Bu çalışmada bölme, Intramural araştırmaya, Ulusal Enstitüsü Hemşirelik araştırma NIH, Bethesda, Maryland, tam olarak desteklenir.

Çalışmada (NCT00852111) Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB tarafından) ulusal kurumları, sağlık (NIH), Bethesda, Maryland kabul edildi. Bu çalışmada kayıtlı katılımcılar ötimik adamları, 18 yaş yaş ve üstü, kim sigara metastatik prostat kanseri ile veya olmadan önceki prostatektomi tanısı konuldu ve vardı dış beam radyasyon terapisi (EBRT) almak üzere zamanlanmış. Potansiyel katılımcılar hariç onlar önemli yorgunluk, neden olabilir ilerleyici bir hastalık olsaydı, psikiyatrik hastalık son beş yıl içinde vardı düzeltilmeyen hipotiroidizm veya anemi, ya da ikinci bir malignite vardı. Sakinleştirici, steroidler veya non-steroid anti-enflamatuar ajanlar kullanılan bireyler de dışlandı. Sağlıklı kontrol kan örnekleri, NIH nakli bölümü tıp bir IRB tarafından onaylanan Protokolü (NCT00001846) altında sağlıklı bağışçılardan elde edilmiştir. Tüm katılımcılar NIH Magnuson klinik araştırma Merkezi'nde yaşında işe alınmış. İmzalı yazılı bilgilendirilmiş izinlerin çalışma katılım önce elde edilmiştir.
1. mitokondriyal işlev ölçüm hazırlık (1. gün deneme)
<ol><li>Sensör kartuş hidrat (süresi yaklaşık Malzemeler tablo; görmek: 5 dk).<ol>
<li>Sensör kartuşu paketinden çıkarın. Yardımcı program plaka her kuyuya 200 μL Calibrant çözüm ekleyin, sonra her hendek 400 μL Calibrant çözüm ile doldurun.</li>
		<li>Şimdi Calibrant çözüm var yardımcı programı plaka sensörü plaka dönün. Kartuş sigara-CO2 37 ° C kuluçka gecede hidrat. Not: Sensör kartuş 4 h en az ve en fazla 72 h için nemli gerekiyor.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Klinik numune hazırlama (2. gün deneme)
<ol><li>Yorgunluk 13 maddelik işlevsel değerlendirme, kronik hastalık tedavisi - temel (önce EBRT başlatma), orta nokta ve tamamlanması EBRT ve 1 yıl sonrası-EBRT, yorgunluk (FACIT-K)2,23,24 kullanarak ölçmek.<ol>
<li>Kullanım a 0 - 4 ölçek nerede bir 0 "hiç de" temsil eder ve bir 4 davalı için karşılık gelen deyimi "çok fazla" ilgilidir her madde yanıt için Toplam puanları ile daha düşük Skorlar yüksek yorgunluk şiddeti yansıtan 16-53, mesafe.</li>
		<li>Yorgunluk bir FACIT-F 43 düşük puan ≥43 yokluğu veya klinik-rağmen anlamlı olmayan yorgunluk2gösteren FACIT-F puanı olarak tanımlayın. Not: 43 en iyi FACIT-F puan yorgunluk puanları kanser hastaları ve genel nüfus2böler.</li>
		<li>FACIT yorgunluk ölçeğinde aşağıdaki 13 bileşen içerir: 1) yorgun; hissediyorum 2) her yerde güçsüz hissediyorum; 3) Ben bitkin hissediyorum ("yıkanmış"); 4) kendimi yorgun hissediyorum; 5) ben yorgun olduğum için işler başladı sorun var; 6) ben yorgun olduğum için şeyler bitirme sorun var; 7) ben enerji var; 8) Ben her zamanki benim faaliyetleri yapmak am güçlü; 9) gündüz uyumak istiyorum; 10) yemek için çok yorgunum; 11) benim her zamanki faaliyetleri yaparken yardıma ihtiyacım var; 12) ben çok yapmak istediğim şeyleri yapmak için yorgun tarafından hayal kırıklığına; ve 13) yorgun olduğum için benim sosyal etkinlik sınırlamak zorunda.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBMC taze toplanan kan örneklerinden izole (yaklaşık süre: 1 h).<ol>
<li>8 mL kan mononükleer hücreler hazırlık tüp içine toplamak ( Tablo malzemelerigörmek). Not: Kan örnekleri içinde 2 h koleksiyonunun işlenmesi gerektiğini. Kan örnekleri daha 2 h örnek toplandıktan sonra işlenirse PBMCs kalitesini tehlikeye olabilir.</li>
		<li>1750 x g (18-25 ° C) Oda sıcaklığında 30 dakika, santrifüj kapasitesi. Bulutlu katman 15 mL konik tüp aktarın. PBS ilâ 15 mL ekleyin ve 5 kez tersine çevirin.</li>
		<li>300 x g de 4 ° C'de 15 dakika santrifüj kapasitesi Dikkatle kaldırmak ve süpernatant rahatsız edici Pelet olmadan. Pelet ilâ 10 mL PBS ekleyerek yeniden askıya alma ve 5 kez tersine çevirin.</li>
		<li>4 ° C'de 10 dakika için 300 x g, santrifüj Süpernatant sıvı atın ve 1 mL PBS hücrelerde yeniden askıya alma. PBMCs 1.5 mL microfuge tüp aktarın.</li>
		<li>610 x g de 10 dakika santrifüj kapasitesi. Dikkatle süpernatant kaldırmak ve Pelet tam RPMI-1640 yılında resuspend (RPMI-%1640 10 ile desteklenmiş FBS, 10 mM penisilin/streptomisin).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kat hücre plakaları yapışık olmayan hücreler için (yaklaşık süresi: 30 dk).<ol>
<li>Hücre ve doku yapıştırıcı çözüm hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek) 0.1 M sodyum bikarbonat pH 8.0 hisse senedi çözümde sulandrarak tarafından. Çalışma çözüm 3,5 μg/cm2 yüzey alanının adlı olmalıdır. Not: Bu çözüm deniz midyesi, Mytilus mantarı--dan hulâsa polifenolik proteinleri içerir. Bu proteinler kendisi yüzeylere tutturmak midye tarafından salgılanan tutkal anahtar bileşenleridir. Biz hücre-Tak PBMCs ile en uygun bulmak.</li>
		<li>Her şey için yapıştırıcı seyreltilmiş çözeltinin 100 μL ekleyin ve oda sıcaklığında en az 20 dk için kuluçkaya. Üç kez DI su ve hava ile kuru yıkayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. mitokondriyal işlev ölçüm
<ol><li>Tahlil medya hazırlanması (yaklaşık süre: 10 dk.). Not: Tahlil medya denemenin gün taze hazırlanmalıdır.<ol>
<li>L-glutamine, pyruvate ve glikoz medya (aynı bileşenlerin Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) olarak, ama sodyum bikarbonat, glikoz, glutamin veya sodyum pyruvate olmadan) üsse tahlil medya yapmak için ekleyin. Medya ısınmak için 37 ° C, sonra pH 7.4 için ayarlayın. Not: L-glutamine, pyruvate ve şekeri konsantrasyonları normal büyüme medya konsantrasyonlarda genellikle aynıdır, ancak üzerinde tahlil göre ayarlanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBMCs Mito stres test için hazırlamak (yaklaşık süre: 2 h).<ol>
<li>Adım 2 yeterli PBMCs % 80-90 confluency ulaşmak için her kuyuya plaka. Deneyim, 1.5 x 105 hücreleri/iyi en tutarlı sonuçlar vermiştir. Not: Kuyu A ve H arka plan kuyu vardır ve yalnızca tahlil medya ile hiçbir hücre içermelidir. Wells B G için en az 3-6 kuyu hasta örnek başına outliers için hesap için kaplama öneririz.</li>
		<li>Tabak iyi spin aşağı 200 x g hücreleri kuyu dibine bağlı kalmak izin vermek 2 min için de. Hücreleri bir kez tahlil medya ile yıkayın. Bu adımı serum ve sodyum bikarbonat büyüme medyasından kaldırır. Not: deneyim, çamaşır adım genellikle 20-%30 hücre kaldırır.</li>
		<li>Bir sigara-CO2 37 ° C kuluçka 45-60 dk için arka plan kuyu A ve H. Incubate dahil olmak üzere her kuyuya 180 μL tahlil medya ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mito stres testi çalıştırma<ol>
<li>Uyuşturucu Mito stres seti tahlil medya ile aşağıdaki gibi yeniden oluşturma:<ol>
<li>Oligomycin: 252 μL tahlil medya 50 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine ekleyin.</li>
			<li>FCCP: 288 μL tahlil medya 50 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine ekleyin.</li>
			<li>Antimycin A / Rotenon: 216 eklemek μL tahlil medya 25 mikron hisse senedi bir çözüm üretmek için şişe içine.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Girdap uyuşturucu yaklaşık 1 dakika için yeniden düzenlendi. Çalışma çözümlerinizle sulandırmak. Not: Çalışma çözümleri konsantrasyonları titre ve önceden belirlenen hücre türüne bağlı olarak deney öncesinde gerekir. PBMCs için biz Oligomycin bu 1 mikron, 1 mikron FCCP ve 0.5 mikron antimycin A bulmak / Rotenon en iyi iş.</li>
		<li>Uyuşturucu her bağlantı noktasına sensör kartuşundaki pipette sırayla:<ol>
<li>Bağlantı noktası A: Pipet 20 μL 10 mikron, Oligomycin, 1 mikron her iyi son bir konsantrasyon için.</li>
			<li>Bağlantı noktası B: 10 mikron FCCP, 1 mikron her iyi son bir konsantrasyon pipet 22 μL.</li>
			<li>Bağlantı noktası C: Pipet 25 μL 5 mikron antimycin A, / Rotenon 0.5 mikron her iyi son bir konsantrasyon için.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>"Mito stres testi" hücre dışı akı enstrüman üzerinde seçin. Enstrüman istemi izleyin ve sensör kartuşu takın. Araç kalibrasyon etiket sensörü otomatik olarak gerçekleştirir. Kalibrasyon etiket sensörü ve enstrüman tahlil kalan bitirdikten sonra hücre montaj levhası. Oksijen dynamics 530 ölçülen nm (uyarma) / 650nm (emisyon), ve proton konsantrasyon 470 ölçülen nm (uyarma) / 530 nm (emisyon).</li>
</ol>4. mitokondriyal işlev veri normalleştirme
<ol><li>Hücre çoğalması tahlil çözüm hazırlamak (yaklaşık süresi: 5 dk).<ol>
<li>48 μL nükleik asit leke (500 x) ve 240 μL arka plan bastırıcı 11.7 mL PBS ekleyin (2 x). Nükleik asit leke bir hücre permeant DNA'ya bağlanıcı boya ve arka plan bastırıcı ölü hücreleri veya hücre lekeli üzerinden güvenliği aşılan hücre zarının bütünlüğü ile bloklar maskeleme boya. DNA'ya bağlanıcı boya ve arka plan bastırıcı yalnızca canlı hücreleri lekeli sağlar.</li>
		<li>Mito stres testi tamamlandıktan sonra her şey ortamda doğrudan çalışma çözüm (180 μL) x 2 eşit miktarda ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreleri hücre proliferasyonu tahlil çözümü için 45-60 dk. miktarını canlı hücre (floresan) 508, plaka okuyucu sayısı 37 ° C kuluçka huzurunda kuluçkaya nm (uyarma) / 527 nm (emisyon) ve OCR verileri normalleştirmek (yaklaşık süre: 10 dk.) . Not: numara canlı hücreleri ek olarak, kullanıcılar aynı zamanda onların veri hücreleri toplam sayısı, nükleik asit, protein konsantrasyonları, vbmiktarı ile normalize etmek seçebilirsiniz.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Berger, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-Related+Fatigue,+Version+2.2015.">Cancer-Related Fatigue, Version 2.2015.</a> Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 13 (8), 1012-1039 (2015).</li><li>Feng, L. R., Dickinson, K., Kline, N., Saligan, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+phenotyping+approaches+lead+to+dissimilar+biologic+profiles+in+men+with+chronic+fatigue+following+radiation+therapy.">Different phenotyping approaches lead to dissimilar biologic profiles in men with chronic fatigue following radiation therapy.</a> Journal of Pain and Symptom Management. 52 (6), 832-840 (2016).</li><li>Feng, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Predictors+of+Fatigue+in+Men+With+Non-Metastatic+Prostate+Cancer+Receiving+External+Beam+Radiation+Therapy.">Clinical Predictors of Fatigue in Men With Non-Metastatic Prostate Cancer Receiving External Beam Radiation Therapy.</a> Clinical Journal of Oncology Nursing. 19 (6), 744-750 (2015).</li><li>Feng, L. R., Wolff, B. S., Lukkahatai, N., Espina, A., Saligan, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploratory+Investigation+of+Early+Biomarkers+for+Chronic+Fatigue+in+Prostate+Cancer+Patients+Following+Radiation+Therapy.">Exploratory Investigation of Early Biomarkers for Chronic Fatigue in Prostate Cancer Patients Following Radiation Therapy.</a> Cancer Nursing. 40 (3), 184-193 (2017).</li><li>Myhill, S., Booth, N. E., McLaren-Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+fatigue+syndrome+and+mitochondrial+dysfunction.">Chronic fatigue syndrome and mitochondrial dysfunction.</a> International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2 (1), 1-16 (2009).</li><li>Pernas, L., Scorrano, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mito-Morphosis:+Mitochondrial+Fusion,+Fission,+and+Cristae+Remodeling+as+Key+Mediators+of+Cellular+Function.">Mito-Morphosis: Mitochondrial Fusion, Fission, and Cristae Remodeling as Key Mediators of Cellular Function.</a> Annual Review of Physiology. 78 (1), 505-531 (2016).</li><li>Vecchiet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+characterization+of+somatic+parietal+tissues+in+humans+with+chronic+fatigue+syndrome.">Sensory characterization of somatic parietal tissues in humans with chronic fatigue syndrome.</a> Neuroscience Letters. 208 (2), 117-120 (1996).</li><li>Jones, D. E. J., Hollingsworth, K. G., Taylor, R., Blamire, A. M., Newton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormalities+in+pH+handling+by+peripheral+muscle+and+potential+regulation+by+the+autonomic+nervous+system+in+chronic+fatigue+syndrome.">Abnormalities in pH handling by peripheral muscle and potential regulation by the autonomic nervous system in chronic fatigue syndrome.</a> Journal of Internal Medicine. 267 (4), 394-401 (2010).</li><li>Feng, L. R., Suy, S., Collins, S. P., Saligan, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TRAIL+in+fatigue+induced+by+repeated+stress+from+radiotherapy.">The role of TRAIL in fatigue induced by repeated stress from radiotherapy.</a> Journal of Psychiatric Research. 91, 130-138 (2017).</li><li>Karamercan, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+peripheral+blood+mononuclear+cells+be+used+as+a+proxy+for+mitochondrial+dysfunction+in+vital+organs+during+hemorrhagic+shock+and+resuscitation.">Can peripheral blood mononuclear cells be used as a proxy for mitochondrial dysfunction in vital organs during hemorrhagic shock and resuscitation.</a> Shock. 40 (6), (2013).</li><li>Ijsselmuiden, A. J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+white+blood+cells+and+platelets+amplify+oxidative+stress+in+heart+failure.">Circulating white blood cells and platelets amplify oxidative stress in heart failure.</a> Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine. 5, 811 (2008).</li><li>Kong, C. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+mitochondrial+alterations+after+cardiac+surgery+involving+cardiopulmonary+bypass:+Clinical+correlations.">Leukocyte mitochondrial alterations after cardiac surgery involving cardiopulmonary bypass: Clinical correlations.</a> Shock. 21 (4), 315-319 (2004).</li><li>Straub, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+and+immune+system+prompt+energy+shortage+in+chronic+inflammation+and+ageing.">The brain and immune system prompt energy shortage in chronic inflammation and ageing.</a> Nature Reviews Rheumatology. 13, 743 (2017).</li><li>Kuhnke, A., Burmester, G., Krauss, S., Buttgereit, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioenergetics+of+immune+cells+to+assess+rheumatic+disease+activity+and+efficacy+of+glucocorticoid+treatment.">Bioenergetics of immune cells to assess rheumatic disease activity and efficacy of glucocorticoid treatment.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 62 (2), 133-139 (2003).</li><li>Kramer, P. A., Ravi, S., Chacko, B., Johnson, M. S., Darley-Usmar, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+mitochondrial+and+glycolytic+metabolism+in+human+platelets+and+leukocytes:+Implications+for+their+use+as+bioenergetic+biomarkers.">A review of the mitochondrial and glycolytic metabolism in human platelets and leukocytes: Implications for their use as bioenergetic biomarkers.</a> Redox Biology. 2, 206-210 (2014).</li><li>Garrabou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effects+of+Sepsis+on+Mitochondria.">The Effects of Sepsis on Mitochondria.</a> The Journal of Infectious Diseases. 205 (3), 392-400 (2012).</li><li>Mittal, M., Siddiqui, M. R., Tran, K., Reddy, S. P., Malik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+in+inflammation+and+tissue+injury.">Reactive oxygen species in inflammation and tissue injury.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 20 (7), 1126-1167 (2014).</li><li>Adrie, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+Membrane+Potential+and+Apoptosis+Peripheral+Blood+Monocytes+in+Severe+Human+Sepsis.">Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Peripheral Blood Monocytes in Severe Human Sepsis.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164 (3), 389-395 (2001).</li><li>Traba, J., Miozzo, P., Akkaya, B., Pierce, S. K., Akkaya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+to+analyze+glycolysis+and+mitochondrial+respiration+in+lymphocytes.">An optimized protocol to analyze glycolysis and mitochondrial respiration in lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54918 (2016).</li><li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells.">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2511 (2010).</li><li>Van den Bossche, J., Baardman, J., de Winther, M. P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+characterization+of+polarized+M1+and+M2+bone+marrow-derived+macrophages+using+real-time+extracellular+flux+analysis.">Metabolic characterization of polarized M1 and M2 bone marrow-derived macrophages using real-time extracellular flux analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), e53424 (2015).</li><li>Boutagy, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+isolated+mitochondria+from+minimal+quantities+of+mouse+skeletal+muscle+for+high+throughput+microplate+respiratory+measurements.">Using isolated mitochondria from minimal quantities of mouse skeletal muscle for high throughput microplate respiratory measurements.</a> Journal of Visualized Experiments. (104), e53216 (2015).</li><li>Yellen, S. B., Cella, D. F., Webster, K., Blendowski, C., Kaplan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fatigue+and+other+anemia-related+symptoms+with+the+Functional+Assessment+of+Cancer+Therapy+(FACT)+measurement+system.">Measuring fatigue and other anemia-related symptoms with the Functional Assessment of Cancer Therapy (FACT) measurement system.</a> Journal of Pain and Symptom Management. 13 (2), 63-74 (1997).</li><li>Yost, K. J., Eton, D. T., Garcia, S. F., Cella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+important+differences+were+estimated+for+six+Patient-Reported+Outcomes+Measurement+Information+System-Cancer+scales+in+advanced-stage+cancer+patients.">Minimally important differences were estimated for six Patient-Reported Outcomes Measurement Information System-Cancer scales in advanced-stage cancer patients.</a> Journal of Clinical Epidemiology. 64 (5), 507-516 (2011).</li><li>Kang, J. -. G., Wang, P. -. y., Hwang, P. M., Galluzzi, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Enzymology. 542, 209-221 (2014).</li><li>Chacko, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+defining+distinct+bioenergetic+profiles+in+platelets,+lymphocytes,+monocytes,+and+neutrophils,+and+the+oxidative+burst+from+human+blood.">Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood.</a> Laboratory Investigation. 93 (6), 690-700 (2013).</li><li>Jones, L. J., Gray, M., Yue, S. T., Haugland, R. P., Singer, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+determination+of+cell+number+using+the+CyQUANT&#174;+cell+proliferation+assay.">Sensitive determination of cell number using the CyQUANT&#174; cell proliferation assay.</a> Journal of Immunological Methods. 254 (1), 85-98 (2001).</li><li>Hartman, M. -. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+mitochondrial+oxygen+consumption+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+to+vascular+function+in+type+2+diabetes+mellitus.">Relation of mitochondrial oxygen consumption in peripheral blood mononuclear cells to vascular function in type 2 diabetes mellitus.</a> Vascular Medicine. 19 (1), 67-74 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Yorgunluk kanser hastalarında iyi tanımlanmış değil veya1ile karakterize zayıflatıcı bir durumdur. Yorgunluk tanısında tamamen öznel raporlama kullanır ve hiçbir geçerli tanılama standart ya da tedavi için bu durum, büyük ölçüde onun pathobiology2anlayış eksikliği nedeniyle. Kanser hastalarında yorgunluk temel önerilen mekanizmaları, mitokondriyal işlev bozukluğu en tedavi amaçlı targetable yollar biridir. Bu nedenle, biz proaktif hasta yorgun...

Yorgunluk, kanser hastaları1yaşam kalitesi üzerinde olumsuz bir etkisi vardır yaygın ve üzücü bir durumdur. Bu tarihe kanser yorgunluk kötü tanımlanmış kalır ve sadece öznel hastalar2tarafından raporlama üzerinde dayanır. Bu nedenle, yorgunluk klinik ayarı3,4objektif olarak niteleyen bir kolayca uyarlanabilir tanılama laboratuvar testi tanımlamak için acil bir ihtiyaç vardır.
Mitokondri disfonksiyon, dahil olmak üzere birden çok temel mekanizmaları yorgunluk5neden önerilen. Mitokondri hücresel enerji ihtiyacı ile Oksidatif fosforilasyon, % 95'i sağlayan elektrik santrali organelleri ve kalsiyum sinyal, apoptozis, bağışıklık sinyal ve diğer hücre içi sinyal olaylar6 düzenlenmesi önemli bir rol oynamak . Buna göre Engelli mitokondriyal bioenergetics ve enerji üretim hatalarını yorgunluk için katkıda bulunabilir. Bu hipotezi destekleyen, önceki çalışmalarda kronik yorgunluk sendromu7olan hastalarda mitokondriyal DNA'da mutasyonlar gözlemledim. Olup merkezi sinir sistemi veya iskelet kasları8,9gibi periferik doku içinde yorgunluk patofizyolojik kökeni yatıyor belirsiz kalırken işte şu anda doğru değerlendirmek için doğrudan Yöntem Mitokondrial disfonksiyon canlı, respiring hücrelerdeki yorgunluk ile ilgili.
Mitokondriyal işlev çalışmaya periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) kullanarak birçok avantaj sunar. İlk olarak, PBMCs standart flebotomi kullanarak klinik ortamda kullanılabilir ve hızlı bir şekilde temel laboratuvar teknikleri kullanarak ayrılmış olabilir. İkinci olarak, kan diğer dokulara kas biyopsisi gibi toplama daha az invaziv oluşur. Böylece, kan örnekleri aynı hastadan art arda tedavisinin etkileri boyuna değerlendirilmesi kolaylaştırır zaman içinde toplanabilir. İlginçtir, PBMCs mitokondriyal işlevde de bir hayvan modeli10böbrek mitokondrial durumu ile ilişkili olduğu ortaya çıktı. Ayrıca, bağışıklık hücre mitokondri farklı hastalık koşulları11,12altında sistemik değişiklikleri algılamak için bir proxy olarak kullanılmaya başlandı. Mitokondri bağışıklık hücreleri dolaşan içinde özellikle bağışıklık işlevlerindeki değişikliklere duyarlı ve bağışıklık sitokinler13,14,15gibi moleküller sinyal vardır. Örneğin, PBMCs hastalarda akut romatizmal inflamatuar hastalıklar ile yüksek temel oksijen tüketimi14sergi gözlenmiştir. Buna ek olarak, oksijen tüketimi sepsis16dahil olmak üzere sistemik inflamatuar koşullar ile hastalardan izole PBMCs düşürüldü. İnflamatuar koşullar altında serbest radikaller tarafından işlevsiz mitokondri üretilen daha fazla yüksek oksidatif stres ve uzun süreli iltihap17için katkıda bulunabilir. Mitokondri oksidatif stres gibi enerji üretiminde de merkezi rol yorgunluk kanser hastaların 13' te çalışmak için bir proxy olarak mitokondriyal işlev kullanarak potansiyel yardımcı programı öneriyor.
Mitokondriyal işlev inceleyerek önceki çalışmalarda kullanılan biyokimyasal teknikleri, mitokondrial membran potansiyeli ölçüm veya klinik ayarı5', kolayca adapte olmayabilir belirli hücre popülasyonlarının yalıtım 14,18. Son yıllarda, hücre dışı akı deneyleri gelişimi araştırmacılar için kolayca izin verdi ve doğru bir şekilde yanıt olarak solunum inhibitörleri19,20 otomatik enjeksiyon oksijen tüketim oranını (OCR) değişiklikleri incelemek , 21 , 22. ancak, bu çalışmaların en belirli hücre tipleri için tasarlanmıştır ve yüksek üretilen iş büyüklüğündeki bir klinik ortamda geçerli olmayabilir. Bu makale, klinik kullanım için mitokondriyal işlev incelenmesi için en iyi duruma getirilmiş bir protokol açıklar.

<table><tbody><tr><td>CPT Mononuclear Cells Preparation Tube&amp;nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>362761</td><td>For isolating PBMCs following phlebotomy</td></tr><tr><td>RPMI-1640&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>10-040</td><td>For making growth media for PBMCs</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Corning</td><td>35-010-CV</td><td>For making growth media for PBMCs</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>ThermoFisher</td><td>15140122</td><td>For making growth media for PBMCs</td></tr><tr><td>Cell-Tak</td><td>Corning</td><td>354240</td><td>Cell and Tissue adhesive solution; allows suspension cells to adhere to the surface</td></tr><tr><td>Seahorse XF Calibrant Solution</td><td>Agilent</td><td>103059-000</td><td>For hydrating cartridges</td></tr><tr><td>XFp Fluxpak (miniplates and sensor cartridges)</td><td>Agilent</td><td>103022-100</td><td>Contains XFp cell culture miniplates and sensor cartridges</td></tr><tr><td>XF base media</td><td>Agilent</td><td>103335-100</td><td>For making XF assay media</td></tr><tr><td>45% cell culture D-(+)-Glucose solution</td><td>Corning</td><td>25-037-CI</td><td>For making XF assay media</td></tr><tr><td>Sodium pyruvate solution</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>25-000-CI</td><td>For making XF assay media</td></tr><tr><td>L-glutamine solution</td><td>ThermoFisher</td><td>25030081</td><td>For making XF assay media</td></tr><tr><td>Seahorse XFp Mito Stress Test Kit</td><td>Agilent</td><td>103010-100</td><td>Contains oligomycin, FCCP, antimycin A/rotenone</td></tr><tr><td>CyQUANT Direct Cell Proliferation Assay</td><td>ThermoFisher</td><td>C35011</td><td>For quantification of live cells and data normalization</td></tr><tr><td>Seahorse XFp Analyzer</td><td>Agilent</td><td>S7802AEA</td><td>For measuring mitochondrial function in live cells</td></tr><tr><td>Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader (or any instrument that can quantify fluorescent cells in a plate)</td><td>BioTek</td><td>BTCYT5PV</td><td>For quantification of live cells and data normalization</td></tr></tbody></table>

evaluating the role of mitochondrial function in cancer-related fatigue

Yorgunluk bir ortak ve çoğu kanser hastaları etkileyen durum zayıflatıcı olduğunu. Bugüne kadar bu durumun şiddetini ölçmek için objektif yorgunluk kalır kötü hiçbir tanı ile karakterize sınayın. Burada PBMCs yorgun kanser hastalarına toplanan mitokondriyal işlev değerlendirmek için en iyi duruma getirilmiş bir yöntemi açıklanmaktadır. Bir kompakt ekstraselüler akı sistemi ve solunum inhibitörleri sıralı enjeksiyon kullanma, biz PBMC mitokondrial fonksiyonel durum bazal mitokondrial solunum, yedek solunum kapasitesi ve açıklar enerji fenotip ölçerek muayene strese yanıt vermek için tercih edilen enerji yolu. Taze PBMCs klinik ayarı standart flebotomi kullanarak kolayca kullanılabilir. Bu protokol için açıklanan tüm tahlil karmaşık biyokimyasal tekniklerin katılımı olmadan 4 saatten az bir süre içinde tamamlanabilir. Ayrıca, tekrarlanabilir veri almak için gerekli olan bir normalleştirme yöntemi açıklanmaktadır. Sunulan basit yordamı ve normalleştirme Yöntem aynı hasta ve potansiyel tedavisinin etkileri değerlendirmek için zaman puan arasında karşılaştırılabilir tekrarlanabilir veri nesil tekrarlanan örnek toplama için izin vermek.

Mito stres testi oksijen tüketim oranını (OCR) ölçme üzerinde tam bir mitokondri profil eşleştirmek için çeşitli solunum inhibitörleri sıralı enjeksiyon sonra dayanır. Her uyuşturucu enjekte aşağıdaki parametreleri hesaplamakta kullanılan sonra OCR ölçümleri ile ilgili mitokondrial sağlığına: Bazal OCR ilk düzey ATP talep dinlenme karşılamak için gerekli oksijen tüketimi değerlendirmek için herhangi bir uyuşturucu enjekte önce ölçüle...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating the Role of Mitochondrial Function in Cancer-related Fatigue at JoVE.com

Evaluating the Role of Mitochondrial Function in Cancer-related Fatigue

Amacımız mitokondrial disfonksiyon kanser hastalarında yorgunluk ile ilişkili değerlendirmek için pratik bir protokol geliştirmekti. Bu yenilikçi protokol döneminde klinik kullanımı içeren yalnızca standart flebotomi ve Temel Laboratuvar işlemleri için optimize edilmiştir.

Kanserle ilgili yorgunluk mitokondriyal işlev rolünün değerlendirilmesi

Fatigue is a common and debilitating condition that affects most cancer patients. To date, fatigue remains poorly characterized with no diagnostic test to ...

evaluating-role-mitochondrial-function-cancer-related

Research

JoVE Journal

Cancer Research

9.1K Görüntüleme.  National Institutes of Health. Amacımız mitokondrial disfonksiyon kanser hastalarında yorgunluk ile ilişkili değerlendirmek için pratik bir protokol geliştirmekti. Bu yenilikçi protokol döneminde klinik kullanımı içeren yalnızca standart flebotomi ve Temel Laboratuvar işlemleri için optimize edilmiştir.

Video: Evaluating the Role of Mitochondrial Function in Cancer-related Fatigue

Assessment of the Metabolic Profile of Primary Leukemia Cells

The metabolic requirement of cancer cells can negatively influence survival and treatment efficacy. Nowadays, pharmaceutical targeting of metabolic pathways is tested in many types of tumors. Thus, characterization of cancer cell metabolic setup is inevitable in order to target the correct pathway to improve the overall outcome of patients. Unfortunately, in a majority of cancers, the malignant cells are quite difficult to obtain in higher numbers and the tissue biopsy is required. Leukemia is an exception, where a sufficient number of leukemic cells can be isolated from the bone marrow. Here, we provide a detailed protocol for the isolation of leukemic cells from leukemia patients bone marrow and subsequent analysis of their metabolic state using extracellular flux analyzer. Leukemic cells are isolated by the density gradient, which does not affect their viability. The next cultivation step helps them to regenerate, thus the metabolic state measured is the state of cells in optimal conditions. This protocol allows achieving consistent, well-standardized results, which could be used for the personalized therapy.

Here we present a protocol for the isolation of leukemic cells from leukemia patients bone marrow and analysis of their metabolic state. Assessment of the metabolic profile of primary leukemia cells could help to better characterize the demand of primary cells and could lead up to more personalized medicine.

Birincil lösemi hücrelerinin metabolik profili değerlendirilmesi

The metabolic requirement of cancer cells can negatively influence survival and treatment efficacy. Nowadays, pharmaceutical targeting of metabolic ...

Kanser Araştırmaları

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of current interventions to adequately treat fatigue in all patients leaves a need for new treatment options. Despite the therapeutic need and importance of preclinical research in helping identify promising novel treatments, few preclinical assays of fatigue are available. Moreover, the most common preclinical assay used to assess fatigue-like behavior, voluntary wheel running, is not suitable for use with some strains of mice, may not be sensitive to drugs that reduce fatigue, and has relatively low throughput. The current protocol describes a novel, non-voluntary preclinical assay of fatigue-like behavior, the treadmill fatigue test, and provides evidence of its efficacy in detecting fatigue-like behavior in mice treated with a chemotherapy drug known to cause fatigue in humans and fatigue-like behavior in animals. This assay may be a beneficial alternative to wheel running, as fatigue-like behavior and potential interventions can be assessed in a greater number of mice over a shorter time frame, thus permitting faster discovery of new therapeutic options.

Fatigue is a common, undertreated and frequently poorly-understood symptom in many diseases and disorders. New preclinical assays of fatigue may help to improve current understanding and future treatment of fatigue. To that end, the current protocol provides a novel means of measuring fatigue-like behavior in the mouse.

Koşu Bandı Yorulma Testi: Mouse Yorgunluk gibi Davranış Basit, Yüksek verim Deneyi

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

Davranış

Analytical Determination of Mitochondrial Function of Excised Solid Tumor Homogenates

Mitochondria are essential to the onset and progression of cancer through energy production, reactive oxygen species regulation, and macromolecule synthesis. Genetic and functional adaptations of mitochondria to the tumor environment drive proliferative and metastatic potential. The advent of DNA and RNA sequencing removed critical barriers to the evaluation of genetic mediators of tumorigenesis. However, to date, methodological approaches to evaluate tumor mitochondrial function remain elusive and require technical proficiency limiting the feasibility, ultimately diminishing diagnostic and prognostic value in both experimental and clinical settings. Here, we&#160;outline a simple and rapid method to quantify rates of oxidative phosphorylation (OXPHOS) and electron transfer (ET) capacity in freshly excised solid tumor homogenates using high-resolution respirometry. The protocol can be reproducibly applied across species and tumor types as well as adapted to evaluate a diversity of mitochondrial ET pathways. Using this protocol, we demonstrate that mice bearing a luminal B mammary cancer exhibit defective nicotinamide adenine dinucleotide-linked respiration and reliance on succinate to generate adenosine triphosphate via OXPHOS.

We developed a practical protocol and analytical approach to evaluate mitochondrial oxidative phosphorylation and electron transfer capacity in fresh tumor homogenates. This protocol can be easily adapted to survey various mitochondrial functions that contribute to cancer initiation, progression, and treatment response.

Eksiz katı tümör homojenatlarının Mitokondriyal fonksiyonunun analitik tayini

Mitochondria are essential to the onset and progression of cancer through energy production, reactive oxygen species regulation, and macromolecule ...

Süspansiyon Büyüten Kanser Hücrelerinden İletim Cybrid Üretimi

Transmitochondrial Cybrid Generation Using Cancer Cell Lines

In recent years, the number of studies dedicated to ascertaining the connection between mitochondria and cancer has significantly risen. However, more efforts are still needed to fully understand the link involving alterations in mitochondria and tumorigenesis, as well as to identify tumor-associated mitochondrial phenotypes. For instance, to evaluate the contribution of mitochondria in tumorigenesis and metastasis processes, it is essential to understand the influence of mitochondria from tumor cells in different nuclear environments. For this purpose, one possible approach consists of transferring mitochondria into a different nuclear background to obtain the so-called cybrid cells. In the traditional cybridization techniques, a cell line lacking mtDNA (&#961;0, nuclear donor cell) is repopulated with mitochondria derived from either enucleated cells or platelets. However, the enucleation process requires good cell adhesion to the culture plate, a feature that is partially or completely lost in many cases in invasive cells. In addition, another difficulty found in the traditional methods is achieving complete removal of the endogenous mtDNA from the mitochondrial-recipient cell line to obtain pure nuclear and mitochondrial DNA backgrounds, avoiding the presence of two different mtDNA species in the generated cybrid. In this work, we present a mitochondrial exchange protocol applied to suspension-growing cancer cells based on the repopulation of rhodamine 6G-pretreated cells with isolated mitochondria. This methodology allows us to overcome the limitations of the traditional approaches, and thus can be used as a tool to expand the comprehension of the mitochondrial role in cancer progression and metastasis.

Yazar Spotlight: Kanser Hücre Hatlarını Kullanarak İletim Cybrid Üretimi  

This protocol describes a technique for cybrid generation from suspension-growing cancer cells as a tool to study the role of mitochondria in the tumorigenic process.

Kanser Hücre Hatlarını Kullanarak İletimkokondriyal Cybrid Üretimi

In recent years, the number of studies dedicated to ascertaining the connection between mitochondria and cancer has significantly risen. However, more ...

Assessing Mitochondrial Function in Sciatic Nerve by High-Resolution Respirometry

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple causes, including autoimmune diseases, diabetes, infections, inherited disorders, and tumors. Assessing mitochondrial function in mouse peripheral nerves can be challenging due to the small sample size, a limited number of mitochondria present in the tissue, and the presence of a myelin sheath. The technique described in this work minimizes these challenges by using a unique permeabilization protocol adapted from one used for muscle fibers, to assess sciatic nerve mitochondrial function instead of isolating the mitochondria from the tissue. By measuring fluorimetric reactive species production with Amplex Red/Peroxidase and comparing different mitochondrial substrates and inhibitors in saponin-permeabilized nerves, it was possible to detect mitochondrial respiratory states, reactive oxygen species (ROS), and the activity of mitochondrial complexes simultaneously. Therefore, the method presented here offers advantages compared to the assessment of mitochondrial function by other techniques.

High-resolution respirometry coupled to fluorescence sensors determines mitochondrial oxygen consumption and reactive oxygen species (ROS) generation. The present protocol describes a technique to assess mitochondrial respiratory rates and ROS production in the permeabilized sciatic nerve.

Siyatik Sinirde Mitokondriyal Fonksiyonun Yüksek Rezolüsyonlu Respirometri ile Değerlendirilmesi

Mitochondrial dysfunction in peripheral nerves accompanies several diseases associated with peripheral neuropathy, which can be triggered by multiple ...

Biyokimya

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Fosfor-31 Manyetik Rezonans Spektroskopisi: Ölçme için Aracı<em&gt; İn Vivo</emİnsan İskelet Kası içinde&gt; Mitokondriyal Oksidatif Fosforilasyon Kapasitesi

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Tıp

Real-Time Measurement of the Mitochondrial Bioenergetic Profile of Neutrophils

Neutrophils are the first line of defense and the most abundant leukocytes in humans. These effector cells perform functions such as phagocytosis and oxidative burst, and create neutrophil extracellular traps (NETs) for microbial clearance. New insights into the metabolic activities of neutrophils challenge the early concept that they primarily rely on glycolysis. Precise measurement of metabolic activities can unfold different metabolic requirements of neutrophils, including the tricarboxylic acid (TCA) cycle (also known as the Krebs cycle), oxidative phosphorylation (OXPHOS), pentose phosphate pathway (PPP), and fatty acid oxidation (FAO) under physiological conditions and in disease states. This paper describes a step-by-step protocol and prerequirements to measure oxygen consumption rate (OCR) as an indicator of mitochondrial respiration on mouse bone marrow-derived neutrophils, human blood-derived neutrophils, and the neutrophil-like HL60 cell line, using metabolic flux analysis on a metabolic extracellular flux analyzer. This method can be used for quantifying the mitochondrial functions of neutrophils under normal and disease conditions.

We describe stepwise protocols measuring the mitochondrial respiration of mouse and human neutrophils and HL60 cells using the metabolic extracellular flux analyzer.

Nötrofillerin mitokondriyal biyoenerjetik profilinin gerçek zamanlı ölçümü

Neutrophils are the first line of defense and the most abundant leukocytes in humans. These effector cells perform functions such as phagocytosis and ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Use of Minimally Invasive Methods to Assess Fuel Utilization and Circadian Rhythms in Older Adults

Aging is associated with multiple physiological changes that contribute synergistically and independently to physical disability and the risk of chronic disease. Although the etiology of age-related physical disability is complex and multifactorial, the decline in mitochondrial function appears to coincide with the progression of functional decline in many older adults. The reason why there is a decrease in mitochondrial function with aging remains elusive, but emerging science indicates that both fuel metabolism and circadian rhythms can influence mitochondrial function.
Recent studies have established that circadian rhythms become disturbed with aging, and that disrupted circadian rhythms have pathological consequences that impact mitochondrial function and overlap with many age-associated chronic diseases. Current quantitative methods for direct assessment of mitochondrial function are invasive and typically require a muscle biopsy, which can pose difficulties with participant recruitment and study adherence, given the perceived levels of potential pain and risk. Thus, an innovative and relatively noninvasive protocol to assess changes in mitochondrial function at the cellular level and circadian patterns in older adults was adapted. Specifically, a real-time metabolic flux analyzer is used to assess the mitochondrial bioenergetic function of white blood cells under differential substrate availability.
The expression of circadian clock genes in white blood cells to cross-correlate with the mitochondrial bioenergetics and circadian rhythm outcomes are also analyzed. It is believed that these innovative methodological approaches will aid future clinical trials by providing minimally invasive methods for studying mitochondrial substrate preference and circadian rhythms in older adults.

A novel and minimally invasive protocol is presented to evaluate the synergistic impact of fuel utilization and circadian rhythms on aging individuals, utilizing peripheral blood mononuclear cells.

Aging is associated with multiple physiological changes that contribute synergistically and independently to physical disability and the risk of chronic ...

Kanserle ilgili yorgunluk mitokondriyal işlev rolünün değerlendirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Birincil lösemi hücrelerinin metabolik profili değerlendirilmesi

Koşu Bandı Yorulma Testi: Mouse Yorgunluk gibi Davranış Basit, Yüksek verim Deneyi

Eksiz katı tümör homojenatlarının Mitokondriyal fonksiyonunun analitik tayini

Kanser Hücre Hatlarını Kullanarak İletimkokondriyal Cybrid Üretimi

Kanser Hücre Hatlarını Kullanarak İletimkokondriyal Cybrid Üretimi

Kanser Hücre Hatlarını Kullanarak İletimkokondriyal Cybrid Üretimi

Siyatik Sinirde Mitokondriyal Fonksiyonun Yüksek Rezolüsyonlu Respirometri ile Değerlendirilmesi

Fosfor-31 Manyetik Rezonans Spektroskopisi: Ölçme için Aracı

Nötrofillerin mitokondriyal biyoenerjetik profilinin gerçek zamanlı ölçümü

Use of Minimally Invasive Methods to Assess Fuel Utilization and Circadian Rhythms in Older Adults