Yazarlar bu çalışanlar ve bu entübasyon teknik öğrenirken tavşan işleme ve anestezi eğitim oturumları geri bildirim için katılan araştırma personel kabul etmek istiyorum.

ana hatlar aşağı entübasyon yordamı Mayo Kliniği kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi.
 1. hazırlık ( şekil 1) <ol><li>5 Fransız polipropilen kateter elde edilir ve toplam uzunluğu 8-10 santim Yani sigara yuvarlak sonunda kesti. Hangi taraftan gerektiğini açıkça belirtmek için Boru kesme sonuna işaret değil takılı nefes borusu (ok, şekil 1).</li>
	<li>Bir boyutu 0 veya 1 Miller laringoskop bıçak üzerinde laringoskop yerleştirin ve ışık çalıştığını doğrulamak.</li>
	<li>%2 lidokain 0.25 mL 1 mL şırınga çizin.</li>
	<li>Steril yağlayıcı bir uygun şekilde büyüklüğünde manşonsuz endotrakeal tüp (genellikle 2,5-4.0 mm ID) amaçla geçerlidir.</li>
	<li>Kez o yerde endotrakeal tüp güvenliğini sağlama (Örneğin, Göbek bandı) eklenen için malzemeleri hazırlayın.</li>
	<li>Hava akımı başarılı entübasyon (#5, şekil 1) onaylamak için yordamı sonunda tespit etmek için bir cihaz almak. Bu isteğe bağlı değil.</li>
</ol> 2. Anestezi 35 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg xylazine İntramüsküler kuadriseps kas bir yaklaşık 4 ay yaşlı, 3.0-3,5 kg, Yeni Zelanda beyaz arka bacak 25 gauge iğne 3 mL şırınga kullanarak gibi <ol><li>Yönet enjekte edilebilir anestezi tavşan. 
	Not: Bu anestezik rejimi genç, sağlıklı, özel patojen-Alerjik araştırma tavşan bir sık kullanılan enjekte edilebilir birlikte, ama klinik durumu ve/veya deneysel hedefleri bağlı olarak, farklı bir protokol daha uygun olabilir.</li>
	<li>Tavşan anestezi sonra kornea dokusu korumak için gözleri steril oftalmik yağ uygulayın.</li>
</ol> 3. Endotrakeal entübasyon uygun endotrakeal tüp yerleştirilmesi için belirlemek için <ol><li>ölçü endotrakeal tüp kesici gelen torasik giriş. Torasik giriş düzeyinde tüp sonu yerleşimini sağlar tüp açılış gırtlak trakeal bifurkasyon kraniyal ama geçmişte kaldı.</li>
	<li>Tavşan sternally biraz genişletilmiş tablo ( Şekil 2) kenarına kafasını ile hazırlık masaya yerleştirin. Tavşan konumlandırılmalı kare, baş ve omurga düz uyum.</li>
	<li>, Baş kaldırma tavşan için bir gazlı bez yastık kullanın &#39; s dil lateral tavşan için &#39; s sağ alt kesici ön dişler travmasından kaçınmak için dikkat çekici (diastema) içinde.</li>
	<li>Laringoskop ve bıçak sağ eli ile kavramak ve tavşan girerek ön dişler, arkasında ağzına yerleştirin &#39; s yaptı.</li>
	<li>Yumuşak damak görünene kadar ağız çatı Kaudal yönde bıçak ucu ile izleyin.</li>
	<li>Sağ eliyle laringoskop ileri (viraj laringoskop aşağı doğru tutarak bilek) ipucu tavşan uzanan süre &#39; s baş geri ve boyun ileri bir açık hava yolu korumak ve larinks ( şekil 3 görüntülemek için A). zorunlu burun canlılar, gırtlak kapağını genellikle yumuşak damak olduğunu ve bu yöntemin kullanılması gırtlak kapağını yerinden ve glottis maruz dil Bankası sıkıştırır. Oksijen Desatürasyon önlemek için bir açık hava yolu entübasyon sırasında korumak için açıklandığı gibi genişletilmiş boyun tutmanız önemlidir.</li>
	<li>Dil yayın ve sol el sağ el için kılavuz kateter yerleştirme boşaltmak için laringoskop blade anahtarı.</li>
	Laringoskop holding ve glottis ( şekil 3 B), görünümünü koruyarak önceden süre geçmiş gırtlak ( şekil 4 delikten rehber kateterin yuvarlak uç <li> ). Kateter trakeal Bifurkasyon bir doğal durdurmak için gelecek.</li>
	<li>Tutun rehber kateterin korurken, endotrakeal tüp kavramak ve kuvvet için kateter endotrakeal tüp konektörüne yakalayarak uygulamamayı dikkat çekici kateter üzerinde iplik. Ses telleri ( şekil 5) direnç kadar tüp ilerlemek.</li>
	<li>%2 lidokain 0.25 mL endotrakeal tüp açılış içine aşılamak. Lidokain yerel olarak anestezi ses telleri, laryngospasm 22 ( şekil 6) önlenmesi için endotrakeal tüp gidecek.</li>
	<li>Etkili olması ve yavaşça ses telleri ( Şekil 7) ilerleyen endotrakeal tüp büküm tarafından devam topikal anestezi için yaklaşık iki dakika izin verin. Tüp ses telleri geçtikten sonra çıkarmak belgili tanımlık laringoskop bıçak ve kateter, tüpü çıkarmak değil için Bakımı.</li>
	Hava akımı gözlemleyerek endotrakeal tüp <li>Doğrula yerleşimi. Bu, yerleşimleri bir doku veya kürk tüp sisleme veya cam/ayna tüpün ucundaki sisleme ve hava akımı için dinlemek için seyir hava akımı, algılamak için tüp sonunda da dahil olmak üzere yapmanın birden fazla yolu vardır. Hava akımı 23 veya solunum algılamak üzere tasarlanan aygıt da olabilir ( şekil 8) entübasyon başarılı (bkz: Malzemeler tablo seçenekleri için) olup olmadığını belirlemek için kullanılır. Endotrakeal tüp Göbek bandı tüp ve baş çevresinde bağlanmış gibi tercih edilen bir yöntem kullanarak güvenli. Anestezi devresi ve auscult her iki Toraks ve akciğerin iki tarafa da havalandırma sağlamak için nefes verirken takın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Quesenberry, K. E., Carpenter, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ferrets, rabbits, and rodents : clinical medicine and surgery. 3rd edn . , (2012).</li><li>Dugdale, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterinary Anaesthesia: Principles to Practice. , (2010).</li><li>Yamamoto, Y., Inoue, S., Abe, R., Kawaguchi, M., Furuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+management+with+the+laryngeal+tube+in+rabbits.">Airway management with the laryngeal tube in rabbits.</a> Lab animal. 36 (5), 33-35 (2007).</li><li>Belena, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laryngeal+mask,+laryngeal+tube,+and+Frova+introducer+in+simulated+difficult+airway.">Laryngeal mask, laryngeal tube, and Frova introducer in simulated difficult airway.</a> J Emerg Med. 48 (2), 254-259 (2015).</li><li>Smith, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+tubes+versus+laryngeal+mask+airways+in+rabbit+inhalation+anesthesia:+ease+of+use+and+waste+gas+emissions.">Endotracheal tubes versus laryngeal mask airways in rabbit inhalation anesthesia: ease of use and waste gas emissions.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 43 (4), 22-25 (2004).</li><li>Kazakos, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+laryngeal+mask+airway+in+rabbits:+placement+and+efficacy.">Use of the laryngeal mask airway in rabbits: placement and efficacy.</a> Lab Anim (NY). 36 (4), 29-34 (2007).</li><li>Crotaz, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+feasibility+investigation+of+the+v-gel+airway:+an+anatomically+designed+supraglottic+airway+device+for+use+in+companion+animal+veterinary+anaesthesia.">Initial feasibility investigation of the v-gel airway: an anatomically designed supraglottic airway device for use in companion animal veterinary anaesthesia.</a> Vet Anaesth Analg. 37 (6), 579-580 (2010).</li><li>Bateman, L., Ludders, J. W., Gleed, R. D., Erb, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+facemask+and+laryngeal+mask+airway+in+rabbits+during+isoflurane+anesthesia.">Comparison between facemask and laryngeal mask airway in rabbits during isoflurane anesthesia.</a> Veterinary Anaesthesia and Analgesia. 32 (5), 280-288 (2005).</li><li>Johnson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+intubation+of+exotic+companion+mammals.">Endoscopic intubation of exotic companion mammals.</a> The veterinary clinics of North America. Exotic animal practice. 13 (2), 273-289 (2010).</li><li>Tranquilli, W. J., Thurmon, J. C., Grimm, K. A., Lumb, W. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lumb &amp; Jones' veterinary anesthesia and analgesia. 4th edn. , (2007).</li><li>Worthley, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+oral+endotracheal+intubation+with+a+fibre-optic+scope+in+rabbits:+a+simple+and+reliable+technique.">Rapid oral endotracheal intubation with a fibre-optic scope in rabbits: a simple and reliable technique.</a> Laboratory Animals. 34 (2), 199-201 (2000).</li><li>Miranda, A., Pego, J. M., Correia-Pinto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+facility+videoendoscopic+intubation+station:+tips+and+tricks+from+mice+to+rabbits.">Animal facility videoendoscopic intubation station: tips and tricks from mice to rabbits.</a> Laboratory animals. , (2016).</li><li>Irazuzta, J., Hopkins, J., Gunnoe, P., Brittain, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+method+of+multipurpose+airway+access+through+percutaneous+tracheostomy+in+rabbits+(Oryctolagus+cuniculus).">Simple method of multipurpose airway access through percutaneous tracheostomy in rabbits (Oryctolagus cuniculus).</a> Lab Anim Sci. 47 (4), 411-413 (1997).</li><li>Bertolet, R. D., Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation:+an+easy+way+to+establish+a+patent+airway+in+rabbits.">Endotracheal intubation: an easy way to establish a patent airway in rabbits.</a> Lab Anim Sci. 30 (2), 227-230 (1980).</li><li>Gilroy, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+of+rabbits+and+rodents.">Endotracheal intubation of rabbits and rodents.</a> J Am Vet Med Assoc. 179 (11), 1295 (1981).</li><li>Morgan, T. J., Glowaski, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teaching+a+new+method+of+rabbit+intubation.">Teaching a new method of rabbit intubation.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (3), 32-36 (2007).</li><li>Inglis, S., Strunk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+anesthesia.">Rabbit anesthesia.</a> Lab Anim (NY). 38 (3), 84-85 (2009).</li><li>Falcao, S. C., Pereira Junior, J. R., Coelho, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+blind+tracheal+intubation+in+rabbits+(Oryctolagus+cuniculi)+supported+by+previous+maneuver+of+esophageal+cannulization.">Technique of blind tracheal intubation in rabbits (Oryctolagus cuniculi) supported by previous maneuver of esophageal cannulization.</a> Acta Cir Bras. 26 (5), 352-356 (2011).</li><li>Su, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+miniature+lighted+stylet+for+fast+oral+endotracheal+intubation+in+rabbits.">A miniature lighted stylet for fast oral endotracheal intubation in rabbits.</a> Vet J. 195 (2), 254-256 (2013).</li><li>Weinstein, C. H., Fujimoto, J. L., Wishner, R. E., Newton, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+of+six-week-old+New+Zealand+White+rabbits+for+thoracotomy.">Anesthesia of six-week-old New Zealand White rabbits for thoracotomy.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (3), 19-22 (2000).</li><li>Stephens DeValle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+Management+of+Rabbit+Anesthesia+Through+the+Use+of+Nasotracheal+Intubation.">Successful Management of Rabbit Anesthesia Through the Use of Nasotracheal Intubation.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48, 166-170 (2009).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Guidance on the Use of Topical Anesthetics for Naso/Oropharyngeal and Laryngotracheal Procedures. , (2006).</li><li>Cook, R. T., Stene, J. K., Marcolina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Beck+Airway+Airflow+Monitor+and+controllable-tip+endotracheal+tube+in+two+cases+of+nonlaryngoscopic+oral+intubation.">Use of a Beck Airway Airflow Monitor and controllable-tip endotracheal tube in two cases of nonlaryngoscopic oral intubation.</a> Am J Emerg Med. 13 (2), 180-183 (1995).</li><li>Fish, R. E., Brown, M. J., Danneman, P. J., Karas, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. , (2008).</li><li>Gografe, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+management+of+long-term+general+anesthesia+in+rabbits+used+as+an+animal+model+of+human+disease.">Successful management of long-term general anesthesia in rabbits used as an animal model of human disease.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 42 (2), 16-19 (2003).</li><li>Nordin, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trachea+and+cuff-induced+tracheal+injury.+An+experimental+study+on+causative+factors+and+prevention.">The trachea and cuff-induced tracheal injury. An experimental study on causative factors and prevention.</a> Acta Otolaryngol Suppl. 345, 1-71 (1977).</li><li>Phaneuf, L. R., Barker, S., Groleau, M. A., Turner, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+injury+after+endotracheal+intubation+and+anesthesia+in+rabbits.">Tracheal injury after endotracheal intubation and anesthesia in rabbits.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 45 (6), 67-72 (2006).</li><li>Grint, N. J., Sayers, I. R., Cecchi, R., Harley, R., Day, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postanaesthetic+tracheal+strictures+in+three+rabbits.">Postanaesthetic tracheal strictures in three rabbits.</a> Lab Anim. 40 (3), 301-308 (2006).</li><li>Squire, R., Siddiqui, S. Q., DiNunizio, G., Brodsky, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+study+of+the+tracheotomy+and+endotracheal+intubation+on+the+rabbit+tracheobronchial+tree.">Quantitative study of the tracheotomy and endotracheal intubation on the rabbit tracheobronchial tree.</a> Ann Otol Rhinol. , (1990).</li><li>Kumar, R. A., Boyer, M. I., Bowen, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+method+of+anesthesia+for+extensive+surgery+in+small+rabbits.">A reliable method of anesthesia for extensive surgery in small rabbits.</a> Lab Anim Sci. 43 (3), 265-266 (1993).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada kolayca herhangi bir klinik ortamda hakim olamaz entübasyon tekniği bir tavşan ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. Bu teknik daha önce yayımlanmış doğrudan görselleştirme teknikleri10,15,20,25 3,5 manşonsuz mm endotrakeal tüp kullanımı da dahil olmak üzere bazı ek ayrıntılandırmaları ile benzer ve bir Bizim seçilmiş, rehber hangi kesme ve kesme sonunda kalıcı bir kalem ile işaretlenmiş olarak 5 Üriner kateter Fransız. Tavşan Trakea kolayca yaralanma eğilimli ve böylece manşonsuz endotrakeal tüpleri kullanımı genellikle ne zaman tavşan entübasyonda zarar trakeal mukoza manşet baskısı önlemek için önerilir. 26 kolay vokal kıvrımlar ile gırtlak doğrudan görselleştirme sırasında görüntüyü tıkayan olmadan geçmek için küçük bir rehber olduğu gibi 5 Fransız Üriner kateter seçtik. Küçük, bu kateter endotrakeal tüp için bir rehber olarak yerinde kalması için sert. Kateterin distal ucu bifurkasyon ulaşıldığında travma azaltmaya yardımcı olmak için yuvarlanır. Kateter uygulanabilir uzunluğu (aşırı uzun) ve bağlantı bir şırınga için genişler sonunda kaldırmak için böylece kateter proksimal sonunda kesilir. Kesme bitiş kalıcı marker ile bu amaçla değil trakeal mukozası zarar nefes borusu içine eklemek için görsel bir gösterge olarak işaretlenir.
Birincil bu teknik bir laringoskop bıçak kullanılmasını gerektirir çünkü bu çok genç tavşan veya daha küçük ağız büyüklüğü nedeniyle çok küçük doğurmak için mümkün olmayabilir, kısıtlamasıdır. Buna ek olarak, bazı özellikler bu boyutunu laringoskop bıçak hazır olmayabilir. Yazarın Kurumu, bu yöntem Yeni Zelanda beyaz (≥6 hafta) ve yetişkin Hollandalı kuşaklı tavşan için kullanılır, ancak biz genç hayvanlar ya da asgarî doğurmak Bu yöntemde teşebbüs değil. Durumlarda tavşan hasta küçük veya küçük bir Miller bıçak ile laringoskop yoksa, alternatif bir seçenek laringoskop yerine bir el mastar kullanmaktır. 15 , 20 #5 kulak spekulum ile bir enstrüman kullanarak, gırtlak görselleştirildiği, kılavuz kateter doğrudan görselleştirme tarafından yerleştirilir ve spekulum yukarıda özetlenen adımları izleyip devam etmeden önce kaldırılır.
Kateter sonu nefes borusu geçer ve trakeal bifurkasyon dokunur gibi travma veya bronkospazm neden olasılığını önlemek için kılavuz kateter yerleştirildiğinde büyük bir dikkatle kullanılması önemlidir. Bu komplikasyon riski azaltılmış veya çok nazik hareketleri sondayla beslenme, orada en kısa zamanda direnci durdurma ve kateter yer bir kez baş ve boyun hareketi kaçınarak tarafından kaçınılmalıdır. Buna ek olarak, endotrakeal tüp üzerinde kateter ilerleyen olduğunda endotrakeal tüp konektörüne yakalamak kateter için potansiyel. Böylece, kateter bağlayıcısı üzerinden alıcı olmadan slaytlar emin olmak önemlidir; Alternatif olarak, bağlayıcı kaldırıldı olabilir ve endotrakeal güvenliğini sağlama yerine tüp veya anestezik devre ekleme.
Entübasyon herhangi bir yöntemle, komplikasyonlar ve advers etkiler için potansiyel var. Laringoskop ile doğrudan görselleştirme yöntemiyle, laringoskop bıçak veya endotrakeal tüp agresif yerleşimini uygunsuz ekleme gırtlak, dilde neden veya yaralanmalar diş. Hayvan doğru konumlandırma gırtlak görselleştirme sırasında travma minimize ilk önemli adımdır. Sırt omurga ile doğrudan uyum içinde kafa ile düz olmalıdır; hayvan düz değil, yoksa boynunu sola veya sağa Bükülü, bu gırtlak görselleştirme daha zor hale getirecek ve aşırı Travmada laringoskop bıçak ile sonuçlanabilir. Başka bir kritik zaman bu tekniği kullanarak başarı gırtlak doğru ağız çatı takip etmek ve bir kez yumuşak damak görselleştirildiği, bıçak bilek bükme tarafından uygun bir pozisyona vardiya anahtarıdır. Bu baş yerine, optimum ses telleri, bulunduğu pozisyona bıçak ucu taşırken tavşan20,24' te oldukça ventral tutar.
Gırtlak doğrudan görselleştirme-ebilmek var olmak hüner yukarıda anahat hassas teknikleri izlenmezse, gırtlak görselleştirme gerektirmeyen alternatif entübasyon stratejileri kullanımını çekici olabilir. Örneğin, kör tekniği bir does değil istemek mümkün seçeneğini kullanın bir laringoskop16,17,18,19,20olduğunu. Ancak, bu tekniğin kullanımı doğrudan tüp yerleştirilmesi için hava akımı endotrakeal tüp yoluyla algılama yeteneğini dayanır ve hayvanın nefes çok sığ veya tutuklandı iseniz, bu yöntemin kullanılması güvenilir değil. Supraglottic cihazlar da, yana yerleştirme bu cihazların gırtlak görselleştirme gerektirmez ve yerleştirmek genellikle çok kolay kabul edilebilir. Bu cihazlar doğrudan Trakea girmek değildir ancak ve böylece orada potansiyel olmadığı için hava yolu, laryngospasm geliştirirse havalandırmak için yetersizlik, bir mühür sıkı yeterli havalandırma açık-göğüs yordamlar veya acil durum sırasında için eksikliği doğrudan akış resüsitasyon ve mide tympany3,4,8geliştirilmesi. Yeni cihazlar özel olarak tasarlanmış tavşanlar için umut verici bir alternatif sunabilir ama daha fazla çalışmalar bu cihazlar değerlendirmek için ihtiyaç vardır ve trakea girdiği eksikliği ile ilgili endişeleri hala kalır. Endotrakeal tüp yanlışlıkla yemek borusu içine yerleştirilmiş olması durumunda Gastrik tympany da intubated bir hayvan potansiyel bir komplikasyon olabilir; Ancak, doğrudan görselleştirme tekniğin kullanımı doğru kılavuz kateter yerleştirme larinks içine doğrulayarak bu komplikasyon riskini azaltır.
Arytenoid ve/veya trakeal mukoza bir travma bir diğer potansiyel endişe özellikle şişme kullanarak tüpler26,27,28kelepçeli bir endotrakeal tüp taktıktan olduğunda. Tavşan borusunda kolayca, hangi subkutan amfizem, pnömotoraks ve hatta ölüm10,27,28,29gibi komplikasyonlara yol açabilir yaralı olabilir. Biz burada tarif tekniği yerine getirirken, trakeal yaralanma önlemek için rehber kateterin yuvarlak uç borusu eklenir sağlanması ve kılavuz kateter glottis zorlama değil manşonsuz endotrakeal tüpleri kullanımı tarafından özen gösterilmelidir. Buna ek olarak, uygun ölçekli bir endotrakeal tüp yelpazesi kritik öneme sahiptir. Endotrakeal tüp boyutu hayvan boyutunu karşı kabul yanı sıra nefes borusu çapı küçük olduğundan gırtlak girişi açılışına karşılaştırıldığında. Endotrakeal tüp çapı çok büyük bir travma arytenoid mukoza veya kıkırdak neden olabilir. Öte yandan, bir daha küçük endotrakeal tüp kullanımı artan havayolu direnci neden olur ve mukus veya bir ilginçlik nedeniyle tıkanıklık olasılığını artıracaktır. Bu sebeple, solunum izleme entübe tavşanlar çok önemlidir. Nabız oksimetri ek olarak, hava akımı ölçülmesi monitore olmalıdırd capnography ile; bir capnograph yoksa, havayolu monitörler hava akışını algılamak için kullanılan (ama dışarı solunan karbon dioksit ölçümleri sağlamak değil) bir alternatiftir. Buna ek olarak, yardımlı havalandırma sağlanması daha küçük çaplı tüpler kullanılan24,30olduğunda özellikle durumlarda yararlı olabilir.
Bu tekniği kullanarak zaten belirtilen faydaları yanı sıra, yoğun bir klinik ortamda önemli olabilir bir asistan için gerek kalmadan tek bir kişi tarafından gerçekleştirilebilecek bu yöntemin başka bir büyük avantaj sağlıyor. Bu durumda, tüm gerekli malzemeleri toplamak ve onları kolayca ulaşılabilecek entübasyon işlemi sırasında özellikle kılavuz kateter yer ve hareketi baş-meli var olmak kaçmak önemlidir.
Biz burada tarif tekniği tüm tavşan intubations, yılda yaklaşık 200-400 intubations hangi miktarda bizim kurumda veteriner ve araştırma personeli tarafından kullanılır. Bu çok kolay olan yaklaşık 30 dakika sürer bir tipik tavşan anestezi eğitim oturumunda, öğretilir. Biz, öğrencilerle işleminin başarıyla sonraki ek hamleyle tekrarlamak için ilk 3 girişimleri içinde ve genellikle mümkün öğrenme öğrenmek nispeten kolay olduğunu bulduk. Gelecekteki çalışma için zaman yeterlilik ve diğer entübasyon teknikleri ile karşılaştırıldığında bu yöntem için zaman içinde yeterlik korumak yeteneği karşılaştırmak için değerli olacaktır. Bu kör teknikleri16varyasyonları için eğitim gördü iken, entübasyon teknikleri çok çeşitli için öğrenme eğrisi kapsamlı bir değerlendirmesini henüz gerçekleştirilmedi. Başka bir olası geleceği yönünde çalışma özellikle pozitif basınç havalandırma sırasında işlevi ile ilgili yeni species-specific supraglottic hava yolu cihazlar için doğrudan endotrakeal entübasyon karşılaştırma içerebilir.
Sonuç olarak, biz burada tarif tavşan entübasyon için teknik non-invaziv, güvenilir, özel ekipman kullanımı gerektirmez, master kolaydır ve bir yardımcıya gerek kalmadan tek bir kişi tarafından gerçekleştirilen. Bütün hava yolu erişim teknikleri belirli bir düzeyde risk mevcut, ancak doğrudan görselleştirme tekniği kullanarak ve biz komplikasyonları en aza indirmek için yukarıda tarif adımları takip ederek, riskleri kadar yeterli bir hava yolu anestezi sırasında sahip yararları tarafından outweighed.

Tavşan gırtlak endotrakeal entübasyon için görünürlüğünü kısıtlar dar, derin oral kavite var. Onlar da çok büyük bir etli dil ve yanak dişleri var olan, dar ağız boşluğu ile birleştirildiğinde, laringoskop eklerken sorunlara neden ve endotrakeal tüp1eklemek için glottis görselleştirme. Oral kavite ve hava yolu yaralanma entübasyon çalışırken neden önlemek için büyük bakım alınması gerekir. Gırtlak dokular çok kırılgan ve aşırı travma yüzünden entübasyon için tekrarlanan denemelerden entübasyon yapmak önemli iltihap neden olabilir daha zor2.
Bu nedenle, çeşitli alternatif teknikler tarif, en önemlisi supraglottic hava yolu aygıt laryngeal dahil3,4, gırtlak maskesi airway (LMA)4,5, tüp 6 ve species-specific supraglottic hava yolu aygıt7. Gırtlak bir tüp bir tüp hava akımı nefes borusu içine doğrudan iki Balonlu oluşur: tüp ortasında büyük bir balon bir mühür alır üst yutak ve daha küçük bir balon distal uçta yemek borusu giriş3mühürler. LMA bir tüp distal uçta üzerinde glottis4,5,6hava geçirmez bir mühür oluşturmak için şişirilmiş bir eliptik maske ile oluşur. Species-specific aygıt ilk veteriner species-specific supraglottic hava yolu aygıtı, kediler için şu anda kullanılabilir olduğundan ve yutak7' tavşan, bir basınç oluşturmak her tür için anatomik yapıları uyacak şekilde tasarlanmış mühür. Bu cihazlar doğrudan Trakea girmeyin çünkü ancak, mide tympany gibi komplikasyonlar için risk takdim edebilir miyim? Nefes borusu içinde uygun bir mühür eksikliği bir endişe ile ilgili solunum destek, acil durumlar ve göğüs cerrahisi3,8için pozitif basınç havalandırma için bu cihazların kullanımı için yeterliliği sunar. Buna ek olarak, trakea ve direkt entübasyon eksikliği atık anestezik gazlar5personel pozlama neden olabilir.
Doğrudan endotrakeal entübasyon için pek çok yöntem olmuştur9,10,11,12,13,14,15açıklanan. Laringoskop ekleme gerekli16,17,18,19 olmadığına göre oropharyngeal boşluğuna yaralanma olasılığını azaltabilir kör tekniği bir popüler bir yöntemdir , 20. görsel olarak kör bir teknik olarak, bu yöntem endotrakeal tüp ve kılavuz yerleştirme için dikkatli düzenleme ile hava akışı için izleme gerektirir. Araştırma ve klinik veteriner pratikte, yazarın deneyimi, bu yöntemi yaygın olarak kullanılsa bu tekniği olabilir zaman alıcı ve her zaman başarılı değil ve böylece daha öğretmek zordur ve ilave anestezik ajanların dozaj gerektirebilir 9 , 10. buna ek olarak, solunum tüpü uygun yerleştirme Kılavuzu için kullanılır için izleme çünkü bu yöntem sırasında solunum durması daha zor ve daha az güvenilir olacaktır. Başka bir popüler yöntem daha büyük türler ile yapılır gibi Entübe etmeye bir geleneksel laringoskop teknik kullanmaktır. Ancak, endotrakeal tüp ağız içine eklendiğinde ses telleri görünümünü tıkalı o tavşan geleneksel laringoskop teknikte zordur. Bu nedenle, bu yöntemin kullanılması tekrarlanan entübasyon girişimleri, artan anestezik dozaj ve oral kavite ve hava yolu10yaralanmaya neden olabilir.
Entübasyon için daha pahalı ve teknik olarak zor seçenekleri de mevcut. Fiberoptik laringoskop endotrakeal tüpün kolay ekleme laringoskop tüpün içine ekleyerek ve bir ekranda soluk borusu içine ekleme görselleştirme sağlar. Benzer şekilde, endoskoplar gırtlak alan görselleştirmek ve tüp yerleştirilmesi rehberlik için kullanılabilir. Ancak, bu yöntemlerin her ikisi de tipik klinik ayarları9,11,12' hazır olmayabilir pahalı ekipman kullanımı gerektirir. Entübasyon burun boşluğuna üzerinden tarif edilmiştir, alternatif bir yöntem olsa da bu fırsatçı patojenler ciğerlerine özellikle21özel patojen ücretsiz değildir tavşanların burun boşluğundan tanıtmaktan riski doğurur. Son olarak, entübasyon daha invaziv yöntem de, iğneyle Trakea yanı sıra bir kılavuz tel yerleşimini tarafından takip bir iğne cricothyroidotomy kullanımı içine yerleştirilen bir iğne aracılığıyla bir kılavuz kateter retrograd ekleme de dahil olmak üzere yayınlanmış, gemi DİLATÖR ve kılıf uygulayıcıya13,14. İnvaziv teknikler bu yöntemler sonrası yordam ağrı ve enfeksiyon gibi olası komplikasyonlar var. Biz burada, laringoskop ve kılavuz kateter kullanarak tarif teknik yeterlilik için kısa bir süre ile en az terbiye ile öğretti, non-invaziv, bir yardımcıya gerek kalmadan tek bir kişi tarafından gerçekleştirilen ve kullanımını gerektirmez özel ekipman.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketalar 
			Ketamine HCl Inj.</td>
			<td>JHP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 42023-113-10</td>
			<td>35mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anased 
			Xylazine (100mg/ml)</td>
			<td>Lloyd Labs</td>
			<td>NADA #139-236</td>
			<td>5mg/kg IM in epaxial muscles or quadriceps muscle (preferred)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Welch Allyn Laryngoscope Handle</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>60300</td>
			<td>Requires 2 size C alkaline batteries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 0 or 1 Miller Laryngoscope Blade</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>68040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 &#8211; 4.0 mm ID uncuffed endotracheal tube</td>
			<td>Jorgenson</td>
			<td>J0149V</td>
			<td>Suitable for 2.5-5 kg rabbits 
			3.5 mm most commonly used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Sovereign polypropylene catheter, 5 Fr x 22&#8221;</td>
			<td rowspan="2">Medtronic</td>
			<td rowspan="2">8890703310</td>
			<td rowspan="2">Cut to 8-10 inches 
			Mark the cut end with permanent marker to indicate which end not to insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine 2% HCL Inj</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>L-2000-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-Ply Nonsterile, Bulk Packed Versalon Sponges (Gauze pads)</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>KC9024A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape, Twill, Bleached &#189;&#8221; x 72 yds</td>
			<td>Encompass Textiles</td>
			<td>48210-025</td>
			<td>Used for securing endotracheal tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR Lubricating Jelly</td>
			<td>HR Pharmaceuticals</td>
			<td>201</td>
			<td>For lubricating endotracheal tube tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Great Plains Ballistics: BAAM (Beck Airway Airflow Monitor) 22</td>
			<td>BoundTree Medical</td>
			<td>21410</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambu Pediatric Co2 Detector</td>
			<td>AMBU INC</td>
			<td>172713</td>
			<td>For confirmation of successful intubation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

endotracheal intubation of rabbits using a polypropylene guide catheter

Tavşanlarda endotrakeal entübasyon onların sıradışı anatomi nedeniyle zor olabilir. Patent bir hava yolu anestezi sırasında elde hava yolu obstrüksiyonu, önleme mide tympany ve solunum destek sağlamak için önlenmesi için önemlidir. Entübasyon zorluk nedeniyle, gırtlak maskesi airways veya gırtlak tüpler kullanımı gibi alternatif yöntemler incelemiş bulunuyoruz. Ancak, bu yöntemleri doğrudan Access'te Trakea için neden ve böylece bir komplikasyon gelişimi için durumlara neden olabilir. Buna ek olarak, trakea ve direkt entübasyon eksikliği atık anestezik gazlar için personel pozlama neden olabilir. Endotrakeal entübasyon için çok sayıda yöntem, kör yerleşim de dahil olmak üzere tarif edilmistir, fiberoptik laringoskop veya endoskop ve krikoid yerleşimini kullanın. Bu çok sayıda yayın rağmen çoğu hala başarı elde etmek mücadele. Burada biz yeterlilik için kısa bir süre ile en az terbiye öğretilebilir bir entübasyon tekniği ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. Kısaca, enjekte edilebilir anestezi ve yönetim uygun konumlandırma tavşan sonra polipropilen kateter laringoskop kullanarak doğrudan görselleştirme tarafından nefes borusu yerleştirilir. Kateter sonra endotrakeal tüp nefes borusu yönlendirmek için bir kılavuz olarak kullanılır. Bu yöntem pahalı ekipmanlara gerek kalmadan entübasyon için izin verir ve bir yardımcıya gerek kalmadan tek bir kişi tarafından gerçekleştirilen. Sonuç olarak, bu teknik kolaylıkla öğretti ve herhangi çok az maliyetle gerçekleştirilen klinik veya araştırma ayarı.

Yazarların kurum olarak, bu teknik genellikle laboratuvar ve veteriner personel için tavşan işleme ve anestezi teknikleri eğitim toplantıları sırasında öğretilir. Öğretim oturumları özel eğitim hayvanlar ile gerçekleştirilir. Bir kez teknik eğitmen gösterir ve stajyerler teknik eğitmen gözetiminde gerçekleştirin. Stajyerler genellikle 1-3 girişimleri içinde başarı elde etmek. Bir kez bireyler entübasyon ikinci kez gerçekleştirmek için gerekli olan ve genellikle başarıyla tavşan ilk ek denemesinde tekrar entübe edebiliyoruz, başarıyla tavşan tüp sonra. Geribildirim özellikle daha önce alternatif tekniklerle eğitilmiş bireylerden bu eğitimler sırasında sürekli olarak bu tekniği öğrenmek ve başarıyla tamamlamak için kolay Yorumlar içerir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig1.jpg"> 
Şekil 1. Malzemeleri endotrakeal entübasyon için: 1) laringoskop boyutu 0 veya 1 Miller laringoskop bıçak, 2) göbek bandı (veya endotrakeal tüp güvenliğini sağlamak için diğer malzemeleri), %2 lidokain, 4) 5-Fransız 3) 0.25 mL polipropilen kateter kesmek ile 8-10 inç Sigara yuvarlak sonunda hangi taraftan Trakea (ok), 5 eklenmesi gereken değil açıkça belirtmek için kalıcı bir kalem ile işaretli) hava akışı algılama cihazı, 6) 7 tüp distal sonuna kadar uygulanmak üzere steril kayganlaßtırıcı) endotrakeal tüp manşonsuz. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig1large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig2.jpg"> 
Resim 2 : Sternal endotrakeal entübasyon için konumlandırma. Tavşan sternally tablonun sonuna genişletilmiş ön ayakları ile yer alıyor. Hind bacaklarda geri genişletilir ve tavşan kafa omurga ile hizalanır. Sol el baş uzantısı laringoskop ekleme hazırlığı içine yükseltmek için kullanılır. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig3.jpg"> 
Şekil 3 : Laringoskop ekleme. A) laringoskop yumuşak damak görünene kadar ağız çatı Bıçağın ucuyla takip sağ kullanarak sol diastema eklenir. Yumuşak damak görünür olduğunda, laringoskop ileri tavşan geri baş ve boyun ileriye uzanan süre gırtlak görselleştirmek için uçlu. B) gırtlak görselleştirme. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig4.jpg"> 
Şekil 4 : Kılavuz kateter ilerlemesi. A) laringoskop bıçak sol el değiştirme sonra sağ el gırtlak geçmiş delikten rehber kateterin yuvarlak uç ilerler. B) kılavuz kateter ile doğrudan görselleştirme ses telleri geçişi sağlanır. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig5.jpg"> 
Şekil 5 : Trakeal tüp ilerlemesi. Endotrakeal tüp üzerinde kılavuz kateter dişli ve ses telleri direnç kadar gelişmiş. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig6.jpg"> 
Şekil 6 : lidokain korumak. Lidokain (%2, 0.25 mL) endotrakeal tüp açılış içine telkin. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig7.jpg"> 
Şekil 7 : Endotrakeal tüp gelişme. İki dakika sonra korumak lidocaine, endotrakeal tüp hafifçe ses telleri geçmek büküm tarafından ileri düzeydedir. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56369/56369fig8.jpg"> 
Şekil 8 : Hava akımı endotrakeal tüp yoluyla doğrulanması. Bir hava akımı algılama cihazı endotrakeal tüp ile hava akışı doğrulamak için kullanılan veya diş bir ayna da başarılı entübasyon gösteren nefes üzerinden yoğunlaşma algılamak için kullanılabilir. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56369/56369fig8large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter at JoVE.com

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Tavşanlarda endotrakeal entübasyon nedeniyle onların sıradışı anatomi zordur. Burada bir teknik polipropilen kateter bir kılavuz olarak kullanarak trakea ve direkt entübasyon için mevcut. Bu yöntem nispeten ucuz malzeme kullanır, en az terbiye için ve herhangi bir klinik ortamda kolayca gerçekleştirilebilir.

Polipropilen kılavuz kateter kullanarak tavşan endotrakeal entübasyon

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

endotracheal-intubation-rabbits-using-polypropylene-guide

Research

JoVE Journal

Biology

33.3K Görüntüleme.  Mayo Clinic. Tavşanlarda endotrakeal entübasyon nedeniyle onların sıradışı anatomi zordur. Burada bir teknik polipropilen kateter bir kılavuz olarak kullanarak trakea ve direkt entübasyon için mevcut. Bu yöntem nispeten ucuz malzeme kullanır, en az terbiye için ve herhangi bir klinik ortamda kolayca gerçekleştirilebilir.

Video: Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1. The plasmid DNA rearranges to form extrachromosomal concatamers that are stably inherited, though not with the same efficiency as actual chromosomes 2. A gene of interest is co-injected with an obvious phenotypic marker, such as rol-6 or GFP, to allow selection of transgenic animals under a dissecting microscope. The exogenous gene may be expressed from its native promoter for cellular localization studies. Alternatively, the transgene can be driven by a different tissue-specific promoter to assess the role of the gene product in that particular cell or tissue. This technique efficiently drives gene expression in all tissues of C. elegans except for the germline or early embryo 3. Creation of transgenic animals is widely utilized for a range of experimental paradigms. This video demonstrates the microinjection procedure to generate transgenic worms. Furthermore, selection and maintenance of stable transgenic C. elegans lines is described.

This video demonstrates the technique of microinjection into the gonad of C. elegans to create transgenic animals.

Mikroenjeksiyon Kararlı Transgenik C. elegans Üretimi

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Biyoloji

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing and adult tissue. An advance in this concept is Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM), linking gene expression, cell fate, and cell behaviors in vivo, to create fate maps based on genetic lineage.
GIFM exploits X-CreER lines where X is a gene or set of gene regulatory elements that confers spatial expression of a modified bacteriophage protein, Cre recombinase (CreERT). CreERT contains a modified estrogen receptor ligand binding domain which renders CreERT sequestered in the cytoplasm in the absence of the drug tamoxifen. The binding of tamoxifen releases CreERT, which translocates to the nucleus and mediates recombination between DNA sequences flanked by loxP sites. In GIFM, recombination typically occurs between a loxP flanked Stop cassette preceding a reporter gene such as GFP.
Mice are bred to contain either a region- or cell type-specific CreER and a conditional reporter allele. Untreated mice will not have marking because the Stop cassette in the reporter prevents further transcription of the reporter gene. We administer tamoxifen by oral gavage to timed-pregnant females, which provides temporal control of CreERT release and subsequent translocation to the nucleus removing the Stop cassette from the reporter. Following recombination, the reporter allele is constitutively and heritably expressed. This series of events marks cells such that their genetic history is indelibly recorded. The recombined reporter thus serves as a high fidelity genetic lineage tracer that, once on, is uncoupled from the gene expression initially used to drive CreERT.
We apply GIFM in mouse to study normal development and ascertain the contribution of genetic lineages to adult cell types and tissues. We also use GIFM to follow cells on mutant genetic backgrounds to better understand complex phenotypes that mimic salient features of human genetic disorders.
This video article guides researchers through experimental methods to successfully apply GIFM. We demonstrate the method using our well characterized Wnt1-CreERT;mGFP mice by administering tamoxifen at embryonic day (E)8.5 via oral gavage followed by dissection at E12.5 and analysis by epifluorescence stereomicroscopy. We also demonstrate how to micro-dissect fate mapped domains for explant preparation or FACS analysis and dissect adult fate-mapped brains for whole mount fluorescent imaging. Collectively, these procedures allow researchers to address critical questions in developmental biology and disease models.

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM) marks and tracks cells with fine spatial and temporal control in vivo and elucidates how cells from a specific genetic lineage contribute to developing and adult tissues. Demonstrated here are the techniques required to fate map E12.5 mouse embryos for epifluorescent and explant analysis.

Genetik Đndüklenebilir Kader Haritalama Pratik Bir Yaklaşım: Hücreler Mark ve Track Görsel Bir Rehberi In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Rapid PCR Thermocycling using Microscale Thermal Convection

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable concentration level. But the design of conventional PCR thermocycling hardware, predominantly based on massive metal heating blocks whose temperature is regulated by thermoelectric heaters, severely limits the achievable reaction speed1. Considerable electrical power is also required to repeatedly heat and cool the reagent mixture, limiting the ability to deploy these instruments in a portable format.
Thermal convection has emerged as a promising alternative thermocycling approach that has the potential to overcome these limitations2-9. Convective flows are an everyday occurrence in a diverse array of settings ranging from the Earth's atmosphere, oceans, and interior, to decorative and colorful lava lamps. Fluid motion is initiated in the same way in each case: a buoyancy driven instability arises when a confined volume of fluid is subjected to a spatial temperature gradient. These same phenomena offer an attractive way to perform PCR thermocycling. By applying a static temperature gradient across an appropriately designed reactor geometry, a continuous circulatory flow can be established that will repeatedly transport PCR reagents through temperature zones associated with the denaturing, annealing, and extension stages of the reaction (Figure 1). Thermocycling can therefore be actuated in a pseudo-isothermal manner by simply holding two opposing surfaces at fixed temperatures, completely eliminating the need to repeatedly heat and cool the instrument.
One of the main challenges facing design of convective thermocyclers is the need to precisely control the spatial velocity and temperature distributions within the reactor to ensure that the reagents sequentially occupy the correct temperature zones for a sufficient period of time10,11. Here we describe results of our efforts to probe the full 3-D velocity and temperature distributions in microscale convective thermocyclers12. Unexpectedly, we have discovered a subset of complex flow trajectories that are highly favorable for PCR due to a synergistic combination of (1) continuous exchange among flow paths that provides an enhanced opportunity for reagents to sample the full range of optimal temperature profiles, and (2) increased time spent within the extension temperature zone the rate limiting step of PCR. Extremely rapid DNA amplification times (under 10 min) are achievable in reactors designed to generate these flows.

We describe a novel method to perform DNA replication via the polymerase chain reaction (PCR). Thermal convection is harnessed to continuously shuttle reagents between denaturing, annealing, and extension conditions by maintaining opposing surfaces of the reactor at constant temperature. This inherently simple design promises to make rapid PCR more accessible.

Mikro Termal Isı Yayımı kullanarak Rapid PCR Thermocycling

Many molecular biology assays depend in some way on the polymerase chain reaction (PCR) to amplify an initially dilute target DNA sample to a detectable ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this topic and so it presents inherent problems. Here we compile a practical introduction to phylogenetics for nonexperts.&#160;We outline in a step-by-step manner, a pipeline for generating reliable phylogenies from gene sequence datasets. We begin with a user-guide for similarity search tools via online interfaces as well as local executables. Next, we explore programs for generating multiple sequence alignments followed by protocols for using software to determine best-fit models of evolution. We then outline protocols for reconstructing phylogenetic relationships via maximum likelihood and Bayesian criteria&#160;and finally describe tools for visualizing phylogenetic trees. While this is not by any means an exhaustive description of phylogenetic approaches, it does provide the reader with practical starting information on key software applications commonly utilized by phylogeneticists. The vision for this article would be that it could serve as a practical training tool for researchers embarking on phylogenetic studies&#160;and also serve as an educational resource that could be incorporated into a classroom or teaching-lab.

Here we describe a step-by-step pipeline for generating reliable phylogenies from nucleotide or amino acid sequence datasets. This guide aims to serve researchers or students new to phylogenetic analysis.&#160;

Nonexperts için Phylogenetics İçin Pratik Kılavuz

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most of these require access to specialist equipment, and often require a degree of expertise to effectively establish reliable experiments and analyze data. Differential scanning fluorimetry (DSF) is being increasingly used as a robust method for initial screening of proteins for interacting small molecules, either for identifying physiological partners or for hit discovery. This technique has the advantage that it requires only a PCR machine suitable for quantitative PCR, and so suitable instrumentation is available in most institutions; an excellent range of protocols are already available; and there are strong precedents in the literature for multiple uses of the method. Past work has proposed several means of calculating dissociation constants from DSF data, but these are mathematically demanding. Here, we demonstrate a method for estimating dissociation constants from a moderate amount of DSF experimental data. These data can typically be collected and analyzed within a single day. We demonstrate how different models can be used to fit data collected from simple binding events, and where cooperative binding or independent binding sites are present. Finally, we present an example of data analysis in a case where standard models do not apply. These methods are illustrated with data collected on commercially available control proteins, and two proteins from our research program. Overall, our method provides a straightforward way for researchers to rapidly gain further insight into protein-ligand interactions using DSF.

Differential scanning fluorimetry is a widely used method for screening libraries of small molecules for interactions with proteins. Here, we present a straightforward method to extend these analyses to provide an estimate of the dissociation constant between a small molecule and its protein partner.

Diferansiyel Taramalı florimetri Kullanarak Protein-ligand Etkileşimleri belirlenmesi

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins within complex biological samples. Since then, western blotting methodology has become a common component of the molecular biologists experimental repertoire. A cursory search of PubMed using the term &#8220;western blot&#8221; suggests that in excess of two hundred and twenty thousand published manuscripts have made use of this technique by the year 2014. Importantly, the last ten years have seen technical imaging advances coupled with the development of sensitive fluorescent labels which have improved sensitivity and yielded even greater ranges of linear detection. The result is a now truly Quantifiable Fluorescence based Western Blot (QFWB) that allows biologists to carry out comparative expression analysis with greater sensitivity and accuracy than ever before. Many &#8220;optimized&#8221; western blotting methodologies exist and are utilized in different laboratories. These often prove difficult to implement due to the requirement of subtle but undocumented procedural amendments. This protocol provides a comprehensive description of an established and robust QFWB method, complete with troubleshooting strategies.

The advancement of western blotting using fluorescence has allowed detection of subtle changes in protein expression enabling quantitative analyses. Here we describe a robust methodology for detection of a range of proteins across a variety of species and tissue types. A strategy to overcome common technical problems is also provided.

Sorun Giderme Stratejileri Modern Kantitatif Floresan Western Blot A Guide

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Discrimination and Characterization of Heterocellular Populations Using Quantitative Imaging Techniques

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do not allow for accurate interpretation of this interplay. Using a quantitative imaging-based approach, we present a high-content protocol for characterizing the dynamic phenotypic responses (i.e. morphology changes, proliferation, apoptosis) of heterogeneous cell populations to changes in environmental stimuli. We highlight our ability to distinguish between cell types based upon either fluorescence intensity or inherent morphology features depending on the application. This platform allows for a more comprehensive characterization of subpopulation response to perturbation while utilizing shorter time, smaller amounts of reagents, and lower likelihood of error than traditional cell biology assays. However, in some cases, cell populations may be difficult to identify and quantitate based on complex cellular features and will require additional troubleshooting; we highlight some of these circumstances in the protocol. We demonstrate this application using response to drug in a cancer model; however, it can easily be applied more broadly to other physiological processes. This protocol allows one to identify subpopulations within a co-culture system and characterize the particular response of each to external stimuli.

We have developed a novel protocol for studying heterocellular population dynamics in response to perturbations. This manuscript describes an imaging-based platform that produces quantitative datasets for simultaneous characterization of multiple cellular phenotypes of heterocellular populations in a robust manner.

Kantitatif Görüntüleme Teknikleri Kullanılarak Heterosellüler Popülasyonların Ayrımcılaştırılması ve Karakterizasyonu

Cellular processes are complex and result from the interplay between multiple cell types and their environment. Existing cell biology techniques often do ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the laboratory. In ticks, all developmental stages (except egg) are hematophagous, and acquiring a blood-meal when attached to their vertebrate hosts is essential for the successful completion of their life cycle. Here we demonstrate a simple method that uses easily openable capsules for feeding of hard ticks on rabbits. The advantages of the proposed method include its simplicity, short duration and most importantly versatile adjustment to the needs of specific experimental requirements. The method makes possible the use of multiple chambers (of various sizes) on the same animal, which permits feeding of multiple stages or different experimental groups while reducing the overall animal requirement. The non-irritating and easily accessible materials used minimizes discomfort to the animals, which can be easily recovered from an experiment and offered for adoption or reused if the ethical protocol allows it.

We have developed a simple and versatile system to feed hard ticks on laboratory rabbits. Our non-laborious protocol uses easily accessible materials and can be adjusted depending on the requirements of the various experimental settings. The method allows comfortable monitoring and/or sampling of ticks during the entire feeding period.

Zor kene istila laboratuvar tavşan çok yönlü bir Model

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been studied substantially using traditional two-dimensional techniques. Recent advancements in X-ray imaging technology via desktop micro-computed tomography (&#181;CT) and synchrotron radiation micro-computed tomography (SR&#181;CT) have allowed for the acquisition of high-resolution three-dimensional (3D) scans of a larger field of view (FOV) than other 3D imaging techniques (e.g., SEM) providing a more complete picture of microscopic structures within human cortical bone. The specimen should be accurately centered within the FOV, however, to limit the appearance of streak artifacts known to impact data analysis. Previous studies have reported procurement of irregularly shaped rectilinear bone blocks that result in imaging artifacts due to uneven edges or image truncation. We have applied a geological sampling protocol (coring) to procure consistently sized cortical bone core specimens for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This coring method is efficient and minimally destructive to tissue. It creates uniform cylindrical samples that decrease imaging artifacts by nature of being isometric during rotation and providing a uniform path length for X-ray beams throughout scanning. Image processing of X-ray tomographic data of cored and irregularly shaped samples confirms the potential of the technique to improve visualization and analysis of cortical bone microarchitecture. A goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable method for the extraction of cortical bone cores that is adaptable for various types of high-resolution bone imaging experiments. An overarching goal of the work is to create a standardized cortical bone procurement for SR&#181;CT that is affordable, consistent, and straightforward. This procedure may further be adapted by researchers in related fields who commonly evaluate hard composite materials such as in biological anthropology, geosciences, or material sciences.

We employed a geological (coring) sampling protocol to procure cortical bone specimens of uniform size for SR&#181;CT experiments from the anterior aspect of human femora. This method is minimally destructive, efficient, results in cylindrical specimens that minimize imaging artifacts from irregular sample shapes and improves microarchitectural visualization and analysis.

Synchrotron Micro-CT için Yüksek Verimli Kortikal Kemik Örneği Alımı ve Analizi için Kesitleme, Coring ve Görüntü İşleme Kılavuzu

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when acquiring a blood-meal. To locate a host to feed on, mosquitoes rely on a wide range of sensory cues, including visual, mechanical, thermal, and olfactory. The study details a technique, electroantennography (EAG), that allows researchers to assess whether the mosquitoes can detect individual chemicals and blends of chemicals in a concentration-dependent manner. When coupled with gas-chromatography (GC-EAG), this technique allows to expose the antennae to a full headspace/complex mixture and determines which chemicals present in the sample of interest, the mosquito can detect. This is applicable to host body odors as well as plant floral bouquets or other ecologically relevant odors (e.g., oviposition sites odorants). Here, we described a protocol that permits long durations of preparation responsiveness time and is applicable to both female and male mosquitoes from multiple genera, including Aedes, Culex, Anopheles, and Toxorhynchites mosquitoes. As olfaction plays a major part in mosquito-host interactions and mosquito biology in general, EAGs and GC-EAG can reveal compounds of interest for the development of new disease vector control strategies (e.g., baits). Complemented with behavioral assays, the valence (e.g., attractant, repellent) of each chemical can be determined.

The present article details a step-by-step protocol for successful and low noise electroantennograms in several genera of mosquitoes, including both females and males.

Sivrisinek elektroantennografisi için adım adım kılavuz

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...