Protokol, hücrelerin enjeksiyonunu ve tümörlerin engraftmanının ve gelişiminin değerlendirilmesini birleştiren bir sistem kullanarak pankreas kanserinin ortopik bir fare modelini oluşturmak için bir yöntemi açıklar. Bu teknik büyük tekrarlanabilirliğe sahiptir, minimal invazivdir, cerrahi prosedürün neden olduğu birçok dezavantajın üstesinden gelmeye izin verir ve 3R ilkelerine uygundur. Yankı rehberliğinde enjeksiyon, safra ağacındaki enjeksiyonlar veya meme kanseri modelleri gibi diğer ortotopik modeller için kullanılabilir.
Böyle bir tekniğin kullanımı, küçük moleküllerin kullanımı ile birleştirilebilir. 27 gauge iğneli bir tüberkülin şırıngası kullanarak tramadol intraperitoneal olarak kilogram başına 5 miligramlık bir dozda uygulayarak ultrason rehberliğinde enjeksiyon için 8 haftalık 20 Atimik çıplak-Foxn-1nu dişi fare hazırlamaya başlayın. Ardından, görüntüleyiciyi açın ve dönüştürücü panelinden uygulama menüsünde Fare, Küçük, Abdominal'i seçin.
B Modu veya Parlaklık Modu görüntüleme penceresinin göründüğünden ve sistemin B-Modu verilerini almaya hazır olduğundan emin olun. Yeni Etüt'ü seçmek için Etüt Tarayıcısına gidin ve çalışma adını ve çalışmanın tarihi gibi bilgileri yazın. Ardından, Seri Adı'nda hayvan suşu, kimlik, doğum tarihi gibi gerekli tüm bilgileri doldurun.
Bilgiler girildikten sonra, programı B-Mode görüntülemeye hazırlamak için "Bitti" ye dokunun. Anestezi uygulanan fareyi sağ kanadında, burnu burun konisi içinde olacak şekilde 37 santigrat derecede ısıtılmış tutma masasına yerleştirin ve farenin gözlerine bir damla veteriner merhem uygulayın. Ardından, farenin sağ elini, sağ ayağını ve kuyruğunu hayvan platformundaki elektrot pedlerine bantlamak için yapışkan bir gazlı bez kullanın.
Farenin solunum hızı ve elektrokardiyogramı elektrot pedleri aracılığıyla kaydedilir. Fareye PANC1 hücreleri enjekte etmeden önce, fare cildini% 70 etanol ile sterilize edin ve yapışkan gazlı bez kullanarak sol kanadın cildini gerilmiş halde tutun. Karın ve farenin sol kanadına ultrason jeli uygulamak için iğnesiz 20 mililitrelik bir şırınga kullanın.
Ultrason dönüştürücüsünün yükseklik kontrol düğmesinin yardımıyla, farenin sol kanadına dokunmak için dönüştürücüyü indirin ve dönüştürücüyü hayvanın vücuduna enine olarak yerleştirin. Ardından, B-Mode görüntülemeyi kullanarak dönüştürücü ekranındaki pankreası görselleştirmek için dönüştürücüyü hareket ettirin. Dezenfekte edilmiş 30 milimetre 28 gauge iğne ile 20 mikrolitre PBS'de asılı 10 milyon PANC1 hücresi içeren 50 mikrolitrelik bir Hamilton şırıngası hazırlayın ve şırıngayı uygun tutucuya yerleştirin.
Tutucu mikromanipülatörü kullanarak, şırıngayı fare derisine, iğne eğimi yukarı bakacak şekilde ve ultrason dönüştürücü ile aynı düzlemde, dönüştürücü ile 45 derecelik bir açı oluşturarak indirin. Mikromanipülatör ile cildi delin ve yörüngeyi takip etmek için ekrandaki ultrason görüntüsünü gözlemlerken şırınga iğnesini pankreasın içine yerleştirin. İğne pankreas içine yerleştirildikten sonra, şırınganın pistonuna sabit basınç uygulayarak hücreleri içeren 20 mikrolitrelik bir bolus enjekte edin.
Doğru enjeksiyon prosedürü, pankreasta küçük bir kabarcığın varlığı ve hipoekojenik sıvının akışı ile kontrol edilebilir. Enjeksiyondan 5 ila 10 saniye sonra, iğneyi geri çekin. Ardından, ultrason dönüştürücüsünü çıkarın ve jeli yandan temizleyin.
İşiniz bittiğinde, fareyi tek başına gözlem altındaki yeni bir kafese, sternal yassılığı korumak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar yerleştirin. Temsili görüntü, eko rehberliğinde hücre enjeksiyonundan sonra pankreasın kuyruğunda bir tümör kütlesinin varlığını gösterir ve protokolün tekrarlanabilirliğini doğrular. PANC1 hücrelerinden türeyen ortotopik pankreas tümörlerinin tümör hacmi, hücre enjeksiyonundan sonraki 8. günden başlayarak haftada bir kez ultrason görüntüleme ile değerlendirildi.
43. günde deneyin son noktasında, tümör kitlelerinin ultrason görüntüleri elde edildi. Nekropsi muayenesinde tümör kitlesi, sağlıklı pankreas, dalak, mide ve karaciğerin küçük bir kısmı gözlendi. Ek olarak, tümör kitleleri histolojik analiz için eksize edildi.
Fareyi sağ tarafında masanın üzerine yerleştirmek önemlidir ve hücrelerin pankreastan dökülme riskini önlemek için cilt uygun şekilde gerilmelidir. Ultrason eşliğinde enjeksiyon ile elde edilen pankreas kanseri modelinin gelecekteki uygulamaları, uygun terapötik tedavilerin veya tedavi kombinasyonlarının geliştirilmesine yönelik çalışmaları içermektedir.
