Yürüyüş analizi ni kullanarak protokolümüz hareket bozukluklarının fare motorlarının yürüyüş bozukluğu olan hastanın semptomu taklit edip etmediğini belirlemede çok yararlıdır. Yani, stres yükleme testinde yürüyüş analizi farelerde bazı motor fenotipleri tespit etmek için, kolay ve pahalı ekipman olmadan yapılabilir, hiçbir spontan etkisi ile. Davranış testini başlatmadan önce, her farenin ağırlığını kaydedin ve her kuyruğu etiketlemek için bir işaretleme kalemi kullanın.
Tüm hayvanlar tartıldı ve işaretlendiğinde, fareleri en az 30 dakika boyunca deneysel odaya yerleştirin ve 25'e 25'e 40 santimetrelik bir asılı kutuyu, döndürülebilir bir kafes kapağıyla laboratuvar bankına yerleştirin. Fareler alıştığında, bir fareyi kafes kapağının ortasına yerleştirin ve kapağı dikkatlice ters çevirin. Ardından, fareyi ev kafesine geri döndürmeden önce farenin kafes kapağından düşme gecikmesini ölçün.
Tüm fareler test edildiğinde, 9,9 ile 42 santimetrelik bir beyaz kağıt parçasını laboratuvar bankına yerleştirin ve kağıdın distal ucuna koyu bir hedef kutusu yerleştirin. Kaçışı önlemek için pistin her iki tarafına kağıtla yaklaşık olarak aynı uzunluktaki diğer kutuları yerleştirin. Ve 35 mililitre petri yemekleri ayırmak için siyah ve kırmızı mürekkep ekleyin.
Analiz için fareleri eğitmek için, kağıdın proksimal ucuna bir fare yerleştirin, hedef kutusuna bakacak ve farenin kağıdın proksimal ucundan kale kutusuna yürümesine izin verin. Fare kutuya ulaştığında, arka ekstremitelerin hareketini sınırlamak için, başparmak ve diğer parmaklar topu arasında arka ve kuyruk tucking, yavaşça hayvan scruff. Ve ön ayakların altlarını kırmızı mürekkeple, arka uzuvların altlarını da siyah mürekkeple batırın.
Ardından, fareyi hemen kağıdın proksimal ucuna yerleştirin, hedef kutusuna bakacak şekilde ve farenin proksimal ucundan kale kutusuna yürümesine izin verin. Ayak baskılı kağıdı hava kuruduktan sonra, pençe baskılarının aynı kısımları arasındaki mesafeleri ölçerek, adım uzunluğunun üç ölçümünü elde etmek için bir cetvel kullanın. Ön taban genişliğinden, ardışık, aynı taraf, ön ayak izleri arasında bir çizgi çizerek ve ön ayak izinin pedinden, ayak izleri arasında çizilen çizgiye kadar dikey çizginin uzunluğunu ölçerek.
Ve arka taban genişliğinde, ardışık sağ arka ayak izleri arasında bir çizgi çizerek, ve sol arka ayak izi ped dikey çizginin uzunluğunu ölçerek, diğer sağ ayak izleri arasında çizilen çizgi. Çakışma için, ön ve arka ayak izleri pedleri arasındaki mesafeyi ölçün. Bir kısıtlama tüpü hazırlamak için, ölçek işaretleri boyunca 50 mililitrelik bir tüp 16 iki milimetrelik delik yapmak için bir kare matkap kullanın, ve her ölçek işareti nin arka.
Nefes almak için beş milimetrelik bir delik açmak için tüpün ucunu kesin ve kuyruk için tüp kapağında dört milimetrelik bir delik aç. Stres yükleme testi için, bir fare scruff, ve ön bacaklar yavaşça sınırlı ile, ilk tutma tüpü baş içine hayvan yerleştirin. Tüpü kapatmadan önce kuyruğu kapaktaki delikten geçirin.
Ve oda sıcaklığında iki saat boyunca bankın üstüne fare yerleştirin. Stres yükleme süresinin sonunda fareyi tüpten çıkarın ve hayvanı kafesine geri döndürün. Bu temsili rakamlarda da görüldüğü gibi heterozigot hızlı başlangıçlı distoni Parkinsonizm modeli fareler, dört haftalık kenyabani tip çöp eşlerini yapmaktan çok daha kısa ön ve arka bacak uzunlukları gösterirler.
Stres heterozigot hızlı başlangıçlı distoni Parkinsonizm modeli fareler, ayrıca sekiz haftalık stresli yabani tip çöp eşleri daha her iki uzuvların önemli ölçüde daha kısa adım uzunlukları sergiler. Her iki uzvun da uzunluklarındaki asimetriler herhangi bir yaşta ki fareler grubunda önemli ölçüde farklı değildir. Her iki uzvun ön tabanı ve çakışmaları da benzer, tüm gruplarda, her yaşta.
Bu stresli heterozigot hızlı başlangıçlı distoni Parkinsonizm modeli farelerde arka taban önemli ölçüde daha geniştir, bu yaş 10 hafta stres vahşi tip hayvanlarda gözlenen daha, stres heterozigot hızlı başlangıçlı distoni Parkinsonizm modeli farelerde motor açıkları neden olduğunu gösteren. Dört ila 10 haftalık hayvanlarda, vahşi tip ve mutant arasında asılı zaman önemli bir fark gözlenmez. 12 haftalıkken, ancak, stres vahşi tip farelerin asılı zaman önemli ölçüde diğer hayvanların daha uzun, heterozigot hızlı başlangıçlı distoni Parkinsonizm modeli farelerde motor açığı düşündüren, yaşlı hayvanlarda kısıtlama testi ile vahşi tip fareler ayırt edilebilir.
Fare, yürüme testinden önce mürekçenin kurumasını önlemek için ekstremitelerin altlarını mürekkepte astıktan hemen sonra fareyi kağıda yerleştirin. Açık alan, yükseltilmiş artı-labirent ve tüm yüzme testi gibi duygusal özellikler için ek testler, yürüyüş anormalliğinin sadece motor açığından kaynaklanıp kaynaklanmadığını cevaplamak için yapılabilir. Protokolümüz strese yatkınlığı keşfetmek, stres yükleme sayının ve süresini değiştirerek ve çeşitli yükleme koşulları arasında motor fenotipleri karşılaştırarak kullanılabilir.
Protokolümüz, stres yüklemelerinin sayısını ve süresini değiştirerek ve çeşitli yükleme koşulları arasında motor fenotipleri karşılaştırarak strese yatkınlığı araştırmak için kullanılabilir.
