Name: culturing in vivo-like murine astrocytes using the fast, simple, and inexpensive awesam protocol
Uploaded: 2018-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol at JoVE.com

Avrupa Araştırma Konseyi (FP7/260916), Alexander von Humboldt-Stiftung (Sofja Kovalevskaja) ve Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE1951 ve SFB889) fon kabul.

Burada açıklanan tüm hayvan deneyleri Alman hayvan refahı için kurallar uyarınca gerçekleştirilmiştir.
Not: Zaman çizelgesi ve protokol ana adımları şekil 1' de gösterilmiştir.
1. hazırlıkları
<ol><li>
Aşağıdaki çözümleri hazırlayın.
	<ol>
<li>DMEM + poligonal MD astrocytes kültür için hazırlamak: % 10 FCS, 100 U penisilin ve 100 µg/mL streptomisin ile DMEM.</li>
		<li>NB + H Yildiz Seklinde astrocytes kültür için hazırlamak: 5 ng/mL HBEGF, 1 x B-27 ek, 1 x glutamin takviyesi, 100 U penisilin ve 100 µg/mL streptomisin ile neurobasal orta. Not: HBEGF daha yüksek konsantrasyonlarda Aliquots hazırlanan ve gerektiğinde Orta olarak eklenecek-20 ° C'de depolanan.</li>
		<li>Diseksiyon orta (10 mM HBSS HEPES) hazırlayın.</li>
		<li>Aliquots 6-7 ml % 0.05 tripsin-EDTA ve 6-7 mL % 0.25 tripsin-EDTA 15 mL tüpler hazır olun. Bunlar-20 ° C'de depolanan ve bir 37 ° C su Banyosunda çözdürülen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İletişim kuralı, başlamadan önce gün 10 cm doku kültürü tedavi bulaşıkta %0,04 polyethylenimine (PEI) her 5 mL kat.</li>
	<li>Ertesi gün, PEI kaldırmak ve iki kez deiyonize, distile su ile bulaşık. DMEM + 12 mL her plakasına ekleyin ve hücreleri kaplama daha önce 37 ° C ve % 5 CO2 kuluçka için en az 30 dk önceden equilibrate.</li>
	<li>Diseksiyon alan hazırlamak: bir laminar akış diseksiyon başlık, yer iki 10 cm Petri yemekler diseksiyon orta buz dolu. Her beyin alanını için izole (örneğin, korteks, Hipokampus), 15-tüp 14 mL diseksiyon orta ile dolu hazırlamak ve buz üzerinde tutun. Diseksiyon araçları (iyi makas, Dumont #3 ve #5 forseps) % 70 etanol ve yere karar diseksiyon mikroskop kapüşonlu ile sprey.</li>
</ol>2. fare veya fare beyin diseksiyon
Not: Her iki fareler ve sıçanlar-ebilmek var olmak kullanılmış. P8-da var olmak kullanılmış daha yaşlı hayvanlar (biz P12 kadar test), ama meninkslerde kaldırma giderek daha zor olacak. Beyin hücreleri büyük hayvanlardan karmaşık işlemler ve doku ayrılma, artan hücre ölümüne giden sırasında kırılabilir bağlantıları kurdu beri Ayrıca, hücre verim ve sağlık, azalacak. Kortikal hazırlıkları burada açıklanan, ancak diğer beyin bölgeleri de kullanılabilir.
<ol><li>% 0.05 tripsin-EDTA bir 37 ° C su banyosunda yerleştirin.</li>
	<li>Hayvanlar (gebe rats E19 pups veya P0-P8 hayvanlar için) yavaş yavaş CO2 konsantrasyonu yükselterek ötenazi ve beyin yalıtır. Aşağıdaki adımları steril tekniği gerektirir.</li>
	<li>
Eğer embriyonik dokuyla çalışma, önce embriyoların rahim kaldırın ve embriyonik keseleri açın sonra hemen kafalarını makasla kesme. Tüm başkanları kesilir, onları önceden soğutulmuş diseksiyon orta aktarın.
	<ol>
<li>Bir kez belgili tanımlık mezartaşı ortamda batık, forseps ve beyincik kapalı çimdik cilt ve kafatası (her ikisi de çok genç hayvanlarda yumuşak) açın. Dikkatle kolu yukarı ve dışarı kafatası beyin geri kalanı. Not: 2-4 E19 embriyo kortikal astrocytes çanak başına 500.000 hücre, diseksiyon gününde kaplama, en az sekiz 10 cm yemekler için yeterince doku verim.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Eski veya yeni doğan yavruları için kafalarını makasla kesmek ve hemen cilt kafasının arkasından düz bir çizgi burnun ucu için kesim tarafından beyin yalıtır. Kafatasının sol ve sağ, sonra kafatası kemik Asansör bir kenara ve dikkatle kesilmiş deri çek. Beyincik kesme ve yukarı ve dışarı kafatası beyin diğer kol. Not: 2-3 P0-P8 pups kortikal astrocytes çanak başına 500.000 hücre, diseksiyon gününde kaplama, en az sekiz 10 cm yemekler için yeterince doku verim.</li>
	<li>Korteks temel orta yapısından ayrı. Forseps hemisferlerin arasında boyuna çatlak içinde yer sonra hareket forseps bir Yarımküre (boyuna çatlak dikey) korteks ve orta yapıları arasında her hemisphere ücretsiz çimdik için.</li>
	<li>Forseps kullanarak her hemisphere (ve onun Hipokampus) tüm meninkslerde çıkarın, sonra hippocampi ayrı. Hipokampal astrocytes gerekiyorsa, her Hipokampus 14 mL diseksiyon orta buz dolu bir 15 mL tüp içine taşıyın.</li>
	<li>Özel bölgeler gerekli (örneğin, frontal korteks) daha fazla alanlarda her hemisphere'nın korteks kaldırın. 1 mm3daha büyük parçalara astrocytes oluşturmak için kullanılacak kortikal herhangi bir doku kes. Diseksiyon orta buz dolu ayrı bir 15 mL tüp kortikal doku tüm parçaları toplamak.</li>
</ol>3. doku sindirim ve ayrılma
<ol><li>Bir kez tüm doku parçaları toplanır, tüp altına yerleşmek bekleyip sonra mümkün olduğu kadar orta Aspire edin.</li>
	<li>2-3 mL % 0.05 tripsin-EDTA serolojik pipet kullanarak ekleyin ve 20 dakika 37 ° C su banyosu tüplerde kuluçkaya. Not: tüm tripsin-EDTA hızla doku parçaları karıştırın ve tekrar yerleşmek için izin vermek için pipet üzerinden yayın.</li>
	<li>Dikkatle tripsin-EDTA, tüpün dibinde mümkün olduğunca küçük sıvı olarak doku parçalar halinde bırakarak Aspire edin.</li>
	<li>Kalan tripsin EDTA yıkamak için önceden soğutulmuş diseksiyon orta 5 mL ekleyin. Üst kısmındaki doku parçaları karıştırma ulaşmak için tüp tarafına pipet.</li>
	<li>Diseksiyon orta Aspire edin ve doku parçalar halinde mümkün olduğunca küçük sıvı olarak bırakın. Önceden soğutulmuş diseksiyon orta iki kez daha fazla ile bu çamaşır tekrarlayın.</li>
	<li>Son yıkama adımdan sonra istimal DMEM + (oda sıcaklığına kadar ısındı) 1.000 µL pipet ucu ve triturate pipetting tarafından doku ve kabarcıklar tanıtımı olmadan aşağı 1 mL ekleyin. Not: bu-ebilmek değişmek belgili tanımlık eriyik, hangi astrocytes oldukça duyarlı olan pH gibi bu kabarcıklar, üreten önlemek önemlidir.</li>
	<li>50 mL tüp açılış 100 µm hücre süzgeç koyun ve önceden soğutulmuş DMEM + 4.5 mL filtresiyle önceden ıslak.</li>
	<li>Disosiye doku süspansiyon hücre süzgeç üzerine 1 mL pipette ve başka bir 4.5 mL ekleyin önceden soğutmalı hücreleri hücre süzgeç aracılığıyla yıkamak için + DMEM.</li>
</ol>4. hücre kaplama Passaging tarafından Astrocyte zenginleştirme için
<ol><li>Örneğin, hücreleri hücre süspansiyon 10 µL trypan mavi ile 10 µL sulandrarak ve karışımı bir hemasitometre üzerine pipetting saymak.</li>
	<li>12 mL DMEM + 10 cm çanak başına 500.000 hücrelerde plaka. Not: DMEM + astrositik büyüme için yararlıdır nöronlar veya microglia için daha çok. Sallayarak sırasında cam coverslips kuyu içinde hareket eden fiziksel güçleri çok bu 10 cm yemekleri (coverslips) olmadan oyunculuk daha güçlü. Hücreleri 24-şey Tabaklarda sarsıldı, onlar sağlıksız hale veya ölmek. Sadece plaka astrocytes sallayarak sonra 24-şey plakaları.</li>
	<li>Hücre kültürleri da kuluçka makinesine 37 ° C ve % 5 CO2 ' de yedi gün boyunca tutun.</li>
	<li>Gün 6, adım 5'te açıklandığı gibi kültür PEI kaplı plakalar gün sallayarak ve hücreleri, passaging önce hazırlayın.</li>
</ol>5. passaging hücreleri
<ol><li>
Bir gün önce passaging, hücre kültürü plakaları %0,04 PEI ile kat.
	<ol>
<li>İmmunocytochemistry, viral iletim veya plazmid transfection (her bir steril 12 mm veya 25 mm cam coverslip, sırasıyla içeren) 24-şey veya 6-şey tabak kullanın.</li>
		<li>Cam coverslips % 70 etanol en az 1 h için kuluçka tarafından sterilize etmek, sonra üç kere coverslips wells yerleştirmeden önce deiyonize, distile suda yıkayın.</li>
		<li>En az 70 µL %0,04 PEI başına 24-şey tabak 12 mm coverslip ve 600 µL %0,04 PEI 25 mm coverslip 6-şey tabak içinde başına ekleyin.</li>
		<li>Western blot ya da RNA-Seq analiz için zaten sonra diseksiyon hücreleri içeren 10 cm yemekleri kullanmaya devam edebilirsiniz. Yemekleri sadece sarsılmış gerekir, sonra hücreleri 1 x PBS ile yıkanmış ve NB + H ile tedavi (yeni yemekleri aktarmak).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gün vitro (DIV) 7 sonra diseksiyon, 10 cm yemekleri hücreleri ile DMEM + bir laboratuvar shaker kuluçka üzerine yerleştirin ve yemekleri 6 h için 110 rpm'de sallamak.</li>
	<li>PEI deiyonize, distile su ile kaplı coverslips üzerinden kapalı iki kez yıkayın. NB + H orta plakaları (24-şey plakaları için ve iyi 6-şey plakaları için başına 2 mL başına 500 µL) ekleyin. Plakayı kuluçka 37 ° C ve 10 cm yemekleri titriyor iken % 5 CO2 veya en az 30 dk önceden equilibrate.</li>
	<li>20-30 dk 6 h sallayarak sona ermeden önceden 1 x PBS, DMEM +, NB + H ve % 0.25 tripsin-EDTA 37 ° c su banyosunda ısıtın.</li>
	<li>6 h sallayarak, kültür yemekleri shaker almak ve (içeren nöronlar sarsılmış kapalı, oligodendrocytes ve microglia) orta ile 10 mL yerini alması sonra çanak başına 1 x PBS önceden ısıttı. Not: Hemen yeniden bağlama astrositik olmayan hücreleri önlemek için ayrılmış hücreleri içeren eski orta Aspire edin önemlidir.</li>
	<li>PBS kaldırın ve 3 mL Önceden ısıtılmış tripsin-EDTA çanak başına ekleyin. Her yemeğin 4 dk. 37 ° C ve % 5 CO2kuluçka için kuluçkaya. Not: Western blot veya RNA-Seq için numune hazırlama, tripsin-EDTA ekleyerek değil. Bunun yerine, eski yerine koymak PBS 12 mL ile NB + H, sonra da kuluçka makinesine kültürler yerleştirilebilir önceden ısındı.</li>
	<li>5 Önceden ısıtılmış DMEM + 3 mL tripsin-EDTA her için çanak, hücreleri 5 mL serolojik pipet kullanarak çanak dışına pipette ve hücre süspansiyon 50 mL tüp içinde toplamak mL ekleyin. Not: Pipet çanak - altından doğrudan kat yemeğin hücreleri ayırmak gibi daha net hale gelmelidir. Serum tripsin inaktive gibi sadece serum içeren orta (yerine DMEM +), kullanın.</li>
	<li>Hücre süspansiyon 3,220 x g 4 dk 20 ° C'de, santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak ve resuspend hücre Pelet 1 ml NB + H önceden ısıttı.</li>
</ol>6. hücre kaplama son Astrocyte kültürler için
<ol><li>Hücreleri saymak.</li>
	<li>6-iyi tabak (ortamda 2 mL NB + H iyi başına) bir kuyu başına 20.000 hücre veya 24-şey tabak (ortamda 500 µL NB + H iyi başına) bir kuyu başına 5000 hücre plaka.</li>
	<li>Hücre kültürleri da kuluçka makinesine 37 ° C ve % 5 CO2 de daha ileri tedavi veya analiz kadar tutun.</li>
	<li>Yarım orta haftada bir değişimi. Not: Düşük besin ortamlarda Proliferasyona astrocytes durmak ama her ne kadar (deneyim, yok microglia AWESAM kültürde ortaya çıktı) kalan herhangi bir microglia çoğalırlar. Yarım orta bir kez bir hafta herhangi bir potansiyel olarak kalan microglia8zenginleştirme engeller ve monocultures en az üç hafta boyunca sağlıklı kalmak alışverişi.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Puschmann, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+3D+cell+culture+system+minimizes+cellular+stress+and+maintains+the+in+vivo-like+morphological+complexity+of+astroglial+cells.">Bioactive 3D cell culture system minimizes cellular stress and maintains the in vivo-like morphological complexity of astroglial cells.</a> Glia. 61 (3), 432-440 (2013).</li><li>Puschmann, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HB-EGF+affects+astrocyte+morphology,+proliferation,+differentiation,+and+the+expression+of+intermediate+filament+proteins.">HB-EGF affects astrocyte morphology, proliferation, differentiation, and the expression of intermediate filament proteins.</a> J Neurochem. 128 (6), 878-889 (2014).</li><li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes.">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li><li>Wolfes, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+culturing+stellate+astrocytes+reveals+spatially+distinct+Ca2++signaling+and+vesicle+recycling+in+astrocytic+processes.">A novel method for culturing stellate astrocytes reveals spatially distinct Ca2+ signaling and vesicle recycling in astrocytic processes.</a> J Gen Physiol. 149 (4), (2016).</li><li>McCarthy, K. D., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue.">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J Cell Biol. 85 (3), 890-902 (1980).</li><li>Krencik, R., Zhang, S. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+functional+astroglial+subtypes+from+human+pluripotent+stem+cells.">Directed differentiation of functional astroglial subtypes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 6 (11), 1710-1717 (2011).</li><li>Morita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+regulation+of+calcium+oscillation+in+astrocytes+by+growth+factors+and+pro-inflammatory+cytokines+via+the+mitogen-activated+protein+kinase+cascade.">Dual regulation of calcium oscillation in astrocytes by growth factors and pro-inflammatory cytokines via the mitogen-activated protein kinase cascade.</a> J Neurosci. 23 (34), 10944-10952 (2003).</li><li>Saura, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cells+in+astroglial+cultures:+a+cautionary+note.">Microglial cells in astroglial cultures: a cautionary note.</a> J Neuroinflammation. 4, 26 (2007).</li><li>Raponi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+expression+defines+a+state+in+which+GFAP-expressing+cells+lose+their+neural+stem+cell+potential+and+acquire+a+more+mature+developmental+stage.">S100B expression defines a state in which GFAP-expressing cells lose their neural stem cell potential and acquire a more mature developmental stage.</a> Glia. 55 (2), 165-177 (2007).</li><li>Royo, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+AAV+serotypes+stably+transduce+primary+hippocampal+and+cortical+cultures+with+high+efficiency+and+low+toxicity.">Specific AAV serotypes stably transduce primary hippocampal and cortical cultures with high efficiency and low toxicity.</a> Brain Res. 1190, 15-22 (2008).</li><li>Malarkey, E. B., Parpura, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+characteristics+of+vesicular+fusion+in+astrocytes:+examination+of+synaptobrevin+2-laden+vesicles+at+single+vesicle+resolution.">Temporal characteristics of vesicular fusion in astrocytes: examination of synaptobrevin 2-laden vesicles at single vesicle resolution.</a> J Physiol. 589, 4271-4300 (2011).</li><li>Zamanian, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+reactive+astrogliosis.">Genomic analysis of reactive astrogliosis.</a> J Neurosci. 2 (18), 6391-6410 (2012).</li><li>Srinivasan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(2+)+signaling+in+astrocytes+from+Ip3r2(-/-)+mice+in+brain+slices+and+during+startle+responses+in+vivo.">Ca(2+) signaling in astrocytes from Ip3r2(-/-) mice in brain slices and during startle responses in vivo.</a> Nat Neurosci. 18 (5), 708-717 (2015).</li><li>Shigetomi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+calcium+microdomains+within+entire+astrocyte+territories+and+endfeet+with+GCaMPs+expressed+using+adeno-associated+viruses.">Imaging calcium microdomains within entire astrocyte territories and endfeet with GCaMPs expressed using adeno-associated viruses.</a> J Gen Physiol. 141 (5), 633-647 (2013).</li><li>Srinivasan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Transgenic+Mouse+Lines+for+Selectively+Targeting+Astrocytes+and+Studying+Calcium+Signals+in+Astrocyte+Processes+In+Situ+and+In+Vivo.">New Transgenic Mouse Lines for Selectively Targeting Astrocytes and Studying Calcium Signals in Astrocyte Processes In Situ and In Vivo.</a> Neuron. 92 (6), 1181-1195 (2016).</li><li>Otsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+dynamics+in+astrocyte+processes+during+neurovascular+coupling.">Calcium dynamics in astrocyte processes during neurovascular coupling.</a> Nat Neurosci. 18 (2), 210-218 (2015).</li><li>Agarwal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+Opening+of+the+Mitochondrial+Permeability+Transition+Pore+Induces+Microdomain+Calcium+Transients+in+Astrocyte+Processes.">Transient Opening of the Mitochondrial Permeability Transition Pore Induces Microdomain Calcium Transients in Astrocyte Processes.</a> Neuron. 93 (3), 587-605 (2017).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Protokol içinde dört adım kritik: 1) konsantrasyonu küçük artışlar olgunlaşmamış kültürler için örneğin, neden olabilir beri tam 5 ng/ml, HBEGF konsantrasyon hazırlanıyor 10 ng/mL HBEGF astrocytes4; de-ayırt 2) doku veya pH değiştirebilir ve astrocyte sağlık engel hücreleri içeren çözümler kaçınmak kabarcıkları; 3) en uygun pH ve sıcaklık sağlıklı astrocytes büyüyen için elde etmek için ortam sıcaklığına önceden; 4) (hiçbir microglia bulundu,...

Astrocytes trofik desteği, kan akımı, sinaptik sinyal ve plastisite ve hücreler arası iletişim - tüm bunların etrafında ince astrositik süreçleri Merkezi mekanizmalar aracılığıyla beyin fonksiyonlarını etkiler. Burada açıklanan AWESAM Protokolü nöronlar ve yararlı örneğin, birçok protein ve hatta Ca2 + sinyal ifadesi farklı beyin hücre boyunca örtüşme olan diğer glia müdahale olmadan bu süreçlerin çalışma sağlar türleri. Ayrıca, bu yöntem daha önce kullanılan tekniklerin sınırlamalar üstesinden gelir. Özellikle, vivo içindebizim iletişim kuralı sağlar-Morfoloji (Yildiz Seklinde astrocytes ince süreçleri ile) ve bir hızlı, kolay, gen ekspresyonu ve ucuz şekilde gibi.
Doğrudan hücre morfolojisi, gen ekspresyonu ve birçok diğer düzenleyici işlemler çevre tarafından etkilenmiştir. Bir kültür tabak içinde bu faktörler tarafından çevreleyen hücreleri, aynı zamanda hangi hücreleri yetiştirilmektedir orta serbest ifade eder. Astrocytes, HBEGF bir Yildiz Seklinde Morfoloji1 ikna etmek için daha önce bildirildi ancak aynı zamanda astrocytes2de-ayırt etmek için bulunamadı. Ancak, düşük konsantrasyonlarda HBEGF, daha sonra daha fazla vivo içindeoluşturmak için kullanılmıştır-RNA sıralama iki farklı protokol3,4ile tanımlandığı gibi hangi tarihlerde astrocytes. Ayrıca, bağımsız olarak protokolü4orta bileşimi ile astrocyte Morfoloji değiştirir: Neurobasal orta HBEGF bir düşük konsantrasyon ile diğer Orta besteleri (örneğin, süre Yildiz Seklinde astrocytes yetiştirmek için en uygun Serum DMEM içeren) poligonal hücrelerde (hatta astrocytes taze immunopanning tarafından izole) üretmek.
AWESAM Protokolü dezavantajları astrocyte monocultures4büyüyen için önceki teknikleri üstesinden gelir. Astrocyte monocultures büyüyen için önceki teknikleri var aşağıdaki dezavantajları: Yildiz Seklinde astrocytes vivo içinde (MD yöntemi)5/; alışılmadık poligonal Morfoloji uzunluk ve maliyet (astrocytes İndüklenmiş pluripotent kök hücreler alır üzerinden üç ay hazırlık ve pahalı büyüme faktörleri de dahil olmak üzere birçok reaktifler gerektirir) Protokolü'nün6; malzeme (immunopanning yöntemi)3düşük miktarda; ve astrocytes de-farklılaşma ve gereksinimi 3D matris (Puschmann ve ark.) 1 , 2. buna ek olarak, AWESAM Protokolü sağlar: vivo-tarihlerde Morfoloji (ince süreçleri ile Yildiz Seklinde astrocytes); hızlı, kolay ve ucuz yöntemi; malzeme büyük miktarlarda; ve en vivo içinde-gen ekspresyonu immunopanned ve MD astrocytes ile karşılaştırıldığında hangi tarihlerde. Ayrıca, Ca2 + sinyal ve vezikül ince işlemler ve olaylar membran yakın geri dönüşüm çalışması için 2D kültür sağlar (örneğin, TIRF mikroskobu 3D kültürlerde mümkün değildir).
MD yöntemi yayımı 19805poligonal astrocyte monocultures teknik bir basit ve hızlı sunan, beri yaygın olarak kullanılmış. Kısacası, MD yöntemi (FCS) fetal buzağı Serumda büyüyen karışık beyin hücreleri üzerine kuruludur-DMEM, içeren takip (olarak diğer tüm beyin hücresi türleri çanak ayırmak) için astrocytes zenginleştirmek ve daha fazla kültür aynı ortamda basamaklarının sallayarak. FCS ile desteklenmiş DMEM farklı kanser hücre satırlarına tüm bunların MD astrocytes kültür tarafından sergilenen poligonal Morfoloji paylaşmak, fibroblastlar ve adiposit arasında değişen birçok hücre tipleri için kullanılır. Kadar erken 2000'lerde7, küçük düşünce olmuştu astrocytes için uygun bir ortama verilen, özellikle onların tipik Yildiz Seklinde Morfoloji lehine içinde vivobuldu. 2011 yılında yayınlanan bir protokol ulaşmak böyle Yildiz Seklinde Morfoloji: immunopanning yöntemi olarak adlandırılan, serum-Alerjik orta astrocytes3kültür için en iyi duruma getirilmiş kullanır. Bu yöntemi kullanarak, taze izole beyin hücreleri bir dizi hücre türüne özgü hücre yüzey proteinleri astrocytes için zenginleştirmek için hedef antikorlar ile kaplı yemekleri sunulur. Daha fazla vivo içinderağmen-immunopanned astrocytes morfoloji ve ifade profil gibi vitro çalışmalar çoğunluğu hala MD astrocyte yönteme güvenmek. İmmunopanning yöntemi daha karmaşık ve zaman alıcı adımlar kültür ilk gününde kapsar MD yöntemi basit ve hızlı, iken (uzun enzim sindirim süre gibi çözümleri farklı yoğunluk, immunopanning kendisi, dikkatli katmanlama ve çeşitli aralıklarla adımlar - kaplama tüm önce). Ancak, daha özel orta kullanarak, AWESAM yöntemi her iki hızını MD yöntemi ve in vivosunar-tarihlerde immunopanning Protokolü morfolojisi.
Genel olarak, AWESAM Protokolü daha fazla vivo içindeçalışmak için yararlıdır-tarihlerde astrocytes 2D monocultures neurons ve diğer glia (immunostainings, immunoblots ve RNA sıralama tarafından daha önce karakterize4 ) olarak izole içinde. Bu ince astrositik işlemler çalışma için izin verir ve spontan Ca2 + sinyal ve olaylar (tarafından TIRF mikroskobu görüntüsüörneğin,) membran yakın görüntülenmesi için büyük erişilebilirlik sağlar.

<table><tbody><tr><td>0.05% trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300054</td><td>warm in 37 &amp;ordm;C waterbath before use</td></tr><tr><td>0.25% trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>warm in 37 &amp;ordm;C waterbath before use</td></tr><tr><td>B-27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>50X stock</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>100X stock</td></tr><tr><td>Penicillin / streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td>50 stock; penicillin: 5000 U/ml; streptomycin: 5000 &amp;micro;g/ml</td></tr><tr><td>Neurobasal medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>without L-glutamine</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>41966029</td><td></td></tr><tr><td>HBEGF</td><td>Sigma</td><td>4643</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco</td><td>14170112</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010049</td><td>1X</td></tr><tr><td>100 &amp;mu;m nylon cell strainer</td><td>BD</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T8154&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cell culture incubator</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Hera Cell 240i cell culture incubator</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory shaker</td><td>Heidolph</td><td>Rotamax 120&amp;nbsp;</td><td>use inside cell culture incubator</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R&amp;nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

culturing in vivo-like murine astrocytes using the fast, simple, and inexpensive awesam protocol

AWESAM (bir low- easy stellate birstrocyte malınan mal) protokolü üzerine kuruludur vivo içindebüyük miktarlarda üretmek için hızlı, basit ve ucuz bir yol-fare ve sıçan astrocyte monocultures hangi tarihlerde : Beyin hücreleri farklı beyin bölgelerden izole olabilir ve hücre kültürü bir hafta sonra astrositik olmayan hücreleri bir shaker kuluçka 6 h için Tarih kültür yemekleri yerleştirerek sarsılmış. Kalan astrocytes sonra yeni kalıplara (NB + H olarak adlandırılan) bir astrocyte özgü orta ile pasajlı. NB + H heparin bağlama EGF benzeri büyüme faktörü (HBEGF), serum orta yerine kullanılan düşük konsantrasyonlarda içerir. NB + H içinde büyüyen sonra AWESAM astrocytes Yildiz Seklinde bir morfoloji ve özellik iyi işlemler var. Dahası, bu astrocytes daha fazla vivo içindevar-tarihlerde gen ekspresyonu daha önceden yayınlanmış yöntemlerle üretilen astrocytes. CA2 + görüntüleme, vezikül dinamikleri ve diğer olaylar membran yakın böylece iyi astrositik süreçleri vitroiçinde canlı hücre confocal veya TIRF mikroskobu kullanarak örneğin, okudu olabilir. Özellikle, AWESAM astrocytes da astrocytes içinde vivoiçin benzer sinyal spontan Ca2 + sergi.

Nöronlar ile birlikte kültürlü ve NB + ortamda yetiştirilen astrocytes 2 hafta sonra kültür (Şekil 2) Yildiz Seklinde görünür. NB + orta ek olarak, ortak kültür astrocytes de büyük olasılıkla onların hayatta kalma ve Morfoloji katkıda bilinmeyen nöron kaynaklı faktörler maruz kalır. Buna ek olarak, MD astrocytes DMEM + (diğer hücre tipleri geçiş önce kapalı sallayarak sonra) monocultures yetiştirilen 2 hafta sonra poligonal gör?...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol at JoVE.com

Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

Burada açıklanan AWESAM iletişim kuralı diğer beyin hücreleri izolasyonu fare astrocytes bir hızlı, basit ve ucuz şekilde kültür için en iyi yöntemdir. AWESAM astrocytes spontan Ca2 + sinyal, morfoloji ve gen ifade profilleri için astrocytes vivo içindebenzer sergi.

Vivokültür-tarihlerde hızlı, basit ve ucuz AWESAM iletişim kuralını kullanarak fare Astrocytes

The AWESAM (a low-cost easy stellate astrocyte method) protocol entails a fast, simple, and inexpensive way to generate large quantities of in vivo-like ...

culturing-vivo-like-murine-astrocytes-using-fast-simple-inexpensive

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

8.4K Görüntüleme.  University of Oxford. Burada açıklanan AWESAM iletişim kuralı diğer beyin hücreleri izolasyonu fare astrocytes bir hızlı, basit ve ucuz şekilde kültür için en iyi yöntemdir. AWESAM astrocytes spontan Ca2 + sinyal, morfoloji ve gen ifade profilleri için astrocytes vivo içindebenzer sergi.

Video: Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Astrocytes are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be learned about their molecular and functional characteristics. In vitro astrocyte cell culture systems can be used to study the biological functions of these glial cells in detail. This video protocol shows how to obtain pure astrocytes by isolation and culture of mixed cortical cells of mouse pups. The method is based on the absence of viable neurons and the separation of astrocytes, oligodendrocytes and microglia, the three main glial cell populations of the central nervous system, in culture. Representative images during the first days of culture demonstrate the presence of a mixed cell population and indicate the timepoint, when astrocytes become confluent and should be separated from microglia and oligodendrocytes. Moreover, we demonstrate purity and astrocytic morphology of cultured astrocytes using immunocytochemical stainings for well established and newly described astrocyte markers. This culture system can be easily used to obtain pure mouse astrocytes and astrocyte-conditioned medium for studying various aspects of astrocyte biology.

Astrocytes have been recognized to be versatile cells participating in fundamental biological processes that are essential for normal brain development and function, and central nervous system repair. Here we present a rapid procedure to obtain pure mouse astrocyte cultures to study the biology of this major class of central nervous system cells.

Fare Kortikal astrositlerde İzolasyon ve Kültür

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Nörobilim

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease pathogenesis and their utility for preclinical drug development. In order to design a better model system for these applications, phenotypically wild-type cortical astrocytes and neural stem cells (NSC) from conditional, genetically engineered mice (GEM) that harbor various combinations of floxed oncogenic alleles were harvested and grown in culture. Genetic recombination was induced in vitro using adenoviral Cre-mediated recombination, resulting in expression of mutated oncogenes and deletion of tumor suppressor genes. The phenotypic consequences of these mutations were defined by measuring proliferation, transformation, and drug response in vitro. Orthotopic allograft models, whereby transformed cells are stereotactically injected into the brains of immune-competent, syngeneic littermates, were developed to define the role of oncogenic mutations and cell type on tumorigenesis in vivo. Unlike most established human glioblastoma cell line xenografts, injection of transformed GEM-derived cortical astrocytes into the brains of immune-competent littermates produced astrocytomas, including the most aggressive subtype, glioblastoma, that recapitulated the histopathological hallmarks of human astrocytomas, including diffuse invasion of normal brain parenchyma. Bioluminescence imaging of orthotopic allografts from transformed astrocytes engineered to express luciferase was utilized to monitor in vivo tumor growth over time. Thus, astrocytoma models using astrocytes and NSC harvested from GEM with conditional oncogenic alleles provide an integrated system to study the genetics and cell biology of astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo and may be useful in preclinical drug development for these devastating diseases.

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Phenotypically wild-type astrocytes and neural stem cells harvested from mice engineered with floxed, conditional oncogenic alleles and transformed via viral Cre-mediated recombination can be used to model astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo by orthotopic injection of transformed cells into brains of syngeneic, immune-competent littermates.

Modelleme Astrositom Patogenez<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Kortikal Astrositler veya Şartlı, Genetiği fareler ile Nöral Kök Hücreler kullanma

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of oxygen and glucose, which causes energy failure and neuronal death. After an ischemic stroke insult, astrocytes become reactive and proliferate around the injury site as it develops. Under this scenario, it is difficult to study the specific contribution of astrocytes to the brain region exposed to ischemia. Therefore, this article introduces a methodology to study primary astrocyte reactivity and proliferation under an in vitro model of an ischemia-like environment, called oxygen glucose deprivation (OGD). Astrocytes were isolated from 1-4 day-old neonatal rats and the number of non-specific astrocytic cells was assessed using astrocyte selective marker Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) and nuclear staining. The period in which astrocytes are subjected to the OGD condition can be customized, as well as the percentage of oxygen they are exposed to. This flexibility allows scientists to characterize the duration of the ischemic-like condition in different groups of cells in vitro. This article discusses the timeframes of OGD that induce astrocyte reactivity, hypertrophic morphology, and proliferation as measured by immunofluorescence using Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA). Besides proliferation, astrocytes undergo energy and oxidative stress, and respond to OGD by releasing soluble factors into the cell medium. This medium can be collected and used to analyze the effects of molecules released by astrocytes in primary neuronal cultures without cell-to-cell interaction. In summary, this primary cell culture model can be efficiently used to understand the role of isolated astrocytes upon injury.

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Ischemic stroke is a complex event in which the specific contribution of astrocytes to the affected brain region exposed to oxygen glucose deprivation (OGD) is difficult to study. This article introduces a methodology to obtain isolated astrocytes and study their reactivity and proliferation under OGD conditions.

Astrocyte reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı Vitro iskemik benzeri koşullar altında izleme

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

Primary Cultures of Rat Astrocytes and Microglia and Their Use in the Study of Amyotrophic Lateral Sclerosis

This protocol demonstrates how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from the cortices of Sprague Dawley rats and how to use these cells for the purpose of studying the pathophysiology of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) in the rat hSOD1G93A model. First, the protocol shows how to isolate and culture astrocytes and microglia from postnatal rat cortices, and then how to characterize and test these cultures for purity by immunocytochemistry using the glial fibrillary acidic protein (GFAP) marker of astrocytes and the ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1) microglial marker. In the next stage, methods are described for dye-loading (calcium-sensitive Fluo 4-AM) of cultured cells and the recordings of Ca2+ changes in video imaging experiments on live cells.
The examples of video recordings consist of: (1) cases of Ca2+ imaging of cultured astrocytes acutely exposed to immunoglobulin G (IgG) isolated from ALS patients, showing a characteristic and specific response compared to the response to ATP as demonstrated in the same experiment. Examples also show a more pronounced transient rise in intracellular calcium concentration evoked by ALS IgG in hSOD1G93A astrocytes compared to non-transgenic controls; (2) Ca2+ imaging of cultured astrocytes during a depletion of calcium stores by thapsigargin (Thg), a non-competitive inhibitor of the endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase, followed by store-operated calcium entry elicited by the addition of calcium in the recording solution, which demonstrates the difference between Ca2+ store operation in hSOD1G93A and in non-transgenic astrocytes; (3) Ca2+ imaging of the cultured microglia showing predominantly a lack of response to ALS IgG, whereas ATP application elicited a Ca2+ change. This paper also emphasizes possible caveats and cautions regarding critical cell density and purity of cultures, choosing the correct concentration of the Ca2+ dye and dye-loading techniques.

We present here a protocol on how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from rat cortices for time-lapse video imaging of intracellular Ca2+ for research on pathophysiology of amyotrophic lateral sclerosis in the hSOD1G93A rat model.

Sıçan Astrositleri ve Mikroglia'nın Birincil Kültürleri ve Amiyotrofik Lateral Skleroz Çalışmalarında Kullanımları

This protocol demonstrates how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from the cortices of Sprague Dawley rats and how to ...

Isolation and Direct Neuronal Reprogramming of Mouse Astrocytes

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through multipotent intermediates. This technique not only holds great promises in the field of disease modeling, as it allows to convert, for example, fibroblasts for patients suffering neurodegenerative diseases into neurons, but also represents a promising alternative for cell-based replacement therapies. In this context, a major scientific breakthrough was the demonstration that differentiated non-neural cells within the central nervous system, such as astrocytes, could be converted into functional neurons in vitro. Since then, in vitro direct reprogramming of astrocytes into neurons has provided substantial insights into the molecular mechanisms underlying forced identity conversion and the hurdles that prevent efficient reprogramming. However, results from in vitro&#160;experiments performed in different labs are difficult to compare due to differences in the methods used to isolate, culture, and reprogram astrocytes. Here, we describe a detailed protocol to reliably isolate and culture astrocytes with high purity from different regions of the central nervous system of mice at postnatal ages via magnetic cell sorting. Furthermore, we provide protocols to reprogram cultured astrocytes into neurons via viral transduction or DNA transfection. This streamlined and standardized protocol can be used to investigate the molecular mechanisms underlying cell identity maintenance, the establishment of a new neuronal identity, as well as the generation of specific neuronal subtypes and their functional properties.

Here we describe a detailed protocol to generate highly enriched cultures of astrocytes derived from different regions of the central nervous system of postnatal mice and their direct conversion into functional neurons by the forced expression of transcription factors.

Fare Astrositlerinin İzolasyonu ve Doğrudan Nöronal Yeniden Programlanması

Direct neuronal reprogramming is a powerful approach to generate functional neurons from different starter cell populations without passing through ...

Yetişkin Fare Omuriliğinden Astrositlerin ve Mikroglia'nın Verimli Ekstraksiyonu

Isolation of Pure Astrocytes and Microglia from the Adult Mouse Spinal Cord For In Vitro Assays and Transcriptomic Studies

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic cells exhibit rapid responses to environmental changes and display significant heterogeneity in terms of morphology, transcriptional profiles, and functions. While our understanding of the functions of glial cells in health and disease has advanced substantially, there remains a need for in vitro, cell-specific analyses conducted in the context of insults or injuries to comprehensively characterize distinct cell populations. Isolating cells from the adult mouse offers several advantages over cell lines or neonatal animals, as it allows for the analysis of cells under pathological conditions and at specific time points. Furthermore, focusing on spinal cord-specific isolation, excluding brain involvement, enables research into spinal cord pathologies, including experimental autoimmune encephalomyelitis, spinal cord injury, and amyotrophic lateral sclerosis. This protocol presents an efficient method for isolating astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating immediate or future analysis with potential applications in functional, molecular, or proteomic downstream studies.

Yazar Spotlight: Yetişkin Fare Omuriliğinden Glial Hücrelerin İzolasyonu 

This protocol outlines the isolation of purified astrocytes and microglia from the adult mouse spinal cord, facilitating subsequent applications such as RNA analysis and cell culture. It includes detailed cell dissociation methods and procedures designed to enhance both the quality and yield of isolated cells.

İn Vitro Tahliller ve Transkriptomik Çalışmalar için Yetişkin Fare Omuriliğinden Saf Astrositlerin ve Mikroglia'nın İzolasyonu

Astrocytes and microglia play pivotal roles in central nervous system development, injury responses, and neurodegenerative diseases. These highly dynamic ...

Generating a Primary Culture of Astrocytes from a Rat Pup Brain

Source: Mili&#263;evi&#263;, K., et al., <a href="https://app.jove.com/v/63483">Primary Cultures of Rat Astrocytes and Microglia and Their Use in the Study of Amyotrophic Lateral Sclerosis.</a> J. Vis. Exp. (2022)
The video demonstrates a technique for culturing primary astrocytes from the rat cortex. The cortex is mechanically dissociated to obtain a homogeneous glial cell suspension, which is then plated on polypeptide-coated plates to promote selective proliferation of astrocytes. Subsequently, the astrocytes are enzymatically dissociated from the plates and transferred to fresh media, allowing the culture of pure astrocytes.

Bir Sıçan Yavrusu Beyninden Birincil Astrosit Kültürü Oluşturma

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Primary cell culture preparation

...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Nöronal Kültür Teknikleri

Birincil Nöronal Kültür

A Simple Technique to Isolate and Culture Murine Astrocytes

Source: Wolfes, A. C., et al., <a href="https://app.jove.com/v/56092">Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol.</a> J. Vis. Exp. (2018)
The video demonstrates a simple method to culture murine astrocytes in isolation from other brain cells. During culturing, by using astrocyte-specific media and inhibiting the adherence of non-astrocytic cells, the method selectively cultures astrocytes. These cultured astrocytes exhibit stellate morphology with fine processes.

Murin astrositlerini izole etmek ve kültürlemek için basit bir teknik

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Rat or Mouse Brain Dissection
...

Vivokültür-tarihlerde hızlı, basit ve ucuz AWESAM iletişim kuralını kullanarak fare Astrocytes

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Fare Kortikal astrositlerde İzolasyon ve Kültür

Modelleme Astrositom Patogenez

Astrocyte reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı Vitro iskemik benzeri koşullar altında izleme

Sıçan Astrositleri ve Mikroglia'nın Birincil Kültürleri ve Amiyotrofik Lateral Skleroz Çalışmalarında Kullanımları

Fare Astrositlerinin İzolasyonu ve Doğrudan Nöronal Yeniden Programlanması

İn Vitro Tahliller ve Transkriptomik Çalışmalar için Yetişkin Fare Omuriliğinden Saf Astrositlerin ve Mikroglia'nın İzolasyonu

İn Vitro Tahliller ve Transkriptomik Çalışmalar için Yetişkin Fare Omuriliğinden Saf Astrositlerin ve Mikroglia'nın İzolasyonu

İn Vitro Tahliller ve Transkriptomik Çalışmalar için Yetişkin Fare Omuriliğinden Saf Astrositlerin ve Mikroglia'nın İzolasyonu

Bir Sıçan Yavrusu Beyninden Birincil Astrosit Kültürü Oluşturma

Murin astrositlerini izole etmek ve kültürlemek için basit bir teknik