Bağırsak-kan bariyeri, besinlerin, bakteri metabolitlerinin, ilaçların ve bağırsak lümeninden kan dolaşımına kadar diğer eksojen bileşiklerin geçişini kontrol eden çok katmanlı bir sistemdir. Bildiğimiz gibi, bariyerbütünlüğü gastrointestinal yanı sıra kardiyovasküler ve kan dolaşımına bağırsak bakteri metabolitleri gibi biyolojik olarak aktif bileşiklerin daha kolay erişim neden olabilir ve tüm organizmanın işleyişini etkileyebilir bazı metabolik hastalıklarda bozulmuş olabilir. Bu nedenle bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliği hem intestinal hem de ekstraintestinal hastalıkların bir belirteci olabilir.
Bu videoda, bir test maddesinin sindirim sistemine uygulanmasından sonra portal kan örneklemesi kullanan sıçanlarda bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliğinin doğrudan bir ölçümlerini salıyoruz. Biz ayrıntılı olarak portal ven ve inferior vena kava sadece hepatik ven birleşimi yukarıda kategorize açıklar. Portal ven ve inferior vena kava dan kan örnekleme bağırsak-kan bariyergeçirgenliği değil, aynı zamanda bağırsak bakteri metabolitleri veya ilaçlar gibi ilgi moleküllerin bir hepatik açıklık ve emilim yolu sadece değerlendirmek için izin verir.
Bu yöntem neredeyse karaciğer ve böbrek fonksiyonu etkilenmez ve yaygın in vivo ve in vitro yöntemleri kullanılan üzerinde güçlü bir avantajdır bağırsak kan akışını korur. Hayvanlar işlemden önce bir gecede oruç tutulmalıdır. Genel anestezi sırasında tüm işlemleri gerçekleştirin.
Hayvanlar deneyden sonra ötenazi yedirilir. Prosedürümüz intraintestinal uygulama için hattın eklenmesi ile başlar. Burada marker intracolonic yönetimi öneriyoruz.
Belki sindirim sisteminin çeşitli düzeylerde yönetim tarafından değiştirilebilir. Örneğin, mide veya duodenum. Ancak, gastrointestinal sistem üst kısımlarına bir belirteç verirken peristalsis in değişken hızını ve enzimler ve mide asitleri ile olası etkileşimleri dikkate alın.
Kolon kateteri olarak pediatrik Foley kateter boyutu 10 F veya 8 F kullanın. Yaklaşık sekiz santimetre kolon içine takılacak kısmı belirtmek için kateteri işaretleyin. Anal bölgeyi ve kolon kateteri takmadan önce rektumdaki dışkı sayısını kontrol edin.
Dışkı varsa, rektum alanı masaj tarafından rektum boşaltın. Kateter boyunca bir yağlayıcı koyun. Daha sonra, anüs ve çevresini bir yağlayıcı ile nemlendirin.
Kateteri harici anal sfinkterden bir kılavuz tel ile takın. Yavaş ileri, geri ve dairesel hareketler yapın. Kateteri takarak karın palpasyonu ile kateterin yerini kontrol etmeye devam edin.
Bir sonraki adım inferior vena cava kateterizasyon. Bağırsak geçirgenliği çalışmalarında bu işlemi atlayabilirsiniz. Femoral arter üzerinde nabız hissetmeye çalışın ve nabız hissedilir bir yerde yaklaşık iki santimetre uzunluğunda uzunlamasına deri kesti.
Nörovasküler demet görselleştirmek için fasya ve kasları incelemek. Sonra, nörovasküler demet gelen femoral ven incelemek. Önce sinirler, sonra femoral arter ve sonra damar.
Femoral venin birkaç küçük dalları kolayca zarar görebilir, çünkü paketin diseksiyon sırasında dikkatli olun. Sonra femoral vene iki ligatür koyun. Henüz düğümleri bağlama.
Proksimal bağın uçlarını iğne tutucu ile yakalayın. Sonra dikkatlice bağ yıpranması damarın proksimal kısmını kapatmak için tutucu yu yukarı doğru doğru uçlar. Damar kanla dolana kadar bekle ve distal düğümü bağla.
Daha sonra, mikrocerrahi makas kullanarak düğüm ve proksimal ligatür arasındaki damar üzerinde küçük bir kesi yapın. Daha sonra kateteri cımbız kullanarak veya videoda yaptığımız gibi kavisli uçlu bir iğne takın. Damarı delin ve iğnenin bükülmüş ucunu kateter için bir kılavuz olarak kullanın.
Kateteri takarak proksimal ligatürü gevşetin. Kateteri, bir hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak yaklaşık 6-7 santimetre takın ve kateterin proksimal ucunu hepatik ven birleşiminin hemen üzerine inferior vena kava yerleştirin. Deneyden sonra kateterin uygun yerleştirilmesi doğrulanmalıdır.
Kateteri iki tek cerrahi düğümle femoral ven içinde sabitle. Proksimal ligatürü de bağlayın. Bir şırınga ile kan çekmeye çalışarak kateterin açıklığını kontrol edin.
Kateteri 0,3 mililitre heparinize tuzlu ile durula. Cerrahi yarayı iki kat tek dikişle kapatın. Şimdi portal ven kateterizasyonuna geçiyoruz.
Portal kateterini hazırlayın. İğne, esnek poliüretan kateter, kateterin esnek polietilen ucu, fiş ve ligatürden oluşur. İşlemin ilk adımı orta hat laparotomi yapmaktır.
Çalışma alanını hazırladıktan sonra, sternumun kiftonundan göbek kadar uzunlamasına deri kesin. Beyaz çizgi boyunca karın duvarının kaslarını kesin. Daha sonra, ksifoid kıkırdak iki kesim arasında olacak şekilde y şeklinde kesilmiş rostrally genişletin.
Bir sonraki adım portal ven diseksiyonu. İlk olarak, tuzlu su ile bezleri nemlendirin. Ve sonra çekum dışlaştırmak, artan ve enine kolon, ve ince bağırsak döngü.
Mezenterin kökünü ortaya çıkarmak için bağırsakları sol tarafa koy. Kurumasını korumak için fizyolojik bir tuzlu ile nemlendirilmiş gazlı bez ile bağırsakları kapatın. Portal ven dikkatlice kenarlarına veya yukarı ya da yukarı ya da diyafram doğru nemli bezleri ile hepatik loblar hareket ortaya çıkarmak için.
Burada portal ven ve üst mezenterik ven görebilirsiniz. Mezenter ile kaplı olmayan portal venin kısmını lokalize edin ve portal damarın altında bağı geçirin. Dokuları hasardan korumak için, fizyolojik bir tuzlu çözelti ile bağnemlendirin.
Bağ ın uçlarını forceps ile kelepçeve yavaşça damar stabilize etmek için sıkın. Kateterin ligatunun uzun kısmını portal damarın serbest kısmının altına geçirin ve kateterin portal venin hemen yanında olması için çekin. Üst mezenterik ven ve portal ven kavşak altında üst mezenterik ven içine iğne yerleştirin.
İğneyi 30 derecelik bir açıyla tutun ve damara girdikten sonra açıyı azaltın ve yaklaşık 6-7 milimetre uzunluğunda portal damara paralel olarak iğneyi neredeyse yatay olarak ilerletin. İğnenin takıldığı yere bir veya iki damla doku tutkalı uygulayın. Karaciğeri kaplayan bezleri çıkarın.
Daha sonra bağırsakları karın boşluğuna geri koyun. Isınmış bir tuzlu çözelti ile bağırsakları nemlendirin ve nemlendirilmiş steril gazlı bez ile kaplayın. Kateterin açıklığını kontrol edin ve kateteri heparinize tuzlu ile durula.
Venöz kan kendiliğinden kateter içinde geri akar. Beş dakika sonra uygun mezenterik kan akışının korunur emin olmak için bağırsak ve peristaltik hareketlerin rengini kontrol edin. Sonunda, göbek çevresindeki kateterdist kısmını dışa doğru dikiş üç kat ile karın boşluğu kapatın.
Portal ven kan toplamak için, portal kateter fişi açın ve serbestçe kan akışını sağlar. Bir şırınga ve künt bir iğne kullanın ve en fazla 0,7 mililitre kan toplayın. Kateteri heparinize tuzlu suyla durulayıp kateter fişini kapatın.
Burada bağırsak geçirgenlik değerlendirmesi için örnek portal kan örnekleme protokolleri salıyoruz. İnferiat vena kavadan alınan kan örnekleri hepatik klirens ve emilim çalışmaları için gereklidir. Inferior vena kava kan toplamak için portal ven kan alırken tam olarak devam edin.
Burada karaciğer temizleme ölçümü ve seçilen bileşiklerin bağırsak portalkan-karaciğer-sistemik kan yolunu izlemek için örnek bir kan örnekleme protokolü salıyoruz. Çalışmalarımızda geçirgenliğin bir göstergesi olarak trimetilamin olan bakteriyel bir metaboliti kullandık. Ancak sınıf geçirgenlik belirteçleri de dahil olmak üzere diğer birçok madde de kullanılabilir.
Çeşitli bakteri ve metabolitleri ve yolları da emme yolu veya hepatik açıklık yolu yolu için kullanılabilir. Kılavuz teli çıkarın ve steril su yeterli hacimli genellikle bir mililitre kullanarak balon şişirmek ama eklemeden önce aslında balon boyutunu kontrol edin. Balon çapı bir santimetreyi geçmemelidir.
Kolon dan yönetilen çözeltinin çıkış riskini en aza indirmek için fare başını aşağı yerleştirin. Yavaş yavaş drenaj portu ve kolon kateter kullanarak test edilen madde uygulayın. Biz su salin 0.7 mililitre çözünmüş kilogram vücut ağırlığı başına 100 miligram bir dozda tritillamin kullanılır.
On dakika sonra kateter balonu söndürün. Hepatik ekstraksiyon olarak anlaşılan hepatik açıklık portal kan konsantrasyonu ile inferior vena kava kan konsantrasyonu arasındaki fark veya inferior vena kava ve portal kan konsantrasyonu oranı ile ifade edilebilir. Biz başarıyla sıçanlarda trimethylamin bağırsak-kan bariyeri geçirgenlik ve karaciğer temizliği ölçtük.
Burada hipertansif sıçanlar normotansif sıçanlara göre TMA kolon geçirgenliği arttığını gösteren temsili sonuçlar. Başka bir araştırmada biz yüksek tuz alımı trimethylamin bağırsak-kan bariyeri geçirgenliği ve karaciğer temizliği etkileyip etkilemediğini inceledik. Trimethylamin intracolonic uygulama portal kan TMA konsantrasyonu önemli bir artış üretti.
Artış ve hepatik açıklık boyutu gruplar arasında benzerdi. Ayrıca kısa zincirli yağ asitlerinin emilim yolunu da takip ettik. Dışkı, portal kan ve periferik kandaki konsantrasyonu ölçtük.
Bu videoda, yaygın olarak kullanılan yöntemlerin aksine, karaciğer ve böbrek fonksiyonları, hepatik açıklık ölçümü ve üçüncü, eksojen bileşiklerin emilim yolunun değerlendirilmesi etkilenmez, vivo bağırsak-kan bariyeri geçirgenlik doğrudan ölçüm içeren kapsamlı bir protokol açıklanmıştır. Sunulan teknik diğer deneysel amaçlara göre ayarlanabilir. Örneğin, portal kan basıncı ölçümü veya ilaç yönetimi doğrudan portal ven.
