Johns Hopkins'teki laboratuvarımız 20 yılı aşkın deneyimi ile küçük hayvan böbrek ve karaciğer nakli gerçekleştirmiştir. Bu özel protokol, sıçanlarda ortotopik böbrek naklinin başarıyla gerçekleştirilmesi için gerekli olan kritik adımları özetlerecektir. Başarı olasılığını ve tekrarlanabilirliğini artırmak için protokolümüz üç farklı adım, donör böbreğin portal ven yoluyla perfüzyonu ve böbrek damarları ve üreterleri anastomoza manşet sistemi kullanılmasını içermektedir.
Bu prosedürü gösteren Dr.Le Qi, laboratuvarımızda bir yüksek lisans öğrencisi olacaktır. Bu yordamı başlatmak için, metin protokolünde açıklandığı gibi donör sıçan anestezi. Bir supine pozisyonda sıçan yerleştirin ve steril maskeleme bandı ile uzuvları hareketsiz.
Bir göz yağlayıcı uygulayın ve metin protokolünde açıklandığı gibi cerrahi alanı sterilize. İlk kesiden önce, ayak tutam ıstırmama refleksinin yokluğunu kontrol ederek farenin yeterince anestezi aldığından emin olun. Makas kullanarak, sempozyum pubis xiphoid için büyük bir uzunlamasına orta hat deri ve kas insizyonu yaparak başlamak ve periton boşluğuna girin.
Nemli bir steril gazlı bez ile bağırsak kapağı ve aort maruz karın sağ lateral tarafına kaydırın, vena kava, ve sol böbrek. Bağırsakları ve karın organlarını nemli ve normal sıcaklıkta tutmak için bir cc şırınga ile önceden ısıtılmış bir mililitre tuzlu su layın. Kapak ve böbrek mide ve dalak kranial seferber ikinci bir nemli gazlı bez uygulayın.
Sonra maruz kalan böbrek kapsayacak şekilde küçük bir nemli gazlı bez ekleyin. Sol renal arter ve damarı bağ dokusundan ve birbirlerinden izole etmek ve harekete geçirmek için mikrocerrahi diseksiyon terhislerini kullanın. Şimdi sol gonadal ven cauterizing tarafından sol renal ven izole ve adrenal arter kauterizing tarafından sol renal arter izole.
Bundan sonra, aort ve vena kava superior ve sol renal pedikül alt diseksiyon forceps ile bağ dokusu keserek seferber. Parçalama forceps kullanarak bağ dokusundan üreter bölmek ve seferber, sonra renal pelvis ölçülen yaklaşık iki santimetre uzunluğunda bir diyagonal kesi yapmak için mikro makas kullanın. Üreterin yarısına poliamid manşet takın ve 8-0 ile düğüm atarak manşeti sabitle ipek sütür.
Sol böbreği, kesişen forsepsler veya mikro makaslar kullanarak perinefroksik yağdan ayırarak harekete geçirin. Bağlı böbrek yağ kapsülü bırakın ve böbrek işlemek için bu siteyi kullanın. Şimdi penis damarı ile 27 gauge iğne ile bir şırınga kullanarak heparin 200 birim uygulayın.
Kanamayı önlemek için enjeksiyon bölgesine pamuklu bezle en az bir dakika basınç uygulayın. Portal ven ve inferior vena kava tanımlayın. Alt vena kava ortaya çıkar.
16 gauge iğne kullanarak portal vene 500 ünite heparin ile karıştırılmış 50 mililitre soğuk tuzlu su enjekte ederek böbreği yıkamaya hazırlanın. Kızarma dan önce, infrahepatik düzeyde inferior vena kava kesmek ve kan dolaşımını çıkmak için izin iğne ekleme yerinde portal ven kaudal kesti. Yavaş yavaş tuzlu çözeltisi infüzyon böbrek yıkama başlayın.
Tek tip gri veya soluk renk koyu kırmızı böbrek bir renk değişikliği gözlemleyin. Kızarma sonra, aort ve vena kava renal arter ve ven proksimal ligate. Donörün vücudunu cerrahi alandan çıkarmadan önce, buz üzerinde soğuk tuzlu içeren bir Petri kabına sifonu çekilen böbreği yerleştirin.
Böbrek soğuk tuzlu bir kez, düzeltmek ve damar manşet kolu immobilize ve yavaşça manşet yoluyla böbrek ven çekin. Sonra 8-0 kullanarak üç düğüm koyarak manşet üzerinde renal ven düzeltmek ipek sütür. Alıcı prosedürüne başlamak için, donör prosedüründen heparin yönetimine kadar olan adımları tekrarlayın.
Daha sonra sol renal arter ve ven proksimal aort ve vena kava iki atravmatik mikrodamar kıskaçları yerleştirin. Böbrek girişine alıcı renal ven proksimal ligate. Damardan kalan tüm kanı çıkarmak için böbrek damarını heparinize salinle temizle.
Daha önce donör böbrek te yeralan kelepçeli renal ven üzerinde ligated renal ven kaydırın. Sonra 8-0 ile damar güvenli ipek sütür. Manşet üzerinde renal ven güvence altına alırken aynı pozisyonel oryantasyon korumak.
Alıcı böbrek girişine renal arter proksimal ligate. Damardaki fazla kanı çıkarmak için heparinize salin ile yıkayın. Şimdi sol böbrek alt kutup düzeyinde üreter ligate.
Perinefirik yağ dan böbrek seferber ve yerli böbrek kaldırın. 10-0 naylon dikiş kullanarak 8-10 kesilen dikişler ile renal arterin uçtan uca anastomoz gerçekleştirin. Adventitial tabaka yı kullanarak arter manevra.
Böbreğin yeniden perfüzyonu yeniden başlatmak için damar kelepçeleri çıkarın. Damarüzerindeki kelepçeyi ve ardından arterüzerindeki kelepçeyi çıkararak başlayın. Anastomoz bölgesi çevresindeki sızan alanlara hafif basınç eklemek için steril pamuklu bir bez kullanın.
Birkaç dakika bir patent anastomoz elde etmek için yeterli olmalıdır. Kısaca yeterli perfüzyon için değerlendirmek için böbrek gözlemlemek. Hemen re-perfüzyon sonra, böbrek renk değiştirmek ve yavaş yavaş birkaç dakika sonra doğal koyu kırmızı renk kazanmak gerekir.
Üreterin görünür peristalsisi ve yerinde idrar üretimi bazen gözlenir. Üreteral manşetin maruz kalan ucunu alıcı üreterin içine takarak bitirin ve alıcı üreterini 8-0 ile sabitle ipek kravat. Donör ve alıcı üreterleri pozisyonda tutmak için, her üreter tarafının uçlarını birbirine bağlayın.
İsteğe bağlı olarak, 3-0 ipek sütür ile renal pedikül kapalı bağlayarak sağ böbrek nefromize. Karın boşluğundan tüm gazlı bezleri çıkarın ve tüm organları doğal konumuna geri getirin. Sonra onları nemli tutmak için bağırsaklar üzerinde tuzlu bir mililitre fışkırtMak.
Rektus kası üzerinde 4-0 emilebilir dikiş ve 4-0 ipek sütür kullanarak kesitli bir şekilde cilt tabakasını kapatın. Reklam libitum su ve gıda erişimi ile temiz bir kafese hayvan yerleştirin ve 37 derece Santigrat ısıtma yastığı üzerinde kurtarma için izin. Hayvanı hayvan tesisine geri döndürmeden önce 1-2 saat boyunca iyileşmeyi gözlemleyin.
Singenik böbrek nakli olan hayvanlar herhangi bir immünsupresif tedavi olmadan uzun süreli sağkalım elde etti. Buna karşılık, immünsupresyon olmadan allojenik böbrek nakli yapılan hayvanlar greftlerini reddettiler ve sekiz günlük ortanca sağkalım la böbrek yetmezliğine yenik düştüler. Ortalama serum kreatinin singenik grupta mütevazı bir şekilde artarken allojeneik grupta 14 kat arttı.
Eksplantasyon üzerine, sinjenik böbrek allografının makroskopik görünümünde herhangi bir anormallik görülmedi. Böbrek rengi ve iç yapıları bozulmadan kaldı. Buna karşılık, reddedilen hayvanların böbrek allografları iç yapıların tahrip ile kırmızı hemorajik yamalar sundu.
Syngenekik greftlerin hematoksilin ve Eozin lekeleri, normal sayıda endotel ve mesangiyal hücre ile ince glomerüler kapiller döngüler göstermiştir. Reddedilen allograflar inflamasyon ve tubulit belirtileri ile tahrip glomerüler yapılar gösterdi. T-hücre aracılı reddi doğrulamak için CD8 pozitif boyama yapıldı.
Synjenik allograflarda çok az CD8 pozitif T-hücresi gösterse de, reddedilen allograflar glomeruli ve tübüli çevresinde t-hücre aracılı reddi doğrulayan önemli ölçüde daha yüksek sayıda CD8 pozitif hücre gösterdi. Bu model, katı organ naklinde terapötik klinik müdahalelerin geliştirilmesinin önünü açan ret, tolerans ve donör-konak etkileşimlerinin immünolojik fenomenleri hakkında önemli bilgiler sağlar.
