El objetivo general de este procedimiento es familiarizar la técnica única necesaria para aislar el ganglio linfático mediastinal de ratones. La operación se llevó a cabo después de inyectar material inmunoestimulante en seis vías diferentes en ratones. En este estudio, utilizamos una nueva clase de material formando estructuras de tamaño nano.
Los surfactantes consisten en un grupo de cabeza hidrófilo y cola hidrófoba. Esos forman micelas esféricas u otra estructura secundaria debido a la separación de microfagos. Utilizamos esta propiedad para una macromolécula bio que es ADN.
Los anfilismos de ADN, que se muestran aquí, como nucleótidos regulares como A, C, G, T, tienen bloques hidrófilos, mientras que las nucleobases neurocélulas modificadas en lípidos actúan como unidades hidrófobas. El oligo modificado fue sintetizado por sintetizador de ADN en octogramas a gran escala. En equi-medios, los DNAs lipídicos anfifílicos forman espontáneamente micelas esféricas de tamaño nanonúfino.
Cuando se forma micela, el ADN permanece de una sola cadena como un portador vacío con alrededor de 10 nanómetros de diámetro. Para equipar al portador con inmune-estimulante, es simple cuestión de extender la secuencia de ADN con receptor similar a un peaje nueve adyuvante a saber, eCpG. El ADN lipídico y la base eCpG aquí, por lo tanto, la superficie externa de la micela se degrada con la secuencia CpG.
Luego nombramos a esta partícula Nano Inmunoestimulante como la INP. Para determinar la forma adecuada de INPs para la respuesta inmune, inyectamos INPs a ratones en 64 rutas de inyección y, en consecuencia, se analizó un tejido de ganglios linfáticos adecuado. Para obtener instrucciones de inyección más detalladas, busque un artículo de JOB publicado por Charles River en 2012.
La principal ventaja de este vídeo es mostrar visualmente cómo obtener el ganglio linfático mediastinal. El video muestra explícitamente la ubicación del ganglio linfático mediastinal que muchas personas encuentran una dificultad para aislar los órganos. Todos los experimentos se llevaron a cabo bajo las directrices del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales en el Centro Clínico de Salud Pública de Shanghai, o La Facultad de Medicina de la Universidad de Ulsan.
Esta parte mostrará la ubicación específica de los órganos o tejidos, que son cruciales para el análisis inmunológico. El bazo y dos ganglios linfáticos se aislarán. En primer lugar, los ratones fueron sacrificados por la eutanasia por inhalación de dióxido de carbono y se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento siguiendo la guía del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales.
A partir de ahora vamos a encontrar los órganos y aislarlos. En primer lugar, fije correctamente el ratón en el escritorio de operación con cuatro pines en la palma del ratón. Esterilice el área de disección con alcohol.
Disecciona la cubierta exterior de la parte inferior del abdomen del ratón con una tijera de gran tamaño. Utilice fórceps para abrir los dos lados del accesorio y fijarlo con pasadores en la mesa de operaciones. La ubicación del ganglio linfático inguinal se expone al encontrar la conjunción del vaso que baja hacia la pierna izquierda.
La forma del recipiente se ve como letra del alfabeto inclinada Y.Uncover la capa con los fórceps y tira de ella de la piel. Corte el peritoneo con una tijera más pequeña para exponer los órganos internos. Mueva el intestino hacia la derecha usando fórceps y luego envuelva en el bazo en forma, que se muestra en el lado izquierdo izquierdo del abdomen.
Se requiere atención adicional durante el procedimiento, ya que el bazo es fácil de interrumpir. Finalmente el punto clave de este video:cosecha del ganglio linfático mediastinol. Se encuentra debajo de la parte superior del pulmón, que es difícil de ver debido a su pequeño tamaño y ubicación algo oculta.
Exponga cuidadosamente el área con tijeras y fórceps pequeños. Corte ambos lados de las costillas y el diafragma también. Sujete las costillas cortadas por encima del pecho.
Durante el procedimiento evitar dañar el corazón y los vasos sanguíneos ya que podría cegar el sitio, encontrar el ganglio linfático mediastinal translúcido. Si por accidente el vaso sanguíneo estalla, limpie suavemente la sangre con gasa. Coge el lado izquierdo del pulmón y dale la vuelta suavemente al otro lado para ver debajo del pulmón.
Levante el ganglio linfático mediastinal usando fórceps. Después de cosechar el ganglio linfático mediastinal, asegúrese de eliminar perfectamente toda la grasa y la sangre que rodea el ganglio linfático, ya que el tejido no deseado puede influir en el análisis. Finalmente, todos los órganos aislados en un plato de petri lleno de medios.
Total 0.1 veces 10 a la sexta célula fueron analizados en esta citometría de flujo. Según la fuerza captador y el tamaño de la población de leucocitos captados fue cerrada y que las células fueron excluidas por manchas oscuras. 24 horas después de la inyección de INP por 64 vías de inyección, bazo, ganglio linfático inguinal y ganglio linfático mediastinal se cosecharon y analizaron la activación de CC por citometría de flujo.
Sobre la base de la estrategia de la población de CC de citometría de flujo se definió como CÉLULAs positivas CD11C positivas y de linaje negativas en el leucocitos vivo. En particular, la inyección intranasal de INP promovió aumentos significativos en la expresión CD40, 80, 86 en el ganglio linfático mediastinol en comparación con PBS para el control. Por lo tanto, estos datos sugirieron que la inyección intranasal de INP se puede utilizar como un adyuvante mucoso para la mejora de la inmunidad en el pulmón.
