Общая цель этой процедуры заключается в ознакомлении с уникальной техникой, необходимой для изоляции медиастинального лимфатического узла от мышей. Операция была проведена после введения иммуностимуляторного материала на шести различных маршрутах у мышей. В этом исследовании мы использовали новый класс материалообразующих наноразмерных структур.
Сурфактанты состоят из гидрофильной головной группы и гидрофобного хвоста. Те формируют сферическую micelle или другую вторичную структуру из-за разъединения микрофагов. Мы использовали это свойство для био макромолекулы, которая является ДНК.
ДНК амфифил, показанный здесь, как регулярные нуклеотиды, такие как A, C, G, T, имеет гидрофильные блоки, в то время как липидные модифицированные ядра нейро-клеток действуют как гидрофобные единицы. Модифицированный олиго был синтезирован синтезатором ДНК в крупномасштабных октограммах. В экви-медиа амфифильные липидные ДНК спонтанно образуют сферические мицеллы размером с нано.
Когда micelle формируется, ДНК остается одной нити в качестве пустого перевозчика около 10 нанометров в диаметре. Чтобы оснастить перевозчика иммуностимулятором, это простой вопрос расширения последовательности ДНК с платным рецептором девять адъювантов, а именно eCpG. Липидная ДНК и eCpG базы здесь, следовательно, внешняя поверхность micelle деградирует с cpG последовательности.
Затем мы назовем эту иммуно-стимулирующую частицу Nano INP. Чтобы определить правильный способ INPs для иммунного ответа мы вводили INPs мышей в 64 инъекций маршрутов и, следовательно, надлежащей ткани лимфатических узлов были проанализированы. Для получения более подробной инструкции по инъекциям, пожалуйста, найдите статью JOB, опубликованную Чарльзом Ривером в 2012 году.
Основным преимуществом этого видео является визуальное отображение того, как получить медиастинальный лимфатический узел. Видео явно показывает расположение медиастинального лимфатического узла, который многие люди находят трудности в изоляции органов. Все эксперименты проводились в соответствии с руководящими принципами Институционального комитета по уходу за животными и использованию в Шанхайском клиническом центре общественного здравоохранения или Медицинском колледже Ульсанского университета.
Эта часть покажет конкретное расположение органов или тканей, которые имеют решающее значение для иммунологического анализа. Селезенка и два лимфатических узла будут изолированы. Прежде всего, мыши были принесены в жертву эвтаназии вдыхания двуокиси углерода, и все усилия были предприняты, чтобы свести к минимуму страдания, как в соответствии с руководством Институционального комитета по уходу за животными и использования.
Отныне давайте найдем органы и изолим их. Во-первых, правильно исправить мышь на операционном столе с четырьмя булавками на ладони мыши. Стерилизовать область вскрытия алкоголем.
Рассекаете внешнюю крышку нижней части живота мыши ножницами большого размера. Используйте типсы, чтобы открыть обе стороны крепления и зафиксировать его булавками на операционном столе. Расположение пахового лимфатического узла подвергается воздействию, находя соединение сосуда спускаясь к левой ноге.
Форма сосуда выглядит как наклонная буква алфавита Y.Uncover слой с хлипами и вытащить его из кожи. Вырезать брюшной полости с меньшими ножницами, чтобы разоблачить внутренние органы. Перемещение кишечника вправо с помощью миппов затем обернуть в форме селезенки, которые показывают, на левой, верхней левой стороне живота.
Дополнительное внимание требуется во время процедуры, так как селезенка легко нарушить. Наконец ключевой момент этого видео: сбор медиастинального лимфатического узла. Он расположен под верхней стороной легкого, что трудно увидеть из-за его небольшого размера и несколько скрытое местоположение.
Тщательно разоблачить области с помощью небольших ножниц и типсов. Вырезать обе стороны ребер и диафрагмы, а также. Обрежьте отрезанные ребра над грудью.
Во время процедуры избегайте повреждения сердца и кровеносных сосудов, так как это может ослепить сайт, находя полупрозрачный медиастинальный лимфатический узел. Если случайно лопнул кровеносный сосуд, аккуратно протрите кровь марлей. Захватите левую сторону легкого и мягко переверните его на другую сторону, чтобы увидеть под легким.
Поднимите медиастинальный лимфатический узел с помощью типсов. После сбора медиастинального лимфатического узла, убедитесь, что идеально удалить все жиры и кровь, окружающие лимфатический узел, поскольку нежелательные ткани могут влиять на анализ. Наконец, все изолированные органы на чашке Петри заполнены средствами массовой информации.
Всего 0,1 раза от 10 до шестой клетки были проанализированы на этот поток цитометрии. Основываясь на силе getter и размер getter лейкоцитов популяции был закрыт, и что клетки были исключены темные окрашивания. Через 24 часа после инъекции INP 64 инъекционными путями, селезенка, паховой лимфатический узел и медиастинальный лимфатический узел были собраны и проанализированы активации DC с помощью цитометрии потока.
На основе стратегии потока цитометрии DC популяция была определена как CD11C положительные и линии отрицательных клеток в живых лейкоцитов. Примечательно, что интраназальная инъекция INP способствовала значительному увеличению CD40, 80, 86 экспрессии в медиастинальных лимфатических узлах по сравнению с PBS для контроля. Таким образом, эти данные свидетельствуют о том, что интраназальные инъекции INP могут быть использованы в качестве слизистой адъюванта для повышения иммунитета в легких.
