Flypub tsay alkol etkisi altında engellenen davranışları ölçer. Bu arada alkol kullanımı bozukluğu mekanistik çalışma kolaylaştıran. Alkol dünyada en çok kullanılan ve yaygın olarak kötüye kullanılan uyuşturuculardan biridir.
Ancak alkol kullanım bozukluğunun altında yatan nörobiyolojik mekanizma tam olarak anlaşılamamıştır. Meyve sinek, Drosophila melanogaster, yaygın etanol öfori üzerindeki etkilerini incelemek için kullanılmıştır, hareket, disinhibition, ve sedasyon. Aynı zamanda tolerans, sensitizasyon ve etanol arayışı gibi bağımlılık ile ilgili davranış uzun ve kalıcı değişiklikleri incelemek için kullanılır.
Drosophila ve diğer hayvan modellerinde birçok çalışma etanol lokomotor aktive etkileri üzerinde duruluyor. Etanolün belirgin etkisi davranışsal disinhibition dur. Ancak, bu çalışma oldukça az temsil edilir.
Bu önemli sorunu çözmek için, etanol etkisi altında engelsiz davranışı ölçmek için Flypub tsay geliştirdi. Flypub odasımonte etmek için, yuvarlak bir şişe almak ve bir jilet ile 25 mililitrelik işareti alt kısmını kesti. Sıcak lehim demiri kullanarak 50 mililitrelik noktada bir delik oluşturun.
Burası sineklerin tanıtılacağı erişim noktası. 75 mililitrelik mark çapı 54 milimetre yuvarlak bir örgü yerleştirin ve sıcak tutkal kullanarak güvenli. Açık alt ucunda çapı 70 milimetre açık bir plastik levha yerleştirin ve sıcak tutkal kullanarak güvenli.
Plastik yuvarlak sıkıca alt bağlı olduğundan emin olmak için, ağırlıkları kullanarak aşağı basınç. 33 bir grup halinde erkek sinektoplamak. Onları bir yiyecek şişesinin kenarına koy.
Etanol maruz kalmadan önce 2 gün boyunca en az %50 bağıl nem ve 12 saat ışık, 12 saat karanlık döngüsü ile 25 derece lik bir inkübatöre yerleştirin. Işıkları, bilgisayarı ve video kaydı için bir kamerayı açarak Flypub tsay istasyonunu hazırlayın. Bir dizi deney için altı pub hazırlayın.
1'den 6'ya kadar olan sayılarla etiketleyin. Yavaşça küçük bir huni kullanarak pub sinektanıtmak. Bir kaset kullanarak barı kapatın.
Sinekleri 10 dakika lığına alıştırın. Alışma sırasında kamera odaklarını ayarlayın ve son beş dakikayı kaydedin. Alışma sırasında etanol teslimatı için pamuk pedleri hazırlayın.
Dört eşit dörtte içine bir pamuk ped kesin ve sonra bir Petri çanak sığdırmak için köşeleri kırpın. Petri kabına pamukluk ekleyin. Pamuk ped% 95 etanol bir mililitre ekleyin.
Etanol çözeltisinin tüm ped alanında eşit olarak dağıtıldıklarından emin olun. Petri kabını laboratuvar mendilleri ile çabucak kapatın. Her pub'ın altına Petri kabı içeren bir etanol yerleştirin.
Sahnedeki barları hizala. Kayda başlayın ve aynı anda bir zamanlayıcı başlatın. Sinekler kur yapmayı veya hareket etmeyi durdurana kadar kaydedin.
Sineklerin %90'ından fazlası sakinleştirildiğinde Petri kabı nı içeren etanolü çıkarın. Sakinleştirilmiş sinekleri yavaşça yiyecek şişelerine aktarın. Onları kuvöze geri yerleştirin.
Önceki adımları altı gün boyunca her 24 saatte bir tekrarlayın. Bir medya oynatıcı kullanarak videoyu açın. Sonra her 10 saniyede bir kur yapan erkek sayısını puan.
Kur faaliyetleri aşağıdaki: tek taraflı kanat uzatma, kur zinciri, kur daire, karın bükme ve montaj içerir. Gösterilen sinek davranışı temsili kayıtları vardır. Uyum sırasında erkeklerin çok fazla aktivite göstermemesi.
Erkeklerin sporadik kur yaptığı ilk maruziyet sırasında. Ve erkeklerin aktivite kur larını sergiledikleri altıncı pozlama sırasında. On ikinci kez blok kur gösteren erkek sayısını girin.
Temsili bir veri noktası olarak art arda üç 10 saniyelik zaman blokları içine kur erkek maksimum sayısını kullanın. En yüksek değere sahip 10 ardışık veri noktasının ortalaması, pub başına erkekler arası kur yapma yüzdesini temsil ediyor. Yabani tip Kton-S tekrarlanan etanol maruziyeti üzerine disinhibited kur giderek artan faaliyetleri sergiler.
Bu etanol disinhibition etkisi davranışsal sensitizasyon temsil eder. Biz tiramin beta-hidroksilaz, T beta H, böylece ahtapotamin eksik olan sinekler test ederek sensitizasyon da ahtapotamin rolünü inceledik. Kton-S gibi, T beta H mutantları tekrarlanan etanol maruziyetine verilen tepkilerin arttığını gösterdiler, ama daha düşük bir seviyede.
T beta H ve Kton-S'i karşılaştırdığımızda, T beta H mutant erkeklerinin her maruziyette Kton-S erkeklere göre daha az çekingen kur sergiledikve bu da oksitaminin duyarlılık için önemli olabileceğini gösterdi. Artık Flypub analizini kullanarak etanoltarafından indüklenen davranışları ayarlayabilir, yönetebilir ve analiz edebilirsiniz. Akılda tutulması gereken önemli noktalar, bir, pub uygun montaj içerir.
İki, tutarlı etanol teslimatı, ve üç, kesin ve tarafsız davranış skoru. Flypub tsay birçok avantajı vardır. Bu basit, kurmak için ucuz ve öğrenmesi kolay.
Ayrıca, sinek birden fazla grup aynı anda, genetik veya deneysel manipülasyonetkilerini belirlemek için bu çalışma kolaylaştıran test edilebilir. Flypub tetki lise, lisans ve yüksek lisans öğrencileri, post docs ve fakülte ile ilköğretim de dahil olmak üzere her düzeyde deneyciler için son derece çekicidir. Özetle, Flypub tsay moleküler oyuncular, hücresel yollar, beyin devreleri ve alkol kullanımı bozukluğuna katkıda risk faktörleri belirlemek için izin verecektir.
