이 작품은 국립 보건원 (NIH), 보조금 R00-DK114498, 미국 농무부 (USDA), 보조금 CRIS에 의해 지원됩니다 : 3092-51000-062 Y. Z. Z.

동물은 베일러 의과 대학 (BCM)의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 동물 관리 및 실험 프로토콜에 따라 표준화 된 조건에 보관됩니다. 동물은 표준 또는 특별한 식단, 물 광고 리비툼을 공급하고 12 시간 주 /밤 주기로 유지됩니다.
1. 금식 세럼 지질 의 측정
<ol><li>마우스를 오후 5시 이후에 새로운 케이지로 옮기고 밤새 (실험 전에 약 16 시간의 금식)에 무료로 접근할 수 있습니다. 하룻밤 단식은 마우스의 위장관의 완전한 비우는 것을 보장합니다. 참고 : 마우스는 금식 하는 동안 그들의 대변을 먹고, 그래서 음식 철수 적절 하 게 금식 보장 할 수 없습니다.</li>
	<li>다음 아침, 꼬리에 마우스를 잡고 표면에 놓습니다. 마우스의 꼬리를 부드럽게 뒤로 당겨 마우스를 제지에 놓습니다. 마우스가 숨을 쉴 수 있도록 하면서 마우스의 움직임을 재교육하기 위해 코 구속을 놓습니다. 코 구속의 손잡이를 조입니다. 가슴 움직임을 모니터링하여 동물이 정상적으로 호흡하고 있는지 확인하고 마우스가 제지기에서 보내는 시간을 최소화합니다.</li>
	<li>자유 이동 마우스의 꼬리 정맥에 피상적 절개 (닉)를 만들고, 마우스를 억제하지 않고 유리 모세관 (모세관의 약 1/3 채우기)에 절개에서 혈액의 25 μL을 그립니다. 신속하게 마이크로 원심 분리기 튜브에 혈액을 날려.</li>
	<li>비타이스틱 파우더를 사용하여 출혈을 멈추고 케이지의 사료를 다시 채우고 쥐가 스트레스의 징후가 없는지 확인하십시오.</li>
	<li>모든 마우스에 대한 혈액 철수를 완료합니다.</li>
	<li>1 시간 동안 실온에서 방해받지 않고 방치하여 혈액이 응고되도록하십시오. 응고된 혈액 샘플을 4°C에서 4°C에서 10분간 냉장 벤치탑 미세원심분리기에서 10분간 회전시키고 분석을 위해 상류체(혈청)를 전달합니다. 참고: 혈청은 분석전까지 몇 주 동안 -20°C에 보관할 수 있습니다. 장기 보관을 위해 혈청을 -70°C로 유지하십시오.</li>
	<li>제조업체의 제공된 프로토콜을 사용하여 각 지질 대사 산물을 분석합니다.</li>
</ol>2. 구강 내측 내성 검사
<ol><li>오후 5시 이후에, 마우스의 무게를 측정하여 다음 날 그들에게 주어질 인트라피드 부피의 계산을 한다. 그런 다음 마우스를 새 케이지로 옮기고 하룻밤 사이에 빨리 (16 시간).</li>
	<li>다음 날 아침, 한 케이지에 보관된 마우스의 꼬리를 표시하여 후속 출혈 단계에서 이를 식별할 수 있습니다.</li>
	<li>꼬리 정맥에 닉을 만들고 유리 모세관 (모세관의 약 1/5을 채우기)에 절개에서 혈액의 15 μL을 그리고 신속하게 T = 0 혈청에 대한 미세 원심 분리 튜브로 혈액을 날려. 참고: 쥐가 과도한 출혈을 보이지 않는 한 분석 중에 출혈을 멈출 필요가 없습니다.</li>
	<li>가바게마우스는 18G 개비지 니를 사용하여 18G 개비지 니를 사용하여 체중 1그램당 15 μl의 비율로, 프리 금식 웨이트를 사용한다. 각 마우스를 1분씩 쌓아 두습니다. 참고 : 동물의 무게를 측정하고 적절한 gavage 바늘 크기를 결정합니다. 일반적으로, 18 게이지 gavage 바늘은 마우스>25 g에 적합하며, 20-22 게이지 게이지 바늘은 더 작은 동물에게 더 적합할 것이다. 마우스를 으쓱하고, 어깨 위로 피부를 잡고 동물의 머리를 제자리에 고정시합니다. 입에 게가지 바늘을 놓고 식도에 도달할 때까지 위 쪽 입맛을 따라 부드럽게 전진합니다. 튜브는 저항없이 통과해야합니다. 적절한 깊이에 도달하면 인트라리피드를 천천히 관리할 수 있습니다. 인트라리피드를 관리한 후 바늘 삽입 시 동일한 각도로 바늘을 부드럽게 제거합니다. 동물을 케이지로 돌려보내 고된 호흡이나 다른 고통의 징후를 모니터링하십시오. 참고: 구강 영역 이나 꼬리 출혈 기술에 경험이 없는 연구원은 2 분 이상 각 마우스를 스택수 있습니다.</li>
	<li>T = 1, 2, 3, 4, 5 및 6 시간에서 혈액을 그립니다 : 꼬리 출혈을 통해 마우스 당 혈액 15 μL (1/5 모세관)을 끌어 내고 혈액을 미세 센세리립후체 튜브로 빠르게 날려 넣습니다.</li>
	<li>마이크로 센드심분리기에서 10분 동안 실온에서 2,000 x g의 혈액 샘플을 회전시합니다. 부동 지방 층을 포함한 상체를 PCR 튜브로 이송하여 보관합니다. 상체는 분석될 때까지 몇 주 동안 -20°C에 저장할 수 있습니다. 참고: 상체는 플라즈마여야 합니다. 원심분리 시에 의해 이미 응고된 일부 샘플이 있는 경우 트리글리세라이드 측정에는 영향을 미치지 않습니다.</li>
	<li>마지막 혈액 수집 후, 스티피스틱 분말을 사용하여 출혈을 중지, 케이지에서 사료를 다시 채우고, 쥐가 극단적 인 스트레스의 흔적을 표시하지 않도록.</li>
	<li>트리글리세라이드 표준의 2 μL을 적재하고 수집된 초자연체를 96웰 플레이트에 넣습니다.</li>
	<li>트리글리세라이드 시약 200μL를 추가하고 색상 개발을 위해 37°C에서 플레이트를 5분간 배양하게 하십시오.</li>
	<li>실험실 플레이트 판독기에서 660nm의 기준 파장을 사용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하고 시료의 농도를 계산합니다.</li>
</ol>3. β3 아드레너기식 수용체 아고니스트 CL 316,243 자극된 Lipolysis 분석
<ol><li>CL 316,243을 멸균 식염수에 5 mg/mL(50x)의 스톡 솔루션으로 준비하고, 사용 전까지 -20°C에 보관하십시오.</li>
	<li>아침에, 실험에 필요한 희석 된 CL 316,243 용액의 양을 계산하기 위해 마우스를 무게. 마우스는 희석 된 CL 316,243의 체중 의 그램 당 10 μL을 받게됩니다, 1 mg / kg 체중의 최종 복용량.</li>
	<li>생쥐를 물에 무료로 접근할 수 있는 새 케이지로 옮기고 4시간 동안 빠르게 처리합니다.</li>
	<li>식염수를 사용하여 50배 재고로부터 충분히 1배 CL 316,243 솔루션을 만듭니다. 1x CL 316,243용액의 최종 농도는 0.1 mg/mL이다. 대조군 치료 그룹에 식염수 사용.</li>
	<li>출혈 단계 동안 쉽게 식별할 수 있습니다.</li>
	<li>꼬리 정맥에 닉을 만들고, 절개로부터 15 μL의 혈액을 유리 모세관 (모세관의 약 1/5 채우기)으로 끌어 내고 T = 0 샘플용 미세 원심 분리 튜브로 혈액을 신속하게 날려 넣습니다. 참고: 쥐가 과도한 출혈을 보이지 않는 한 분석 중에 출혈을 멈출 필요가 없습니다.</li>
	<li>희석 된 CL 316,243 용액 (또는 실험에 포함 되는 경우 제어) 10 μL/g 체급의 부피에 내회적으로 주입. 각 마우스를 1분씩 쌓아 두습니다. 각 60분 실험에 대해 최대 5마리의 마우스를 사용하거나 2인 팀에 10마리의 마우스를 사용하십시오.</li>
	<li>T = 5, 15, 30, 60 분에서 혈액을 그립니다 : 꼬리 출혈을 통해 마우스 당 혈액 (1/5 모세관)의 15 μL을 그립니다.</li>
	<li>마지막 혈액 수집 후, 스티피스틱 분말을 사용하여 출혈을 중지, 케이지에서 사료를 다시 채우고, 쥐가 극단적 인 스트레스의 흔적을 표시하지 않도록.</li>
	<li>냉장 된 미세 원심 분리기에서 5 분 동안 4 °C에서 2,000 x g에서 혈액 샘플을 회전시하십시오. 저장을 위해 상체를 PCR 튜브로 전송합니다. 상체는 분석될 때까지 몇 주 동안 –20°C에 저장할 수 있습니다.</li>
	<li>2x 연속 희석 글리세롤 표준(0.156, 0.312, 0.625, 1.25 및 2.5 mg/ml 트리렐린-동등한 농도)의 1 μL을 적재하고, 96웰 플레이트에 수퍼나티를 수집하였다. 무료 글리세롤 시약 100μL을 추가하고, 색상이 발달할 수 있도록 플레이트가 37°C에서 5분간 배양하게 합니다.</li>
	<li>실험실 플레이트 판독기를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하고 샘플의 농도를 계산합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+chylomicron+uptake+into+lacteals.">Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, 52-57 (2010).</li><li>Nuno, J., de Oya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoprotein+lipase:+review.">Lipoprotein lipase: review.</a> Revista Cl&#237;nica Espa&#241;ola. 170 (3-4), 83-87 (1983).</li><li>Williams, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+processes+that+handle+--+and+mishandle+--+dietary+lipids.">Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids.</a> Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).</li><li>Burla, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MS-based+lipidomics+of+human+blood+plasma:+a+community-initiated+position+paper+to+develop+accepted+guidelines.">MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines.</a> Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).</li><li>Umpleby, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone+measurement+guidelines:+Tracing+lipid+metabolism:+the+value+of+stable+isotopes.">Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes.</a> Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).</li><li>Mitchell, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+paired+sibling+analysis+of+the+beta-3+adrenergic+receptor+and+obesity+in+Mexican+Americans.">A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).</li><li>Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caloric+restriction+in+C57BL/6J+mice+mimics+therapeutic+fasting+in+humans.">Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans.</a> Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).</li><li>Hayek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+increases+high+density+lipoprotein+(HDL)+levels+both+by+increasing+the+transport+rates+and+decreasing+the+fractional+catabolic+rates+of+HDL+cholesterol+ester+and+apolipoprotein+(Apo)+A-I.+Presentation+of+a+new+animal+model+and+mechanistic+studies+in+human+Apo+A-I+transgenic+and+control+mice.">Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).</li><li>Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+evidence+for+the+absence+of+a+functional+cholesteryl+ester+transfer+protein+gene+in+mice+and+rats.">Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry &amp; Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).</li><li>Tall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+cholesterol+ester+transfer+protein+and+relationship+to+coronary+artery+disease+risk.">Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk.</a> Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).</li><li>Singh, A. K., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglyceride+and+cardiovascular+risk:+A+critical+appraisal.">Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal.</a> Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).</li><li>Miller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglycerides+and+cardiovascular+disease:+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).</li><li>Dron, J. S., Hegele, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Hypertriglyceridemia.">Genetics of Hypertriglyceridemia.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455 (2020).</li><li>Dole, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relation+between+non-esterified+fatty+acids+in+plasma+and+the+metabolism+of+glucose.">A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose.</a> Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).</li><li>Bartelt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue+activity+controls+triglyceride+clearance.">Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance.</a> Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).</li><li>de Souza, C. J., Burkey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta+3-adrenoceptor+agonists+as+anti-diabetic+and+anti-obesity+drugs+in+humans.">Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans.</a> Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).</li><li>Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-adrenergic+control+of+lipolysis+and+thermogenesis+in+adipose+tissues.">Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues.</a> Journal of Experimental Biology. 221, (2018).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

세 가지 애서에서는 몇 가지 중요한 고려 사항과 함께 실험실에서 기능을 강력하게 설명했습니다. 야간 금식은 금식 혈청 지질 수준 과 경구 내측 내성 시험을 결정하기 위해 필요합니다. 경구 내립 성 내성 검사의 경우, 특히 1 시간 및 2 시간 지점에서 지방 층의 형성을 최소화하기 위해 실온에서 혈액을 회전하는 것이 중요합니다. 형성하는 경우이 지방 층을 버리지 않는 것이 중요합니다. 상체?...

탄수화물과 지질은 에너지 대사를 위한 두 가지 주요 기판입니다. 비정상적인 지질 대사는 타입 II 당뇨병, 심혈관 질환, 지방 간 질환 및 암을 포함한 많은 인간 질환을 초래합니다. 식이 지질, 주로 트리 글리세라이드, 림프계로 내장을 통해 흡수 하 고 심장 근처 chylomicrons에서 정맥 순환을 입력1. 지질은 혈류량의 지단백 입자에 의해 운반되며, 지방산 모이드는 근육 및 지방 조직2와같은 말초 기관에서 지단류 의 작용에 의해 해방된다. 나머지 콜레스테롤이 풍부한 잔재 입자는 간3에의해 지워집니다. 마우스는 지질 대사를 연구하기 위한 연구 모델로 실험실에서 널리 사용되어 왔습니다. 포괄적인 유전 도구 세트를 사용할 수 있고 상대적으로 짧은 번식 주기를 통해 지질이 어떻게 흡수되고 합성되고 대사되는지 연구할 수 있는 강력한 모델입니다.
지질 대사의 복잡성으로 인해, 정교한 지질학 연구 또는 동위원소 추적기 연구는 일반적으로 지질 종 또는 지질 관련 대사 플럭스와운명4,5의수집을 정량화하는 데 사용된다. 이것은 전문 장비 나 전문 지식이없는 연구자에게 엄청난 도전을 만듭니다. 이 논문에서는 기술적으로 도전적인 기술이 사용되기 전에 초기 테스트역할을 할 수 있는 세 가지 논문을 제시합니다. 그(것)들은 마우스를 위한 비 단말 절차이고, 따라서 지질 취급 용량에 있는 잠재적인 다름을 확인하고 영향을 받은 프로세스를 좁히는 데 아주 유용합니다.
첫째, 금식 혈청 지질 분자를 측정하는 것은 마우스의 전반적인 지질 프로파일을 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다. 마우스는 식사 후 많은 지질 종상승하기 때문에 금식해야하며, 증가 정도는 식단의 조성에 의해 강하게 영향을 받습니다. 총 콜레스테롤, 트리글리세라이드 및 비에스테르화 지방산(NEFA)을 포함한 많은 지질 분자는 흡광도를 읽을 수 있는 상용 키트 및 플레이트 판독기를 사용하여 측정할 수 있습니다.
둘째, 구강 내성 내성 검사는 흡수와 신진 대사의 순 효과로서 지질 처리 능력을 평가합니다. 구두로 투여된 내tralipid는 순환 트리글리세라이드 수준(1-2시간)에 스파이크를 일으키고, 그 후 혈청 트리글리세라이드 수준이 기저 수준(4-6시간)으로 돌아갑니다. 이 분석법은 마우스가 외인성 지질을 얼마나 잘 처리할 수 있는지에 대한 정보를 제공합니다. 심장, 간 및 갈색 지방 조직은 트리글리세라이드의 활성 소비자이며, 흰색 지방 조직은 이를 에너지 매장량으로 저장합니다. 이러한 함수의 변경은 테스트 결과의 차이로 이어질 것입니다.
마지막으로, 저장된 지질을 동원하기 위해 lipolysis를 촉진하는 것은 체중 감량을위한 가능한 전략으로 간주됩니다. β3-adrenergic 수용체 신호 경로는 지방 조직에서 지방 조직에 있는 백혈구 lipolysis에 있는 중요한 역할을 하고, 인간 유전학은 비만과 상관되는 β3-adrenergic 수용체에 있는 기능다형성 Trp64Arg의 기능 상실을 확인했습니다6. CL 316,243, 특이적이고 강력한 β3-아드레너기능 수용체 작용제, 지방 조직 lipolysis 및 글리세롤의 방출을 자극한다. CL 316,243에 대한 마우스의 반응평가는 화합물의 효능의 개발, 개선 및 이해에 대한 귀중한 정보를 제공할 수 있다.
전체적으로, 이 시험은 마우스의 지질 대사 상태에 있는 변경을 위한 초기 스크린으로 이용될 수 있습니다. 그들은 악기와 시약의 접근성을 위해 선택됩니다. 이 연구에서 파생 된 결과, 연구원은 그들의 동물의 신진 대사 적합성의 전반적인 그림을 형성 하 고 더 정교 하 고 대상된 접근 에 결정 할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20% Intralipid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml</td>
			<td>Shaotong</td>
			<td>B07F1KRMYN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL 316,243 Hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Feeding Needles (18 Gauge)</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>FNC-18-2-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free Glycerol Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol Standard Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>999-34691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>991-34891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>995-34791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>993-35191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>50989-161-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix Plus Chemistry Reference Kit</td>
			<td>Verichem</td>
			<td>9500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-222-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-362-574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEFA STANDARD SOLUTION</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>276-76491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Boston Bioproducts</td>
			<td>BM-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Triglycerides Reagent</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TR22421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total Cholesterol Reagents</td>
			<td>Thermo Scientifi</td>
			<td>TR13421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>11695-4022-1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing whole-body lipid-handling capacity in mice

지질 대사를 평가하는 것은 신진 대사 기능을 평가하는 초석이며 생체 대사 연구에 필수적인 것으로 간주됩니다. 지질은 그들의 합성 및 신진 대사에 관련 된 많은 경로와 많은 다른 분자의 클래스. 영양 및 비만 연구를 위한 지질 hemostasis를 평가하기 위한 출발점이 필요합니다. 이 논문은 마스터하기 위하여 작은 전문 지식 또는 사례를 필요로 하는 3개의 쉽고 접근가능한 방법을 설명하고, 마우스에 있는 지질 대사 이상을 위해 검열하기 위하여 대부분의 실험실에 의해 적응될 수 있습니다. 이들 방법은 (1) 구강 내립내성 검사를 통해 식이 지질 처리 기능을 위한 상용 키트(2)를 이용한 여러 금식 혈청 지질 분자를 측정하고, (3) 약제화합물인 CL 316,243, 마우스에 대한 반응을 평가한다. 함께, 이러한 방법은 마우스에서 지질 처리 기능의 높은 수준의 개요를 제공 할 것입니다.

우리는 각 분석이 마우스의 지질 대사에 대한 귀중한 정보를 제공한다는 세 가지 발췌문으로 보여줍니다. C57BL/6J 남성 마우스의 경우 8주에서 8주간의 고지방 식단(HFD) 사료를 섭취하여 8주 동안 공급에 어려움을 겪고 있으며, 총 콜레스테롤 수치가 크게 상승했으며 혈청 트리글리세라이드와 NEFA는 그렇지 않았으며혈액내트리글리세라이드와 NEFA가 식이 지방 챌린지에 의해 주로 규제?...

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Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

이 논문은 마우스의 지질 대사를 평가하기 위한 3가지 쉽고 접근 가능한 에세이를 제공합니다.

마우스에서 전신 지질 처리 용량 평가

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

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비디오: Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Transthoracic Echocardiography in Mice

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene expression. Transgenic and gene targeting methods can be used to generate mice with altered cardiac size and function,1-3 and as a result, in vivo techniques are needed to evaluate their cardiac phenotype. Transthoracic echocardiography, pulse wave Doppler (PWD), and tissue Doppler imaging (TDI) can be used to provide dimensional measurements of the mouse heart and to quantify the degree of cardiac systolic and diastolic performance. Two-dimensional imaging is used to detect abnormal anatomy or movements of the left ventricle, whereas M-mode echo is used for quantification of cardiac dimensions and contractility.4,5 In addition, PWD is used to quantify localized velocity of turbulent flow,6 whereas TDI is used to measure the velocity of myocardial motion.7 Thus, transthoracic echocardiography offers a comprehensive method for the noninvasive evaluation of cardiac function in mice.

Transthoracic echocardiography offers a noninvasive method for the evaluation of cardiac function in mice. A combination of ultrasound and Doppler imaging modalities can be used to obtain dimensional measurements of the heart and intracardiac blood flow, which together provide an assessment of cardiac systolic and diastolic performance.

마우스에 Transthoracic Echocardiography

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene ...

연구

의학

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

태아 알코올 노출의 Zebrafish 모델에서 Teratogenic 변경 사항 평가

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

마우스의 긴 기간 온 몸이 고열에 대한 프로토콜

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

One desirable endpoint of general anesthesia is the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is less straightforward than it is in human patients. A widely used behavioral surrogate for hypnosis in rodents is the loss of righting reflex (LORR), or the point at which the animal no longer responds to their innate instinct to avoid the vulnerability of dorsal recumbency. We have developed a system to assess LORR in 24 mice simultaneously while carefully controlling for potential confounds, including temperature fluctuations and varying gas flows. These chambers permit reliable assessment of anesthetic sensitivity as measured by latency to return of the righting reflex (RORR) following a fixed anesthetic exposure. Alternatively, using stepwise increases (or decreases) in anesthetic concentration, the chambers also enable determination of a population's sensitivity to induction (or emergence) as measured by EC50 and Hill slope. Finally, the controlled environmental chambers described here can be adapted for a variety of alternative uses, including inhaled delivery of other drugs, toxicology studies, and simultaneous real-time monitoring of vital signs.

Loss of the righting reflex has long served as a standard behavioral surrogate for unconsciousness, also called hypnosis, in laboratory animals. Alterations in volatile anesthetic sensitivity caused by pharmacological interventions can be detected with a carefully controlled high-throughput assessment system, which may be adapted for delivery of any inhaled therapeutic.

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in post-menopausal women has not been adequately studied. Accordingly, we investigated the impact of voluntary cage-wheel exercise and forced treadmill exercise on cardiac adaptation in menopausal mice. The most commonly used inducible model for mimicking menopause in women is the ovariectomized (OVX) rodent. However, the OVX model has a few dissimilarities from menopause in humans. In this study, we administered 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) to female mice, which accelerates ovarian failure as an alternative menopause model to study the impact of exercise in menopausal mice. VCD selectively accelerates the loss of primary and primordial follicles resulting in an endocrine state that closely mimics the natural progression from pre- to peri- to post-menopause in humans. To determine the impact of exercise on exercise capacity and cardiac adaptation in VCD-treated female mice, two methods were used. First, we exposed a group of VCD-treated and untreated mice to a voluntary cage wheel. Second, we used forced treadmill exercise to determine exercise capacity in a separate group VCD-treated and untreated mice measured as a tolerance to exercise intensity and endurance.

Two exercise paradigms were tested on a newly developed chemically induced menopausal mouse model to examine the impact of menopause on exercise capacity and cardiac adaption to exercise.

쥐의 운동 능력과 심장 적응에 화학적으로 유도 된 난소 실패의 영향을 연구하는 방법

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key element is the quantitative determination of a tumor-specific genetic alteration in relation to a universal sequence using a dual-probe digital PCR assay and the subsequent calculation of the proportion of tumor cells. The assay is carried out on a culture containing tumor cells of an established line and spiked-in non-tumor cells. The mixed culture is treated with a test drug at various concentrations. After the treatment, DNA is prepared directly from the survived adhesive cells in wells of 96-well plates using a simple and inexpensive method, and subjected to a dual-probe digital PCR assay for measuring a tumor-specific genetic alteration and a reference universal sequence. In the present demonstration, a heterozygous deletion of the NF1 gene is used as the tumor-specific genetic alteration and a RPP30 gene as the reference gene. Using the ratio NF1/RPP30, the proportion of tumor cells was calculated. Since the dose-dependent change of the proportion of tumor cells provides an in vitro indication for specificity of the drug, this genetic and cell-based in vitro assay will likely have application potential in drug discovery. Furthermore, for personalized cancer-care, this genetic- and cell-based tool may contribute to optimizing adjuvant chemotherapy by means of testing efficacy and specificity of candidate drugs using primary cultures of individual tumors.

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

The goal of this protocol is to assess specificity of anticancer drugs in vitro using mixed cultures containing both tumor and non-tumor cells.

항암 약의 특이성 평가<em&gt; 체외</em

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

인-31 자기 공명 분광학 : 측정을위한 도구<em&gt; 생체</em인간의 골격 근육에&gt; 미토콘드리아 산화 적 인산화 능력

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard therapy, a considerable number of CLI patients are not suited for either surgical or endovascular revascularization. Angiogenic therapies are emerging as an option for these patients but are currently still under investigation. Before application in humans, those therapies must be tested in animal models and its mechanisms must be clearly understood. An animal model of hindlimb ischemia (HLI) has been developed by the ligation and excision of the distal external iliac and femoral arteries and veins in mice. A comprehensive panel of tests was assembled to assess the effects of ischemia and putative angiogenic therapies at functional, histologic and molecular levels. Laser Doppler was used for the flow measurement and functional assessment of perfusion. Tissue response was evaluated by the analysis of capillary density after staining with the anti-CD31 antibody on histological sections of gastrocnemius muscle and by measurement of collateral vessel density after diaphonization. Expression of angiogenic genes was quantified by RT-PCR targeting selected angiogenic factors exclusively in endothelial cells (ECs) after laser capture microdissection from mice gastrocnemius muscles. These methods were sensitive in identifying differences between ischemic and non-ischemic limbs and between treated and non-treated limbs. This protocol provides a reproducible model of CLI and a framework for testing angiogenic therapies.

Here, a critical hindlimb ischemia experimental model is presented followed by a battery of functional, histologic and molecular tests&#160;to assess the effectiveness of angiogenic therapies.&#8203;

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...