Bu yöntem Salmonella ve Shigella tarama için yüksek bir iş verme platformu sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı tekrar, özgül, hassas ve yüksek iş artışıdır. Bu teknik, naat hızlı yöntem ve gerçek zamanlı PCR tarama ilk uygulandı kültür ve kültür birleştirmek ve daha sonra pozitif olanlar bakteri kültürü ve kimlik için gönderildi.
Bu yöntem Salmonella ve Shigella taraması üzerinde durulsa da, Vibrios, Staphylococcus, E.Coli ve saire gibi diğer patojenlere de uygulanabilir. Örneklerdeki arka plan florası nedeniyle doğru koloninin seçimi zor olduğundan, bu yöntemin görsel gösterimi çok önemlidir. Başlamak için, her örnek için besin suyu üç mililitre ekleyin.
Sonra, örnekleri 6 saat boyunca 36 derecede kuluçkaya yatırın. Bundan sonra, iki dakika için 800 gs ön zenginleştirme kültürü santrifüj. Sonra, yeni bir tüp için supernatant aktarın ve 12, 000 gs beş dakika için tekrar santrifüj.
Supernatant attıktan sonra, pelet dna çıkarma çözeltisi 100 mikrolitre ekleyin. Sonra, bir dakika için tüp girdap. Sonra, kuru banyoda numuneyi 1000 santigrat derecede ısıtın.
Santrifüj tekrarladıktan sonra, yeni bir tüp içine supernatant toplamak. İlk olarak, reaksiyon karışımı oluşturmak ve metin protokolüne göre bisiklet programı ayarlayın. Ardından, floresan gerçek zamanlı PCR makinesinde gerçek zamanlı PCR gerçekleştirin.
İlk olarak, beş mililitre selenit kristali ortama zenginleştirme öncesi kültürden 100 mikrolitre ekleyin. Sonra, 18-24 saat boyunca 36 santigrat derece kültür kuluçka. Sonra, kültürün bir döngü toplamak ve bir plaka üzerine yayıldı.
Sonra, 18 ila 24 saat boyunca 36 santigrat derece plaka kuluçka. Kuluçkadan sonra şüpheli kolonileri seçin ve bir tabağa aktarın. Plakayı 36 derecede 18-24 saat kuluçkaya yatırın.
Daha sonra, otomatik bir mikrobiyal tanımlama sistemi kullanarak şüpheli koloniyi tanımlayın. O-antijen karakterizasyonu na başlamak için, temiz bir slayt için O-antijen polivalent sera bir damla ekleyin. Koloninin bir halkasını kaydırak ve serada öğüt.
Bakteri akan kum gibi görünüyorsa, antijen karakterize edilene kadar O-antijen monovalent sera ile önceki tedaviyi tekrarlayın. H-antijen karakterizasyonu na başlamak için, temiz bir slayta bir damla H-antijen polivalent sera ekleyin. Sonra, koloninin bir döngü dolusu toplamak ve sera içinde ızgara.
Özel H-antijen karakterize olana kadar tedaviyi tekrarlamak için H-antijen monovalent sera kullanın. Kültürü ayırmak için, zenginleştirme öncesi kültürün bir döngü toplamak ve bir plaka üzerine yayıldı. Sonra, 18 ila 24 saat boyunca 36 santigrat derecede yer kuluçka.
Kuluçkadan sonra, şüpheli görünümlü bir koloniyi bir tabağa koyun. Plakayı 36 derecede 17 ila 24 saat kuluçkaya yatırın. Daha sonra, otomatik bir mikrobiyal tanımlama sistemi kullanarak biyokimyasal tanımlama için koloni tabi.
Sonra, temiz bir slayt Shigella türleri polivalent sera bir damla uygulayın. Sonra, bazı bakterileri toplamak ve sera içine eziyet için bir mikro-döngü kullanın. Son olarak, eğer sera akan kum benzer, daha fazla bakteri karakterize etmek için Shigella türleri monovalent sera kullanın.
Bu protokol kullanılarak salmonella ve Shigella türleri için hastalardan dışkı örnekleri tarandı. Gerçek zamanlı PCR kullanarak, HEX kanalında başarılı bir amplifikasyon vardı, bu da numunenin Salmonella türleri için pozitif olduğunu gösteriyordu. Daha gerçek zamanlı PCR örnek iki Salmonella için pozitif olduğunu belirtti ve güdümlü Salmonella türleri kültürü için seçildi.
Salmonella türlerinin rehberli kültüründe pembe ve mor koloniler ayrı ayrı kaplandı ve biyokimyasal tanımlamaya tabi tutuldu. Sonuçlar, örnek iki kolonilerin Salmonella paratyphi B.Using real-time PCR olduğunu gösterdi, FAM kanalında başarılı bir amplifikasyon vardı, bu örnek Shigella türleri için olumlu olduğunu gösteren. Daha gerçek zamanlı PCR örnek 10 Shigella için olumlu olduğunu belirtti ve güdümlü kültür için seçildi.
Shigella türlerinin güdümlü kültüründe, pembe-kırmızı ve renksiz koloniler ayrı ayrı kaplandı ve biyokimyasal tanımlamaya tabi tutuldu. Sonuçlar, örnek 10'un Shigella sonnei faz II bakterisi içerdiğini göstermiştir. Bu yordamı denerken, dizi değişimi nedeniyle yöntemin sınırlamahatırlamak önemlidir.
Bu yordamı takiben, yanlış negatif gerçek zamanlı PCR sonuçlarını önlemek için doğrudan kültür gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Bu teknik Salmonella ve Shigella tespiti alanında araştırmacılar için önünü açıyor, yeni protokol iki kat olumlu oranı artırmak ve iş yükü ve TAT önemli ölçüde azaltabilir gibi. Salmonella ve Shigella ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve kişisel koruyucu ekipman PPE'nin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
