유산소 유기체와는 달리, 엄격하게 혐기성 미생물은 산소의 부재를 필요로한다. 산소는 공기에서 유비쿼터스이기 때문에 재배 중에 산소가 없는 상태를 유지하는 것은 혐기성 배양에 필요한 필수 조건입니다. 적용 된 기술은 액체 배양에서 혼합 된 미생물 집단을 육성하기 위해 해부학 조건을 제공하는 간단하고 저렴한 방법을 나타낸다.
이 기술은 또한 순수한 문화의 재배를 위해 적용될 수 있습니다. 그러나 산소에 민감한 미생물의 경우 이 절차가 적용되지 않을 수 있습니다. 중간 재료의 무게를 적절한 플라스크에 계량하고 증류수의 절반 부피로 용해하십시오.
그런 다음 REDOX 표시기의 밀리리터를 추가하고 미량 원소 용액에 비타민을 넣습니다. 유기체 요구 사항에 따라 pH를 조정하고 증류수로 최종 부피를 1리터로 가져옵니다. REDOX 표시기의 색상은 pH에 따라 달라지며 조정하는 데 약간의 시간이 필요할 수 있습니다.
120 밀리리터 세럼 플라스크를 50 밀리리터의 매질로 채운 다음, 액체 상에서 산소의 용해도를 줄이기 위해 섭씨 100도의 수조에 20~30분 동안 배양합니다. 머리 공간을 질소로 플러시합니다. 질소로 작업 할 때 적절한 실내 환기를 돌보십시오.
부틸 고무 셉타로 플라스크를 닫고 알루미늄 캡을 고정합니다. 다음으로, 각 플라스크에 0.1 밀리리터를 줄여 REDOX 전위를 더욱 줄입니다. 그리고 121 °C에서 20 분 동안 플라스크를 오토클레이브하십시오.
폐쇄 된 선박의 살균인증을 받은 오토클레이브는이 프로토콜을 적용 할 때 사용되어야합니다. 그렇지 않으면 온도 상승에서 파생된 과압으로 인해 혈청 플라스크가 폭발할 수 있습니다. 혐기성 소화기에서 접종을 준비하려면 400 밀리리터의 증류수를 플라스크에 넣고 끓입니다.
질소로 머리 공간을 영구적으로 플러시하면서 섭씨 약 30도까지 식힙니다. 혐기성 소화제에서 파생된 약 100그램의 슬러지를 추가하여 희석 을 측정하기 위해 슬러지의 정확한 질량을 기록합니다. 플라스크의 헤드 스페이스를 질소로 교환하고 부틸 고무 중격으로 닫습니다.
120 RPM에서 플라스크를 30분 동안 흔들어 보세요. 더 큰 슬러지 입자 퇴적물을 하자, 다음 주사기와 카누라를 사용하여 5 밀리리터의 접종을 제거하고 이전에 준비 된 혈청 플라스크에 주입하십시오. 접종된 혈청 플라스크를 실험에 적합한 온도로 배양하여 인큐베이션 시작 후 약 15~30분 동안 온도 상승으로 인한 과다압을 배출해야 합니다.
인큐베이션 시간 동안 바이오 가스 생산 및 조성물을 평가하기 위해 현재 대기압을 기록하고 기압계를 준비하여 플라스크 내의 압력을 평가합니다. 플라스크를 흔들어 주사기와 카눌라를 사용하여 헤드 스페이스 가스 1 밀리리터를 제거합니다. 가스 크로마토그래피를 사용하여 수소, 산소, 메탄 및 이산화탄소 농도를 측정합니다.
플라스크에서 1 밀리리터의 액체를 사용하여 원고 지시에 따라 모든 키가 큰 지방산의 농도를 모니터링하고 적절한 온도로 반납 한 후 플라스크를 압력으로 배출하십시오. 이 프로토콜은 혐기성 소화를 전도하는 소형 생물 반응기를 만드는 데 사용되었습니다. 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 고기 추출물 및 카제인이 3가지 농도로 첨가되었고, 메탄 생산은 28일 간 인큐베이션 기간 동안 모니터링되었다.
메탄오겐은 메탄신생의 전자담체인 공동 효소 F420을 방사하여 시각화되었으며, 420나노미터의 흡수최대를 가진 청록색 형광을 나타낸다. 가스 분석과 동시, 시료는 인큐베이션 기간 동안 휘발성 지방산 및 페닐 산 농도를 분석하였다. 미생물 공동체의 특정 미생물 및/또는 조성물의 풍부를 표적으로 하는 분자 생물학적 방법은, 실험의 특정 시점에서, 기술된 절차를 사용하여 적용될 수 있다.
