Nakil modelleri genellikle cerrahi uzmanlık gerektiren immünolojik araştırmalar için değerli araçlardır. Burada sıçanlarda heterotopik kalp ve kardiyak kas hücre nakli için uygun bir yaklaşım salıyoruz. Modelimizin tüm önemli adımlarını vurgulayarak ve basitleştirerek, cerrahi bir arka plan olmayan araştırmacılar bu modelde makul bir süre içinde ustalaşabilmelidir.
Her iki nakil modeli de tolerans ve ret mekanizmaları hakkında değerli bilgiler sağlar ve çeşitli türlerde uygulanabilir. Biz daha önce cerrahi eğitim olmadan bireylere bu modeli öğretim de çok deneyime sahip. Önemli adımları öğrendikten sonra, ölen hayvanlarla sabır ve yeterli uygulama tavsiye ediyoruz.
Donör kalp eksplantasyonu için, anestezi yedi ila 22 haftalık sıçan donör hayvan pedal refleks yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, göz yağlayıcı uygulamak ve karın ve torasik kürk kaldırmak için mekanik makası kullanın. Bir ısıtma tabanı üzerinde supine pozisyonda sıçan yerleştirin ve elastik bantları ile operasyon masasının tabanında uzuvları düzeltmek. Maruz kalan cildi %70 etanol ile dezenfekte edin ve ortanca laparotomi yapın.
Kesiye retraktör ler yerleştirin ve inferior vena kava ortaya çıkarmak için donörün sol tarafına bağırsak seferber sterilize pamuk lu bezler kullanın. Daha sonra, bir mililitre buz gibi isotonik tuzlu çözeltide çözünmüş 500 Uluslararası Heparin Birimi'nin intravenöz enjeksiyonuna izin vermek için inferior vena kavasını delin. Bir pamuklu bez kullanarak hafif sıkıştırma ile iğne geri çekilmesinden sonra delinmiş bölgede kanamayı durdurun.
Diyaframı incise, donörün her iki tarafına lateral torakotomi yapmak ve toraks duvarPin. İki mikro iğne tutucu kullanarak künt preparat ile perikard ve vagal sinir çıkarın. Exsanguination için, karın damarları transect ve enine perikardiyal sinüs içine bir sonda sivri makas künt dalı takın.
Kalbin hafif kaudal traksiyon altında mümkün olduğunca distal olarak artan aort ve pulmoner arter incelemek için bir kompres kullanın. Superior ve inferior vena kava ve pulmoner venlerin etrafına tek bir 5-0 ligatür yerleştirin ve ligatür adım-mümkün olduğunca dorsally olarak sıkın. Doku dorsal'ı bağa doğru koparVe kalbi çıkar.
Ekteki kalbi perfüzyonetmek için, 30 mililitre buz gibi buz-soğuk, izotonik tuzlu çözeltisi ile takviye edilen 30 mililitre buz-soğuk, izotonik tuzlu çözeltisi floş bir 18 gauge kanül kullanın artan aortave pulmoner arter ile heparin 1000 Uluslararası Birimleri ile buz üzerinde tuzlu çözelti 15 mililitre tüp içinde kalp yerleştirmeden önce. Sadece gösterildiği gibi 10 ila 14 haftalık alıcı sıçan hazırladıktan sonra, sıcak, ıslak kompres üzerine alıcının sol üst tarafına bağırsak seferber. Ve cerrahi mikroskobu veya yeterli bir alternatifi ayarlayın.
Duodenum ve proksimal jejunum seferber sonra, sırasıyla, beş ila yedi tam büyütme kullanarak, karın aort ve inferior vena kava ortaya çıkarmak için pamuklu bezler ve künt diseksiyon kullanın. Lomber damarları yaralamadan karın damarlarını yükseltmek için iki mikro iğne tutucu kullanarak, damarlara Cooley vasküler kelepçe yerleştirin. Karın damarlarını delmek için 30 ila 45 derece kemerli 27 gauge kanül kullanın.
Ve potts makası kullanarak delinme bölgesini donör damarlarının lümeni boyutuna uyan uzunlamasına bir kesi ye dönüştürün. Pıhtıları gidermek ve postoperatif trombozönlemek için damarlara tuzlu su koyun ve grefti situsun içine yerleştirin. İki basit kesintiye uğramış 8-0 kullanma monofilament rezorbable olmayan dikişler, uzunlamasına kesi kranial ve kaudal köşelerinde alıcı abdominal aort için artan donör aort düzeltmek.
Anastomozun ilk yarısını 8-0 ile yaparken alıcının karın aortu ile donörün yükselen aortanını anastomoza yerleştirmek için grefti alıcı damarların sağına yer. monofilament sütür. Daha sonra grefti alıcı damarların soluna yerleştirin ve anastomozun ikinci yarısını gerçekleştirin. Kranial ve kaudal köşelerde iki köşe düğümleri ile benzer bir şekilde inferior vena kava donör pulmoner arter düzeltin.
Her köşesinde düğümleri ile donör gemi sabitleme sonra, anastomoz ilk yarısında bir intraluminal anastomoz çalıştırmak için geminin içine dışarıdan bir dikiş yerleştirin. Dikiş aşağı bağlamadan önce, dışarıdan başka bir dikiş yerleştirin. Anastomozun ikinci yarısını bitirdikten sonra periferik emboliyi önlemek için, anastomozun ikinci yarısının düğümlerini sıkmadan önce anastomozu tuzlu suyla yıkayın.
Hem anastomozların etrafına hemostatik gazlı bez yerleştirin ve greft reperfüzyonuna izin vermek için Cooley vasküler kelepçeyi dikkatlice bırakın. Hafif sıkıştırma ve sterilize pamuk bezleri ile herhangi bir kanama yönetimi. Yaklaşık 60 saniye sonra kalp atmaya başlar.
Dikkatle bağırsak ları değiştirin ve ayrı sürekli 3-0 polifilament çalışan dikişler ile karın fasya ve cilt kapatın. Uygun deneysel zaman noktasında, gösterildiği gibi bir donör sıçan kalp hasat ve üç milimetre parçalara üç kalp parçalamak için steril bir neşter veya steril makas kullanın. 37 derece santigrat 30 dakika boyunca kollajenaz mililitre başına 0.5 miligram ile desteklenen kültür ortamı 20 mililitre parçaları sindirin.
Sindirim sonunda, kültür ortamı kaldırırken, büyük gözenekli elek için doku ekleyin. İzotonik tuz çözeltisi beş ila 10 mililitre ekleyin ve elek ile doku bulamaç zorlanma. Hücre süspansiyonuna iki kez santrifüj ettikten sonra 40 mikrometrelik bir süzgeçten geçirin.
Kalan hücreleri toplamak için beş ila 10 mililitre iyotonik tuzlu çözelti ile süzgeç durulayın. Ve santrifüjden sonra, izole edilmiş sıçan kalp hücrelerini mililitre başına beş kat 10 oranında salsal çözeltide yeniden askıya alın. Hücre çözeltisi ile bir mililitre şırınga yükleyin ve hedef kulak yukarı bakacak şekilde yanal bir pozisyonda anestezi alıcı hayvan yerleştirin.
Bir parmak ve çift taraflı bant ile kulak düzeltmek ve subkutan alıcının kulağına görsel kılcal damarlar yakın kardiyak kas hücresi çözeltisi 20 mikrolitre enjekte etmek için 27 gauge kanül kullanın. Uygun deneysel gözlem döneminden sonra, drenaj servikal lenf düğümleri ayıklayın ve ilgi uygun downstream analizleri gerçekleştirmek. Singenik nakli greft yetmezliği belirtileri olmadan 100 güne kadar hayatta kaldı.
Özel donör-alıcı kombinasyonu heterotopik kalp nakli reddi farklı hızlarda neden olabilir. Reddedilen kalplerin kriyostat bölümleri immün efektör hücrelerin infiltrasyonunun arttığını ortaya çıkarırken, sinjenik greftler büyük ölçüde bağışıklık hücrelerinden arınmaktadır. Oral kardiyak kas hücre enjeksiyonu sonrası lenf nodu hücrelerinin drenajı servikal lenfadenektomi ve yeniden stimülasyon tahlilleri, allojenik transplant alıcılarında heterotopik kardiyak dokuya yönelik farklı suş spesifik immün yanıtları ortaya çıkararak sitokin profilleme gibi immünolojik analizleri de garanti eder.
İğneyi takılıp çıkarırken damarları dikkatlice kullanın. Darlığı önlemek için dikişlere çok fazla dikkat etmeyin. Her anastomoz için çok fazla dikiş yerleştirmeyin.
