Bu eser Ulusal Enstitüsü, alerji ve enfeksiyon hastalıkları Ulusal Sağlık Enstitüleri [Grant numaraları R01 AI117211, R01 AI130060, R21 AI127954 ve R42 AI106375 BS için] ve ABD Gıda ve İlaç İdaresi [sözleşme tarafından desteklenmiştir HHSF223201710199C BML için].

Hayvanları içeren tüm yordamları araştırmacı kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanması gerekir.
1. bakteriyel Inoculum hazırlanması
<ol><li>Bakteri kolonileri yalıtmak.<ol>
<li>Çizgi uygun steril agar Orta (Örneğin, Tryptic soya agar), bakteriyel strain (Örneğin, A. baumannii "HUMC1") izole kolonileri oluşturmak için dikkatli olmak.</li>
		<li>Uygun koşullar (Örneğin, bir gecede 37 ° C'de), kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gecede kültür büyümek.<ol>
<li>Bir temsilci, steril bir inoculating döngü agar plakalı izole koloni seçin ve uygun steril broth Orta (Örneğin, Tryptic soya suyu) 10 mL aşılamak için kullanabilirsiniz.</li>
		<li>Durağan faz, uygun koşullar (Örneğin, Bacalı kapağı, 50 mL konik şişe geceleme 200 devirde sallayarak ile 37 ° C) ulaşmak örnek sağlar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt kültür büyümek.<ol>
<li>Gecede Kültür 100 μL 10 mL taze steril broth bir pipet kullanarak aktarın.</li>
		<li>Uygun koşullar (Örneğin, 3 h Bacalı kapağı, 50 mL konik şişe için 200 devirde sallayarak ile 37 ° C), üstel/log fazı ulaşmak için izin verir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt kültür yıkayın.<ol>
<li>Alt kültür incubating onun ortamdan kaldırabilirsiniz.</li>
		<li>Bakteri cips 5 min için 4.000 × g, santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Aspire edin ve süpernatant atın.</li>
		<li>10 mL steril fosfat tamponlu tuz (PBS) Pelet ve şiddetle tamamen resuspended kadar girdap ekleyin.</li>
		<li>Adımları yineleyin 1.4.2 - 1.4.4 iki kez, toplam 3 yıkar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bakteriyel süspansiyon konsantrasyon ayarlayın.<ol>
<li>600 optik yoğunluk ölçer bir spektrofotometre kullanarak nm (OD600), bakteriyel süspansiyon optik yoğunluğunu ölçmek.</li>
		<li>İnoculum optik yoğunluğu bir OD600 0,5, düşünceye kadar steril PBS denklem Cben× Vben kullanarak bakteriyel süspansiyon Ekle "C" nerede konsantrasyon, Cf× Vf, = "V" ise birim, "ben" ilk, olduğunu ve "f", son. * Cf her zaman 0,5 olmalıdır; Vf çözmek için değişkendir.</li>
		<li>Bakteriyel süspansiyon bir OD600 0,5 düşerse, bakteri cips ve 0,5 OD600 ulaşmak için süpernatant uygun miktarda kaldırmak 5 min için 4.000 × g, santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Seri dilutions steril PBS (Örneğin, 1 × 10-6elde etmek için üç 1: 100 dilutions) gerçekleştirmek ve koloni oluşturan bakteri konsantrasyonu ortaya koymaktadır korelasyon katsayısı belirlemek için steril agar tabağa mL (CFUs/mL) başına birim bir OD600 0,5. Not: Bu korelasyon katsayısının değeri için her tür her zor değişir ve inoculum hazırlık bir enfeksiyon için önce belirlenmelidir.</li>
		<li>Korelasyon katsayısı belirledikten sonra bunu bir inoculum (Örneğin, 2 × 108- 1 × 109 CFUs/mL); istenilen konsantrasyon oluşturmak için kullanın istenen inoculum OD600 0,5 büyükse bakteri cips ve istenen toplama ulaşmak için süpernatant uygun miktarda kaldırmak 5 min için 4.000 × g de bakteriyel süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Bu değerler aynı türden bakteri yalıtır ve farklı genetik kökenden fareler arasında değişir gibi her tür fare her bakteri izole virülans belirlemek için in vivo pilot çalışmalar gerçekleştirmek. Belirli suşları alt inocula öldürücü Ayagin Gram-negatif türleri için farelerde LD100 genellikle 1-5 × 108 CFUs/fare, olmasına rağmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Daha önce yayımlanmış8 (isteğe bağlı) isteğe bağlı, kesin inocula olarak ileride kullanmak için aynı aliquots dondur.<ol>
<li>Bakteriyel inoculum 1 L iki 500 mL konik şişeleri ve 5 min için 4.000 × g, santrifüj yukarıda açıklanan transfer olarak hazırlayın.</li>
		<li>450 mL süpernatant konik her şişe üzerinden atmak ve granül kalan süpernatant bakteri resuspend.</li>
		<li>Konsantre bakteriyel inoculum manyetik heyecan çubuğunu içeren bir 250 mL kabı transfer ve sürekli bir heyecan tabak 300 devirde üstüne karıştırın.</li>
		<li>Dikkatle konsantre bakteriyel inoculum (Örneğin, 1 × 1010 CFUs/mL) tam olarak 600 μL aktarım bir 1.6-mL kriyojenik flakon steril H2O tam olarak 300 μL ve 300 içeren bir pipet kullanarak μL steril gliserin; Mix ve-80 ° C'de depolayın Not: Gliserol muhafazası için gerekli deneysel sonuçlar yıkmak ve bu nedenle onu yıkamak gerekli olan aşırı ölüm neden olur.</li>
		<li>Kullanım için hazır olduğunuzda, oda sıcaklığında 10 dakika için örnek çözülme.</li>
		<li>1 mL 50 mL konik şişe aktarmak, 4.000 × g bakteri cips 5 min için de 9 mL steril PBS ve santrifüj ekleyin. Süpernatant Aspire edin ve PBS bulaşıcı inoculum için istenen toplama ulaşmak için uygun bir hacmine CFUs (CFUs/ml hisse senedi toplama donmuş 1 mL ×) önceden belirlenmiş miktar resuspend.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anesthetizing fareler
<ol><li>Ketamin/Xylazine Not: Anestezi ketamin/xylazine ile fare uyanır önce aşı yordamı tamamlamak için bu tekniği yeni araştırmacı için yeterli zaman sunan uzun bir süre vardır.<ol>
<li>Pharmaceutifcal sınıf PBS, 1 mL olarak 100 mg/mL ketamin hisse senedi çözüm 8,5 mL birleştirerek 10 mL enjekte edilebilir çözeltisi hazırlamak (son konsantrasyonu 10 mg/mL) ve 20 mg/mL Xylazine hisse senedi çözüm 0.5 mL (son konsantrasyonu 10 mg/mL).</li>
		<li>Enjeksiyonla mayi (IP) (Örneğin, bir 25-g fare için 250 μL) 10 μL/g yönetmek.</li>
		<li>Çünkü onların gözleri anestezi sırasında uzun bir süre zarar eğilimli ketamin/Xylazine ile anestezi fareler gözünde oftalmik merhem uygulamak.</li>
		<li>Fareyi bir kafese koyun ve anesteziden uyanana kadar izlemek. Not: sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan katılımsız bırakılmamalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isoflurane Not: Fare hızlı bir şekilde isoflurane kaynaklı anesteziden anestezi bu yöntemi yalnızca aşılama yordam yetkin olduktan sonra kullanılmalıdır yüzden indüksiyon odasından sonra kaldırılmakta uyan.<ol>
<li>Saf fareler ile oksijen akan bir uygun ölçekli indüksiyon odası yerleştirin.</li>
		<li>Odası tamamen kapalı sonra fareyi kullanarak hassas Buharlaştırıcı %4 (v/v) en az 5 min için isoflurane eklemek anestezi; anestezi indüksiyon odasından bir fare kaldırma ve anesteziden uyanmaya ne kadar süreceği ölçerek onaylamak (~ 60 s). Not: anestezi kez değişebilir üzerinde kurumsal yönergeleri dayalı ve bazı hayvanlar tam anestezi olmak için daha--dan 5 dk gerekebilir unutmayın.</li>
		<li>10 dakikaya kadar için anestezi isoflurane konsantrasyonu % 2-3 ayarlayarak korumak; anestezi toplam süresi ise > 15 dk, oftalmik merhem imzalat fareler gözler için geçerlidir.</li>
		<li>Bir kafes içinde fareyi getirin ve anestezi, adım 2.1 olduğu gibi gelen uyanana kadar izlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. aşı/hastalık fareler
<ol><li>İmzalat bir fare askıya alma, onun üst kesici dişler (Örneğin, diş ipi) güçlü, zayıf dizesini tarafından asılı bir yükseklikte sabit bir nesne için yaklaşık iki katı fare Gövde uzunluğu (Örneğin, 20 cm) çalışma yüzeyi (Örneğin yukarıda güvenli Laboratuvar tezgah).</li>
	<li>Fare dil steril, künt uçlu forseps kullanarak onun ağzından yavaşça çekin. Dil bir steril, eldivenli bir parmak fare dili yanlışlıkla kırma önlemek için transfer. Dil mastoidi erişmesine izin vermek ve inoculum tarafa, yutma engelleyen ağız dışında tutun.</li>
	<li>Fare dilini tutarak, 50-μL inoculum (bakteriyel süspansiyon) bir micropipette kullanarak mastoidi yerleştirin; mastoidi oral kavite ve farenks arka ağız kısmına doğru yer alır. Not: Sadece ilk durak micropipette tarihinde pipetting tarafından sıvı sunmak çok önemlidir. Fareyi birkaç saniye ne zaman inoculum içinde mastoidi yerleştirilir nefes; sonunda, yansımalı aspirasyon pnömoni enfeksiyonu neden olan akciğerlere giren sıvı ayırt edici çatırtı gürültü ile gösterilen bakteriyel süspansiyon nefes için fareyi neden olur.</li>
	<li>İnoculum kadar koymamış durumunda normal solunum engellemek, siklikla ağız ve inoculum sonraki soluma yoluyla yansımalı aspirasyon zorlamak için forseps ile çimdik için yeterli geri.</li>
	<li>Aşı sonra dil yayın, fare süspansiyon dizeden kaldırmak, bir kafese koyun ve anestezi, adım 2.1 olduğu gibi gelen uyanana kadar izlemek.</li>
</ol>4. hastalık ilerleme izleme
Not: hayvan acı nedeniyle, çeşitli göstergeler fareler can çekişen olunca belirtmek için kullanılmalıdır; ötenazi önceden onaylanmış bir IACUC protokol uyarınca bu tespiti takip yapılmalıdır; moribundity çeşitli işaretleri vücut ısısı, kilo kaybı, görünüm, yürüyüş ve kan (Örneğin, Istat üzerinden)9,10,11,12denelde edilebilir diğer biyolojik dahil, 13,14,15,16.
<ol><li>Daha önce onaylanmış IACUC Protokolü (Örneğin, servikal çıkığı tarafından takip CO2 ) göre fareler ötenazi.</li>
	<li>Akciğerlere trakea, pulmoner arter ve pulmoner ven yakın akciğerlere keserek euthanized fareden kaldırın.<ol>
<li>Mikroskobu<ol>
<li>Akciğerler (veya bölümünün) bir örnek kalıp içine yerleştirin.</li>
			<li>Örnek kalıp tamamen doku batış en uygun kesme sıcaklık (O.C.T.) karışımla doldurun.</li>
			<li>Örnek-80 ° C'de dondurmak</li>
			<li>Örnek bir patoloji laboratuvar bölümü ve slaytları Mikroskopi için bağlama için gönderin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bakteri yükü<ol>
<li>Akciğer dokusu bir analitik dengede tartın.</li>
			<li>Akciğer dokusu 50 mL konik flakon steril PBS (doku büyüklüğüne) 2-5 mL içeren aktarın.</li>
			<li>Akciğer doku doku homogenizer ile homojenize.</li>
			<li>Homogenate seri dilutions yaklaşık 1000 CFUs/beklenen bakteri yükü akciğerlerde dayalı mL, elde etmek için steril PBS gerçekleştirin.<ol>
<li>1 × 109 CFUs/mg bekleniyor, örneğin, üç 1: 100 dilutions gerçekleştirin: PBS ve girdap; 9.9 ml homogenate Transfer 100 μL ilk 1: 100 seyreltme bu. İlk 1: 100 seyreltme 100 μL PBS ve girdap 9.9 mL transfer; ikinci 1: 100 seyreltme bu. İkinci 1: 100 seyreltme 100 μL PBS ve girdap 9.9 mL transfer; Bu üçüncü ve son 1: 100 seyreltme var.</li>
				<li>Akciğerlerde bakteri yükü bilinmiyorsa, beklenen aralığı yakalamak için dilutions gerçekleştirebilirsiniz.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Steril agar üzerinde plaka dilution(s).<ol>
<li>Steril Tryptic soya suyu (TSB) agar (TSA) plakalı hazırlamak: birleştirin TSB 30 g, agar 15 g ve 1 litre su, mix ile manyetik karıştırıcı ve ısı ~ 100 ° C'de 5 dakika serin ve basınçlı kap üzerinde sıvı döngüsü için 15 dk. için soğutmak için izin ver sonra izin ver süreyle kaynar kadar ~ 55 ° C, transfer 10 mL taze autoclaved steril Petri yemekler, TSA ve oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. Kuru benchtop 2-5 d için üzerinde veya altında bir Biyogüvenlik 10 dakikadır kabine ortaya izin.</li>
				<li>Seyreltme 100 μL steril TSA içeren bir Petri kabına aktarın ve dağıtıcı veya cam boncuk kullanarak TSA yayılmış.</li>
				<li>Gecede 37 ° C'de Petri kabına bir oksijen kuluçka (yani, 37 ° C kuluçka makinesi su ele geçen bir 1-L kabı içeren) saklamak</li>
			</ol>
</li>
			<li>CFUs/mL akciğer homogenate üzerine agar kaplama göre belirler (Örneğin, yukarıda açıklanan üçüncü ve son seyreltme 100 μL ile TSA plaka üzerinde 100 CFUs 100 CFUs/100 μL × 100dil 1 × 100dil #2 × 100dil #3 olurdu = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>CFUs/mg akciğer doku CFUs/mL akciğer homogenate mg akciğer doku/mL homogenate (Eğer yukarıda açıklanan örnek 100 mg 5 mL PBS, sonra 1 × 109 CFUs/mL ÷ 100 mg / 5 mL = 5 × 107 homojenize akciğer dokusunun kullanılanÖrneğin, tarafından bölerek dayalı hesaplamak CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Spellberg, B., Talbot, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommended+Design+Features+of+Future+Clinical+Trials+of+Antibacterial+Agents+for+Hospital-Acquired+Bacterial+Pneumonia+and+Ventilator-Associated+Bacterial+Pneumonia.">Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia.</a> Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).</li><li>Kalil, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+Adults+With+Hospital-acquired+and+Ventilator-associated+Pneumonia:+2016+Clinical+Practice+Guidelines+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America+and+the+American+Thoracic+Society.">Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society.</a> Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).</li><li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia.">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).</li><li>Azoulay-Dupuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+efficacy+of+a+new+fluoroquinolone,+sparfloxacin,+against+penicillin-susceptible+and+-resistant+and+multiresistant+strains+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+mouse+model+of+pneumonia.">In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).</li><li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+pneumonia.">Animal models of human pneumonia.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).</li><li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry.">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).</li><li>Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+virulent+Acinetobacter+baumannii+to+reduce+variability+of+in+vivo+studies.">Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies.</a> BMC Microbiology. 15, 252 (2015).</li><li>Trammell, R. A., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+for+predicting+death+as+an+outcome+for+mice+used+in+infectious+disease+research.">Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research.</a> Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).</li><li>Bast, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia:+use+of+temperature+as+a+measure+of+disease+severity+to+compare+the+efficacies+of+moxifloxacin+and+levofloxacin.">Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).</li><li>Hankenson, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+loss+and+reduced+body+temperature+determine+humane+endpoints+in+a+mouse+model+of+ocular+herpesvirus+infection.">Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).</li><li>Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+endpoint+for+an+intranasal+invasive+pulmonary+aspergillosis+mouse+model.">Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model.</a> Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).</li><li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Exacerbates+Infection+via+Hyperinflammation+by+Signaling+through+TLR4+and+RAGE.">Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li><li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+Antibody+Protects+Against+Acinetobacter+baumannii+Infection+by+Enhancing+Bacterial+Clearance+and+Evading+Sepsis.">Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).</li><li>Cheng, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serotypes+5+and+8+capsular+polysaccharides+in+protection+against+Staphylococcus+aureus+in+murine+models+of+infection.">Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection.</a> Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).</li><li>Wong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+Pathophysiological+Overview+of+Acinetobacter+Infections:+a+Century+of+Challenges.">Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges.</a> Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).</li></ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Emin olmak için fare minyatür insanlar değildir. Fare modellerden elde edilen sonuçlar bağlamda kabul ve daha sonra insanlar, iki tür6arasındaki farklılıklar ve benzerlikler dayalı uygulanabilirliği için yorumlanır. Uygun fare zorlanma olarak seçmek önemlidir bazı diğerlerinden daha; bazı enfeksiyonlara daha yatkındır aynı seçim16patojen zorlanma için geçerlidir.
Enfeksiyonlar titiz ve son derece tekrarlanabilir biçimde g...

Alt solunum yolu enfeksiyonu dünyanın en ölümcül bulaşıcı hastalık ve ölüm gelişmekte olan ülkelerde1' deki en yaygın nedeni var. Genel olarak, bu enfeksiyonların fazla 3.2 milyon ölüm1için hesap. Buna ek olarak, nozokomiyal pnömoni sağlık edinsel enfeksiyonlar en yaygın ve en ölümcül formları arasında ve en antibiyotik dirençli patojenler2,3tarafından kaynaklanır. Tipik topluluk alınan her ikisi için bakteriyel pnömoni ve nozokomiyal pnömoni edinimi oropharyngeal içeriği aspirasyon alveoller içine yoldur. Bu hastalıklar genellikle eğitim için kullanılan fare modelleri burunici aşı4çok hedef kapalı komplikasyonlar ve hastalığı ile uyumsuz sinüzit ve fiziksel travma, gibi belirtiler neden akciğer dışında bakterilerin yatırmak, kullanın modelleri vardı insan ilerlemesinde taklit etmek için tasarlanmış. Diğer modelleri inhalasyon odalar ve daha doğru viral, tüberküloz ve fungal pnömoni taklit ama doğru bir şekilde tipik bakteriyel pnömoni edinmesinin normal rotanın özetlemek değil micromisting cihazlar kullanabilirsiniz.
Fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni modeli doğal yol ve patogenezinde bakteriyel pnömoni benzetimi yapmak için yararlı. Aşı tarafından 50 µL imzalat fareler bir pipet kullanarak mastoidi içine bakteriyel süspansiyon yansımalı aspirasyon ensues, hangi içinde zatürreeye sonuçlanır. Bu modeli kullanarak, bir zatürre neden olan patojen ve daha yüksek sadakat manken insanda gözlenen aspirasyon pnömoni enfeksiyonlara daha benzer bu hastalıklarla mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz. Ayrıca, ağız boşluğu5,6ile enfekte benzer modelleri farklı olarak tam inoculum nerede bu off-site inflamasyon ve gastrit gibi enfeksiyonlara neden olabilir bağırsak yerine akciğerlere ulaşır bu model sağlar ve enterit. Son olarak, Laringoskop gerektirir ve trakea7ile inoculates başka bir yayımlanmış modeli, aksine bu model hava yolu bir sonda ile besleme iğneyle engel değil ve enjeksiyon inoculum teslim edilmek üzere gerektirmez. Yerine, aşı üzerinde fare doğal aspirasyon refleks dayanır.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214530</td><td>Combine with TSB to make TSA</td></tr><tr><td>Beads, Borosilicate Glass</td><td>Kimble</td><td>135003</td><td>Sterilize by baking or autoclaving before each use</td></tr><tr><td>Beaker, 250 mL</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td>Used during precise aliquoting of concentrated bacterial inocula</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Sorvall</td><td>ST 40R</td><td>Capable of 4,000&amp;times;g at 4&amp;deg;C</td></tr><tr><td>Chamber for Anesthesia</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>VetFlo-0720</td><td>Accommodates up to 5 mice</td></tr><tr><td>Cryomold, Intermediate Size</td><td>Sakura Tissue-Tek</td><td>4566</td><td>Disposable vinyl specimen molds, 15&amp;times;15&amp;times;5 mm</td></tr><tr><td>Dental Floss</td><td>Oral-B</td><td>37000469537</td><td>Tie to stable post approx. 6&quot; above table height</td></tr><tr><td>Forceps</td><td>VWR</td><td>82027-440</td><td>Used to gently pull tongue out of mouse&#039;s mouth</td></tr><tr><td>Homogenizer for Lung Tissue</td><td>Omni International</td><td>TM125-115</td><td>Autoclave before first use; rinse between samples</td></tr><tr><td>Isoflurane for Anesthesia</td><td>Abbott</td><td>10015516</td><td>Alternative drug can be used; modify procedure accordingly</td></tr><tr><td>iSTAT Cartridge</td><td>Abbott</td><td>03P79-25</td><td>Various cartridges are available to suit your needs</td></tr><tr><td>Ketamine, 100 mg/mL</td><td>Western Medical Supply</td><td>4165</td><td>Dilute 1:10 in PBS to 1 mg/mL and combine with Xylazine at 1 mg/mL</td></tr><tr><td>Ointment for Eyes</td><td>Akorn</td><td>Tears Renewed</td><td>Avoid touching eye with tip of dispenser</td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Used to freeze lung samples at -80 &amp;deg;C to prepare for pathology sectioning</td></tr><tr><td>Petri Dish</td><td>VWR</td><td>25384-302</td><td>Polystyrene, disposable, sterilized, 100&amp;times;15 mm</td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>Dulbecco&#039;s PBS without calcium and magnesium</td></tr><tr><td>Pipette Tips, 200-&amp;mu;L</td><td>VWR</td><td>10017-044</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Pipetter, 200-&amp;mu;L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman P200</td><td>Autoclave and calibrate before use</td></tr><tr><td>Spreader, Bacterial Cell</td><td>Bel-Art</td><td>F377360006</td><td>Sterilize by baking or autoclaving before each use</td></tr><tr><td>Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter &amp;times; 38.1 mm Length</td><td>VWR</td><td>58948-150</td><td>Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting</td></tr><tr><td>Stir Plate, Magnetic</td><td>Corning</td><td>PC-620D</td><td>Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting</td></tr><tr><td>Tryptic Soy Broth (TSB)</td><td>BD</td><td>211822</td><td>Combine with Agar to make TSA</td></tr><tr><td>Vial, Conical, Sterile, 50 mL</td><td>Corning</td><td>431720</td><td>Used for preparing bacterial inocula</td></tr><tr><td>Vial, Conical, Sterile, 500 mL</td><td>Corning</td><td>431123</td><td>Used to concentrate inocula for preparing frozen inocula</td></tr><tr><td>Vial, Cryogenic, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430659</td><td>Used for cryogenic storage of concentrated bacterial inocula</td></tr><tr><td>Xylazine, 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>AnaSed Injection</td><td>Dilute 1:20 in PBS to 1 mg/mL and combine with Ketamine at 1 mg/mL</td></tr></tbody></table>

murine oropharyngeal aspiration model of ventilator-associated and hospital-acquired bacterial pneumonia

Fare enfeksiyon modelleri hastalık patogenezinde anlama ve etken patojenler ile mücadele için tasarlanmış yeni tedavi etkinliğinin sınamak için kritik öneme sahiptir. Zatürreeye klinikte Hastalar tarafından sunulan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor ve böylece bir uygun vivo içinde modeli garanti eder. Hedef kapalı komplikasyonlar ve sinüzit, gastrit, enterit, fiziksel travma veya aerosol taklit etmek için sis microparticle gibi belirtiler neden akciğer dışında aşırı organizmalar mevduat burunici aşılama tipik pnömoni modelleri kullanmak viral, tüberküloz veya mantar zatürreden daha normal yayıldı. Bu modeller patogenezinde bakteriyel pnömoni tipik topluluk veya sağlık-edinilen doğru bir şekilde yansıtmıyor. Buna ek olarak, bu fare modeli oropharyngeal aspirasyon pnömoni sağlık edinilen pnömoni damlacık rotasında taklit eder. Bakterilerin 50 µL aşı süspansiyon imzalat farelerin mastoidi içine pnömoni sonuçları yansımalı aspirasyon neden olur. Bu model ile bir zatürre neden olan patojen ve bu hastalıklar ile mücadele için yeni tedaviler patogenezinde inceleyebilirsiniz.

Dikkatli bir şekilde iletişim kuralı takip ederek, tekrarlanabilir ve sağlam verileri kolayca elde edilebilir. Kesinlikle bir özelleştirilmiş inoculum hazırlama protokolüne bir birbirleriyle karşılaştırılmak üzere deneyleri için uygun önemlidir. Düzgün işlemesine fareler enfeksiyon işlemi sırasında önemlidir. İsoflurane yoksun bir anestezi odasına fareler yerleştirdiğinizden emin olun. Fare ile isoflurane önceden dolu bir odaya girdiyseniz paniğe kapılmaz ve...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia at JoVE.com

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Zatürreeye insan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor. Hastalığın patogenezinde anlama ve Roman tedavi etkinliğinin sınamak için kritik bir uygun vivo içinde modelidir. Bu fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni model ile bir patogenez ve bu ölümcül enfeksiyonlara karşı yeni tedavi inceleyebilirsiniz.

Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

murine-oropharyngeal-aspiration-model-ventilator-associated-hospital

Research

JoVE Journal

Medicine

11.7K Görüntüleme.  University of Southern California. Zatürreeye insan en sık görülen enfeksiyonlar arasında yer alıyor. Hastalığın patogenezinde anlama ve Roman tedavi etkinliğinin sınamak için kritik bir uygun vivo içinde modelidir. Bu fare oropharyngeal aspirasyon pnömoni model ile bir patogenez ve bu ölümcül enfeksiyonlara karşı yeni tedavi inceleyebilirsiniz.

Video: Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

The Utilization of Oropharyngeal Intratracheal PAMP Administration and Bronchoalveolar Lavage to Evaluate the Host Immune Response in Mice

The host immune response to pathogens is a complex biological process. The majority of in vivo studies classically employed to characterize host-pathogen interactions take advantage of intraperitoneal injections of select bacteria or pathogen associated molecular patterns (PAMPs) in mice. While these techniques have yielded tremendous data associated with infectious disease pathobiology, intraperitoneal injection models are not always appropriate for host-pathogen interaction studies in the lung. Utilizing an acute lung inflammation model in mice, it is possible to conduct a high resolution analysis of the host innate immune response utilizing lipopolysaccharide (LPS). Here, we describe the methods to administer LPS using nonsurgical oropharyngeal intratracheal administration, monitor clinical parameters associated with disease pathogenesis, and utilize bronchoalveolar lavage fluid to evaluate the host immune response. The techniques that are described are widely applicable for studying the host innate immune response to a diverse range of PAMPs and pathogens. Likewise, with minor modifications, these techniques can also be applied in studies evaluating allergic airway inflammation and in pharmacological applications.

The host immune response to pathogen infection is a tightly regulated process. Utilizing a lipopolysaccharide lung exposure model in mice, it is possible to conduct high resolution evaluations of the complex mechanisms associated with disease pathogenesis.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

The host immune response to pathogens is a complex biological process. The majority of in vivo studies classically employed to characterize host-pathogen ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. Here we have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa or PA). Using this model, we were able to show lung inflammation at the early phase of injury. In addition, alveolar epithelial barrier leakiness was observed by analyzing bronchoalveolar lavage (BAL); and alveolar cell death was observed by Tunel assay using tissue prepared from injured lungs. At a later phase following injury, we observed cell proliferation required for the repair process. The injury was resolved 7 days from the initiation of P. aeruginosa injection. This model mimics the sequential course of lung inflammation, injury and repair during pneumonia. This clinically relevant animal model is suitable for studying pathology, mechanism of repair, following acute lung injury, and also can be used to test potential therapeutic agents for this disease.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, preferably in models which mimic the intended clinical indication. A method for inducing robust lung infections in immunocompetent rats and mice is described which allows for the assessment of treatments in a model of serious pneumonia caused by S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae or A. baumannii. Animals are anesthetized, and an agar-based inoculum is deposited deep into the lung via nonsurgical intratracheal intubation. The resulting infection is consistent, reproducible, and stable for at least 48 h and up to 96 h for most isolates. Studies with marketed antibacterials have demonstrated good correlation between in vivo efficacy and in vitro susceptibility, and concordance between pharmacokinetic/pharmacodynamic targets determined in this model and clinically accepted targets has been observed. Although there is an initial time investment when learning the technique, it can be performed quickly and efficiently once proficiency is achieved. Benefits of the model include elimination of the neutropenic requirement, increased robustness and reproducibility, ability to study more pathogens and isolates, improved flexibility in study design and establishment of a challenging infection in an immunocompetent host.

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;<i&gt; H. influenza</i&gt;<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ya da<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Akut Akciğer Hasarı Açık Trakeostomi Gastrik Asit Aspirasyon Fare Modeli Maksimal Akut Ölümcül olmayan Akciğer Hasarı Sonuçlar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Tıp

A Precise Pathogen Delivery and Recovery System for Murine Models of Secondary Bacterial Pneumonia

Secondary bacterial pneumonias following influenza infections consistently rank within the top ten leading causes of death in the United States. To date, murine models of co-infection have been the primary tool developed to explore the pathologies of both the primary and secondary infections. Despite the prevalence of this model, considerable discrepancies regarding instillation procedures, dose volumes, and efficacies are prevalent among studies. Furthermore, these efforts have been largely incomplete in addressing how the pathogen may be directly influencing disease progression post-infection. Herein we provide a precise method of pathogen delivery, recovery, and analysis to be used in murine models of secondary bacterial pneumonia. We demonstrate that intratracheal instillation enables an efficient and accurate delivery of controlled volumes directly and evenly into the lower respiratory tract. Lungs can be excised to recover and quantify the pathogen burden. Following excision of the infected lungs, we describe a method to extract high quality pathogen RNA for subsequent transcriptional analysis. This procedure benefits from being a non-surgical method of delivery without the use of specialized laboratory equipment and provides a reproducible strategy to investigate pathogen contributions to secondary bacterial pneumonia.

Here, we present methods to improve secondary bacterial pneumonia studies by providing a non-invasive route of instillation into the lower respiratory tract followed by pathogen recovery and transcript analysis. These procedures are reproducible and can be performed without specialized equipment such as cannulas, guide wires, or fiber optic cables.

Sekonder Bakteriyel Pnömoni Murine Modelleri için Hassas Patojen Dağıtım ve Kurtarma Sistemi

Secondary bacterial pneumonias following influenza infections consistently rank within the top ten leading causes of death in the United States. To date, ...

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic pathogen upon influenza A virus (IAV) infection. Advanced age enhances host susceptibility to secondary pneumococcal pneumonia and is associated with worsened disease outcomes. The host factors driving those processes are not well defined, in part due to a lack of animal models that reproduce the transition from asymptomatic colonization to severe clinical disease. 
This paper describes a novel mouse model that recreates the transition of pneumococci from asymptomatic carriage to disease upon viral infection. In this model, mice are first intranasally inoculated with biofilm-grown pneumococci to establish asymptomatic carriage, followed by IAV infection of both the nasopharynx and lungs. This results in bacterial dissemination to the lungs, pulmonary inflammation, and obvious signs of illness that can progress to lethality. The degree of disease is dependent on the bacterial strain and host factors. 
Importantly, this model reproduces the susceptibility of aging, because compared to young mice, old mice display more severe clinical illness and succumb to disease more frequently. By separating carriage and disease into distinct steps and providing the opportunity to analyze the genetic variants of both the pathogen and the host, this S. pneumoniae/IAV co-infection model permits the detailed examination of the interactions of an important pathobiont with the host at different phases of disease progression. This model can also serve as an important tool for identifying potential therapeutic targets against secondary pneumococcal pneumonia in susceptible hosts.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

This paper describes a novel mouse model for the transition of pneumococcus from an asymptomatic colonizer to a disease-causing pathogen during viral infection. This model can be readily adapted to study polymicrobial and host-pathogen interactions during the different phases of disease progression and across various hosts.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Experimental Model to Evaluate Resolution of Pneumonia

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) causes acute lung injury, characterized by rapid alveolar damage and severe hypoxemia. This, in turn, leads to high morbidity and mortality. Currently, there are no pre-clinical models that recapitulate the complexity of human ARDS. However, infectious models of pneumonia (PNA) can replicate the main pathophysiological features of ARDS. Here, we describe a model of PNA induced by the intratracheal instillation of live Streptococcus pneumoniae and Klebsiella pneumoniae in C57BL6 mice. In order to evaluate and characterize the model, after inducing injury, we carried out serial measurements of body weight and bronchoalveolar lavage (BAL) for measuring markers of lung injury. Additionally, we harvested lungs for cell count and differentials, BAL protein quantification, cytospin, bacterial colony-forming unit counts, and histology. Lastly, high dimensional flow cytometry was performed. We propose this model as a tool to understand the immune landscape during the early and late resolution phases of lung injury.

This manuscript describes the establishment of an infectious model of pneumonia in mice and the respective characterization of injury resolution along with methods for growing bacteria and intratracheal instillation. A novel approach using high-dimensional flow cytometry to evaluate the immune landscape is also described.

Pnömoni Çözünürlüğünü Değerlendirmek için Deneysel Model

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) causes acute lung injury, characterized by rapid alveolar damage and severe hypoxemia. This, in turn, leads to ...

Solunum Yolu Enfeksiyonu Çalışmaları için Çip Üzerinde Akciğer Modeli Oluşturulması

Immunocompetent Alveolus-on-Chip Model for Studying Alveolar Mucosal Immune Responses

We introduce an advanced immunocompetent lung-on-chip model designed to replicate the human alveolar structure and function. This innovative model employs a microfluidic-perfused biochip that supports an air-liquid interface mimicking the environment in the human alveoli. Tissue engineering is used to integrate key cellular components, including endothelial cells, macrophages, and epithelial cells, to create a representative tissue model of the alveolus. The model facilitates in-depth examinations of the mucosal immune responses to various pathogens, including viruses, bacteria, and fungi, thereby advancing our understanding of lung immunity. The primary goal of this protocol is to provide details for establishing this alveolus-on-chip model as a robust in vitro platform for infection studies, enabling researchers to closely observe and analyze the complex interactions between pathogens and the host's immune system within the pulmonary environment. This is achieved through the application of microfluidic-based techniques to simulate key physiological conditions of the human alveoli, including blood flow and biomechanical stimulation of endothelial cells, alongside maintaining an air-liquid interface crucial for the realistic exposure of epithelial cells to air. The model system is compatible with a range of standardized assays, such as immunofluorescence staining, cytokine profiling, and colony-forming unit (CFU)/plaque analysis, allowing for comprehensive insights into immune dynamics during infection. The Alveolus-on-chip is composed of essential cell types, including human distal lung epithelial cells (H441) and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) separated by porous polyethylene terephthalate (PET) membranes, with primary monocyte-derived macrophages strategically positioned between the epithelial and endothelial layers. The tissue model enhances the ability to dissect and analyze the nuanced factors involved in pulmonary immune responses in vitro. As a valuable tool, it should contribute to the advancement of lung research, providing a more accurate and dynamic in vitro model for studying the pathogenesis of respiratory infections and testing potential therapeutic interventions.

Yazar Spotlight: İnsan Bağışıklık Tepkisi ve Enfeksiyon Mekanizmalarının Derinlemesine İncelenmesi için Mikroakışkan Çip Üzerinde Akciğer Modeli Geliştirme

Lung-on-chip models surpass traditional 2D cultures by mimicking the air-liquid interface and endothelial cell perfusion, simulating blood flow and nutrient exchange crucial for lung physiology studies. This enhances lung research relevance, offering a dynamic, physiologically accurate environment to advance the understanding and treatment of respiratory infections.

Alveolar mukozal immün yanıtları incelemek için immünokompetan alveol-çip üzerinde model

We introduce an advanced immunocompetent lung-on-chip model designed to replicate the human alveolar structure and function. This innovative model employs ...

Fare Oropharyngeal aspirasyon modeli Ventilatör ilişkili ve hastane edinilen bakteriyel pnömoni

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler