Dr. W. Mintzer fiberoptik orotrakeal entübasyon gerçekleştirmek için öneri için teşekkür ederim. Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 ve R01HL082487 tarafından desteklenir.

Allerjen: <ol><li> C57BL / 6 fareler, yaş 4-8 hafta, derin genel anestezi elde etmek için 10 dakika boyunca oksijen buhar karışımı% 3.2 izofluran ile tasfiye hava geçirmez bir pleksiglas odasında anestezi. </li><li> Intranazal allerjen sorunları (45μL OVA (22.5 mikrogram) ve 7μL A. oryzae (7 mg), PBS içinde) olmak üzere toplam yedi ardışık uygulamaları, Perşembe ve Pazar günleri, her Salı, yönetilmektedir. </li></ol> Anestezi: <ol start="3"><li> Önce her bir allerjen, ve 7. meydan, fare, bir ışık hariç yuvasına yerleştirme önce 48 mg / kg etomidat (2 mg / ml) intraperitoneal yönetilmektedir. </li><li> Basınç arka pençeleri (5-10 dk) başvurusu üzerine gözlemlenebilir nörolojik yanıt eksikliği tespit edilene kadar Konu priz kalır. </li></ol> Entübasyon: <ol start="5"><li> ~ 37 ° C vücut çekirdek sıcaklığı, hipotermi önlemek için işlem boyunca konuya odaklanmış olmalıdır bakım sağlamak için mesafe muhafaza radyant ısı lambası. Rektal termometre kullanılan ısı kaynağı ne olursa olsun euthermia onaylamak için başlangıçta en az kullanılmalıdır. KRİTİK ADIMLAR deney hayvanları tarafından alınan tüm sıvı ve aletler steril olmalıdır; prosedürleri sıkı aseptik koşullar altında yapılmalıdır. Anestezi altında iken uzun süreli hipotermi hayvanların anormal veri ve / veya ölüme yol açacaktır. Yeterlilik tüm invaziv prosedürler ile canlı hayvanlar üzerinde çalışmaya başlamadan önce kadavra hayvanlar kullanarak geliştirilmelidir. Oftalmik yağ, genel anestezi altında hayvanların korneal abrazyon önlemek için kullanılmalıdır. </li><li> Anestezi fareler yuvadan kaldırılır ve Pletismograf masaya yatış pozisyonu (ventral yüzü yukarı), yerleştirilir, 45 derecelik bir açıyla ayarlanabilir. </li><li> Tablo çevreleyen bir lastik bant yerine oturana kadar bu konuda güvence altına almak için en üst satırı kesici dişler arkasına eklenir. Sağ elinde cımbız ile, kavrama, genişletmek ve sol elinde depressor metal bir yerde güvence önce ağız dil kaldırın, böylece entübasyon için engelsiz bir havayolu sağlar. </li><li> Angiocatheter içeri sokulur ve bir ışık kaynağına bağlı bir 0.8 mm çaplı fiberoptik konu, ucu ötesine 10 mm genişletilmiş. Depressor sol el ile sakinleştirdi olduğu gibi, ses tellerine görüntülenmiştir kadar fiberoptik iplik ışıklı sonunda sağ el ile ağız boşluğu ve yutak yoluyla yönlendirilir. Parçacığı sonra hareketli ses tellerinin ve trakea içine direk görüş altında geçti, kabloları maksimum açıkken meydana zaman aşımına uğradı. </li><li> Kateter ucu trakeanın orta kısmı içinde yatıyor kadar angiocatheter sonra trakea içine fiberoptik konu geçti. 17-22 gram fareler için, bu konnektör ve konu s alt çene ve kafatası aşırı arasındaki görünür kalan 10 mm kateter segmentine karşılık gelir. Kateter geçirilir gerçek miktarı, ilgili boyutu ve genetik arka plan 2-3 kateterize farelerin trakea doğrudan muayene ile tespit edilmelidir. </li><li> Başparmak ile konnektörün hemen aşağıdaki oklüzyon sonlandırmak düzenli derin nefes (göğüs kafesi ve karın ritmik geziler) gözlemleyerek fiberoptik konu kaldırılır ve başarılı entübasyon teyit edilir. Boğulma tepkisi ne olursa olsun, başparmak tıkanıklığı, düzensiz nefes, ya da nefes almada zorluk, diğer belirtileri malpositioning ve genellikle özofagus entübasyon işaret angiocatheter göstergesidir. KRİTİK ADIM Arıza hızlı bir özofageal entübasyon tersine çevirmek için öldürücü olabilir. Özofageal entübasyon şüpheleniliyorsa, kateterin kolayca çıkartılabilir olmalıdır ve hayvanın normal solunum paterni devam ediyor sonra reinserted. Etomidat, mevcut tüm kemirgen anesteziklerin olarak tercih edilen anestezi, bu ajan en kardiyovasküler toksisite (hipotansiyon, aritmi, kardiyak arrest) kışkırtır. </li><li> Alt Pletismograf tablo çalışma tezgahı ve hava vantilatör port karşı karşıya kadar konu 180 ° dönüş paralel kadar. Ventilatöre bağlanmadan önce yan hayvan açın. </li><li> Torakoabdominal gezi hava geçirmez bir bağlantı sağlamak ve ventilatör (150 solunum / dakika, 9 ml / g tidal volüm,% 100 oksijen işleyişi) aktive sonra, ventilatör ile ayak görüldüğü zaman, başarılı entübasyon daha da teyit edilmiştir. </li></ol> İntravenöz hattı: <ol start="13"><li> A 10 mm konik açısı içine bakacak şekilde, 27ga iğne şırınga konektöründen ücretsiz eritme, ve steril forseps ve hemostat kullanarak orta noktada iğne 90 ° bükme yoluyla kaldırılır. Olmayan Eğimli sonunda IV enjeksiyon portu önde gelen PI10 boru bağlı. </li><li> Potansiyel önlemek içinölümcül hava embolizasyon, tüp ve iğne 37 ile tasfiye ° C, 1 ml şırınga ile% 0.9 NaCl. 15ml bir santrifüj tüpüne kap içine açılan bir delikten itti 27ga iğne, enjeksiyon portu oluşur. Kap, böylece hava iğne sürüklenmemiş ve damar içine enjekte edeceğini olasılığını azaltarak, iğne ucu sürekli batık olduğunu tuzlu gibi ile doludur. </li><li> Isı lambası altında kalan fare ile, iğne kaudal aşırı kuyruk paralel ve lateral ven üzerinden uyumlu hale gelmiştir. Damar s uzunluğu boyunca cranially yönettiği ve bend subkutan itti iğne, cilt altında biraz çalıştırmak. Başarılı IV yerleşimi şırınga pistonu hafif çekme ile IV tüp içine kan backflow gözlemleyerek teyit edilir. Ayrıca, kuyruk ven içine 50-100 ul salin enjeksiyonu üzerine IV hattı üzerinden akışı engelsiz olmalıdır. Ara sıra kuyruk damarları stably kanüle olamaz. Bu gibi durumlarda, fare, diğer tarafında ve IV genellikle zorlanmadan erişilebilir diğer kuyruk 180 derece dönebilir. </li><li> Kurulumdan ısı lambası çıkardıktan sonra, konu daha sonra 4 kelepçeler uygulaması ile hava geçirmez olarak güvenli, Pletismograf içine alınır. KRİTİK ADIM ısı lambası kalmasına izin Pletismograf odasında hava ısı ve potansiyel olarak sağlanmalıdır iv iğneler ve çözümler R RS Sterilite sonraki ölçümler değiştirmez. Iğne Sterilizasyon iv yerleştirme öncesinde steril serum fizyolojik ile durulama ve kızarma% 70 etanol ile çeker ve kızarma tarafından gerçekleştirilir. Ayrıca, kuyruk% 70 etanol veya iv ekleme önce izopropil alkol ile temizlenmesi gerekir. </li></ol> Havayolu direnci ölçümleri: <ol start="17"><li> Tepe direnci katsayısı sürekli kantitatif tarafından belirlenir DPT / V (DPT trakeal basınç değişim ve V hava akışı) eşit akciğer hacmi puan (% 70 tidal hacim). DPT, trakeal angiocatheter bağlı bir basınç dönüştürücü kullanarak belirlenir. V belirlemek için, Pletismograf basınç değişimleri, fizyolojik aralıkları üzerinde çalışılan hacim değişiklikleri kalibre edilir. Preamp modül tarafından hesaplanan zamanla Pletismograf hacmi, diferansiyel, V. istikrarlı bir temel oluşturma sonra R RS (&lt;3 dakika içinde% 5 varyasyon), ardışık beş artan dozlarda (hacim = 2 g / ml vücut ağırlığı) asetilkolin klorür (0.058, 0.18, 0.59, 1.58 ve 5.8 mg / kg vücut ağırlığı, pH 7.4,% 0.9 tuzlu su, buz ve her enjeksiyon öncesinde el ısındı idame) konsantrasyonları ile bir saniye içinde, iv enjekte edilir başlangıca R RS döndükten sonra uygulanan başlangıç ​​direnci üç katına (yaklaşık 12 cm H 2 O x ml -1 x sn, yani yaklaşık 4 cm tipik temel üstünde hava yolu direnci% 200 oranında artış kadar, sonraki her bir doz H 2 O x ml -1 x sn) elde edilir. Bazal değerler (PC 200 adlandırdığı) R RS% 200 artışa neden vücut ağırlığının mg / g, provokatif konsantrasyon Ach Ach-R RS doz-yanıt eğrilerinin matematiksel enterpolasyon ile hesaplanır. </li><li> PC 200 değerleri, serbest elemanları ulaştı ve Pletismograf sökmeye edilmiştir. Maksimum 5 Ach artan dozlarda verilir. Ach konsantrasyon aralığı yukarıda verilen en naif fare suşları için PC 200 değerleri elde etmek için uygundur. KRİTİK ADIM yaklaşık 4 cm H 2 O x ml -1 x saniye 30 saniye boyunca direnç monitör temel üzerine kurulmuştur, normal serum fizyolojik 60 mcL iv anestezi uygun düzlemde elde edildiğini teyit etmek için enjekte edilebilir. Tam anestezi ile, direnç önemli bir değişiklik olacak, bacaklarda ya da kuyruk direnci ya da hareket bir artış fiziksel sıkıntının bir işareti temsil eden ve ek anestezik ihtiyacı gösterir. </li><li> Kuyruk ven IV çıkarın ve sonra trakeal kanül yerinde tutarak solunum yolu bakımı, ventilatör hayvan kesmek. Ara sıra hayvanların hemen spontan solunum devam etmek için başarısız. Bu gibi durumlarda, solunum, göğüs kafesi hafifçe masaj yaparak teşvik edilebilir. KRİTİK ADIM spontan solunum kurtarma odasına transfer etmek için önce kurulmuş olması gerekir, aksi takdirde ölüm meydana gelir. </li><li> Spontan solunumun yeniden başlatılması üzerine, fareler 37% 100 O 2 ve bakımı ile temizlenir bir oda, bir yerde trakeal kanül ile aktarılır ° C bir ısı lambası kullanarak. 15-20 dakika içinde, fare, güçlü bir nefes ve trakeal kateter kaldırılır ve hayvanlar olabilir ve bu noktada, ekstremitelerde hareket etmeye başlayanafely düzenli kafeslerine aktarılır. KRİTİK ADIM havayolu kolayca asetilkolinin indüklediği hiper salivasyon nedeniyle bilinçsiz bir fare tıkalı ve havayolu fizyolojik ölçümler aşağıdaki anestezi farelerde boğulmaya bağlı ölüm için önemli bir nedenidir. Bu nedenle, trakeal kanül uyandırılamadığı ve hiper-salivaton sona kadar çıkarılmamalıdır kadar, bronkoalveoler lavaj uygulanan farelerde bile yerinde kalmalıdır. </li></ol> Bronkoalveoler lavaj: <ol start="21"><li> Bronkoalveoler lavaj sıvı toplanması, farelerin yeterli öğürme refleksi (kurtarma odasında yerleştirildikten sonra ~ 20 dk) kurtarabilirsiniz zaman güvenlidir. Öğürme refleksi angiocatheter hafifçe içe ve dışa doğru kayar tarafından değerlendirilir; açık öksürük ya da mücadele öğürme refleksi geri olduğunu göstermektedir. Izin KRİTİK ADIM bir iyileşme süresi çok uzun süreli bireysel farelerden alınan BAL dönüş verimliliği büyük ölçüde azalacak; bu nedenle, önerilen 20 dakikalık dinlenme dönemi takip öğürme refleksi, her birkaç dakikada izlenebilir olmalıdır . Eğer fareler kısmi uyanışı nedeniyle lavaj işlemi tolere edemeyen,% 3.2 izofluran buhar anestezi kullanılabilir. </li><li> ~ 30 ° sol lob akciğer yönlendirilmiş sürekli bir bend ile metalik entübasyon kılavuz tel (0,5 mm OD), angiocatheter eklenir. Kılavuz tel ve kateter angiocatheter (hub hariç) sadece 1mm tarafından ön dişlerin ötesine uzanan öyle ki, akciğer sol lob birlikte gelişmiş olan. KRİTİK ADIM Arıza sol akciğer izole etmek için büyük ölçüde hayvan ölüm olasılığını artırırken, verim düşürecektir . Bakım, kılavuz telin ucu açık angiocatheter sonuna kadar geçmez emin olmak için alınmalıdır. Çıkıntılı metal ucu ile angiocathether ilerlemek bir trakeal laserasyon ve trakea rüptürü nedeniyle ölüme yol açabilir. </li><li> Angiocatheter yerinde tutmak, kılavuz tel kaldırılır ve 300 mcL PBS (pH 7.4, steril) 1 ml şırınga ile sol akciğer temizlendi. Hemen negatif basınç oluşturmak için şırınga pistonu çizerken, angiocatheter yoğun akciğer masaj yaparken kaldırıldı (3 s) yavaş yavaş, sonra. 100-200 mcL BAL dönüş bekleniyor. </li><li> 37 ° C,% 100 O 2 odasının sürekli toraks masaj yaparken. Lavaj farelerin hemen geri Sol tarafına yerleştirin fareler tamamen düzelene kadar (~ 20 dk). Hayvanlar kafesler içine yerleştirilir. </li></ol> ZAMANLAMA: Fare başına, bütün prosedürü yerine getirmek için 1 saat daha artık almalıdır: 3-4, 5-10 dakika Adım; Adımlar 5-21, 10 dk; Adım 22, 20-30 dakika; Adımlar 23-24. 10 dk. Artmış yeterlilik ile protokol şaşırtıcı konuları, 3 fareler / saat işlenebilir. Temsilcisi Sonuçlar: PC 200 değerleri tedbirler ile belirlenen farelerde Havayolu hiperreaktivite, aktivasyonu ve sitokin IL-135-7 T hücreleri ve sekresyon akciğerlere işe bir sonucudur. Böylece, havayolu hiperreaktivite allerjen ile havayolu meydan kaçınılmaz bir sonucu değildir, ama çok sağlam bir T hücre bağışıklık bölmesi ve T hücre yanıtları için tekrarlanan alerjene maruz ortamında geliştirmek için gereken süreyi bağlıdır. Şekil. 2a, havayolu hiperreaktivite, altıncı meydan sonra başka önemli bir artış ile 5 allerjen zorlukları sonra geliştirilen temel değerleri, önemli ölçüde kıyasla daha düşük PC 200 değerler olarak tanımlanır. Nedenlerden dolayı tam olarak anlaşılmış değildir ilk allerjen (Şekil 2a), hava yolu reaktivitesi sonra (PC 200 değerleri artan) azalmıştır. Benzer eğilimler aynı fareler (Şekil 2b) Ach doz cevap eğrileri karşılaştırılarak açıktır. Ancak, tam havayolu hiperreaktivite beşinci allerjen sonra aniden gelişir burada görülür, öyle ki fareler 30 kat daha fazla olmak, dördüncü ve altıncı sorunları arasında Ach daha duyarlı. Birlikte, AHR en güvenilir ölçümler altı allerjen zorlukları (12 gün) sonra elde edilen bu bulgular gösterir; önceki timepoints ölçümleri, son derece değişken veri verim muhtemeldir. Araç intranazal (tuzlu su) ile tekrar tekrar meydan Fare havayolu hiperreaktivite geliştirmek ve verilen Ach tüm dozlarda, R RS ölçümleri önemli ölçüde (Şekil 3 ve veri gösterilmemiştir) bazal değerlerinden farklılık gösterebilir yok. Önce sağlam AHR ortaya çıkması, allerjen ile indüklenen hava yolu baskın hücre tipi nötrofil (Şekil 4) idi. AHR eğilim benzer şekilde, ancak, eozinofili yavaş yavaş tekrar tekrar allerjen ve af BAL sıvısında eozinofil sayısal baskın hücre tipi oldu güçlendirdineutrophis sayıları belirgin bir düşüş (Şekil 4) ile tesadüf ter altıncı zorluk,. Makrofajlar başlangıçta ilk birkaç allerjen zorluklarla sayısı artmış ve bundan sonra bolluk içinde dalgalanmıştır. Lenfosit bolluk ne olursa olsun, allerjen zorlukların sayısını önemli ölçüde değiştirebilir ve paradoksal model birincil önem verilen, genellikle BAL sıvısında az sayıda hücre vermedi. Ne allerjen ne BAL örnekleme alan farelerde Havayolu direnci ölçümleri deney 17 gün içinde değişiklik yoktu. Havayolu fizyolojisi ölçümler veya allerjen yokluğunda tekrar BAL sıvısı örneklemesi yapılan ve 5 gün (veriler gösterilmemiştir) sonra da devam etmedi solunum yollarında sadece gelişmiş bir nötrofil ve makrofaj işe gösterdi. Bu bulgular, allerjen meydan farelerde gözlenen belirgin nötrofili büyük ölçüde usul ve antijen değil sonucu olduğunu göstermektedir. Kontrol, PBS-meydan fareler, hava yolu direnci ölçümleri de zaman içinde önemli ölçüde değişiklik yoktu. Gelişmiş makrofaj ve nötrofil değil, BAL sıvısında eozinofil, istihdam da bu farelerin, sadece tekrarlanan BAL sıvısı örneklemesi (Şekil 4 b, d) alan farelerde gözlenen bu değişikliklerin benzer görüldü. Hep birlikte, bu veriler, alerjik (eozinofilik) hava yolu inflamasyonu ve AHR indüksiyon, havayolu farklı manipülasyonlar allerjen önemi alt çizgi değil. Burada kullanılan proteinaz benzer intranazal allerjenler kullanarak benzer sonuçlar beklenebilir. Ancak, birçok araştırmacılar alerjik akciğer hastalığı neden ovalbumin kullanın. Ovalbumin intradermal veya intraperitoneal emişli (1-2 hafta) uygun bir süre havayolu hiperreaktivite de dahil olmak üzere, bir alüminyum tuzunun, sağlam bir astım fenotipi çöktürülmüş sonra, çözünür ovalbumin ile tek bir intranazal meydan sonra 24 saat içinde beklenebilir. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 kemirgen Pletismograf Fotografik gösterimi, havayolu fizyolojisi ölçüm kayıt hemen önce. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. Hava yolu direnci ölçümleri. A) istatistiksel amaçlar için, antilog PC 200 değerleri rapor edilmiştir. Ilk meydan okuma ve sonraki düşüş daha fazla zorluklar sonra antilog PC 200 yılında büyük bir artış dikkat edin . B) Solunum sistemi direnci (RRS):, altıncı ve yedinci zorlukları sonra Ach-RRS doz-yanıt eğrisinin dikliği unutmayın. Hata çubukları SEM temsil eder. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Temsilcisi gerçek zamanlı solunum sistemi direnci (R SC) Ach ardışık IV dozları alan fare meydan naif bir (A) ve (B) 6X allerjen iz. Doz değerleri mg / kg birimlerinde sunulmaktadır. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4 7 ardışık intranazal zorlukları ile tedavi edilen farelerde sol akciğerlerden edilen bronkoalveoler lavaj örneklerinde Diferansiyel bağışıklık hücre sayımı . Allerjen (A) veya PBS (B) ile tedavi edilen farelerde bağışıklık hücrelerinin yüzde (%) bolluğu. Allerjen (C) veya PBS (D) ile tedavi edilen farelerden alınan bağışıklık hücrelerinin toplam sayısı. Sem - Değerler ortalama + / olarak gösterilir.

<ol>
	<li>Hamelmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+airway+responsiveness+in+allergic+mice+using+barometric+plethysmography.">Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).</li><li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice.">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J. Appl. Physiol. 97, 286-292 (2004).</li><li>Bates, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+and+misuse+of+penh+in+animal+models+of+lung+disease.">The use and misuse of penh in animal models of lung disease.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 373-374 (2004).</li><li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice.">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J. Appl. Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li><li>Grunig, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+IL-13+independently+of+IL-4+in+experimental+asthma.">Requirement for IL-13 independently of IL-4 in experimental asthma.</a> Science. 282, 2261-2263 (1998).</li><li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirements+for+allergen-induced+airway+hyperreactivity+in+T+and+B+cell-deficient+mice.">Requirements for allergen-induced airway hyperreactivity in T and B cell-deficient mice.</a> Mol. Med. 4, 344-355 (1998).</li><li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+4,+but+not+interleukin+5+or+eosinophils,+is+required+in+a+murine+model+of+acute+airway+hyperreactivity.">Interleukin 4, but not interleukin 5 or eosinophils, is required in a murine model of acute airway hyperreactivity.</a> J. Exp. Med. 183, 109-117 (1996).</li><li>Amdur, M. O., Mead, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+respiration+in+unanesthetized+guinea+pigs.">Mechanics of respiration in unanesthetized guinea pigs.</a> Am J Physiol. 192, 364-368 (1958).</li></ol>

Çalışmada, astım ve diğer çeşitli hava yolu obstrüktif hastalıkları, biyomedikal araştırmanın aktif ve genişleyen bir alan oluşturmaktadır. Astım ile ilgili deneysel araştırmaların önemli bir bileşeni, değişen koşullar altında havayolu boyutu değişiklikleri ölçmek için kapasite. Provokatif meydan okuma, kurallı bir özelliği, astım ve ilgili akciğer hastalıkları ve solunum yolu olarak adlandırılan hava yolu aşırı duyarlılığının bir özellik yanıt aşırı hava yolu daralma...

Havayolu fizyolojisi ölçüm yazılımı (Rescomp) özel hazırlanmış (415-519-4371 Millennium Premier Grup) oldu. Veriler, Pentium III işlemci (Intel, Inc. Santa Clara, CA) ve dijital sinyal dönüştürücü 17-pin analog (National Instruments, # PC-LPM16) ile donatılmış, Windows XP çalıştıran bir PC iş istasyonu kullanılarak analiz edildi. Buxco, Inc. Wilmington, NC, küçük bir hayvan havayolu fizyolojisi iş istasyonu özel (Millenium Premier Group) piyasada bulunan basınç dönüştürücüleri (parça no TRD5700 ve TRD4510), preamp modülleri (# MAX2270), kasa (part # MAX1320 kullanarak toplandı ) ve özelleştirilmiş bir küçük hayvan Pletismograf. 0.5mm dış çaplı ışık kaynağına bağlı fiber optik iplik, (Cole Palmer Aydınlatıcı, 41.722 serisi) Vantilatör (Harvard Apparatus Mouse Vantilatör, # 687) 10 mm, 27ga iğne (BD Biosciences, kedi yok. 309.602) Isı lambası 1 ml şırınga (BD Biosciences, kedi yok. 305.109) 4 kelepçeleri (Pony 3200 bahar kelepçe) Entübasyon kılavuz için 0,5 mm dış tel Hemasitometre SuperFrost / plus mikroskop lamı (Fisher kedi yok. 12-550-15) Shandon Filtre Kartlar (Termo kedi yok. 5.991.022) Diferansiyel hücre slayt leke (Fisher kedi yok. 122.911) Işık mikroskobu (Leica) Sitospin 3 (Shandon) 20 GA, 1.25 inç ProtectIV intravenöz kateterler (Smith Tıp) 0,5 mm polimer fiber optik (Edmund Optik # NT02-532).

a reversible, non-invasive method for airway resistance measurements and bronchoalveolar lavage fluid sampling in mice

Havayolu hiperreaktivite (AHR) ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı örneklemesi, deneysel astım modelleri için gerekli olan, ama aynı hayvan gibi ölçümler elde etmek için tekrarlanır prosedürleri genellikle mümkün değildir. Burada, farelerde AHR ve bronkoalveoler lavaj sıvısı örnekleri tekrarlanan ölçümler elde etmek için protokoller göstermektedir. Fareler tedavi güçlü bir allerjen veya plasebo ile 14 gün boyunca intranazal yedi kez meydan vardı. Ilk meydan okuma öncesinde ve her intranazal meydan takip eden 24 saat içinde, aynı hayvanlar sözlü entübe ve mekanik ventilasyon, anesteziye edildi. Sahte ve alerjene meydan hayvanlar arasında asetilkolin (Ach) klorür intravenöz doz artırarak yol açtığı solunum sistemi direnci (RRS) doz cevap eğrileri karşılaştırılarak değerlendirilir AHR, tespit edilmiştir. Daha sonra, böylece hava yolu hücreleri bu diferansiyel numaralandırma yapılabilir ve aynı entübasyon ile, sol akciğere lavaj oldu. Bu çalışmalar AHR ve BAL sıvı toplanması tekrarlanan ölçümler aynı hayvanların mümkün olduğunu ortaya koyuyor ve bu maksimum hava yolu aşırı duyarlılığı ve havayolu eozinofili allerjen başlatılması 7-10 gün içinde elde edilir. Bu roman tekniği uzunlamasına deney için gerekli olan farelerin sayısını önemli ölçüde azaltır ve çeşitli kemirgen türleri, hastalık modelleri ve havayolu fizyolojisi aletleri için geçerli.

Watch this Scientific Journal Video about A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice at JoVE.com

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

a-reversible-non-invasive-method-for-airway-resistance-measurements

Research

JoVE Journal

Biology

22.3K Görüntüleme.  Baylor College of Medicine (BCM). Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Video: A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: Doğru Genotiplendirme için Basit Bir Yöntem

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Biyoloji

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative medicine. A non-invasive method to monitor the transplanted stem cells repeatedly in vivo would greatly enhance our ability to understand the mechanisms that control stem cell death and identify trophic factors and signaling pathways that improve stem cell engraftment. MR imaging has been proven to be an effective tool for the in vivo depiction of stem cells with near microscopic anatomical resolution. In order to detect stem cells with MR, the cells have to be labeled with cell specific MR contrast agents. For this purpose, iron oxide nanoparticles, such as superparamagnetic iron oxide particles (SPIO), are applied, because of their high sensitivity for cell detection and their excellent biocompatibility. SPIO particles are composed of an iron oxide core and a dextran, carboxydextran or starch coat, and function by creating local field inhomogeneities, that cause a decreased signal on T2-weighted MR images. This presentation will demonstrate techniques for labeling of stem cells with clinically applicable MR contrast agents for subsequent non-invasive in vivo tracking of the labeled cells with MR imaging.

For the evaluation of new stem cell therapies it is important to non-invasively track the injected cells in vivo. This video will show you how to label human mesenchymal and embryonic stem cells with iron oxide based contrast agents in vivo for subsequent MR imaging in vivo.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo labeling of stem cells with a fluorescent dye, subsequent intravenous injection of the labeled cells and visualization of their accumulation in specific target organs or pathologies. The presented technique demonstrates how we label human mesenchymal stem cells (hMSC) by simple incubation with the lipophilic fluorescent dye DiD (C67H103CIN2O3S) and how we label human embryonic stem cells (hESC) with the FDA approved fluorescent dye Indocyanine Green (ICG). The uptake mechanism is via adherence and diffusion of the lypophilic dye across the phospholipid cell membrane bilayer. The labeling efficiency is usually improved if the cells are incubated with the dye in serum-free media as opposed to incubation in serum-containing media. Furthermore, the addition of the transfection agent Protamine Sulfate significantly improves contrast agent uptake.

This video shows techniques for labeling of human embryonic stem cells and mesenchymal stem cells with fluorescent dyes. This technique can be used for an in vivo tracking of transplanted stem cells with optical imaging and for histopathological correlations with fluorescence microscopy.

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

Deniz suyu Örnekleme ve Tahsilat

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not regenerate very efficiently in vivo; and as a result, osteoarthritis leads to irreversible cartilage loss and is accompanied by chronic pain and immobility 1,2. Cartilage tissue engineering offers promising potential to regenerate and restore tissue function. This technology typically involves seeding chondrocytes into natural or synthetic scaffolds and culturing the resulting 3D construct in a balanced medium over a period of time with a goal of engineering a biochemically and biomechanically mature tissue that can be transplanted into a defect site in vivo 3-6. Achieving an optimal condition for chondrocyte growth and matrix deposition is essential for the success of cartilage tissue engineering. 
 In the native joint cavity, cartilage at the articular surface of the bone is bathed in synovial fluid. This clear and viscous fluid provides nutrients to the avascular articular cartilage and contains growth factors, cytokines and enzymes that are important for chondrocyte metabolism 7,8. Furthermore, synovial fluid facilitates low-friction movement between cartilaginous surfaces mainly through secreting two key components, hyaluronan and lubricin 9 10. In contrast, tissue engineered cartilage is most often cultured in artificial media. While these media are likely able to provide more defined conditions for studying chondrocyte metabolism, synovial fluid most accurately reflects the natural environment of which articular chondrocytes reside in.
 Indeed, synovial fluid has the advantage of being easy to obtain and store, and can often be regularly replenished by the body. Several groups have supplemented the culture medium with synovial fluid in growing human, bovine, rabbit and dog chondrocytes, but mostly used only low levels of synovial fluid (below 20&#37;) 11-25. While chicken, horse and human chondrocytes have been cultured in the medium with higher percentage of synovial fluid, these culture systems were two-dimensional 26-28. Here we present our method of culturing human articular chondrocytes in a 3D system with a high percentage of synovial fluid (up to 100&#37;) over a period of 21 days. In doing so, we overcame a major hurdle presented by the high viscosity of the synovial fluid. This system provides the possibility of studying human chondrocytes in synovial fluid in a 3D setting, which can be further combined with two other important factors (oxygen tension and mechanical loading) 29,30 that constitute the natural environment for cartilage to mimic the natural milieu for cartilage growth. Furthermore, This system may also be used for assaying synovial fluid activity on chondrocytes and provide a platform for developing cartilage regeneration technologies and therapeutic options for arthritis.

A 3D system of culturing human articular chondrocytes in high levels of synovial fluid is described. Synovial fluid reflects the most natural microenvironment for articular cartilage, and can be easily obtained and stored. This system thus can be used for studying cartilage regeneration and for screening therapeutics for treating arthritis.

Sinovya Sıvısı Kültürleme İnsan Eklem kondrosit 3D Sistemi

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the production of new mouse models of disease and investigations into the hormonal regulation of tissue degeneration (or regeneration) following pathological challenge. The murine reproductive (or estrous) cycle is divided into 4 stages: proestrus, estrus, metestrus, and diestrus. Defined fluctuations in circulating levels of the ovarian steroids 17-&beta;-estradiol and progesterone, the gonadotropins luteinizing and follicle stimulating hormones, and the luteotropic hormone prolactin signal transition through these reproductive stages. Changes in cell typology within the murine vaginal canal reflect these underlying endocrine events. Daily assessment of the relative ratio of nucleated epithelial cells, cornified squamous epithelial cells, and leukocytes present in vaginal smears can be used to identify murine estrous stages. The degree of invasiveness, however, employed in collecting these samples can alter reproductive status and elicit an inflammatory response that can confound cytological assessment of smears. Here, we describe a simple, non-invasive protocol that can be used to determine the stage of the estrous cycle of a female mouse without altering her reproductive cycle. We detail how to differentiate between the four stages of the estrous cycle by collection and analysis of predominant cell typology in vaginal smears and we show how these changes can be interpreted with respect to endocrine status.

Here, we describe how to identify the stage of the murine reproductive (proestrus, estrus, metestrus, or diestrus) by simple, non-invasive collection and cytological assessment of vaginal smear samples. We further describe how vaginal cytology reflects circulating hormonal levels underlying transition through the murine reproductive cycle.

Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary clearance function has been established. Freshly harvested mouse trachea is cut longitudinally through the trachealis muscle and mounted in a shallow walled chamber on a glass-bottomed dish. The trachea sample is positioned along its long axis to take advantage of the trachealis muscle to curl longitudinally. This allows imaging of ciliary motion in the profile view along the entire tracheal length. Videos at 200 frames/sec are obtained using differential interference contrast microscopy and a high speed digital camera to allow quantitative analysis of cilia beat frequency and ciliary waveform. With the addition of fluorescent beads during imaging, cilia generated fluid flow also can be determined. The protocol time spans approximately 30 min, with 5 min for chamber preparation, 5-10 min for sample mounting, and 10-15 min for videomicroscopy.

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

An easy and reliable technique for visualizing and quantifying airway cilia motility and cilia generated flow using mouse trachea is described. This technique can be modified to determine how a wide range of factors influence cilia motility, including pharmacological agents, genetic factors, environmental exposures, and/or mechanical factors such as mucus load.

Kemirgen Havayolu Epiteli içinde Cilia Motilite Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için ex vivo Yöntemi

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of transporters. The phosphorylation and nucleotide dependent chloride channel activity of CFTR has been frequently studied in whole cell systems and as single channels in excised membrane patches. Many Cystic Fibrosis-causing mutations have been shown to alter this activity. While a small number of purification protocols have been published, a fast reconstitution method that retains channel activity and a suitable method for studying population channel activity in a purified system have been lacking. Here rapid methods are described for purification and functional reconstitution of the full-length CFTR protein into proteoliposomes of defined lipid composition that retains activity as a regulated halide channel. This reconstitution method together with a novel flux-based assay of channel activity is a suitable system for studying the population channel properties of wild type CFTR and the disease-causing mutants F508del- and G551D-CFTR. Specifically, the method has utility in studying the direct effects of phosphorylation, nucleotides and small molecules such as potentiators and inhibitors on CFTR channel activity. The methods are also amenable to the study of other membrane channels/transporters for anionic substrates.

Described here is a rapid and effective procedure for functional reconstitution of purified wild-type and mutant CFTR protein that preserves activity for this chloride channel, which is defective in Cystic Fibrosis. Iodide efflux from reconstituted proteoliposomes mediated by CFTR allows studies of channel activity and the effects of small molecules.

Saf Yabanitip ve Mutant CFTR Protein Fonksiyonel Sulandırma ve Kanal Aktivite Ölçümleri

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

Fekal Glukokortikoid Analizi: Tek tırnaklılarda in Non-invaziv Adrenal İzleme

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

The Assembly and Application of 'Shear Rings': A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as well as pathological changes in endothelial phenotype and gene expression. In particular, maladaptive effects of periodic, unidirectional flow induced shear stress can trigger a variety of effects on several vascular cell types, particularly endothelial cells. While by now endothelial cells from diverse anatomic origins have been cultured, in-depth analyses of their responses to fluid shear have been hampered by the relative complexity of shear models (e.g., parallel plate flow chamber, cone and plate flow model). While these all represent excellent approaches, such models are technically complicated and suffer from drawbacks including relatively lengthy and complex setup time, low surface areas, requirements for pumps and pressurization often requiring sealants and gaskets, creating challenges to both maintenance of sterility and an inability to run multiple experiments. However, if higher throughput models of flow and shear were available, greater progress on vascular endothelial shear responses, particularly periodic shear research at the molecular level, might be more rapidly advanced. Here, we describe the construction and use of shear rings: a novel, simple-to-assemble, and inexpensive tissue culture model with a relatively large surface area that easily allows for a high number of experimental replicates in unidirectional, periodic shear stress studies on endothelial cells.

The Assembly and Application of &#039;Shear Rings&#039;: A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

Different levels and patterns of fluid shear are known to modulate endothelial gene expression, phenotype and susceptibility to disease. We discuss the assembly and use of 'shear rings': a model that produces unidirectional, periodic shear stress patterns. Shear rings are simple to assemble, economical and can produce high cell yields.

Montaj ve &#39;Kayma Rings&#39; Uygulama: Orbital tek yönlü ve Periyodik Akışkan Akışının ve Kayma Stres için Yeni Bir Endotel Modeli

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as ...