Bu işlemin genel amacı farelerden mediastinal lenf nodunun izole sinde gerekli benzersiz tekniği tanımaktır. Operasyon, farelerde altı farklı güzergâhta immünostimülan materyal enjekte edildikten sonra gerçekleştirildi. Bu çalışmada, nano boyutlu yapıları oluşturan yeni bir malzeme sınıfı kullandık.
Sürfaktanlar hidrofilik kafa grubu ve hidrofobik kuyruk oluşur. Mikrofaj ayrımına bağlı olarak küresel mikel veya diğer sekonder yapıyı oluştururlar. Bu özelliği DNA olan bir biyo makromolekül için kullandık.
Burada gösterilen DNA amphiphilesi, A, C, G, T gibi düzenli nükleotitler hidrofilik bloklara sahipken lipid modifiye edilmiş nöro-hücre nükleobazları hidrofobik üniteler olarak hareket eder. Modifiye oligo büyük ölçekli oksitogramlarda DNA sentezleyici tarafından sentezlendi. Equi-media'da amfilik lipid DNA'lar kendiliğinden nano boyutlu küresel miseller oluştururlar.
Micelle oluştuğunda, DNA çapı yaklaşık 10 nanometre ile boş bir taşıyıcı olarak tek iplikli kalır. Taşıyıcıyı immün-uyarıcı ile donatmak için, DNA dizisini ücretli reseptör dokuz adjuvan yani eCpG ile genişletmek basit bir konudur. Buradaki lipid DNA ve eCpG baz bu nedenle micelle'in dış yüzeyi CpG dizisi ile bozulur.
Daha sonra bu Bağışıklık Uyarıcı Nano parçacığı INP olarak adlandırıyoruz. İnP'lerin immün yanıt için uygun yöntemini belirlemek için farelere 64 enjeksiyon rotasında INP enjekte ettik ve sonuç olarak uygun bir lenf nodu dokusu analiz edildi. Daha ayrıntılı enjeksiyon talimatı için lütfen Charles River tarafından 2012 yılında yayınlanan bir JOB makalesi bulun.
Bu videonun ana avantajı görsel olarak nasıl mediastinal lenf düğümü elde etmek için gösteren. Video açıkça bir sürü insan organları izole bir zorluk bulmak mediastinal lenf düğümü yerini gösterir. Tüm deneyler Şangay Halk Sağlığı Klinik Merkezi'nde veya Ulsan Üniversitesi Tıp Fakültesi'nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi yönergeleri altında gerçekleştirilmiştir.
Bu bölümde immünolojik analiz için çok önemli olan organ veya dokuların özel konumu gösterecektir. Dalak ve iki lenf düğümü izole edilecektir. Her şeyden önce, fareler karbondioksit inhalasyon ötenazi tarafından kurban edildi ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesinin rehberliğinde olduğu gibi acıyı en aza indirmek için tüm çabalar yapıldı.
Şu andan itibaren organları bulup izole edelim. İlk olarak, fareyi çalışma masasında farenin avuç içinde dört iğneyle düzgün bir şekilde düzeltin. Diseksiyon alanını alkolle sterilize edin.
Farenin karın ın alt kısmını büyük boy bir makasla inceleyin. Ekin her iki tarafını da açmak ve ameliyat masasında iğnelerle düzeltmek için forseps kullanın. Inguinal lenf nodunun yeri sol bacama doğru inen damarın birleşimi ni bularak ortaya çıkar.
Geminin şekli eğimli alfabe harfi Y.Forceps ile tabaka ortaya çıkarmak ve deriden çekin gibi görünüyor. İç organları ortaya çıkarmak için daha küçük makas ile periton kesin. Forceps kullanarak sağa bağırsak taşıyın sonra şeklinde dalak sarın, hangi karın sol, üst sol tarafında gösterir.
Dalak bozulması kolay olduğundan işlem sırasında ek dikkat gereklidir. Son olarak bu videonun kilit noktası: mediastinal lenf düğümü hasat. Bu küçük boyutu ve biraz gizli konumu nedeniyle görmek zor akciğer, üst tarafının altında yer almaktadır.
Küçük makas ve forceps kullanarak bölgeyi dikkatlice ortaya çıkarın. Kaburgaların ve diyaframın her iki tarafını da kesin. Kesilen kaburgaları göğsün üstünden kes.
Bu yarı saydam mediastinal lenf düğümü bulma, site kör olabilir beri işlem sırasında kalp ve kan damarlarızarar kaçının. Eğer kazara kan damarı patlarsa, gazlı bezle kanı nazikçe silip süpürün. Akciğerin sol tarafını alın ve yavaşça akciğerin altını görmek için diğer tarafa çevirin.
Forseps kullanarak mediastinal lenf nodunu yukarı çekin. Mediastinal lenf nodunu hasat ettikten sonra, istenmeyen doku analizi ni etkileyebileceğinden, lenf düğümunu çevreleyen tüm yağ ve kanı mükemmel bir şekilde çıkardığından emin olun. Son olarak, bir petri kabındaki tüm izole organlar medyayla dolu.
Bu akış sitometrisinde toplam 0.1 çarpı 10 ile altıncı hücreler analiz edildi. Kuvvet getter ve boyut getter lökosit popülasyonuna göre geçitli ve hücreler koyu boyama ile dışlandı. INP enjeksiyonundan 24 saat sonra 64 enjeksiyon yolu ile dalak, inguinal lenf nodu ve mediastinal lenf nodu hasat edildi ve akış sitometrisi ile DC aktivasyonu analiz edildi.
Akış sitometrisi DC popülasyonstratejisine göre canlı lökositte CD11C pozitif ve soy negatif hücreleri olarak tanımlanmıştır. Özellikle INP intranazal enjeksiyonu, kontrol için PBS'ye kıyasla mediastinal lenf nodunun CD40, 80, 86 ekspresyonunda önemli artışlara yol açmaktadır. Bu nedenle, bu veriler INP intranazal enjeksiyon akciğerde bağışıklık geliştirme için bir mukozal adjuvan olarak kullanılabilir önerdi.
