predicts the efficacy of anti-cancer therapy.</a> Nature communications. , (2016).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+macrophage+proliferation+suppresses+atherosclerotic+plaque+inflammation.">Inhibiting macrophage proliferation suppresses atherosclerotic plaque inflammation.</a> Science advances. , (2015).</li><li>Priem, B., Tian, C., Tang, J., Zhao, Y., Mulder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+nanoparticles+for+the+accurate+detection+of+drug+delivery.">Fluorescent nanoparticles for the accurate detection of drug delivery.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12, 1881-1894 (2015).</li><li>Gianella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+nanoemulsion+platform+for+imaging+guided+therapy+evaluated+in+experimental+cancer.">Multifunctional nanoemulsion platform for imaging guided therapy evaluated in experimental cancer.</a> ACS Nano. 5, 4422-4433 (2011).</li><li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+with+liposomes+as+pharmaceutical+carriers.">Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 145-160 (2005).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44, 924-938 (2016).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+PET+Imaging+of+HDL+in+Multiple+Atherosclerosis+Models.">In Vivo PET Imaging of HDL in Multiple Atherosclerosis Models.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 9, 950-961 (2016).</li><li>Duivenvoorden, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statin-loaded+reconstituted+high-density+lipoprotein+nanoparticle+inhibits+atherosclerotic+plaque+inflammation.">A statin-loaded reconstituted high-density lipoprotein nanoparticle inhibits atherosclerotic plaque inflammation.</a> Nature communications. 5, 3065 (2014).</li><li>Carney, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+PET+Imaging+of+PARP1+Expression+in+Glioblastoma+Models.">Non-invasive PET Imaging of PARP1 Expression in Glioblastoma Models.</a> Mol Imaging Biol. , (2015).</li><li>Salinas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioiodinated+PARP1+tracers+for+glioblastoma+imaging.">Radioiodinated PARP1 tracers for glioblastoma imaging.</a> EJNMMI Res. 5, 123 (2015).</li><li>Carlucci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Modality+Optical/PET+Imaging+of+PARP1+in+Glioblastoma.">Dual-Modality Optical/PET Imaging of PARP1 in Glioblastoma.</a> Mol Imaging Biol. 17, 848-855 (2015).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+screening+of+a+nanoparticle+library+improves+atherosclerosis+therapy.">Immune cell screening of a nanoparticle library improves atherosclerosis therapy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2016).</li><li>Scott, A. M., Wolchok, J. D., Old, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+therapy+of+cancer.">Antibody therapy of cancer.</a> Nat Rev Cancer. 12, 278-287 (2012).</li><li>Goodwill, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-space+MPI:+magnetic+nanoparticles+for+safe+medical+imaging.">X-space MPI: magnetic nanoparticles for safe medical imaging.</a> Adv Mater. 24, 3870-3877 (2012).</li></ol>

The authors have no disclosure to make.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול: האיכות הגבוהה של ליפוזומים כפולים שכותרתו היא המפתח לייצר תוצאות עקביות על פני תקופה ארוכה של זמן. צבעי ניאון חינם או 89 יוני Zr יכולים ליצור דפוסי מיקוד שונים לחלוטין ויש להסירם לחלוטין במהלך שלב...

ננו-רפואה היא הסטה הפרדיגמה של פיתוח טיפול בסרטן 1. בהשראת ההשפעה הקלינית העצומה של ננו-רפואת הסרטן הקודם, כגון liposome- ו nanotherapies מבוסס אלבומין 2, 3, ניסוחי רומן רבים הופקו בעשור האחרון. עם זאת, הניתוחים האחרונים של הצלחת התרגום הקלינית של ננו-רפואת הסרטן אלה עולים, כי רק מעטים מהם אושרו לשימוש קליני 4, 5. מכשול עיקרי אחת לתרגום הקליני של ננו-רפואת הסרטן החדש הוא השיפור המוגבל שלהם של החלון תרפויטי לעומת הממשל הישיר של התרכובות הטיפוליות בחינם 6. כפי הערכתנו, מדויקת של ביצועי vivo של ננו-רפואה בבית, רקמה מערכתית, ורמות הסלולר במודלים של בעלי חיים פרה-קליניים חיוני identify בעלי מדדה טיפולי אופטימלי לתרגום קליני עתידי. ננו יכול להיות רדיואקטיבי לאפיון כמוני לחיות חיים עם הדמיה טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET), אשר יש רגישויות שחזור מעולות בין כל שיטות ההדמיה הקליניות 7. לדוגמא, 89 Zr שכותרתו לטווח במחזור ננו-רפואה מתאפיינת בעכברי מודל לסרטן 8, 9, 10, כמו גם במודלי מחלה אחרים 11. בנוסף, הדם מחצית החיים biodistribution של ננו-רפואה ניתן להעריך באופן נרחב באמצעות מדידות קרינה רדיואקטיבית vivo לשעבר ברקמות בודדים 8. לכן, radiolabeling מאפשר הערכה כמותית של ננו-רפואה ברמות מערכתיות ורקמות. חשוב לציין, radiolabeleננו-רפואה ד כלל לא ניתן לנתח על-התא הבודד או רמות subcellular בשל ברזולוציה מרחבית המוגבלת של האות רדיואקטיבי. לכן, תיוג פלורסנט מוכיח להיות אפנות משלימים עבור ההערכה של חלקיקים עם טכניקות הדמיה אופטיות כגון cytometry זרימת הקרינה מיקרוסקופיה 12. לשם כך, חלקיקים שכותרתו עם ברדיואיזוטופים תגי פלורסנט ניתן להעריך כמותית in vivo על ידי הדמיה גרעינית לשעבר vivo על ידי ספירת רדיואקטיביות, והם יכולים גם להיות מאופיינים בהרחבה ברמה התאית על ידי הדמיה אופטית. בעבר, פיתחנו נהלים מודולרית לשלב תוויות רדיואקטיבי פלורסנט לתוך חלקיקים שונים, כולל ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (HDL) 11, ליפוזומים 9, 10, חלקיקים פולימריים, שברי נוגדנים, ו nanoemulsions 10, 13. חלקיקים אלה שכותרתו אפשרו לאפיון כמוני במודלים של בעלי חיים רלוונטיים ברמות שונות, אשר הנחו את אופטימיזציה של ננו אלה עבור היישומים הספציפיים שלהם. במחקר הנוכחי, המטרה היא להשתמש חלקיקים-the liposomal פלטפורמת ננו-הרפואה ביותר שהוקם 14 -as דוגמא להפגין נהלים מקיפים כדי ליצור ננו-חלקיקים כפולים שהכותרת ולאפיין אותו ביסודיות במודל של עכברי B16-F10 מלנומה syngeneic קלסי 15 . מהתוצאות, אנו בטוחים זה גישת אפיון nanoparticle ניתן להתאים להעריך ננו-רפואת הסרטן אחר בעכברי מודל רלוונטי.

<table><tbody><tr><td>DPPC</td><td>Avantilipids</td><td>850355</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000</td><td>Avantilipids</td><td>880120P</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-DFO</td><td>Home made</td><td>110634</td><td>Perez-Medina &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, JNM, 2014</td></tr><tr><td>DiIC12[5]-DS</td><td>AAT Bioquest</td><td>22051</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal filter</td><td>Vivaproducts</td><td>VS2061</td><td></td></tr><tr><td>Rotary evaporator</td><td>Buchi</td><td>R-100</td><td></td></tr><tr><td>Radio-HPLC</td><td>Shimadzu HPLC with 2 LC-10AT pumps</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;89&lt;/sup&gt;Zr-oxalate</td><td>MSKCC</td><td>Synthesized in house</td><td>TR19/9 variable beam cyclotron (Ebco Industries Inc.)</td></tr><tr><td>Micro PET-CT</td><td>Siemens</td><td>Inveon Micro-PET/CT</td><td></td></tr><tr><td>Gamma counter</td><td>PerkinElmer</td><td>2470-0150</td><td></td></tr><tr><td>Flow cytometry</td><td>BD Biosciences</td><td>Fortessa</td><td>Any multi-parametric flow cytometry analyzers would suffice</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16-YFP melanoma cells</td><td>Home made</td><td>N/A</td><td>Salmon &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, Immunity, 2016</td></tr><tr><td>Ly6C (clone HK1.4)--APC-Cy7</td><td>128025</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>MHCII (M5/114/152)--APC</td><td>107613</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (30-F11)--BV510</td><td>103137</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD64 (X54-5/7.1)--PE-Cy7</td><td>139313</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11b (M1/70)--BV605</td><td>101237</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (17A2)--BV711</td><td>100241</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3)--PE</td><td>561073</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11c (M418)--PerCP-Cy5.5</td><td>117327</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3) no fluorophore</td><td>550274</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr></tbody></table>

a comprehensive procedure to evaluate the in vivo performance of cancer nanomedicines

בהשראת ההצלחה של ננו-רפואת הסרטן הקודם במרפאת, חוקרים יצרו מספר רב של ניסוחי רומן בעשור האחרון. עם זאת, רק מספר קטן של ננו-רפואה אושר לשימוש קליני, ואילו רוב ננו-רפואה בפיתוח קליני הניבו תוצאות מאכזבות. מכשול עיקרי אחת לתרגום הקליני המוצלח של ננו-רפואת הסרטן החדש הוא חוסר הבנה מדויקת של ביצועי in vivo שלהם. מאמר זה כולל הליך קפדני על מנת לאפיין את התנהגות in vivo של ננו-רפואה בעכברים נושאי גידול ב מערכתית, רקמה, תא בודד, ורמות subcellular באמצעות שילוב של טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה ממוחשבת (PET-CT), שיטות כימות רדיואקטיביות , cytometry זרימה, מיקרוסקופ פלואורסצנטי. בגישה זו, חוקרים יכולים להעריך ניסוחי ננו רומן במדויק בעכברי מודל רלוונטי של Cancer. פרוטוקולים אלה עשויים יש את היכולת לזהות את ננו-רפואת הסרטן המבטיח ביותר עם פוטנציאל translational גבוה או כדי לסייע אופטימיזציה של ננו-רפואת הסרטן לתרגום בעתיד.

איור 1 מציג סקירה של ההליך. איור 2 מציג את הליך סינתזה סכמטי של ליפוזומים כפול שכותרתו כמתואר בשלב 1 10. איור 3 הינה ביטוי של PET-CT התמונה (איור 3 א), כימות רדיואקטיביות מ PET הדמיה (איור 3 ב), דם מחצית ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines at JoVE.com

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

נוהל מקיף כדי להעריך את<em&gt; In vivo</em&gt; ביצועים של סרטן ננו-רפואה

Inspired by the success of previous cancer nanomedicines in the clinic, researchers have generated a large number of novel formulations in the past ...

a-comprehensive-procedure-to-evaluate-vivo-performance-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

8.8K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

Video: A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. Photosensitizers selectively accumulate in tumor tissue and lead to tumor cell death in the presence of oxygen and the proper wavelength of light.
To increase the therapeutic effect of PDT, we developed both photosensitizer- and anticancer agent-loaded lung cancer-targeted nanoparticles. Both enhanced permeability and retention (EPR) effect-based passive targeting and hyaluronic-acid-CD44 interaction-based active targeting were applied. CD44 is a well-known hyaluronic acid receptor that is often introduced as a biomarker of non-small cell lung cancer. 
In addition, a combination of PDT and chemotherapy is adopted in the present study. This combination concept may increase anticancer therapeutic effects and reduce adverse reactions. 
We chose hypocrellin B (HB) as a novel photosensitizer in this study. It has been reported that HB causes higher anticancer efficacy of PDT compared to hematoporphyrin derivatives1. Paclitaxel was selected as the anticancer drug since it has proven to be a potential treatment for lung cancer2. 
The antitumor efficacies of photosensitizer (HB) solution, photosensitizer encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-NPs), and both photosensitizer- and anticancer agent (paclitaxel)-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-P-NPs) after PDT were compared both in vitro and in vivo. The in vitro phototoxicity in A549 (human lung adenocarcinoma) cells and the in vivo antitumor efficacy in A549 tumor-bearing mice were evaluated.
The HB-P-NP treatment group showed the most effective anticancer effect after PDT. In conclusion, the HB-P-NPs prepared in the present study represent a potential and novel photosensitizer delivery system in treating lung cancer with PDT.

Photodynamic therapy (PDT) is an alternative choice for lung cancer treatment. To increase the therapeutic effect of PDT, lung cancer-targeted nanoparticles combined with chemotherapy were developed. Both in vitro and in vivo anticancer efficacies of PDT with prepared nanoparticles were evaluated.

יעילות אנטי סרטנית של טיפול פוטודינמי עם ריאות חלקיקים סרטן ממוקד

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its therapeutic benefit. Nanoparticle-based drug combination has been shown to mitigate the problems encountered by free drug combination therapy. Our previous studies have shown that the combination of two anticancer drugs, doxorubicin (DOX) and mitomycin C (MMC), produced a synergistic effect against both murine and human breast cancer cells in vitro. DOX and MMC co-loaded polymer-lipid hybrid nanoparticles (DMPLN) bypassed various efflux transporter pumps that confer multidrug resistance and demonstrated enhanced efficacy in breast tumor models. Compared to conventional solution forms, such superior efficacy of DMPLN was attributed to the synchronized pharmacokinetics of DOX and MMC and increased intracellular drug bioavailability within tumor cells enabled by the nanocarrier PLN. 
To evaluate the pharmacokinetics and bio-distribution of co-administered DOX and MMC in both free solution and nanoparticle forms, a simple and efficient multi-drug analysis method using reverse-phase high performance liquid chromatography (HPLC) was developed. In contrast to previously reported methods that analyzed DOX or MMC individually in the plasma, this new HPLC method is able to simultaneously quantitate DOX, MMC and a major cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in various biological matrices (e.g., whole blood, breast tumor, and heart). A dual fluorescent and ultraviolet absorbent probe 4-methylumbelliferone (4-MU) was used as an internal standard (I.S.) for one-step detection of multiple drug analysis with different detection wavelengths. This method was successfully applied to determine the concentrations of DOX and MMC delivered by both nanoparticle and solution approaches in whole blood and various tissues in an orthotopic breast tumor murine model. The analytical method presented is a useful tool for pre-clinical analysis of nanoparticle-based delivery of drug combinations.

This protocol describes an efficient and convenient analytical process of sample extraction and simultaneous determination of multiple drugs, doxorubicin (DOX), mitomycin C (MMC) and a cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in the biological samples from a preclinical breast tumor model treated with nanoparticle formulations of synergistic drug combination.

חילוץ מדגם, כימות כרומטוגרפי סימולטני של דוקסורוביצין, מיטומיצין C שלאחר משלוח סמים בשילוב של חלקיקים נושאות לעכברים

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Medicine

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being investigated for applications in imaging and therapy. Viral nanoparticles (VNPs) derived from plants can be regarded as self-assembled bionanomaterials with defined sizes and shapes. Plant viruses under investigation in the Steinmetz lab include icosahedral particles formed by Cowpea mosaic virus (CPMV) and Brome mosaic virus (BMV), both of which are 30 nm in diameter. We are also developing rod-shaped and filamentous structures derived from the following plant viruses: Tobacco mosaic virus (TMV), which forms rigid rods with dimensions of 300 nm by 18 nm, and Potato virus X (PVX), which form filamentous particles 515 nm in length and 13 nm in width (the reader is referred to refs. 1 and 2 for further information on VNPs).
From a materials scientist's point of view, VNPs are attractive building blocks for several reasons: the particles are monodisperse, can be produced with ease on large scale in planta, are exceptionally stable, and biocompatible. Also, VNPs are "programmable" units, which can be specifically engineered using genetic modification or chemical bioconjugation methods 3. The structure of VNPs is known to atomic resolution, and modifications can be carried out with spatial precision at the atomic level4, a level of control that cannot be achieved using synthetic nanomaterials with current state-of-the-art technologies.
In this paper, we describe the propagation of CPMV, PVX, TMV, and BMV in Vigna ungiuculata and Nicotiana benthamiana plants. Extraction and purification protocols for each VNP are given. Methods for characterization of purified and chemically-labeled VNPs are described. In this study, we focus on chemical labeling of VNPs with fluorophores (e.g. Alexa Fluor 647) and polyethylene glycol (PEG). The dyes facilitate tracking and detection of the VNPs 5-10, and PEG reduces immunogenicity of the proteinaceous nanoparticles while enhancing their pharmacokinetics 8,11. We demonstrate tumor homing of PEGylated VNPs using a mouse xenograft tumor model. A combination of fluorescence imaging of tissues ex vivo using Maestro Imaging System, fluorescence quantification in homogenized tissues, and confocal microscopy is used to study biodistribution. VNPs are cleared via the reticuloendothelial system (RES); tumor homing is achieved passively via the enhanced permeability and retention (EPR) effect12. The VNP nanotechnology is a powerful plug-and-play technology to image and treat sites of disease in vivo. We are further developing VNPs to carry drug cargos and clinically-relevant imaging moieties, as well as tissue-specific ligands to target molecular receptors overexpressed in cancer and cardiovascular disease.

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Plant viral nanoparticles (VNPs) are promising platforms for applications in biomedicine. Here, we describe the procedures for plant VNP propagation, purification, characterization, and bioconjugation. Finally, we show the application of VNPs for tumor homing and imaging using a mouse xenograft model and fluorescence imaging.

חלקיקים נגיפיים עבור<em&gt; בחי</em&gt; הדמית גידול

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Bioengineering

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory cytokine interleukin-1 alpha (IL-1&#945;) has been evaluated as an anticancer agent in several preclinical and clinical studies. However, dose-limiting toxicities, including flu-like symptoms and hypotension, have dampened the enthusiasm for this therapeutic strategy. Polyanhydride nanoparticle (NP)-based delivery of IL-1&#945; would represent an effective approach in this context since this may allow for a slow and controlled release of IL-1&#945; systemically while reducing toxic side effects. Here an analysis of the antitumor activity of IL-1&#945;-loaded polyanhydride NPs in a head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) syngeneic mouse model is described. Murine oropharyngeal epithelial cells stably expressing HPV16 E6/E7 together with hRAS and luciferase (mEERL) cells were injected subcutaneously into the right flank of C57BL/6J mice. Once tumors reached 3-4 mm in any direction, a 1.5% IL-1a - loaded 20:80 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane:1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane (CPTEG: CPH) nanoparticle (IL-1&#945;-NP) formulation was administered to mice intraperitoneally. Tumor size and body weight were continuously measured until tumor size or weight loss reached euthanasia criteria. Blood samples were taken to evaluate antitumor immune responses by submandibular venipuncture, and inflammatory cytokines were measured through cytokine multiplex assays. Tumor and inguinal lymph nodes were resected and homogenized into a single-cell suspension to analyze various immune cells through multicolor flow cytometry. These standard methods will allow investigators to study the antitumor immune response and potential mechanism of immunostimulatory NPs and other immunotherapy agents for cancer treatment.

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

A standard protocol is described to study the antitumor activity and associated toxicity of IL-1&#945; in a syngeneic mouse model of HNSCC.

הערכת הפעילות האנטי-סרטנית In vivo של ננו-חלקיקים פוליאנהידריד IL-1α

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same pathway, are likely to fail. Emphasis must be placed upon the inhibition of pathways that are responsible for intrinsic and/or adaptive resistance to therapy. An active field of investigation is the development and testing of DNA repair inhibitors that promote the action of, and prevent resistance to, commonly used chemotherapy and radiotherapy. We used a novel protocol to evaluate the effectiveness of BRCA2 inhibition as a means to sensitize tumor cells to the DNA damaging drug cisplatin. Tumor cell metabolism (acidification and respiration) was monitored in real-time for a period of 72 hr to delineate treatment effectiveness on a minute by minute basis. In combination, we performed an assessment of metastatic frequency using a chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model of extravasation and invasion. This protocol addresses some of the weaknesses of commonly used in vitro and in vivo methods to evaluate novel cancer therapy regimens. It can be used in addition to common methods such as cell proliferation assays, cell death assays, and in vivo murine xenograft studies, to more closely discriminate amongst candidate targets and agents, and select only the most promising candidates for further development.

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Here, real-time monitoring of tumor cell metabolism, combined with an in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane (CAM) model of metastasis, are used to evaluate novel anti-cancer targets/agents for their ability to sensitize tumor cells to DNA damaging chemotherapeutics.

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס<em&gt; In vivo</em&gt; ניסויי גידול xenograft NIRF הדמיה בעכברים באמצעות<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cytometry הזרימה ומיקרוסקופי

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

<meta charset="utf8"></head><body>ננו-תרופות המכוונות ל-miRNA-10b אונקוגני לטיפול בסרטן שד גרורתי

Monitoring of Nanodrug Accumulation in Murine Breast Cancer Metastases

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have been shown to be associated with the metastatic potential of breast cancer and are implicated in tumor cell migration, invasion, and viability. However, it can be difficult to deliver an inhibitory RNA molecule to the tissue of interest. To overcome this challenge and deliver active antisense oligonucleotides to tumors, we utilized magnetic iron oxide nanoparticles as a delivery platform. These nanoparticles target tissues with increased vascular permeability, such as sites of inflammation or cancer. Delivery of these nanoparticles can be monitored in vivo by magnetic resonance imaging (MRI) due to their magnetic properties. Translation of this therapeutic approach into the clinic will be more accessible because of its compatibility with this relevant imaging modality. They can also be labeled with other imaging reporters such as a Cy5.5 near-infrared optical dye for correlative optical imaging and fluorescence microscopy. Here, we demonstrate that nanoparticles labeled with Cy5.5 and conjugated to therapeutic oligomers targeting oncogenic miRNA-10b (termed MN-anti-miR10b, or &#34;nanodrug&#34;) administered intravenously accumulate in metastatic sites, opening a possibility for therapeutic intervention of metastatic breast cancer.

<meta charset="utf8"></head><body>ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים

Here, we describe the protocol for in vivo delivery of magnetic iron oxide nanoparticles carrying RNA oligomers to metastatic breast cancer in animal models, providing a clinically viable approach for the therapeutic silencing of oncogenic nucleic acids.

ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have ...

נוהל מקיף כדי להעריך את

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

יעילות אנטי סרטנית של טיפול פוטודינמי עם ריאות חלקיקים סרטן ממוקד

חילוץ מדגם, כימות כרומטוגרפי סימולטני של דוקסורוביצין, מיטומיצין C שלאחר משלוח סמים בשילוב של חלקיקים נושאות לעכברים

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

חלקיקים נגיפיים עבור

הערכת הפעילות האנטי-סרטנית In vivo של ננו-חלקיקים פוליאנהידריד IL-1α

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס

ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים

ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים

ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים