Bu subaraknoid kanama modeli, patofizyolojik mekanizmaları ve sonuçlarını daha iyi anlamamıza yardımcı olur. Bu, umarım tedavilerin üretilmesine ve etkilenen hastalarda hastalık yükünün azaltılmasına neden olur. Bu tekniğin temel avantajı, sabit miktarda kan enjekte edildiğinden, yüksek oranda tekrarlanabilir olmasıdır.
Ayrıca, anahtar parametrelerde bir insan subaraknoid kanamasına benzer. ICP probunu yapmak için, 20 milimetrelik bir polietilen boru parçasının bir ucunu yakın, dairesel bir plaka yapın ve lümeni açık tutun. Ardından, polietilen borunun sonuna 10 milimetrelik bir silikon boru parçası bağlamadan önce polietilen boru üzerine bir milimetrelik silikon boru halkası kaydırın.
Daha sonra, stereotaksik bir çerçeveye yerleştirmeden önce bir Sprague Dawley sıçanını anestezi altına alın, entübe edin ve kateterize edin. Lokal anestezi uygulamasını takiben, orta hatta iğne delinmesinden kaudal olarak sekiz milimetrelik bir cilt kesisi yapın. Diseksiyon mikroskobu altında, atlantooksipital membranı tanımlamak için tüm kasları katmanlar halinde açıkça diseke edin.
Daha sonra boyun kas sistemini kısıtlamak için kol retraktörünü kullanın, gerekirse retraktörü kaudal olarak yerleştirin. Steril ICP probunun ICP dönüştürücüsüne bağlı olup olmadığını kontrol ettikten sonra, ICP probunu salinle yıkayın ve probda hava kabarcığı olmadığından emin olun. 23 gauge'lik bir iğne kullanarak, atlantooksipital membranı keserek ICP probunu membrandan nazikçe koaksiyel hale getirmek için bir delik açın.
Probu hafifçe çekin ve sıfır ila beş milimetre cıva arasında değişen bir titreşim eğrisi gösterdiğinden emin olun. Değilse, probu çıkarın, dönüştürücüye bağlantıyı yeniden kontrol edin ve lümenden geçen akışı onaylayın. Atlantooksipital membranın probun etrafını sardığı alanda, iki damla doku yapıştırıcısı uygulayın.
Ardından, ICP probunun yer değiştirme riskini en aza indirmek için ek yapıştırıcı uygulamadan önce bir milimetrelik silikon boruyu membrana doğru ilerletin. ICP probu yapıştırıldıktan sonra, retraktörü çıkarın. Daha sonra, emilemeyen bir monofilament 4-0 sütür kullanarak, insizyonun kaudal ucuna bir yatay yatak sütürü ve sefalik uca bir basit kesilmiş sütür yerleştirin.
Lazer-doppler probu yerleştirmek için, gözlerin hemen önünden başlayarak orta hatta kaudal olarak 15 milimetrelik bir kesi yapın. Bağ dokusunu ve kasları forseps ile çıkardıktan sonra, bregma ve koronal sütürleri tanımlamak için steril bir pamuklu çubuğun ucunu bir rougine olarak kullanın. Silahlı retraktörü yerleştirdikten sonra, stereotaksik çerçeveye tam olarak bregma üzerine 25 gauge bir omurilik iğnesi yerleştirin ve pozisyonu not edin.
Ardından, iğneyi bregmadan çıkarın. Çerçeveyi önden 6,5 milimetre hareket ettirin. Ardından, delme tarafını işaretlemek için iğneyi orta hatta değiştirin.
Dura mater kemiğin altında tanımlanana kadar delin. Düz forseps kullanarak, kemik parçalarını yavaşça çıkarın. Sonra boşluğu kemik mumu ile doldurun.
Daha sonra, bregmanın sağında üç ila dört milimetre yanal ve lazer-doppler için koronal sütürün hemen önünde, başka bir delik açın. Dura mater nüfuz etmemeye özen göstermek. Lazer-doppler'in kan akışını ölçebileceği damarları arayın.
Lazer doppler'i yerleştirin ve değerleri kontrol edin. Minimum 100 akı birimi değeri gereklidir. Mikroskopu çıkardıktan sonra değerler kabul edilebilir kalırsa, probu sabitlemek için bir damla yapıştırıcı ekleyin.
Değerin 80 akı biriminin üzerinde olup olmadığını doğrulamak için yeniden kontrol edin. Subaraknoid kanamayı indüklemek için, kafatasının tabanı nedeniyle direnç hissedilene kadar iğneyi kafatasının içinden yarım küreler arasındaki orta çizgiye yavaşça yerleştirin. Optik kiazmın hemen önüne doğru yerleştirmeyi sağlamak için iğneyi bir milimetre geri çekin.
Kan enjekte ederken en homojen sonucu elde etmek için, iğneyi saat yönünde 90 derece çevirin, böylece iğne ucu sağa bakacak şekilde çevirin. Sonra stilettoyu çıkarın. 15 dakikalık bir dengeden sonra, 80 ila 100 milimetre cıva aralığında ortalama bir arteriyel kan basıncı elde etmek için anestezi seviyesini ayarlayın.
Daha sonra pH, kısmi karbondioksit basıncı ve kısmi oksijen basıncının fizyolojik parametreler dahilinde olduğunu doğrulamak için bir kan gazı analizi yapın. Daha sonra, künt 23 gauge iğneli bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, kuyruk kateterinden 500 mikrolitre kan çekin. Hava enjeksiyonunu önlemek için, omurilik iğne odasının ölü alanını kanla doldurun.
Şırıngadaki kanın hacmini 300 mikrolitreye ayarladıktan sonra, şırıngayı spinal iğneye bağlayın. Daha sonra, şırınganın etrafını sıkıca kavrayarak, ortalama arteriyel basıncı aşmak için kanı manuel olarak enjekte edin. Serebral içi basınçta dik bir artış ve serebral kan akışında eşzamanlı dik bir düşüş gözlemleyin.
Subaraknoid kanamanın indüksiyonundan 30 dakika sonra, iğneyi ve lazer-doppler probunu çıkarın. Ve boşlukları kemik mumu ile doldurun. Emilemeyen monofilament 4-0 sütür kullanarak, insizyonu iki yatay yatak sütürü ile kapatın.
ICP probunu sterna magna'ya enjeksiyon yapmak üzere kullanmak için, silikon boruyu çıkarın ve polietilen boruya bir pim bağlantı noktası adaptörü takın. Hayvan uyanıkken intratekal bir uygulama gerçekleştirmek için, hassas bir şırıngaya bir pim portu enjektörü yerleştirin. Ardından tedaviyi pin bağlantı noktası bağdaştırıcısı aracılığıyla uygulayın.
İntratekal uygulamaların yapılması gerekmiyorsa, basit kesilmiş dikişi kesin. Daha sonra, makas kullanarak, ICP probunu mümkün olduğunca kısaltın ve beyin omurilik sıvısı sızıntısını önlemek için ucunu yapıştırın. Kesiyi emilemeyen bir monofilament 4-0 sütür ile kapatın.
Dönen kutup testi kullanılarak kaba duyusal motor fonksiyonun değerlendirilmesinde, deneysel olarak indüklenen subaraknoid kanaması olan sıçanlar, ameliyattan 24 ve 48 saat sonra sahte hayvanlara kıyasla anlamlı derecede daha kötü performans göstermiştir. Endotelin-1 reseptör ailesi için bir agonist olan endotelin-1'e duyarlılık, deneysel sıçanların baziler ve orta serebral arterlerinde subaraknoid kanamadan iki gün sonra sahte kontrollere kıyasla anlamlı derecede artmıştır. Deney sıçanlarının her iki arteri de, 5-hidroksitriptamin reseptör ailesi için bir agonist olan 5-karboksamidotriptamin'e duyarlılıkta benzer bir artış göstermiştir.
İşlemi takiben, nörodavranışsal testlerin yanı sıra immünohistokimya, PCR, western blotting analyzer gibi doku analizleri yapılarak sonuçların ve mekanizmaların analizi yapılabilir.
