The authors would like to thank Drs. Helene Salmon and Miriam Merad from Icahn School of Medicine at Mount Sinai for providing the B16-F10-YFP cells and for their expert advice on melanoma mouse models. The authors further thank the Animal Imaging Core Facility, the Radiochemistry and Molecular Imaging Probes Core Facility, and the Molecular Cytology Core Facility at Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) for their support. This work was supported by National Institutes of Health grants NIH 1 R01 HL125703 (W.J.M.M.), R01CA155432 (W.J.M.M.), K25 EB016673 (T.R.) and P30 CA008748 (MSK Center Grant). The authors also thank the Center for Molecular Imaging and Nanotechnology (CMINT) at MSK for their financial support (T.R.).

يتكون هذا الإجراء من وضع العلامات مزدوج المشعة والفلورسنت النانوية، في الجسم الحي PET-CT التصوير، وخارج الحي القياسات biodistribution، وخارج الحي المناعية والتدفق الخلوي التحليلات. تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان. 1. إعداد الليبوزومات المسمى ثنائي ملاحظة: مسانج B16 أورام سرطان الجلد يمكن أن يتسبب عن طريق حقن خلايا 300000 B16-F10 في الأجنحة الخلفية C57BL / 6 الفئران تحت التخدير من استنشاق 2٪ -isoflurane التي تحتوي على الأوكسجين. استخدام الكواشف والأدوات المعقمة في مساحة عمل عقيم أثناء الجراحة. بعد الجراحة، ومراقبة بعناية الحيوانات حتى شفائهم من التخدير. وضع الحيوانات مرة أخرى في أقفاصها فقط عندما يستعيد وعيه الكامل والتنقل. إيوائهم في غرف معقمة للحيوانات مع الاورام xenografted. الأورام مع حجممن 300 مم 3 مثالية لتوصيف جسيمات متناهية الصغر بسبب بهم وضوحا تعزيز النفاذية والاحتفاظ الآثار (الثوري)، والتي يمكن أن تزيد من تراكم جسيمات متناهية الصغر. وتقدم بروتوكولات مفصلة أدناه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قارورة ذهابا والقاع، ويحل خليط من 20 ملغ من الدهون في 2 مل من الكلوروفورم التي تحتوي على 1،2-dipalmitoyl- التعطيل -glycero-3-phophocholine (DPPC)، والكولسترول، 1،2-disearoyl- التعطيل -glycero- 3-phosphoethanolamine بولي (جلايكول الإثيلين) 2000 (DSPE-PEG2000)، DSPE-ديفيروكسامين (DSPE-DFO) 8، وحمض 1،1-diododecyl-3،3،3،3-tetramethylindodicarbocyanine-5،5-دسلفنك ( DiIC12 [5] -DS) في نسب الرحى من 61.3٪، 33.4٪، 5، 0.2٪، و 0.1٪ على التوالي. ملاحظة: هذا التكوين الدهون هي مشابهة جدا لصياغة liposomal من دوكسوروبيسين المستخدمة حاليا في عيادة 2. فإن الجسيمات الشحمية الناتجة عن إجراءاتنا تحاكي عن كثب أداء في الجسم الحي من nanomedic السريريةالمعهد الوطني للإحصاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المبخر الدوار لإزالة المذيبات العضوية وتشكيل لفيلم الدهون رقيقة في درجة حرارة الغرفة. إضافة 20 مل من برنامج تلفزيوني ويصوتن لمدة 30 دقيقة لتوليد الجسيمات النانوية liposomal باستخدام صوتنة طرف 3.8 ملم وسعة 30 واط، مع تبريد كافية على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في حل الحويصلية في 4000 x ج لمدة 10 دقيقة لإزالة الركام وغسل النانوية مع برنامج تلفزيوني باستخدام الترشيح الطرد المركزي (الوزن الجزيئي قطع (MWCO: 100 كيلو دالتون) لإزالة الدهون حرة والمذيبات العضوية المتبقية التركيز على الجسيمات الشحمية، والتي سوف البقاء في الغرفة العليا، ونقلها إلى أنبوب جديد. ويمكن تخزين الجسيمات الشحمية في الثلاجة في برنامج تلفزيوني لمدة تصل إلى 1 قبل أسبوع من خطوات لاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمراقبة الجودة، وتوصيف الجسيمات الشحمية التي تشتت الضوء الحيوي (DLS). على وجه التحديد، مزيج 50 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية مع 950 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني، ومن ثم نقل الخليط في كفيت التحجيم. ضع كفيت في تحليل وقياس الجسيماتأحجام وتوزيع حجمها. (مؤشر التشتت المتعدد (PDI)) ومن المتوقع أن تكون 90 أحجام الجسيمات وتوزيع حجمها - 120 نانومتر و 0.1 - 0.2 على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لradiolabeling، مزيج من الجسيمات الشحمية النقاء، أي ما يعادل 2 ملغ من الدهون، في برنامج تلفزيوني في الرقم الهيدروجيني بين 6.9 و 7.1 مع 1 MCI 89 عنصر الزركون-أكسالات عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة في أنبوب 1.5 مل، (الحجم الكلي: ~ 100 ميليلتر). إزالة الحرة، غير المتفاعل 89 عنصر الزركون عن طريق الترشيح الطرد المركزي (MWCO = 100 كيلو دالتون)، على غرار الخطوة 1.3. غسل retentate مع برنامج تلفزيوني العقيمة وتمييع للحجم المطلوب. يجب أن يكون العائد الإشعاعية 80-95٪. الحذر! العمل مع المواد المشعة ودرجة عالية من التنظيم. يجب أن تكون معتمدة من المؤسسات وتقديم التسهيلات اللازمة، وتدريب الموظفين، ورقابة صارمة على استخدام النشاط الإشعاعي. يحتاج الباحثون لتلقي التدريب الكافي وارتداء معدات الوقاية الشخصية وحلقات قياس الجرعات / شارات عند التعامل مع النشاط الإشعاعي. </li><li&gt; تحديد نقاء الإشعاعية من الجسيمات الشحمية رديولبلد من حجم الإقصاء راديو HPLC، التي ينبغي أن تكون في العادة أكثر من 98٪ 10. درجات نقاء الإشعاعية أقل من 95٪ تدل على عدم كفاية الغسيل على خطوة 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد radiolabeling، وتحديد حجم الجسيمات النانوية التي تشتت الضوء الديناميكي. ومن المتوقع أن يكون ضمن نفس النطاق مثل القياسات في الخطوة 1.4 10 حجم وPDI. ملاحظة: إذا لم يسمح للعينات المشعة في قياس التدفق الخلوي أو مضان المجهر، نات غير المشعة عنصر الزركون-الأكسالات يمكن أن تستخدم لتسمية الجسيمات الشحمية في الخطوة 1.5. هذه الجسيمات الشحمية غير المشعة لها خصائص مماثلة لالنظير من المشعة. ويرد وصف هذا الإجراء في الشكل 2. </li></ol> 2. في فيفو التصوير PET-CT وBiodistribution من الليبوزومات المزدوج المسمى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ نحو 100 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية المزدوج المسمى ثإيث حوالي 300 μCi من النشاط الإشعاعي في الفئران سرطان الجلد ضبط النفس (C57BL / 6، أنثى، 10 - 16 أسبوعا من العمر) من خلال الأوردة الذيل، في حوالي 10 MCI 89 عنصر الزركون / كجم من وزن الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد عمر النصف، سحب الدم من الوريد الذيل من الحيوانات تخدير أقل من 2٪ التي تحتوي على الأيزوفلورين الأكسجين باستخدام 28-G المحاقن الأنسولين. جمع الدم (10-20 ميكرولتر) في أنابيب وزنه قبل في 2 دقيقة، 15 دقيقة، 1 ساعة، 4 ساعات، 8 ساعات، 24 ساعة، و 48 ساعة بعد الحقن. تزن الدم عن طريق الفرق، وتحديد محتوى النشاط الإشعاعي باستخدام عداد غاما، وحساب تركيز النشاط الإشعاعي كنسبة مئوية من جرعة حقن للغرام الواحد (٪ ID / ز). ملاحظة: تنفيذ الإجراء في غرفة مجهزة بنظام التخدير، وأقفاص الانتعاش، والتدفئة، وغطاء محرك السيارة واقية. تأكد من أن الحيوانات يتعافى تماما وكسب الحراك الطبيعي بعد العملية قبل نقلها من أقفاص الانتعاش إلى عقد أقفاص. بيت الحيوانات الحاملة للورم في الغرف المخصصة للحيوانات التي تدار بالتعاون معالمواد المشعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 أو 48 ساعة بعد الحقن ل الجسيمات الشحمية، صورة الفئران في الحيوانات الصغيرة MicroPET-CT الماسح الضوئي 10. وضع تخدير الحيوان أفقيا على بطنه وإبقائه تخدير. إدارة 2٪ الأيزوفلورين الأكسجين من خلال مخروط الأنف. تطبيق مرهم للعين لعينيها قبل الفحص لمنعهم من الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ كامل الجسم PET ثابت مسح تسجيل 50 مليون على الأقل أحداث متزامنة، مع المدة التقريبية لمدة 15 دقيقة. تعيين إطار توقيت الطاقة وصدفة في 350-700 كيلو و 6 م، على التوالي. بعد ذلك، إجراء فحص 5 دقائق التصوير المقطعي (CT). تعيين أنبوب الأشعة السينية لجهد 80 كيلو فولت وتيار 500 أمبير. يستخدم الاشعة المقطعية 120 الخطوات الدوران لما مجموعه 220 درجة، مع ما يقرب من 145 مللي ثانية في إطار 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الفحص PET-CT، التضحية فورا الفئران خنقا غاز ثاني أكسيد الكربون وتأكيد الوفيات pinchiنانوغرام الكفوف من الحيوانات. أكد مرة واحدة، نفذ الخلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدم في الأنسجة الماوس عن طريق خفض أولا فتح الأذين الأيمن ومن ثم حقن 20 مل PBS إلى البطين الأيسر، وبعد ذلك جمع الأنسجة ذات الصلة مثل ورم والكبد والطحال والرئة والكلى والعضلات، وغيرها (16). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الأنسجة، قياس محتوى النشاط الإشعاعي من قبل جاما عد 8، 9، وحساب تراكم النشاط الإشعاعي الأنسجة كنسبة مئوية من الجرعة المحقونة في غرام (٪ ID / ز). </li></ol> 3. فيفو السابقين التدفق الخلوي والمناعية ملاحظة: حقن حوالي 100 ميكرولتر من الجسيمات الشحمية الفلورسنت في الفئران سرطان الجلد من خلال الوريد الذيل بجرعة 0.5 ملغ من الصبغة لكل كيلوغرام من وزن الجسم. إذا لم يسمح للعينات المشعة في قياس التدفق الخلوي ومضان المجهر، يجب أن تستخدم الجسيمات الشحمية غير المشعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضحية الفئران 24 ساعة بعد الحقن، كما في الخطوة 2.5، وجمع الأورام، التي يجب تخزينها في برنامج تلفزيوني الباردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالتدفق الخلوي، اتبع الخطوات التالية (17): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كوكتيل انزيم التي تتكون من خليط من النقاء كولاجيناز الأول والثاني (4 U / مل)، هيالورونيداز (60 U / مل)، والدناز أنا (60 U / مل) في التدفق الخلوي عازلة (PBS مع 0.5٪ BSA و1 ملي EDTA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج 100 ملغ من نسيج الورم مع 200 ميكرولتر من العازلة كوكتيل انزيم في أنبوب 1.5 مل والزهر الأنسجة إلى قطع صغيرة مع مقص غرامة. إضافة 1.3 مل أخرى من كوكتيل انزيم في أنبوب ونقل محتوياته إلى لوحة 6 جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يهز لوحة 6 جيدا على شاكر الأفقي وضعها داخل الفرن C 37 درجة لمدة 60 دقيقة في 60 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل جناسة الأنسجة مع التدفق الخلوي عازلة 3 مرات للحصول على تعليق خلية واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار على الخلايا مع مزيج من الأجسام المضادة الخاصة المؤشرات الحيوية بما في ذلك CD45، CD11b، Ly6C، CD11c و،CD64، CD3، MHCII، وCD31 (1: 200 التخفيف لجميع الأجسام المضادة، يتم توفير المعلومات استنساخ في جدول المواد). تحديد أنواع الخلايا ذات الصلة، وتحديد كثافتها متوسط ​​مضان (MFI) من DiIC12 (5) -DS في كل خلية السكان مع تدفق المناسب الخلوي برامج التحليل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالمناعية، اتبع الخطوات التالية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الورم إلى شريط كاسيت مليئة الأمثل القطع المتوسط ​​(أكتوبر) وتجميده في الثلج الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 6 ميكرون أقسام المجمدة من نسيج الورم ووضعها على شرائح الأنسجة الزجاجية. وينبغي أن تشمل الأقسام أكبر المقاطع العرضية للورم، والتي توفر المعلومات الأكثر تمثيلا على الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار على المؤشرات الحيوية (على سبيل المثال، CD31 لخلايا بطانة الأوعية الدموية) في المصالح مع الأجسام المضادة المقابلة (على سبيل المثال، ومكافحة CD31، استنساخ MEC13.3). إصلاح الأجزاء مع امتصاص العرق. منع لهم المصل مطابقة للأصل الأنواع من الأجسام المضادة الثانوية؛ incubأكل مع الأجسام المضادة الأولية لمدة 12 ساعة عند 4 درجات مئوية، وبعد ذلك مع الأجسام المضادة الثانوية لمدة 2 ساعة. وأخيرا، ويغسل مع برنامج تلفزيوني، وتغطي مع زلات الغطاء. صورة الشرائح ملطخة لايكا مبائر تستقيم SP5 المجهر 13 و 16. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Peer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanocarriers+as+an+emerging+platform+for+cancer+therapy.">Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy.</a> Nat Nanotechnol. 2, 751-760 (2007).</li><li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxil(R)--the+first+FDA-approved+nano-drug:+lessons+learned.">Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned.</a> J Control Release. 160, 117-134 (2012).</li><li>Green, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abraxane,+a+novel+Cremophor-free,+albumin-bound+particle+form+of+paclitaxel+for+the+treatment+of+advanced+non-small-cell+lung+cancer.">Abraxane, a novel Cremophor-free, albumin-bound particle form of paclitaxel for the treatment of advanced non-small-cell lung cancer.</a> Ann Oncol. 17, 1263-1268 (2006).</li><li>Juliano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine:+is+the+wave+cresting?.">Nanomedicine: is the wave cresting?.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 171-172 (2013).</li><li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bankruptcy+filing+worries+developers+of+nanoparticle+cancer+drugs.">Bankruptcy filing worries developers of nanoparticle cancer drugs.</a> Nature. 533, 304-305 (2016).</li><li>Venditto, V. J., Szoka, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+nanomedicines:+so+many+papers+and+so+few+drugs!.">Cancer nanomedicines: so many papers and so few drugs!.</a> Adv Drug Deliv Rev. 65, 80-88 (2013).</li><li>Dunphy, M. P., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiopharmaceuticals+in+preclinical+and+clinical+development+for+monitoring+of+therapy+with+PET.">Radiopharmaceuticals in preclinical and clinical development for monitoring of therapy with PET.</a> J Nucl Med. (50 Suppl 1), (2009).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+Imaging+of+Tumor-Associated+Macrophages+with+89Zr-Labeled+High-Density+Lipoprotein+Nanoparticles.">PET Imaging of Tumor-Associated Macrophages with 89Zr-Labeled High-Density Lipoprotein Nanoparticles.</a> J Nucl Med. 56, 1272-1277 (2015).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+labeling+strategy+for+in+vivo+PET+and+near-infrared+fluorescence+imaging+of+nanoparticle+tumor+targeting.">A modular labeling strategy for in vivo PET and near-infrared fluorescence imaging of nanoparticle tumor targeting.</a> J Nucl Med. 55, 1706-1711 (2014).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoreporter+PET+predicts+the+efficacy+of+anti-cancer+therapy.">Nanoreporter PET predicts the efficacy of anti-cancer therapy.</a> Nature communications. , (2016).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+macrophage+proliferation+suppresses+atherosclerotic+plaque+inflammation.">Inhibiting macrophage proliferation suppresses atherosclerotic plaque inflammation.</a> Science advances. , (2015).</li><li>Priem, B., Tian, C., Tang, J., Zhao, Y., Mulder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+nanoparticles+for+the+accurate+detection+of+drug+delivery.">Fluorescent nanoparticles for the accurate detection of drug delivery.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12, 1881-1894 (2015).</li><li>Gianella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+nanoemulsion+platform+for+imaging+guided+therapy+evaluated+in+experimental+cancer.">Multifunctional nanoemulsion platform for imaging guided therapy evaluated in experimental cancer.</a> ACS Nano. 5, 4422-4433 (2011).</li><li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+with+liposomes+as+pharmaceutical+carriers.">Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 145-160 (2005).</li><li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+Activation+of+CD103(+)+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition.">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44, 924-938 (2016).</li><li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+PET+Imaging+of+HDL+in+Multiple+Atherosclerosis+Models.">In Vivo PET Imaging of HDL in Multiple Atherosclerosis Models.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 9, 950-961 (2016).</li><li>Duivenvoorden, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+statin-loaded+reconstituted+high-density+lipoprotein+nanoparticle+inhibits+atherosclerotic+plaque+inflammation.">A statin-loaded reconstituted high-density lipoprotein nanoparticle inhibits atherosclerotic plaque inflammation.</a> Nature communications. 5, 3065 (2014).</li><li>Carney, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+PET+Imaging+of+PARP1+Expression+in+Glioblastoma+Models.">Non-invasive PET Imaging of PARP1 Expression in Glioblastoma Models.</a> Mol Imaging Biol. , (2015).</li><li>Salinas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioiodinated+PARP1+tracers+for+glioblastoma+imaging.">Radioiodinated PARP1 tracers for glioblastoma imaging.</a> EJNMMI Res. 5, 123 (2015).</li><li>Carlucci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Modality+Optical/PET+Imaging+of+PARP1+in+Glioblastoma.">Dual-Modality Optical/PET Imaging of PARP1 in Glioblastoma.</a> Mol Imaging Biol. 17, 848-855 (2015).</li><li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+screening+of+a+nanoparticle+library+improves+atherosclerosis+therapy.">Immune cell screening of a nanoparticle library improves atherosclerosis therapy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2016).</li><li>Scott, A. M., Wolchok, J. D., Old, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+therapy+of+cancer.">Antibody therapy of cancer.</a> Nat Rev Cancer. 12, 278-287 (2012).</li><li>Goodwill, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-space+MPI:+magnetic+nanoparticles+for+safe+medical+imaging.">X-space MPI: magnetic nanoparticles for safe medical imaging.</a> Adv Mater. 24, 3870-3877 (2012).</li></ol>

The authors have no disclosure to make.

خطوات حاسمة في البروتوكول: جودة عالية من الجسيمات الشحمية المزدوج المسمى هي المفتاح لتحقيق نتائج متسقة على مدى فترة طويلة من الزمن. الأصباغ الفلورية مجانية أو 89 أيونات عنصر الزركون يمكن أن تولد أنماط استهداف مختلفة تماما وي?...

النانوي يتحول نموذج التنمية علاج السرطان 1. مستوحاة من التأثير الطبي الهائل من طب النانو السرطان السابق، مثل liposome- وnanotherapies القائم على الزلال 2، 3، وقد تم إنتاج العديد من الصيغ الجديدة في العقد الماضي. بيد أن التحليلات الأخيرة لنجاح الترجمة السريري لهذه طب النانو السرطان تشير إلى أنه ليس هناك سوى عدد قليل منهم قد تمت الموافقة على استخدام السريري 4، 5. وتتمثل إحدى العقبات الرئيسية لترجمة السريرية للطب النانو جديد للسرطان هي تحسينها محدود للمؤشر العلاجية مقارنة مع الادارة مباشرة من المركبات العلاجية المجانية 6. على هذا النحو، وتقييم دقيق للأداء في الجسم الحي من طب النانو في المنهجية، والنسيج، ومستويات الخلايا في النماذج الحيوانية قبل السريرية ضرورية لidentifذ تلك مع مؤشرات العلاجية المثلى للترجمة السريرية في المستقبل. يمكن أن المواد النانوية يكون رديولبلد لتوصيف الكمي في الحيوانات التي تعيش مع التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET) والتصوير، والذي لديه حساسية ممتازة والتكاثر بين جميع طرائق التصوير السريرية 7. على سبيل المثال، 89 عنصر الزركون المسمى اتسمت طب النانو في نماذج الماوس لسرطان 8، 9، 10، وكذلك في نماذج الأمراض الأخرى 11 المنتشرة منذ فترة طويلة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن نصف عمر الدم وbiodistribution من طب النانو يمكن تقييمها على نطاق واسع باستخدام القياسات الإشعاعية خارج الجسم في الأنسجة الفردية 8. لذلك، radiolabeling يسمح للتقييم الكمي للطب النانو في مستويات النظامية والأنسجة. الأهم من ذلك، radiolabeleطب النانو د عموما لا يمكن تحليلها على خلية واحدة أو مستويات التحت خلوية نظرا لدقة المكاني المحدود للإشارة المشعة. لذلك، ووضع العلامات الفلورية يبرهن على أن تكون طريقة تكميلية لتقييم النانوية مع تقنيات التصوير الضوئي مثل التدفق الخلوي ومضان المجهري 12. تحقيقا لهذه الغاية، النانوية المسمى مع النظائر المشعة والعلامات الفلورية يمكن تقييمها كميا في الحي بواسطة التصوير النووي وخارج الحي من قبل العد النشاط الإشعاعي، ويمكن أيضا أن تكون وصفت على نطاق واسع على المستوى الخلوي عن طريق التصوير الضوئي. سابقا، وقد وضعنا إجراءات معيارية لدمج تسميات المشعة والفلورية في مختلف النانوية، بما في ذلك البروتين الدهني عالي الكثافة (HDL) 11، الجسيمات الشحمية 9، 10، النانوية البوليمرية، شظايا الأجسام المضادة، وnanoemulsions 10 و 13. وقد سمحت هذه الجسيمات النانوية وصفت لتوصيف الكمي في النماذج الحيوانية ذات الصلة على مختلف المستويات، والتي وجهت تعظيم الاستفادة من هذه المواد النانوية لتطبيقات محددة. في الدراسة الحالية، والهدف من ذلك هو استخدام الجسيمات النانوية، وliposomal منصة النانوي الأكثر رسوخا 14 -كما مثالا للتدليل إجراءات شاملة لتوليد جسيمات متناهية الصغر المزدوج وصفت وإلى تميز بدقة في كلاسيكية سرطان الجلد مسانج B16-F10 نموذج الفأر 15 . من النتائج، ونحن واثقون من هذا النهج توصيف جسيمات متناهية الصغر يمكن تكييفها لتقييم طب النانو السرطان الأخرى في نماذج الفئران ذات الصلة.

<table><tbody><tr><td>DPPC</td><td>Avantilipids</td><td>850355</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000</td><td>Avantilipids</td><td>880120P</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-DFO</td><td>Home made</td><td>110634</td><td>Perez-Medina &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, JNM, 2014</td></tr><tr><td>DiIC12[5]-DS</td><td>AAT Bioquest</td><td>22051</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugal filter</td><td>Vivaproducts</td><td>VS2061</td><td></td></tr><tr><td>Rotary evaporator</td><td>Buchi</td><td>R-100</td><td></td></tr><tr><td>Radio-HPLC</td><td>Shimadzu HPLC with 2 LC-10AT pumps</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;89&lt;/sup&gt;Zr-oxalate</td><td>MSKCC</td><td>Synthesized in house</td><td>TR19/9 variable beam cyclotron (Ebco Industries Inc.)</td></tr><tr><td>Micro PET-CT</td><td>Siemens</td><td>Inveon Micro-PET/CT</td><td></td></tr><tr><td>Gamma counter</td><td>PerkinElmer</td><td>2470-0150</td><td></td></tr><tr><td>Flow cytometry</td><td>BD Biosciences</td><td>Fortessa</td><td>Any multi-parametric flow cytometry analyzers would suffice</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16-YFP melanoma cells</td><td>Home made</td><td>N/A</td><td>Salmon &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt;, Immunity, 2016</td></tr><tr><td>Ly6C (clone HK1.4)--APC-Cy7</td><td>128025</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>MHCII (M5/114/152)--APC</td><td>107613</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (30-F11)--BV510</td><td>103137</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD64 (X54-5/7.1)--PE-Cy7</td><td>139313</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11b (M1/70)--BV605</td><td>101237</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (17A2)--BV711</td><td>100241</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3)--PE</td><td>561073</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11c (M418)--PerCP-Cy5.5</td><td>117327</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3) no fluorophore</td><td>550274</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr></tbody></table>

a comprehensive procedure to evaluate the in vivo performance of cancer nanomedicines

مستوحاة من نجاح طب النانو السرطان السابق في العيادة، وقد ولدت الباحثون عدد كبير من الصيغ الجديدة في العقد الماضي. ومع ذلك، فقد تمت الموافقة على عدد صغير فقط من طب النانو للاستخدام السريري، في حين أن غالبية طب النانو تحت التطوير السريري قد أسفرت عن نتائج مخيبة للآمال. وتتمثل إحدى العقبات الرئيسية لترجمة السريرية الناجحة لطب النانو السرطان الجديد هو عدم وجود فهم دقيق للفي الجسم الحي أدائها. تتميز هذه المقالة إجراء صارم لوصف السلوك في الجسم الحي من طب النانو في الفئران الورم الحاملة في المنهجية، والنسيج، وحيدة الخلية، ومستويات التحت خلوية من خلال دمج انبعاث البوزيترون التصوير المقطعي التصوير المقطعي (PET-CT)، وأساليب النشاط الإشعاعي الكمي ، التدفق الخلوي، والفحص المجهري مضان. باستخدام هذا النهج، يمكن للباحثين تقييم بدقة التركيبات النانوية الجديدة في نماذج الفئران ذات الصلة canceص. قد يكون لهذه البروتوكولات القدرة على تحديد طب النانو السرطان الواعدة مع إمكانية متعدية عالية أو للمساعدة في تعظيم الاستفادة من طب النانو السرطان للترجمة في المستقبل.

ويبين الشكل 1 لمحة عامة عن هذا الإجراء. ويبين الشكل 2 الإجراء التوليف التخطيطي من الجسيمات الشحمية المزدوج المسمى هو موضح في الخطوة 1 10. الشكل (3) يعرض تمثيلية PET-CT الصورة (الشكل 3A)، النشاط الإشعاعي الكم?...

Watch this Scientific Journal Video about A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines at JoVE.com

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

إجراء شامل لتقييم<em&gt; في فيفو</em&gt; الأداء من السرطان طب النانو

Inspired by the success of previous cancer nanomedicines in the clinic, researchers have generated a large number of novel formulations in the past ...

a-comprehensive-procedure-to-evaluate-vivo-performance-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

8.8K Views.  Memorial Sloan Kettering Cancer Center. The poor understanding of the in vivo performance of nanomedicines stymies their clinical translation. Procedures to evaluate the in vivo behavior of cancer nanomedicines at systemic, tissue, single-cell, and subcellular levels in tumor-bearing immunocompetent mice are described here. This approach may help researchers to identify promising cancer nanomedicines for clinical translation.

Video: A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. Photosensitizers selectively accumulate in tumor tissue and lead to tumor cell death in the presence of oxygen and the proper wavelength of light.
To increase the therapeutic effect of PDT, we developed both photosensitizer- and anticancer agent-loaded lung cancer-targeted nanoparticles. Both enhanced permeability and retention (EPR) effect-based passive targeting and hyaluronic-acid-CD44 interaction-based active targeting were applied. CD44 is a well-known hyaluronic acid receptor that is often introduced as a biomarker of non-small cell lung cancer. 
In addition, a combination of PDT and chemotherapy is adopted in the present study. This combination concept may increase anticancer therapeutic effects and reduce adverse reactions. 
We chose hypocrellin B (HB) as a novel photosensitizer in this study. It has been reported that HB causes higher anticancer efficacy of PDT compared to hematoporphyrin derivatives1. Paclitaxel was selected as the anticancer drug since it has proven to be a potential treatment for lung cancer2. 
The antitumor efficacies of photosensitizer (HB) solution, photosensitizer encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-NPs), and both photosensitizer- and anticancer agent (paclitaxel)-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles (HB-P-NPs) after PDT were compared both in vitro and in vivo. The in vitro phototoxicity in A549 (human lung adenocarcinoma) cells and the in vivo antitumor efficacy in A549 tumor-bearing mice were evaluated.
The HB-P-NP treatment group showed the most effective anticancer effect after PDT. In conclusion, the HB-P-NPs prepared in the present study represent a potential and novel photosensitizer delivery system in treating lung cancer with PDT.

Photodynamic therapy (PDT) is an alternative choice for lung cancer treatment. To increase the therapeutic effect of PDT, lung cancer-targeted nanoparticles combined with chemotherapy were developed. Both in vitro and in vivo anticancer efficacies of PDT with prepared nanoparticles were evaluated.

المضادة للسرطان فعالية من العلاج الضوئي مع النانوية المستهدفة السرطان والرئة

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its therapeutic benefit. Nanoparticle-based drug combination has been shown to mitigate the problems encountered by free drug combination therapy. Our previous studies have shown that the combination of two anticancer drugs, doxorubicin (DOX) and mitomycin C (MMC), produced a synergistic effect against both murine and human breast cancer cells in vitro. DOX and MMC co-loaded polymer-lipid hybrid nanoparticles (DMPLN) bypassed various efflux transporter pumps that confer multidrug resistance and demonstrated enhanced efficacy in breast tumor models. Compared to conventional solution forms, such superior efficacy of DMPLN was attributed to the synchronized pharmacokinetics of DOX and MMC and increased intracellular drug bioavailability within tumor cells enabled by the nanocarrier PLN. 
To evaluate the pharmacokinetics and bio-distribution of co-administered DOX and MMC in both free solution and nanoparticle forms, a simple and efficient multi-drug analysis method using reverse-phase high performance liquid chromatography (HPLC) was developed. In contrast to previously reported methods that analyzed DOX or MMC individually in the plasma, this new HPLC method is able to simultaneously quantitate DOX, MMC and a major cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in various biological matrices (e.g., whole blood, breast tumor, and heart). A dual fluorescent and ultraviolet absorbent probe 4-methylumbelliferone (4-MU) was used as an internal standard (I.S.) for one-step detection of multiple drug analysis with different detection wavelengths. This method was successfully applied to determine the concentrations of DOX and MMC delivered by both nanoparticle and solution approaches in whole blood and various tissues in an orthotopic breast tumor murine model. The analytical method presented is a useful tool for pre-clinical analysis of nanoparticle-based delivery of drug combinations.

This protocol describes an efficient and convenient analytical process of sample extraction and simultaneous determination of multiple drugs, doxorubicin (DOX), mitomycin C (MMC) and a cardio-toxic DOX metabolite, doxorubicinol (DOXol), in the biological samples from a preclinical breast tumor model treated with nanoparticle formulations of synergistic drug combination.

استخراج عينة والمتزامن كوانتيتيشن الكروماتوغرافي ميتوتريكسات وج ميتوميسين عقب تسليم تركيبة المخدرات في جسيمات نانوية للفئران الحاملة للورم

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Medicine

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being investigated for applications in imaging and therapy. Viral nanoparticles (VNPs) derived from plants can be regarded as self-assembled bionanomaterials with defined sizes and shapes. Plant viruses under investigation in the Steinmetz lab include icosahedral particles formed by Cowpea mosaic virus (CPMV) and Brome mosaic virus (BMV), both of which are 30 nm in diameter. We are also developing rod-shaped and filamentous structures derived from the following plant viruses: Tobacco mosaic virus (TMV), which forms rigid rods with dimensions of 300 nm by 18 nm, and Potato virus X (PVX), which form filamentous particles 515 nm in length and 13 nm in width (the reader is referred to refs. 1 and 2 for further information on VNPs).
From a materials scientist's point of view, VNPs are attractive building blocks for several reasons: the particles are monodisperse, can be produced with ease on large scale in planta, are exceptionally stable, and biocompatible. Also, VNPs are "programmable" units, which can be specifically engineered using genetic modification or chemical bioconjugation methods 3. The structure of VNPs is known to atomic resolution, and modifications can be carried out with spatial precision at the atomic level4, a level of control that cannot be achieved using synthetic nanomaterials with current state-of-the-art technologies.
In this paper, we describe the propagation of CPMV, PVX, TMV, and BMV in Vigna ungiuculata and Nicotiana benthamiana plants. Extraction and purification protocols for each VNP are given. Methods for characterization of purified and chemically-labeled VNPs are described. In this study, we focus on chemical labeling of VNPs with fluorophores (e.g. Alexa Fluor 647) and polyethylene glycol (PEG). The dyes facilitate tracking and detection of the VNPs 5-10, and PEG reduces immunogenicity of the proteinaceous nanoparticles while enhancing their pharmacokinetics 8,11. We demonstrate tumor homing of PEGylated VNPs using a mouse xenograft tumor model. A combination of fluorescence imaging of tissues ex vivo using Maestro Imaging System, fluorescence quantification in homogenized tissues, and confocal microscopy is used to study biodistribution. VNPs are cleared via the reticuloendothelial system (RES); tumor homing is achieved passively via the enhanced permeability and retention (EPR) effect12. The VNP nanotechnology is a powerful plug-and-play technology to image and treat sites of disease in vivo. We are further developing VNPs to carry drug cargos and clinically-relevant imaging moieties, as well as tissue-specific ligands to target molecular receptors overexpressed in cancer and cardiovascular disease.

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Plant viral nanoparticles (VNPs) are promising platforms for applications in biomedicine. Here, we describe the procedures for plant VNP propagation, purification, characterization, and bioconjugation. Finally, we show the application of VNPs for tumor homing and imaging using a mouse xenograft model and fluorescence imaging.

الفيروسية النانوية ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير ورم

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Bioengineering

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory cytokine interleukin-1 alpha (IL-1&#945;) has been evaluated as an anticancer agent in several preclinical and clinical studies. However, dose-limiting toxicities, including flu-like symptoms and hypotension, have dampened the enthusiasm for this therapeutic strategy. Polyanhydride nanoparticle (NP)-based delivery of IL-1&#945; would represent an effective approach in this context since this may allow for a slow and controlled release of IL-1&#945; systemically while reducing toxic side effects. Here an analysis of the antitumor activity of IL-1&#945;-loaded polyanhydride NPs in a head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) syngeneic mouse model is described. Murine oropharyngeal epithelial cells stably expressing HPV16 E6/E7 together with hRAS and luciferase (mEERL) cells were injected subcutaneously into the right flank of C57BL/6J mice. Once tumors reached 3-4 mm in any direction, a 1.5% IL-1a - loaded 20:80 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane:1,6-bis(p-carboxyphenoxy)hexane (CPTEG: CPH) nanoparticle (IL-1&#945;-NP) formulation was administered to mice intraperitoneally. Tumor size and body weight were continuously measured until tumor size or weight loss reached euthanasia criteria. Blood samples were taken to evaluate antitumor immune responses by submandibular venipuncture, and inflammatory cytokines were measured through cytokine multiplex assays. Tumor and inguinal lymph nodes were resected and homogenized into a single-cell suspension to analyze various immune cells through multicolor flow cytometry. These standard methods will allow investigators to study the antitumor immune response and potential mechanism of immunostimulatory NPs and other immunotherapy agents for cancer treatment.

Evaluation of the In vivo Antitumor Activity of Polyanhydride IL-1&#945; Nanoparticles

A standard protocol is described to study the antitumor activity and associated toxicity of IL-1&#945; in a syngeneic mouse model of HNSCC.

تقييم النشاط المضاد للأورام في الجسم الحي للجسيمات النانوية Polyanhydride IL-1α

Cytokine therapy is a promising immunotherapeutic strategy that can produce robust antitumor immune responses in cancer patients. The proinflammatory ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same pathway, are likely to fail. Emphasis must be placed upon the inhibition of pathways that are responsible for intrinsic and/or adaptive resistance to therapy. An active field of investigation is the development and testing of DNA repair inhibitors that promote the action of, and prevent resistance to, commonly used chemotherapy and radiotherapy. We used a novel protocol to evaluate the effectiveness of BRCA2 inhibition as a means to sensitize tumor cells to the DNA damaging drug cisplatin. Tumor cell metabolism (acidification and respiration) was monitored in real-time for a period of 72 hr to delineate treatment effectiveness on a minute by minute basis. In combination, we performed an assessment of metastatic frequency using a chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model of extravasation and invasion. This protocol addresses some of the weaknesses of commonly used in vitro and in vivo methods to evaluate novel cancer therapy regimens. It can be used in addition to common methods such as cell proliferation assays, cell death assays, and in vivo murine xenograft studies, to more closely discriminate amongst candidate targets and agents, and select only the most promising candidates for further development.

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Here, real-time monitoring of tumor cell metabolism, combined with an in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane (CAM) model of metastasis, are used to evaluate novel anti-cancer targets/agents for their ability to sensitize tumor cells to DNA damaging chemotherapeutics.

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

التحقق من Nanobody والجسم المضاد القائم<em&gt; في فيفو</em&gt; التجارب ورم طعم أجنبي NIRF التصوير في الفئران عن طريق<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; التدفق الخلوي والميكروسكوب

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

<meta charset="utf8"></head><body>الأدوية النانوية التي تستهدف miRNA-10b الورمي لعلاج سرطان الثدي النقيلي

Monitoring of Nanodrug Accumulation in Murine Breast Cancer Metastases

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have been shown to be associated with the metastatic potential of breast cancer and are implicated in tumor cell migration, invasion, and viability. However, it can be difficult to deliver an inhibitory RNA molecule to the tissue of interest. To overcome this challenge and deliver active antisense oligonucleotides to tumors, we utilized magnetic iron oxide nanoparticles as a delivery platform. These nanoparticles target tissues with increased vascular permeability, such as sites of inflammation or cancer. Delivery of these nanoparticles can be monitored in vivo by magnetic resonance imaging (MRI) due to their magnetic properties. Translation of this therapeutic approach into the clinic will be more accessible because of its compatibility with this relevant imaging modality. They can also be labeled with other imaging reporters such as a Cy5.5 near-infrared optical dye for correlative optical imaging and fluorescence microscopy. Here, we demonstrate that nanoparticles labeled with Cy5.5 and conjugated to therapeutic oligomers targeting oncogenic miRNA-10b (termed MN-anti-miR10b, or &#34;nanodrug&#34;) administered intravenously accumulate in metastatic sites, opening a possibility for therapeutic intervention of metastatic breast cancer.

<meta charset="utf8"></head><body>مراقبة تراكم الأدوية النانوية في نقائل سرطان الثدي في الفئران

Here, we describe the protocol for in vivo delivery of magnetic iron oxide nanoparticles carrying RNA oligomers to metastatic breast cancer in animal models, providing a clinically viable approach for the therapeutic silencing of oncogenic nucleic acids.

مراقبة تراكم الأدوية النانوية في نقائل سرطان الثدي في الفئران

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have ...

إجراء شامل لتقييم

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

المضادة للسرطان فعالية من العلاج الضوئي مع النانوية المستهدفة السرطان والرئة

استخراج عينة والمتزامن كوانتيتيشن الكروماتوغرافي ميتوتريكسات وج ميتوميسين عقب تسليم تركيبة المخدرات في جسيمات نانوية للفئران الحاملة للورم

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

الفيروسية النانوية ل

تقييم النشاط المضاد للأورام في الجسم الحي للجسيمات النانوية Polyanhydride IL-1α

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية

التحقق من Nanobody والجسم المضاد القائم

مراقبة تراكم الأدوية النانوية في نقائل سرطان الثدي في الفئران

مراقبة تراكم الأدوية النانوية في نقائل سرطان الثدي في الفئران

مراقبة تراكم الأدوية النانوية في نقائل سرطان الثدي في الفئران