Protokolümüz dolaşım kimerizmi için geliştirilmiş bir doğrulama yöntemi ve biyomedikal araştırmalar için başarılı parabiyoz modeli kurulumu için bir yöntem sunmaktadır. Parabiyozda kan kimerizmi tespiti için kullanılan mevcut yöntemlerle karşılaştırıldığında, protokolümüz güvenli ve basittir ve hızlı ve güvenilir bir doğrulama sağlar. Bu yöntem parabiyoz modellerinde kan kimerizminin saptanmasına özgü olmasına rağmen, parabiyotik prosedürleri içeren herhangi bir biyomedikal çalışmaya uygulanabilir.
En zorlu adım glikoz enjeksiyonudur. Bu nedenle deneysel bir işlem gerçekleştirmeden önce kuyruk damar enjeksiyonu uygulama, ya da venöz görsel fare kuyruk fiksatör kullandığınızdan emin olun. Pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, iki 20 ila 25 gram anestezik C57 siyah 6 erkek fareyi supine pozisyonuna yerleştirin ve bir farenin sol tarafını ve ikinci farenin sağ tarafını dirsekten yaklaşık bir santimetre yukarısından diz altına doğru bir santimetre kadar iyice tıraş etmek için elektrikli bir tıraş cihazı kullanın.
Her hayvanın temizlenmiş derisinde, dirseğin 0,5 santimetre yukarısından diz ekleminin 0,5 santimetre altına kadar uzunlamasına deri kesileri yapmadan önce kalan tüyleri tüydökücü kremle çıkarın ve cildi deri altı fasyasından nazikçe ayırın. Parabiontun olecranon ve diz lerini 3-0 dikişle bağlayın ve tıraşolmuş deriyi 5-0 dikişle dikin. Daha sonra subkutan olarak dehidratasyon önlemek için 0.5 mililitre sodyum klorür enjekte, ve intramusküler ağrı gidermek için fare 25 gram başına 10 miligram tramadol enjekte, üç gün boyunca günde her fare içine.
Glikoz dalgalanması ile parabionlar arasındaki sirkülasyonun başarılı bir şekilde yapılmasını doğrulamak için, parabiyoz ameliyatından sonraki 10. Kuyruk ucundan 2-4 santimetre kaudal vene bir mililitrelik şırınga iğnesi yerleştirin ve mümkün olduğunca damara paralel olarak 100 mikrolitre tuzlu çözeltinin kilogramı başına 10 saniyelik bir süre içinde donöre enjekte edin. Sonraki kullanım makas donör ve alıcı hayvanlardan enjeksiyondan sonra ilgi çeşitli zaman noktalarında bir damla kan toplama sağlamak için tonlarını kaldırmak için.
Sonra glikoz düzeyi tespiti için bir glucometer test şeridinin merkezine her kan örneğinin bir damla ekleyin. Evans mavi boya emici tarafından dolaşımın başarılı inşaat doğrulamak için, donör fare içine intraperitoneally 0.5% Evans mavi karşı leke 200 mikrolitre enjekte ve iki saat sonra kardiyak delinme ile her iki parabiontkan kan toplamak. Serumu santrifüjle ayırın ve serumu %0,9 sodyum klorür oranıyla 1-50 oranında seyreltmek için konik bir tüpe aktarın.
Daha sonra seyreltilmiş serum örneklerinin emiciliğini bir spektrofotometre üzerinde 620 nanometre olarak ölçün. Altı donör faredeki kan şekeri düzeylerinin bu temsili analizinde, kuyruk damarına 100 mikrolitre glikoz enjekte edildikten sonra kan şekeri litre başına ortalama bir dakika içinde 26,5 mikromolara yükseldi. Kan şekeri düzeyleri daha sonra yavaş yavaş 60 dakika litre başına 13.3 mikrolitre azalmıştır.
Alıcı farelerde, enjeksiyondan sonra kan şekeri yavaş yavaş artarak 15 dakikada ilk zirve seviyesine ulaştı. Parabiontların serumundaki Evans mavi boya konsantrasyonu da dolaşım kimerizminin başarılı bir yapıya işaret eder ve parabiontlar arasındaki deri altı vasküler kavşaklar açıkça görülebilir. Parabiyoz ameliyatından 15 gün sonra kan kimerizmi oluşturmayan parabionlarda alıcı fareler donör hayvana glukoz enjekte edildikten sonra 60 dakika içinde kan şekeri seviyesinin artmadığını gösterdi.
İki alıcıda Evans mavisinin kan konsantrasyonu da yüksek değildi, glikoz dalgalanma yöntemi evans mavi yöntemi kadar hassas olduğunu gösteren. Ayrıca hızlı bir şekilde artan glikoz düzeyleri nedeniyle kan insülin düzeyi belirgin bir saat sonra azalmış ve üç saat normal seviyelere geri, insülin metabolizması üzerinde enjekte glikoz etkileri geri olduğunu gösteren. İğnenin doğrudan kuyruk damarına yerleştirildiğinden emin olun.
Bu yöntemle parabionların kan kimeralizmi onaylandıktan sonra canlı parabiyotik hayvanlarda fizyopatolojik değişiklikler incelenebilir.
