Bu araştırma Deutsche Krebshilfe tarafından desteklenmiştir (Max Eder grup AN için: 110972), bir DGVS doktora tezi Bursu (SMB) ve bir Else-Kröner-Fresenius-Vakfı burs (RGG) Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen. Jutta Blumberg ve Ulrike Wegner uzman teknik destek için teşekkür ederiz. Biz de tüm hayvan teknisyenleri Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen fare tutmak için hayvan tesisinde teşekkür ederiz. Tüm deneyler Alman hayvan refahı düzenlemelere göre yapıldı.

Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen, Almanya (33.9-42502-04-15/2056) hayvan bakımı yönergeleri uyarınca protokolüdür. Panoları bireysel hayvan belirli gereksinimlerine bağlı olarak gözden geçirin, bazı iletişim kuralı adımlar buna göre değiştirilmiş olabilir.
1. abdominal palpasyonla KPC farelerin
<ol><li>Gereksiz ultrason taramaları önlemek için muhtemelen intraabdominal bir lezyon ayı olabilir ve daha sonra abdominal ultrason geçmesi fareler tanımlamak için fare karın muayene et.<ol>
<li>Abdominal palpasyonla haftalık 8 hafta-in yaş KPC fare modeli başlayarak gerçekleştirin. Yüksek çözünürlüklü ultrason da transplante tümör modeller (örneğin, orthotopics) veya diğer genetik fare modelleri uygulanabilir. Not: tümörlerin palpe önce tümör kinetik ve çalışma bağlı olarak (önleme çalışma, terapötik müdahale çalışması), algılama çok küçük tümörlerde (1-2 mm) monitör tümör başlangıç için uygun hedeftir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kafes ızgara üzerine fareyi getirin ve yavaşça fareyi kuyruğundan kaldırın ve karın hafifçe yukarı ve aşağı dizin ve sigara tamir el (şekil 1) başparmak ile giderek muayene et.</li>
	<li>Fareyi yumuşak palpasyonla kaldırabilir, yavaş yavaş basıncı artırarak devam edin. Daha büyük bir direnç üst ve alt karın kolayca tespit edilebilir. Bazen, sert dışkı yanlışlıkla bir tümör yorumlanabilir kitle.</li>
</ol>2. çalışma alanı hazırlanması
<ol><li>En az üç farklı çalışma birimleri için alan sağlamak: ön tarama alanını, sahne ve kurtarma kafes tarama. Gerekli malzeme Şekil 2' de tasvir.</li>
	<li>Ana çalışma plaka temiz (örneğin % 70 ile etanol) ve (şekil 3) tarama önce Isıtma platformunda geçiş. Birinci fare transfer edilmeden önce hedef sıcaklık 38-40 ° c ulaşacağından emin olun.</li>
	<li>Ultrason makinede geçiş ve elde edilen veriler (şekil 4) için yeni bir klasör oluşturun. B-mod ayarı karın görüntüleme için uygulanır. Ayrıca, karın dönüştürücü makinenin etkin bağlantı noktasına takılı olduğundan emin olun. Transduser baş çalışma sahne üstündeki montaj sistemi dönüştürücü kullanarak düzeltebilirsiniz.</li>
	<li>Bir kurtarma kafes bir ısıtma yüzeyi veya termal mat (veya kullanım Isıtma lambası) sonrası yordam termoregülasyon ve taranan farelerin hızlı iyileşme sağlamak için hazırlamak. Doku ince bir tabaka olarak yastık boğulma (şekil 5) riski ile yatak takımları, aspirasyon önlemek için bu kafesin dibinde koymak.</li>
</ol>3. inhalasyon anestezi
<ol><li>İndüksiyon odanın içine bir fare koyarak devam edin. Gaz taşıyıcı akışı (1 L/dak oksijen veya hava) için vana açıp isoflurane konsantrasyonu % 4, indüksiyon odasının yavaş yavaş artan bir doygunluk izin ayarlayabilirsiniz. (Etkin veya edilgen filtreleme) uygun isoflurane atma yerinde olduğundan emin olun. Yaklaşık 2-4 dakika sonra fare genellikle derin sedasyon altında olacaktır.<ol>
<li>Sedasyon çalışma Sahne Alanı'nda % 2 isoflurane burun konisi aracılığıyla yönetmek olarak korumak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde hayvan indüksiyon odasından çalışma Sahne Alanı'na transfer. Burun konisi sürekli gaz akışı için kontrol edin. Fare burun burun konisi anestezi satır çıkış koymak. İlk tarama için düzenli sırtüstü pozisyon konumdur. Fare da pankreas baş veya kuyruk Tümörleri (şekil 6) görünürlüğünü artırmak için sağa veya sola yan yerleştirilebilir.</li>
	<li>Abdominal ultrason acı başınaolmasa da, bir ağrı ücretsiz durumu ve derin anestezik durum gösterge ayak çimdik testi gerçekleştirin. Fare hala etkin veya etkin bir şekilde hareket etme, retransfer ise hayvan geri tekrarlanan ve uzun süreli indüksiyon için indüksiyon odasında.</li>
	<li>Göz koruma merhem sıvı kaybı nedeniyle kornea yaralanmaları önlemek için kullanın.</li>
	<li>Anestezi sırasında bir izleme sistemi kullanın. Ancak, EKG ve rektal ısı düzenli olarak kullanılır abdominal ultrason taramak için. Önemlisi, fareler anestezi altında thermoregulate yeteneği kaybetmek. Bu nedenle, hipotermi veya solunum soluyarak veya apne gibi klinik belirtiler yakından gözlemlemek. Herhangi bir belirti açık dur isoflurane ve yer fare kurtarma kafeste hemen ise.</li>
</ol>4. ultrason ayarları
<ol><li>Ultrason sistemde üretici yönergelerine tarafından açıklandığı gibi geçin. Birincil ayarı aktive karın paketiyle genel görüntüleme koymak emin olun. Genellikle B modunda görüntüleme veri toplama standart olarak kullanılır.</li>
	<li>İyi görüntü kalitesi aşağıdaki parametrelerle ulaşmak: frekans 40 MHz, 2D-kazanç 25-30 dB, görüntü derinliği 10 mm, resim genişliği 10 mm, 3-6 mm arasında merkezi ile 3 odak alanı.</li>
</ol>5. fare hazırlık
<ol><li>Yapışkan bant kullanarak üst ve alt ekstremite düzeltmek. Hayvan fiksasyon (Şekil 7) nedeniyle herhangi bir yaralanma önlemek mümkün olduğunca dikkatli olun.</li>
	<li>Tüm karın kürk elektronik evde beslenen hayvan makası kullanarak kaldırın. Kürk doku nedeniyle göğüs kafesi kadar alt karin başlatın. Bu alanda deri yaralanmaları önlemek için oluşum xiphoideus , kendine iyi bak. Not: Fare kürk ultrason dalgaları yansıtır ve görünürlüğü azalır.</li>
	<li>Bir en iyi duruma getirilmiş cilt hazırlık ve kürk tümüyle kaldırılmasını gerçekleştirmek için depilatory krem kullanın. Krem pamuk İpuçları (şekil 8) kullanarak traş karın üzerine ince bir tabaka yönetmek. Krem kuru dokuların bol su baştan başa çıkarmak tüm artıkları (Şekil 9, şekil 10, Şekil 11) tarafından takip ile (30 s ya da sonra daha sonra kullanılan krem bağlı olarak) kaldırın. Krem kalıntıları deri ve mukozada tahriş sonra ultrason neden olabilir ve böylece sağlık etkileyebilir.</li>
	<li>Yeterli tarama sağlamak için ultrason jeli (şekil 12) karın üzerine bol koşullar geçerlidir. Genellikle, sıcak ultrason jeli hipotermi fare için en aza indirmek için kullanılır.</li>
	<li>El ile dönüştürücü kafasına ultrason jeli ince bir tabaka uygulayın. Bir test çentik dönüştürücü uç dokunarak gerçekleştirin. Dönüştürücü doğru konumlandırılmış bir sinyal sol üst tarafındaki vasıl belgili tanımlık perde görülebilir.</li>
</ol>6. abdominal ultrason
<ol><li>Firma basınç uygulayarak karın üzerine dönüştürücü ayarlayın. Fare karın ağır sıkıştırma için solunum veya dolaşım bozukluğu neden olabilir ve kaçınılmalıdır.</li>
	<li>Yukarı ve aşağı inceden inceye gözden geçirmek. Çerçeve çalışma platformu ve tekerlekleri x ekseni ve y ekseni için ayarlayın.</li>
	<li>İlk adım olarak her iki böbrek tanımlayın. Genellikle alt karın hyperechogenic homojen yapıları olarak görünürler. Bağlı vena renalis vena kava inferior (şekil 13) bu da daha fazla neden kolayca bulunabilir.</li>
	<li>Vena lienalis hizmet için pankreas Simgesel Yapı beden olarak kullanın. Vena renalis ve vena lienalisarasında ayrım yapmak için girişim. Vena lienalis tespiti pankreas tam olarak yerelleştirilebilir. Normal pankreas oldukça katı bir yapı (Şekil 14 ve şekil 15) daha karın boşluğu yoluyla yayılan bir membran var.</li>
</ol>7. pankreas tümörü algılama ve birim değerlendirme
<ol><li>Tüm çevresindeki yapılardan pankreas lezyonlar tanımlayın. Bunlar genellikle hypoechoic inhomogeneous yuvarlak veya uzun doku kitleler (şekil 16) görüntülenir. Tümör genellikle sert ve zor tarama baş tarafından birleştirilebilir. Dikkat, zaman zaman açıkça bir tümör ve ince bağırsak döngü arasında ayırt etmek zor olabilir. Pankreas tümörleri dikkat edilmelidir değil Bağırsak bağırsakların dikkat edin.</li>
	<li>Tümör algılama ekran yukarı ve aşağı bir izlenime toplam boyutu ve ultrason Kaliper kullanarak en büyük çapı ölçmek için. Uygun bir görüntü bulunduktan sonra ekran donma ve tam tümör boyutu belirlemek için ölçü aracını kullanın. Dikkat, daha sonra kullanmak bir tümör kuyruk, vücut veya pankreas başkanı lokalize olup olmadığını ayırt etmek önemli olacaktır.</li>
	<li>Modu yaşamayı değiştirmeden önce çalışma kaydetmek için resimleri kaydetmek emin olun. Dikkat, ayar tekerleği serbest ve ultrason sonda daha da fare karında basıldığında olabilir görüntü dondurma. Bu nedenle, donarak mode değiştirmeden önce sıkıştırma ayarı düzeltmek.</li>
	<li>İlk uçak ölçümü bitirdikten sonra tarama baş tarafından boyuna konumda (şekil 17) 90 ° döndürmek veya tümörlerin boyuna genişleme tespit etmek için onun yanına fare açmak. Bazı tümör yeterli görüş için farenin konumunu değiştirmek gerekebilir. Pankreas kuyruk tümörler için fareyi onun sağ tarafında (şekil 10 ve şekil 19), sol tarafında (Şekil 11 ve şekil 20) pankreas baş tümörler için yerleştirilebilir.</li>
</ol>8. tümör Birim miktar
Not: Bir büyük amacı tüm çabaları, tümör biriminin doğru belirlenmesidir. Çeşitli teknikler kullanılabilir olmasına rağmen bir elipsoid formüle dahil olmak üzere bir hesaplama yöntemi Üniversitesi Tıp Merkezi Goettingen tercih edilir.
<ol><li>Tüm üç daha önce elde edilen çapları ile donatılmış, karşılık gelen tümör (şekil 21) yaklaşık hacmi hesaplamak.</li>
	<li>Alternatif olarak, sonraki hacim hesaplama ve 3 3-d-yeniden yapılanma ile tümör bölgesinin bir otomatik tarama gerçekleştirmek için tarama kafasının bir motor sistemi kullanın.</li>
</ol>9. kurtarma
<ol><li>Tarama sonra dikkatli bir şekilde tüm yapışkan bandı çıkarın ve dikkatli bir şekilde çıkarın tüm ultrason jeli kuru doku ile.</li>
	<li>Dikkatle fare ( şekil 21) kurtarma kafesin içine aktarın. Herhangi bir kaplama doku solunum bozukluğu neden olabilir mouse´s yüze kaçının. Kurtarma için bir yan konum tercih edilmelidir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı ile pankreas tümörleri genetiği fare modellerinde yüksek çözünürlüklü abdominal ultrason Imaging'i kullanma miktarının için ayrıntılı bir açıklama sağlanmıştır. Son zamanlarda, Sastra ve ark. nasıl fare modelleri, ancak hazırlık ve tüm diğer adımları için önkoşul gösterildiği gibi11işleme hakkında görüntülenmeyecektir talimat pankreas tümörleri ölçmek için ayrıntılı bir açıklama yayınladı. Bu makale genel amacı farel...

Genetiği fare modelleri kanser araştırma yeteneklerini yakından insan karsinojenezis1,2,3karmaşık doğası özetlemek için nedeniyle artan bir önem kazanmıştır. En sık kullanılan modelleri pankreas kanseri geliştirme eğitim için ilerleme ve terapötik yanıt bir Tümör baskılayıcı p534inactivation ile kombine Kras onkogen etkinleştiren bir mutasyon karakterize. Bu LSI-KrasG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre (KPC) fare modeli taklit eden invaziv Karsinomu için önceden invazif pankreas İntraepitelyal Neoplazi (PanIN) lezyon üzerinden ilerleme step-wise. Phenotypically, neredeyse tüm fareler doğumdan sonra ilk altı ay içinde PDAC geliştirmek. Ancak, transplante modellerle karşılaştırıldığında, KPC modeli 8 hafta son derece değişken tümör başlangıcından birkaç ay4ortaya koymaktadır. Pankreas Tümörleri (5-9 mm çapında) belirli bir boyutu ulaştığınızda, hızla tümör büyümesini hızlandırır ve fareler preklinik denemeler5' te kayıtlı gerekir. Bu nedenle, tümör başlangıçlı ve tümör boyutu tam algılama preklinik çalışma lojistik ve tedavi takibi için gerekli bir önkoşuldur. Genel olarak, çeşitli yaklaşımlar gibi manyetik rezonans görüntüleme (MRG)6,7,8,9 veya yüksek çözünürlüklü ultrason tarama bilgisayarlı tomografi tümör tarama yapmak için istihdam ve Terapi10. Her teknik avantajları ve dezavantajları vardır. Her ne kadar MRI- veya bilgisayarlı tomografi (CT)-görüntüleme sağlar yüksek çözünürlüklü veri toplama yanı sıra doğru hacim hesaplama, uzun süreli sınav zamanı genel sedasyon altında olarak ve çok pahalı ekipman gereklidir ve sık izin vermez uzun bir süre boyunca tarama. Buna ek olarak, küçük hayvan Ultrasonografi fareler11karın patolojiler için ekran için istihdam kurulan bir yöntemidir. Görüntüleme bu yöntemin avantajları, kez, yüksek çözünürlükte tarama kısa ve doppler ultrason veya kontrast kullanma imkanı perfüzyon organların paralel görselleştirmek için ultrason (CEUS) gelişmiş. Ancak, anatomik bilgi, 3D hayal gücü ve tam pratik eğitimden gerçek görüntü yorumu için gereklidir.
Aşağıdaki makalede, yüksek çözünürlüklü ultrason KPC modeli kullanmak için detaylı bir protokol sağlanır. Ayrıca, standart ultrason görüntüleri tasvir ve araştırmacı için yönlendirme kolaylaştırmak için organ yapıları ile Etiketlenmiş.

<table><tbody><tr><td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>VS-11945</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>VS-11874</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>SA-12055</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td><td>SA-11982</td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;electronic pet clippers</td><td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td><td>5025232484324</td><td>Panasonic ER-PA10-s</td></tr><tr><td>Labotect Hot plate</td><td>Labor tech G&amp;ouml;ttingen, Germany</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>eye cream (ophthalmic ointment)</td><td>Sch&amp;uuml;lke&amp;amp;Mayr, Germany</td><td>9080249</td><td></td></tr><tr><td>veterinary isoflurane</td><td>Abbvie, Germany</td><td>4831867</td><td></td></tr><tr><td>depilatory cream</td><td>RB healthcare UK, United Kingdom</td><td>8218535</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td><td>TH. Geyer, Germany</td><td>22941000</td><td></td></tr><tr><td>ultrasound gel</td><td>Asmuth, Germany</td><td>13477</td><td></td></tr><tr><td>tissue wipes</td><td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td><td>7558</td><td></td></tr><tr><td>cotton tips</td><td>Meditrade, Germany</td><td>75481116</td><td></td></tr><tr><td>glass bowl for ultrasound gel</td><td>ARC France, France</td><td>H1149</td><td></td></tr><tr><td>water bowl</td><td>W &amp;amp; P Trading Co., USA</td><td>B00K2P6PLQ</td><td></td></tr><tr><td>gauze sponges</td><td>Fuhrmann, Germany</td><td>960504</td><td></td></tr></tbody></table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

LSI-KrasG12D / +; LSI-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre (KPC) fare modeli pankreas kanseri yeni tedaviler değerlendirmek için bir kurulmuş ve sık kullanılan transgenik modeli temsil eder. Tümör başlangıçlı 8 hafta ile birkaç ay arasında KPC modelindeki değişkendir. Bu nedenle, non-invaziv görüntüleme aygıtlarının ekran için tümör başlangıçlı ve tedaviye yanıt için izlemek için gereklidir. Bu sorunu gidermek için farklı yaklaşımlar son yıl içinde ortaya çıkmıştır. Yüksek çözünürlüklü ultrason invasiveness sigara, hızlı oturum süreleri ve yüksek görüntü çözünürlüğü olmadan radyasyona maruz kalma gibi büyük avantajları vardır. Ancak, ultrason farelerde önemsiz ve yeterli anatomik bilgi değildir ve pratik becerileri yüksek çözünürlüklü ultrason preklinik pankreas kanseri modellerinde başarıyla gerçekleştirmek için gereklidir. Aşağıdaki makale ile endojen pankreas kanseri modelleri belirli bir odak ile fare modellerinde abdominal ultrason için ayrıntılı bir uygulamalı rehber sunulur. Ayrıca, ortak hatalar ve nasıl önlenebileceği bir özetini sağlar.

Ultrason görüntüleme insan hastalıkları fare modelleri birkaç önemli sorunu gidermek için kullanılan çok yönlü ve non-invaziv bir tekniktir. Tüm diğer görüntüleme yaklaşımlar büyük avantaj için yüksek üretilen iş, maliyet verimliliği, kısa edinme zaman ve gerçek zamanlı görüntüleme karşılaştırılır. Ancak, bu araç uzmanlık doğru yüksek kaliteli görüntüler oluşturmak için gerekir. Özellikle istenmeyen eserler olması durumunda genel olarak ult...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models at JoVE.com

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Bu makalede genetiği pankreas kanseri farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason kullanımı. Birincil amaç algılama ve endojen pankreas tümörleri değerlendirilmesi için ayrıntılı bir talimat sağlamaktır.

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

utilizing-high-resolution-ultrasound-to-monitor-tumor-onset-growth

Research

JoVE Journal

Cancer Research

10.7K Görüntüleme.  University Medical Center Goettingen. Bu makalede genetiği pankreas kanseri farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason kullanımı. Birincil amaç algılama ve endojen pankreas tümörleri değerlendirilmesi için ayrıntılı bir talimat sağlamaktır.

Video: Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Kanser Araştırmaları

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic alterations in oncogenes such as the KRAS oncogene, which constitutes ~25% of lung cancer cases. The difficulty in therapeutically targeting KRAS-driven lung cancer partly stems from having poor models that can mimic the progression of the disease in the lab. We describe a method that permits the relative quantification of primary KRAS lung tumors in a Cre-inducible LSL-KRAS G12D mouse model via ultrasound imaging. This method relies on brightness (B)-mode acquisition of the lung parenchyma. Tumors that are initially formed in this model are visualized as B-lines and can be quantified by counting the number of B-lines present in the acquired images. These would represent the relative tumor number formed on the surface of the mouse lung. As the formed tumors develop with time, they are perceived as deep clefts within the lung parenchyma. Since the circumference of the formed tumor is well-defined, calculating the relative tumor volume is achieved by measuring the length and width of the tumor and applying them in the formula used for tumor caliper measurements. Ultrasound imaging is a non-invasive, fast and user-friendly technique that is often used for tumor quantifications in mice. Although artifacts may appear when obtaining ultrasound images, it has been shown that this imaging technique is more advantageous for tumor quantifications in mice compared to other imaging techniques such as computed tomography (CT) imaging and bioluminescence imaging (BLI). Researchers can investigate novel therapeutic targets using this technique by comparing lung tumor initiation and progression between different groups of mice.

This protocol describes the steps taken to induce KRAS lung tumors in mice as well as the quantification of formed tumors by ultrasound imaging. Small tumors are visualized in early timepoints as B-lines. At later timepoints, relative tumor volume measurements are achieved by the measurement tool in the ultrasound software.

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Tıp

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Generation of an Orthotopic Xenograft of Pancreatic Cancer Cells by Ultrasound-Guided Injection

Pancreatic cancer (PCa) represents one of the deadliest cancer types worldwide. The reasons for PCa malignancy mainly rely on its intrinsic malignant behavior and high resistance to therapeutic treatments. Indeed, despite many efforts, both standard chemotherapy and innovative target therapies have substantially failed when moved from preclinical evaluation to the clinical setting. In this scenario, the development of preclinical mouse models better mimicking in vivo characteristics of PCa is urgently needed to test newly developed drugs. The present protocol describes a method to generate a mouse model of PCa, represented by an orthotopic xenograft obtained by ultrasound-guided injection of human pancreatic tumor cells. Using such a reliable and minimally invasive protocol, we also provide evidence of in vivo engraftment and development of tumor masses, which can be monitored by ultrasound (US) imaging. A noteworthy aspect of the PCa model described here is the slow development of the tumor masses over time, which allows precise identification of the starting point for pharmacological treatments and better monitoring of the effects of therapeutic interventions. Moreover, the technique described here is an example of implementation of the 3Rs principles since it minimizes pain and suffering and directly improves the welfare of animals in research.

We present a protocol to generate a minimally invasive orthotopic pancreatic cancer model by ultrasound-guided injection of human pancreatic cancer cells and the subsequent monitoring of tumor growth in vivo by ultrasound imaging.

Ultrason Eşliğinde Enjeksiyon ile Pankreas Kanseri Hücrelerinin Ortotopik Ksenograftının Oluşturulması

Pancreatic cancer (PCa) represents one of the deadliest cancer types worldwide. The reasons for PCa malignancy mainly rely on its intrinsic malignant ...

High-Resolution Ultrasonography for the Analysis of Orthotopic ATC Tumors in a Genetically Engineered Mouse Model

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes significantly. Genetically engineered murine models that mimic ATC&#39;s progression may help researchers to study treatments for this disease. Crossing three different genotypes of mice, a TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53&#916;ex2-10/&#916;ex2-10&#160;transgenic ATC model was developed. The ATC murine model was induced by an intraperitoneal injection of tamoxifen with overexpression of BrafV600E and deletion of Trp53, and the tumors were generated within about 1 month. High-resolution ultrasound was applied to investigate the tumor initiation and progression, and the dynamic growth curve was obtained by measuring the tumor sizes. Compared to magnetic resonance imaging (MRI) and computed tomography scanning, ultrasound has advantages in observing the ATC murine model, such as being noninvasive, portable, in real-time, and without radiation exposure. High-resolution ultrasound is suitable for dynamic and multiple measurements. However, ultrasonographic examination of the thyroid in mice requires relevant anatomical knowledge and experience. This article provides a detailed procedure for utilizing high-resolution ultrasound to scan tumors in the transgenic ATC model. Meanwhile, ultrasonic parameter adjustment, ultrasound scanning skills, anesthesia and recovery of the animals, and other elements that need attention during the process are listed.

The present protocol describes high-frequency ultrasonography for visualizing the entire mouse thyroid gland and monitoring the growth of anaplastic thyroid carcinoma.

Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Ortotopik ATC Tümörlerinin Analizi için Yüksek Çözünürlüklü Ultrasonografi

Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) is associated with a poor prognosis and short median survival time, but no effective treatment improves the outcomes ...

İmplante Edilmiş Stabilize Pencere Kullanılarak Murin Pankreas Görüntüleme

Stabilized Window for Intravital Imaging of the Murine Pancreas

The physiology and pathophysiology of the pancreas are complex. Diseases of the pancreas, such as pancreatitis and pancreatic adenocarcinoma (PDAC) have high morbidity and mortality. Intravital imaging (IVI) is a powerful technique enabling the high-resolution imaging of tissues in both healthy and diseased states, allowing for real-time observation of cell dynamics. IVI of the murine pancreas presents significant challenges due to the deep visceral and compliant nature of the organ, which make it highly prone to damage and motion artifacts. 
Described here is the process of implantation of the Stabilized Window for Intravital imaging of the murine Pancreas (SWIP). The SWIP allows IVI of the murine pancreas in normal healthy states, during the transformation from the healthy pancreas to acute pancreatitis induced by cerulein, and in malignant states such as pancreatic tumors. In conjunction with genetically labeled cells or the administration of fluorescent dyes, the SWIP enables the measurement of single-cell and subcellular dynamics (including single-cell and collective migration) as well as serial imaging of the same region of interest over multiple days. 
The ability to capture tumor cell migration is of particular importance as the primary cause of cancer-related mortality in PDAC is the overwhelming metastatic burden. Understanding the physiological dynamics of metastasis in PDAC is a critical unmet need and crucial for improving patient prognosis. Overall, the SWIP provides improved imaging stability and expands the application of IVI in the healthy pancreas and malignant pancreas diseases.

Yazar Spotlight: Gelişmiş İntravital Görüntüleme ile Pankreas Hastalığı Anlayışında Devrim Yaratmak 

We present a protocol for the surgical implantation of a stabilized indwelling optical window for subcellular-resolution imaging of the murine pancreas, allowing serial and longitudinal studies of the healthy and diseased pancreas.

Murin Pankreasın İntravital Görüntülenmesi için Stabilize Pencere

The physiology and pathophysiology of the pancreas are complex. Diseases of the pancreas, such as pancreatitis and pancreatic adenocarcinoma (PDAC) have ...

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Ultrason Eşliğinde Enjeksiyon ile Pankreas Kanseri Hücrelerinin Ortotopik Ksenograftının Oluşturulması

Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Ortotopik ATC Tümörlerinin Analizi için Yüksek Çözünürlüklü Ultrasonografi

Murin Pankreasın İntravital Görüntülenmesi için Stabilize Pencere

Murin Pankreasın İntravital Görüntülenmesi için Stabilize Pencere

Murin Pankreasın İntravital Görüntülenmesi için Stabilize Pencere