Aerobik organizmaların aksine, kesinlikle anaerobik mikroorganizmalar oksijen yokluğu gerektirir. Oksijen havada her yerde olduğu için, ekimi sırasında oksijensiz koşulları korumak anaerobik kültür için bir ön koşuldur. Uygulanan teknik sıvı kültürde karışık bir mikrobiyal popülasyon yetiştirmek için anoksik koşullar sağlamak için basit ve ucuz bir yöntem temsil eder.
Bu teknik saf kültürlerin yetiştirilmesinde de uygulanabilir. Ancak, yüksek oksijene duyarlı mikroorganizmalar için bu işlem geçerli olmayabilir. Uygun bir şişede orta malzemeyi tartarak başlayın ve damıtılmış su yarım hacim ile eriterek.
Sonra, REDOX göstergesi mililitre ekleyin, iz element çözeltisi vitaminler takip. Organizma nın gereksinimlerine göre pH'ı ayarlayın ve son hacmi distile su ile 1 litreye getirin. REDOX göstergesinin rengi pH'ya bağlıdır ve ayarlamak için biraz zaman gerekebilir.
120 mililitrelik serum şişelerini 50 mililitre orta ile doldurun, sonra sıvı fazdaki oksijenin çözünürlüğünü azaltmak için 100 derecelik bir su banyosunda 20 ila 30 dakika kuluçkaya yatırın. Kafa alanını nitrojenle temizle. Azot ile çalışırken uygun oda havalandırma dikkat edin.
Şişeleri butil kauçuk septa ile kapatın ve alüminyum kapakları düzeltin. Daha sonra, REDOX potansiyelini daha da azaltmak için her şişeye 0,1 mililitre azaltma maddesi ekleyin. Şişeleri 121 derecede 20 dakika boyunca otoklavlayın.
Bu protokol uygulanırken kapalı kapların sterilizasyonu için onaylı bir otoklav kullanılmalıdır. Aksi takdirde, sıcaklık artışından kaynaklanan aşırı basınç serum şişeleri patlamaya neden olabilir. Anaerobik digester inoculum hazırlamak için, bir şişe distile su 400 mililitre ekleyin ve kaynatın getirmek.
Kafa boşluğunu kalıcı olarak azotla yıkatarak yaklaşık 30 santigrat dereceye kadar soğutun. Seyreltme tayini için çamurun tam kütlesini kaydettiğinden emin olun, bir anaerobik digester türetilen çamur yaklaşık 100 gram ekleyin. Şişenin kafa alanını azotla değiştirin ve butil kauçuk septumla kapatın.
120 RPM'de şişeyi 30 dakika sallayın. Daha büyük çamur parçacıkları tortu sağlar, sonra inoculum 5 mililitre kaldırmak ve daha önce hazırlanmış bir serum şişesi içine enjekte etmek için bir şırınga ve kanula kullanın. Kuluçkaya yatan serum şişesini deney için uygun bir sıcaklıkta kuluçkaya yatırın, kuluçkaya başladıktan yaklaşık 15-30 dakika sonra sıcaklık artışının neden olduğu aşırı basıncı niçin boşaltın.
Kuluçka süresi boyunca biyo gaz üretimini ve bileşimini değerlendirmek için, mevcut atmosfer basıncını kaydedin ve şişe içindeki basıncı değerlendirmek için bir manometre hazırlayın. Şişeleri salla ve şırınga ve kanula kullanarak 1 mililitre kafa boşluğu gazını çıkarın. Gaz kromatografisi kullanarak hidrojen, oksijen, metan ve karbondioksit konsantrasyonu ölçün.
El yazması talimatlara göre tüm uzun yağ asitlerinin konsantrasyonlarını izlemek için şişeden 1 mililitre sıvı kullanın ve uygun sıcaklığa geri döndükten sonra şişeleri basınç üzerinden boşaltın. Bu protokol anaerobik sindirim yürüten minyatür biyoreaktörler oluşturmak için kullanılmıştır. Triptofan, tirozin, fenilalanin, et özü ve kazein 3 farklı konsantrasyonda eklendi ve metan üretimi 28 günlük kuluçka döneminde izlendi.
Metanojenler, metanogenezde bir elektron taşıyıcısı olan F420 koenziminin yayılarak görüntülenmiş ve maksimum 420 nanometre emilimi ile mavi-yeşil floresan sergiler. Gaz analizi ile eşzamanlı olarak, inkübasyon döneminde uçucu yağ asidi ve fenil asit konsantrasyonları için numuneler analiz edildi. Deney belirli bir noktada, belirli mikroorganizmaların bolluğunu ve/veya mikrobiyal topluluğun bileşimini hedefleyen moleküler biyolojik yöntemler, açıklanan prosedür kullanılarak uygulanabilir.
