Bu protokol önemlidir, çünkü donma-eritme yöntemimiz biyomedikal, farmasötik veya kozmetik uygulamalarda kullanılmak üzere biyouyumlu hidrojeller hazırlamak için uygun bir süreçtir. Bu yöntemin en büyük avantajı bir doğum kusuruneden olabilir kimyasal crosslinking ajanlar kullanmamasıdır. Ayrıca, bu yöntemde kullanılan donma durumu derece gibi hidrojellerin nihai özelliğini kontrol eder.
Bu yöntem hidrojellere diğer uygulamalarla birlikte uygulanabilir. Bu su kirliliği tedavisinde kullanılır. Gerçekten de, yeni bir kültür için bir su kabı olarak kullanılan polimer boncuk üretmek için kullanılabilir.
Ölçtüğü polimer solçünü tamamen homojenize etmek önemlidir. Aksi takdirde, hidrojeller çatlama noktaları sunacak. Ayrıca, her döngüde donma süreleri ile dikkatli olmalısınız.
Bu işlem başlamak için oda sıcaklığında 0,2 gram chitosan ve 0,1 molar asetik asit 10 mililitre eritin ve% 2 chitosan çözeltisi hazırlamak için gecede sürekli mekanik karıştırma korumak. Ertesi gün, pva bir gram ve distile su 10 mililitre eritin ve bir saat boyunca 80 derece santigrat karıştırın. Onlar homojen olana kadar oda sıcaklığında her iki çözelti eşit miktarda karıştırmak için bir manyetik karıştırıcı kullanın.
Karışımları Petri yemeklerinin üzerine dökün. Degas için iki saat atmosferik basınçta örnekleri bırakın. Hidrojelleri eksi dört santigrat derece, eksi 20 santigrat derece veya eksi 80 santigrat derecede 20 saat ve dört devirle dondurun.
Beş ya da altı donma döngüsü kullanarak eksi 80 derecede başka bir hidrojeli 20 saat dondurun. Üçüncü donma döngüsünden sonra hidrojelleri deiyonize suyla yıkayın. Son donma döngüsünün sonunda 48 saat boyunca eksi 50 santigrat derece hidrojelleri kuru ve daha fazla karakterizasyon için karıştırın dondurun.
FT-IR karakterizasyonunu gerçekleştirmeye hazır olduğunuzda, FT-IR spektrofotometresine ATR modunda küçük bir hidrojel parçası yerleştirin. FT-IR spektrosu 4000'den 600 dalga boyuna alın. İlk olarak, çapı 13 milimetre ve yüksekliği 10 milimetre olan hidrojel diskler kesip.
Tartın. Diskleri sallarken 25 derecede 50 mililitre deiyonize su yla kuluçkaya yatırın. Her 30 dakikada bir numuneyi ortamdan çıkarın.
Herhangi bir fazla su ortadan kaldırmak ve tartmak için örnek blot. Daha sonra şişme derecesini hesaplayın ve metin protokolünde belirtildiği gibi elektronik mikroskopi ve gözenek asimetrisi gerçekleştirin. Yüklemeden önce, litre başına 15 miligram diflunisal çözelti dört litre hazırlamak ve bir gecede karıştırın.
Çözeltinin konsantrasyonunun UV-Vis Spektroskopisi ile doğrulanın. Sonra 24 saat boyunca 400 miligram dondurulmuş kurutulmuş hidrojel örnekleri ve altı mililitre distile su kavuruyor. Yükleme için, bir şişeyi 50 mililitre Diflunisal çözeltisi ile doldurun ve 25 santigrat derecede sabit karıştırma ile koruyun.
Şişedeki her şişmiş hidrojeli batırın. Daha sonra, eğrinin plato bölgesini belirlemek için farklı zamanlarda kalan Diflunisal çözeltinin 2 mililitrelik aliquotlarını alın. 24 saat sonra, yeni bir çözüm ile değiştirin.
Her aliquot'un emiciliğini 252 nanometre olarak ölçün ve Diflunisal'ın kalibrasyon eğrisini kullanarak çözeltideki Diflunisal mevcut konsantrasyonu belirleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi hidrojelde tutulan Diflunisal miktarını ve kapsülleme verimliliğini belirleyin. Sonra yüklü hidrojelleri eksi 80 derecede dondurun ve eksi 50 santigrat derecede lyophilize.
İlaç salınımı için, 300 miligram dondurulmuş kurutulmuş Diflunisal yüklü hidrojelleri ve 50 mililitre fosfat tamponu pH 7.4 ve 25 santigrat derecede batırın. Sürekli karıştırmayı koruyun. Farklı zamanlarda iki mililitre lik aliquots çekin ve sabit bir hacim tutmak için taze orta ile değiştirin.
Bir kalibrasyon eğrisine göre 252 nanometrede spektrofotometrik olarak spektrofotometrik olarak yayımlanan Diflunisal'ı belirleyin. Bundan sonra, metin protokolünde belirtildiği gibi hidrojellerde baskın ilaç salınım mekanizmasını ortaya nedenlere uygulayın. Burada CSPVA hidrojelleri bir donma çözme yöntemi kullanılarak çapraz bağlantı ajanlar olmadan hazırlanır.
FT-IR spektrosu her iki polimerin yedi karakteristik sinyallerini gösterir. Tüm CSPVA hidrojelleri son derece gözenekli bir yüzey gösterir ve hazırlık koşullarına göre belirgin değişiklikler gözlenir. Eksi dört santigrat derecede hazırlanan hidrojeller en büyük gözenekleri sunar.
Eksi 80 santigrat derecede hazırlanan hidrojellerin daha gözenekli bir ağı var gibi görünüyor ve donma döngülerinin sayısı daha tanımlı ve dairesel gözeneklerin tanıtımını yapacak gibi görünüyor. Ancak, eksi 80 santigrat derecede altı donma döngüsü ile hazırlanan hidrojeller, muhtemelen düşük toplam saldırı hacmine yansıyan yüksek tortuosity nedeniyle eksi 80 santigrat derece dört donma döngüleri ile hazırlananlara göre daha az geçirgenlik göstermektedir. Şişme davranışı nda hidrojeller hızlı bir şekilde büyük miktarda su emerler, ilk beş saat boyunca ağırlıklarının on katını ve 20 saat sonra ağırlıklarının 15 katına kadar korurlar.
Sıcaklığın etkisi gözlemlenirken eksi 80 santigrat derecede dört donma döngüsü ile hazırlanan hidrojelin ilk beş saat içinde daha az şişme kapasitesi gösterdiği görülmektedir. Donma döngülerinin sayısı herhangi bir zamanda herhangi bir fark yaratmak için görülmez. Hidrojellerden Diflunisal serbest kinetik eksi 80 santigrat derece dört donma döngüleri ile hazırlanan hidrojel ile her durumda yaklaşık 30 saat korunur, en yüksek miktarda serbest.
Eksi 80 santigrat derecede dört donma döngüsü ile hazırlanan hidrojel ile eksi 80 santigrat derecede altı donma döngüsü ile hazırlanan hidrojel arasında hiçbir fark yoktur. Bu prosedürü çalışırken hatırlanması gereken en önemli şey donma koşullarıdır. Tamamlanmış, oluşmuş bir hidrojel elde etmek için neredeyse üç donma döngüsünden başlamalısınız.
Bu yöntem, in-vitro biyouyumluluğu değerlendirmek için hücre kültürü ile kombine edilebilir. Ayrıca bozulma çalışmaları ile kombine edilebilir. Bu prosedürlerin geliştirilmesinden sonra, diğer polimerleri karışıma ve hatta aloe vera gibi doğal bileşiklere dahil etme olasılığını keşfedebileceğimizi fark ettik.
Bunu yapmak bize bu malzemelere yeni özellikler dahil etmek için izin verebilmiştir.
