Biz insan orbicularis istinat ligament, yörünge alanı içinde hassas bir yapı nın non-invaziv araştırma yumuşak doku kontrastı artırmak için fosfotungstik asit ile mikroCT uygulamak. Bu protokol insan yumuşak dokuların non-invaziv araştırma araştırmacılara yardımcı olmak için optimize edilmiştir ve gider makul bir miktar ile gerçekleştirmek için basittir. Örnekleri elde etmek için, önce numune hasat için cilt üzerinde kesme alanını belirtmek için renkli bir kalem kullanın.
İşaretli çizginin medial kampüse, yanal olarak lateral kampüse, alt göz kapağının üst sınırına ve orbital jantın çizgisinin bir santimetre altına indirilmelerine kadar uzandığını doğrulayın. Daha sonra, işaretli çizgi boyunca yüz dokularını kesmek için bir bıçak kullanın, kesme bıçak ucu kemiğe dokunmak için yeterince derin olduğundan emin olun. Hasat örnek deri içermelidir, deri altı doku, kas, yağ, ve periost.
Topun toplanması üzerine, hemen oda sıcaklığında beş ila yedi gün boyunca% 10 formalin örnek düzeltin. Fiksasyon döneminin sonunda, numuneyi üç ila yedi milimetre kalınlığında dilimleyin. Her numunenin süperolateral tarafını dikmek için bir iğne ve siyah iplik kullanın, böylece numunenin yönü daha sonraki zaman noktalarında belirlenebilir.
Artan bir etanol konsantrasyonu serisindeki numuneyi konsantrasyon başına bir gün boyunca susuz bırakın ve numuneleri boyama olana kadar %70 etanol çözeltisinde bırakın. Mikrobilgisayar tomografisi taramasına bir hafta kala, 210 mililitreye %70 etanol 2,1 gram PTA ekleyin ve çözümü dakikada 55-60 dönüşte bir çalkalayıcının üzerine yerleştirin. Her dilimlenmiş parça için üç adet 70 mililitrelik plastik kap hazırlayın.
Boya alkol çözeltisi içine çözülmüş olduğunda, çözelti ile kapları doldurun. %1 PTA'lık her bir kaba bir numune yerleştirin ve numuneleri 5-7 gün boyunca dakikada 55-60 dönüşle sallayın. Boyama tamamlandığında, tarama için hazırlamak için bir hafta boyunca taze% 70 etanol içinde örnekleri saklayın.
MikroCT taraması için, kurumasını önlemek için numuneleri Parafilm'e sarın ve bir örneği tarayıcı tepsisine yerleştirin. Tarayıcının kaynak voltajını 70 kilovolta, kaynak akımını 114 mikrometreye, alüminyum filtreyi 0,5 milimetreye, görüntü pikselboyutunu 20 milimetreye, pikseli 2,240'a, 240'a, 500 milisaniyeye ve dönüş adımını 0,3 dereceye ayarlayın. Sonra, tarama başlatın.
Tarama tamamlandığında, yeniden yapılandırma yazılımını açın ve taranan dosyaları başlatmak için Eylemler ve Açık Veri Kümesi'ni seçin. Ayarlar sekmesini seçin ve halka yapılarını azaltmayı yediye ve ışın sertleştirme düzeltmesine ayarlayın. Yeniden yapılandırmaya başlamak için Başlat'ı seçin.
Son veriler belirlenen klasörde depolanır. Yeniden yapılandırmanın sonunda, dosya yeniden boyutlandırma yazılımını açın ve yeniden oluşturulan dosyaları başlatmak için Kaynak veri kümesini seçin. Hedef veri kümesi sekmesinde jpg'yi seçin ve "Enterpolasyon Yok" Seçeneği seçeneğiyle 1/2 Yeniden Boyutlandırma seçeneğini seçin Sonra slayt çubuğunu Resim sıkıştırma sekmesinde 100'e ayarlayın ve dönüştürmeyi başlatın.
3B yeniden yapılandırma için 3B birim oluşturma yazılımını açın ve Eylemler ve Yük Hacmi Verilerini seçin. Parlaklık ve kontrast düzeyini ayarlamak için, Aktarım İşleme Düzenleyicisi sekmesindeki histogramdaki şekil aktarım işlevini değiştirin. Sonraki Seçenekler ve Aydınlatma seçin ve gerçekçi bir modelleme sesi elde etmek için Gölgeler ve Yüzey Aydınlatma simgeleri seçin.
Tıklayın ve sürükleyin ve sağ tıklayın ve taşımak ve en iyi görünümü bulmak için 3B görüntü döndürmek için sürükleyin, yakınlaştırmak veya istediğiniz gibi uzaklaştırmak için kaydırma. Bölüm resimlerini görüntülemek için yeri kaydırmak için Shift ve sürükleyin'i tıklatın. Işık simgesini açın ve görüntülemek için en iyi aydınlatmayı bulmak için Aydınlatma gösterge çubuğunu ayarlayın, ardından Işık simgesini kapatın ve Aydınlatma sekmesini kapatın.
Seçenekler sekmesinde, son görüntü için kutuyu gizlemek için Göster ve Kırpma Kutusu'nu seçin. Ardından, görüntüyü depolamak için Eylemler ve Görüntüyü Kaydet'i seçin. ORL'nin bu detaylı rekonstrüksiyonu, gösterildiği gibi PTA preparatı ile mikroCT ile sağlanmış, dermis ve periost arasında eğik olarak uzanan bağsel fibromusküler yapının görüntülenmesi sağlanmıştır.
Koronal görünümde, lif miktarı ve karmaşıklığı yanal artar. Yatay görünümde, ağaçlandırmalı formasyona sahip ayrıntılı bir örgü görülmektedir. Sagital görünümde, ORL liflerinin kalınlıkları inferiora azalır.
Genel olarak, bu çok yönlü gözlem ORL sayısı ve lif kalınlığı özelliklerine bağlı olarak varyasyonları ile sürekli plakalar çok katmanlı bir örgü oluşur kanıtlıyor. Bir numunenin hacmine göre boyama süresi yetersiz olduğunda, son görüntü numunenin orta bölgesinde boş bir delik içerebilir. PTA yanında diğer ajanlar kullanılabilir ve farklı ajanlar farklı yararları veya boyama özellikleri çıkarları var.
Bu nedenle, denemenize göre boyama bölgesini optimize etmek yararlıdır.
