Washington Üniversitesi'nden Raymond Sanchez'e el yazması düzenlemedeki değerli yardımları ve M.Sc Georgina Cortés ve M.Sc Cintia Javier'e bu tekniğin standartlaştırılmasındaki teknik destekleri için minnettarız. Ayrıca Facultad de Estudios Superiores Zaragoza: MVZ'deki veterinerlik hizmetleri üyelerine de minnettarız. Adriana Altamirano, MVZ. Roman Hernández ve MVZ. Dolores-Elizabeth Guzmán deney hayvanlarının mükemmel bakımı ve bakımı için. Bu protokolde açıklanan deneyler DGAPA-PAPIIT hibe numarası: IN216015 ve CONACyT hibe numarası: roberto Domínguez'e 236908 desteklendi. Carlos-Camilo Silva, Program de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) doktor öğrencisidir ve Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Hibe numarası: 294555) tarafından desteklenmektedir.

Yazarların bu makaleye göre açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu makalede, uyanık ve sınırsız sıçanların beyninde herhangi bir zamanda ayrı bir bölgeyi geçici olarak devre dışı bırakma yöntemi açıklanmaktadır. Östrous döngülerini izlemek ve yumurtlamayı değerlendirmek için basit bir yöntem de sağlanır. Bu protokol, TTX ile tedavi edilen hayvanların yumurtlama sonuçlarını araç tarafından tedavi edilenlerinkiyle karşılaştırarak belirli beyin bölgelerinin yumurtlamayı yönlendiren mekanizmalara katkısının basit bir analizine izin verir. Nörob...

Yumurtlama, her estral/adet döngüsünde bir veya daha fazla olgun oositin yumurtalıklardan salındığı süreçtir. Tüm memeli türleri üremek için gametlerin üretimine bağlı olduğu için, yumurtlamayı düzenleyen mekanizmaların anlaşılması biyotıp, hayvancılık endüstrisi ve nesli tükenmekte olan türlerin bakımından geniş alanlarda büyük bir etkiye sahiptir. Yumurtlama, birkaç hipotalamik ve ekstra hipotalamik alanı, ön hipofizdeki gonadotropları ve oositlerle birlikte yumurtalıkların içindeki yumurtalık köklerini oluşturan theca ve granüloza hücrelerini içeren hipotalamik-hipofiz-yumurtalık ekseni ile düzenlenir1.
Yumurtalık folikülleri, folikül uyarıcı hormonun tonik ve phasic salgılanmasına ve gonadotroplar tarafından salgılanan iki gonadotropin olan luteinize edici hormona yanıt olarak büyür, gelişir ve sonunda yumurtlar. Gonadotropin salgılama patörü, uygun foliküler gelişim ve yumurtlama için çok önemlidir ve gonadotropin salgılayan hormon (GnRH)1,2tarafından düzenlenir. Bu nöropeptid, bazal diencephalon boyunca dağılmış nöronlar tarafından sentezlendi ve daha sonra hipotalamus ve ön hipofizini birbirine bağlayan portal vaskülat salgılandı. GnRH-nöronların salgı aktivitesi, çeşitli beyin yapılarından kaynaklanan sinaptik girdi ile modüle edilir. Bu yapılar, yiyeceklerin mevcudiyeti, fotoperiyodun uzunluğu ve kandaki hormonların konsantrasyonu da dahil olmak üzere organizmanın dış ve iç ortamının durumu hakkında bilgi aktarır. Bu anlamda, her türün üreme düzenini şekillendiriyorlar ve yumurtlamayı yöneten mekanizmaların düzgün bir şekilde anlaşılması için bu tür yapıların belirli rolleri belirlenmelidir. Örnek olarak, östrous döngüsü sırasında estradiol seviyelerindeki dalgalanmanın GnRH salgısını düzenlediği gösterilmiştir; bununla birlikte, GnRH-nöronları bu tür değişiklikleri tespit etmek için gereken estradiol reseptör izoformını ifade etmez. Bu reseptörleri ifade eden iki nöron popülasyonu, sırasıyla üçüncü ventrikülün rostral periventriküler bölgesinde ve arcuate çekirdeğinde ve GnRH-nöronları ile stablish sinapslarında bulunur. Bu nöronların estradiol konsantrasyonunu yorumladığını ve daha sonra GnRH salgısının güçlü bir indüktörü olan kisspeptin'i serbest bırakarak GnRH-nöronlarının aktivitesini uyardığını gösteren kanıtlarvardır 3.
Thermik veya kimyasal lezyonların yanı sıra mekanik sağırferentasyonu içeren deneyler, araştırmacıların yumurtlama4,5 , 6 , 7 ,8,9,10,11,12'nin düzenlenmesinde birkaç beyin yapılarının katılımını belirlemelerine izinverdi. . Bununla birlikte, bu deneyler invaziv ve travmatik olmanın dezavantajıdır, tedavinin etkilerini değerlendirmeden önce birkaç gün iyileşme gerektirir ve tedavinin akut etkilerinin analizini engeller. Ayrıca hedeflenen alanları kalıcı olarak etkiler ve uzun vadede diğer fizyolojik süreçleri bozar. Bu sorunlar nedeniyle, bu deneylerin sonuçları genellikle hayvanın vücudundaki homeostatik telafi edici mekanizmalar tarafından gizlenmektedir ve alanın dahil olduğu zamansal düzenleyici dinamikler hakkında doğru bilgi almak oldukça zordur.
Nöronların aktivitesini geçici olarak bozan ilaçların kılavuz kanüller aracılığıyla mikroenjeksiyonu, yukarıda belirtilen dezavantajları aşan uygun bir alternatiftir. Kanüller stereotaksik bir ameliyatla herhangi bir beyin bölgesine yerleştirilecek ve araştırmacının ameliyatın şaşırtıcı etkileri ortadan kaybolduktan sonra ilaç tedavisine başlamasını sağlar. İlaçların zamanlanmış mikroenjeksiyon, araştırmacıların bölgenin sürecin belirli bir adımına katkısı ile ilgili hipotezleri test etmelerini sağlar ve uyanık kısıtlanmış veya serbest hareket eden hayvanlarda gerçekleştirilebilir. Lokal anestezistler, agonistler, antagonistler, ters agonistler ve tetrodotoxin (TTX) gibi biyolojik toksinler de dahil olmak üzere çeşitli ilaçlar belirli zamanlarda ilgi alanına mikroenjeksiyon yapılabilir.
TTX, kirpi balığının vücudunda yaşayan bakterilerin yanı sıra diğer omurgalılar ve omurgasızlar tarafından sentezlenen biyolojik bir toksindir. TTX, sodyum kanallarının seçici ve geçici ablukası yoluyla sinirsel aktiviteyi susturur, bu da sodyuma bağımlı eylem potansiyellerinin inhibisyonu ile sonuçlanır. TTX varlığında, hücreler depolarizasyon aşamasında bir değişiklik yaşarlar ve bu nedenle heyecan verici değildir, ancak canlı kalırlar. TTX'in bloke etkisi moleküler bileşimi ile açıklanmaktadır: bir guanidinium grubu sodyum kanalının hücre dışı yönünden geçebilir, ancak molekülün geri kalanı boyutu nedeniyle geçemez, bu nedenle sıkışmıştır ve kanal13 , 14,15,16,17'yi engeller. . TTX'in etki mekanizması, sinir sistemini hem in vitro hem de in vivo incelemek için bir araç olarak kullanılmasına izin verdi. Bu toksinin intraserebral enjeksiyonu, hafıza tutma18,uyku ve uyarılma 19 , yer tanıma20, mekansal navigasyon21, uyuşturucu bağımlılığı 22 , termoregülasyon23, şizofreni gelişimi24,cinsel davranış25ve yumurtlamanın düzenlenmesi26gibi çeşitli işlemlerde ayrı beyin bölgelerinin rolünü incelemek için kullanılmıştır. diğerleri arasında. Bu protokolde hipotalamik çekirdeklerin uyanık ve sınırsız sıçanlarda TTX mikroenjeksiyonu ile geçici inaktivasyonunun yumurtlaması üzerindeki etkileri açıklıyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 &#956;L Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 G x 1&#34; stainless steel hypdermic needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G x 1&#34; stainless steel hypdermic needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G x 1/2&#34; stainless steel hypdermic needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial cerebrospinal fluid</td>
			<td>BASi</td>
			<td>MD-2400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone trimer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16152-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burr for micro drill</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>19007-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cut-off disc</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>SM5010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting tweezers</td>
			<td>Truper</td>
			<td>17367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocrylate glue</td>
			<td>Kola loka</td>
			<td>K-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Nic Tone</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enrofloxasin</td>
			<td>Senosiain</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E4009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estereoscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Bonn scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Face mask</td>
			<td>Lanceta HG</td>
			<td>60036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxilin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13008-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypromelose artificial tears</td>
			<td>Sophia Labs</td>
			<td>8950015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Pisa Agropecuaria</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Aranda</td>
			<td>1183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection pump</td>
			<td>KD Scientific</td>
			<td>788380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monomer</td>
			<td>Nic Tone</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mototool</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>Lanceta HG</td>
			<td>69028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Rupture Ear Bars</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine</td>
			<td>Dermo Dine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine with soap</td>
			<td>Germisin espuma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure tweezers</td>
			<td>Truper</td>
			<td>17371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat anesthesia mask</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>PISA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10015-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pentobarbital</td>
			<td>Pisa Agropecuaria</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard electrode holder</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>1770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel wire</td>
			<td>American Orthodontic</td>
			<td>856-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 900LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Sissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon connectors</td>
			<td>Basi</td>
			<td>MD-1510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon tubing</td>
			<td>Basi</td>
			<td>MF-5164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrodotoxin</td>
			<td>Alomone labs</td>
			<td>T-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaporizer</td>
			<td>Kent scientific</td>
			<td>VetFlo</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

unraveling the role of discrete areas of the rat brain in the regulation of ovulation through reversible inactivation by tetrodotoxin microinjections

Yumurtlamanın düzenlenmesinde beynin rolünü incelemek için birçok deneysel yaklaşım kullanılmıştır. Örnekler arasında, her ikisi de hedef alanın bütünlüğünü kalıcı olarak bozan invaziv yöntemler olan nöronal grupların lezyonu ve sağırferentasyonu say verilebilir. Bu yöntemlere akut ve zamansal düzenleyici mekanizmaların analizini etkileyebilecek ikincil etkiler eşlik eder. Belirli beyin bölgelerini hedefleyen kılavuz kanüllerin stereotaksik implantasyonu, ardından bir iyileşme dönemi, araştırmacıların ameliyatın istenmeyen etkilerinin ortadan kalkmasından sonra farklı ilaçları mikroenject etmelerini sağlar. Tetrodotoksin, çeşitli fizyolojik süreçlerde birkaç beyin bölgesinin rollerini belirlemek için kullanılmıştır, çünkü sodyuma bağımlı eylem potansiyellerini geçici olarak inhibe eder, böylece hedef bölgedeki tüm sinirsel aktiviteyi engeller. Bu protokol, bu yöntemi, östrous döngüsünün herhangi bir aşamasının belirli zamanlarında yumurtlamanın düzenlenmesinde ayrı beyin bölgelerinin rolünü ortaya çıkarmak için östrous döngüsünün ve yumurtlamanın değerlendirilmesi için stratejilerle birleştirir. Anesteziklerin ve stres hormonlarının yumurtlama üzerinde uyguladığı bloke etme etkilerinden kaçınmak için uyanık ve sınırsız sıçanlar(Rattus norvegicus)kullanılmıştır. Bu protokol, farklı fizyolojik süreçleri incelemek için diğer türlere, beyin hedeflerine ve farmakolojik ajanlara kolayca uyarlanabilir. Bu yöntemde gelecekteki iyileştirmeler, kılavuzüller yerine küçük çaplı cam kılcal damarlar kullanılarak bir mikroenjeksiyon sisteminin tasarlanmasını içerir. Bu, implantasyon sırasında hasar gören doku miktarını azaltacak ve aşılanan ilaçların hedef alan dışına yayılmasını azaltacaktır.

Yukarıda açıklanan protokol, tek bir TTX veya aracın (yapay beyin omurilik sıvısı) etkileri değerlendirilerek test edildi; ACSF) sıçanda yumurtlamanın düzenlenmesinde rol aldığı bilinen iki farklı çekirdeklerden birine mikroenjeksiyon: suprachiasmatic ve arcuate çekirdeği. Suprachiasmatic çekirdeği, memelilerde merkezi sirkadiyen kalp pilini içerdiğinden seçilmiştir. Gonadotropinlerin salgılanması olarak döngüsel olayların düzenlenmesinde rol oynar. Arcuate çekirdeği, östrous döngüsün...

Watch this Scientific Journal Video about Unraveling the Role of Discrete Areas of the Rat Brain in the Regulation of Ovulation through Reversible Inactivation by Tetrodotoxin Microinjections at JoVE.

Unraveling the Role of Discrete Areas of the Rat Brain in the Regulation of Ovulation through Reversible Inactivation by Tetrodotoxin Microinjections

Bu protokol, düşük maliyetli bir mikroenjeksiyon sisteminin inşasını, derin beyin yapılarına stereotaksik implantasyonunu ve uyanık ve sınırsız sıçanlarda tetrodotoksin zamanlanmış mikroenjeksiyon prosedürünü açıklar. Amaç, hipotalamik yapıların nöral aktivitelerini engelleyerek yumurtlamanın düzenlenmesine katılımını ortaya çıkarmaktır.

Tetrodotoksin Mikroenjeksiyonları ile Ters İnaktivasyon Yoluyla Yumurtlamanın Düzenlenmesinde Sıçan Beyninin Ayrık Alanlarının Rolünün Çözülmesi

Many experimental approaches have been used for studying the role of the brain in the regulation of ovulation. Examples include the lesion and ...

This protocol allows researchers to explore the nuclei of the neuronal circuits that regulates ovulation in female mammals at specific times of their estrous cycle.This technique can be adapted to study any process on the regulation of the brain in any species.Also they can less art fabricator in the lab lowering the overall cost.Demonstrating this procedure will be Montserrat Bola

unraveling-role-discrete-areas-rat-brain-regulation-ovulation-through

Research

JoVE Journal

Neuroscience

2.9K Görüntüleme.  Universidad Nacional Autónoma de México. This protocol allows researchers to explore the nuclei of the neuronal circuits that regulates ovulation in female mammals at specific times of their estrous cycle.This technique can be adapted to study any process on the regulation of the brain in any species.Also they can less art fabricator in the lab lowering the overall cost.Demonstrating this procedure will be Montserrat Bola

Video: Unraveling the Role of Discrete Areas of the Rat Brain in the Regulation of Ovulation through Reversible Inactivation by Tetrodotoxin Microinjections