Bir sıçanda büyük pontin kanaması oluşturmak için bir protokol sağlıyoruz. Bu modelin kurulumu kolaydır, tekrarlanabilir ve son derece başarılıdır. Otolog sıçan yönteminin damıtılmış enjeksiyonu, beyin bölgelerinden herhangi birinde kanama yapmak için kullanılabilir.
Bu teknikleri denemek isteyen kişiler stereotaksik çerçeve kullanmayı öğrenmeli ve pontin anatomisine aşina olmalıdır. Farenin üzerine cerrahi bir örtü yerleştirerek başlayın. İşaretli orta çizgi boyunca neşterle bir kesi yapın.
Olası kanı çıkarmak için pamuklu çubuk kullanın. Sonra kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisi kapağının her iki tarafına bir parça toka yerleştirin. Pamuklu bir bezi %0,9 saline batırın ve bağ dokularını kafatası kemiğinden hafifçe çıkarın.
Bregma'nın merkezi noktasını başlangıç noktası olarak işaretlemek için bir işaret kalemi kullanın. Dikkatli bir şekilde devam eden bir mikro matkap kullanarak kraniyotomi gerçekleştirin. Bittiğinde mikro matkabı stereotaksik çerçeveden çıkarın.
Stereotaksik tutucuya 100 mikroliter Hamilton şırıngası koyun. Enjeksiyon pompası anahtarını açın. Hızlı soluma düğmesine tıklayın.
Daha sonra heparin çözeltisini 100 mikrolitreye epire edin ve tamamen boşaltın. Cildi dezenfekte etmek, azgınlığı yumuşatmak ve enjeksiyonun başarı oranını artırmak için kuyruk damarını genişletmek için kökten uca tüm hikayeye en az üç kez klorheksidin ve% 75 alkol cerrahi ovma uygulayın. Bir mililitrelik şırıngaya bir kafa derisi akupunktur takın, ardından kafa derisi akupunkturunu kuyruk ucundan üç santimetre uzaklıktaki yanal bir kuyruk damarına yerleştirin ve 150 mikrolitre kan alın.
Kafa derisi akupunkturu bir mililitre şırındırından çıkarın ve kanı bir tüpe aktarın. Kanın pıhtılaşmasını önlemek için hızlı bir şekilde çalışmak. Cerrahi eldivenleri değiştirin.
Geri çekme modunu seçin. Ses seviyesini 100 mikrolitreye ayarlayın ve hızı dakikada 200 mikrolitreye ayarlayın. Çalıştır düğmesine tıklayın ve Hamilton şırıngasına 100 mikrolitre kan emiş edin.
Dem açma moduna geçin ve hızı dakikada bir mikroliter olarak ayarlayın. Uç beyin yüzeyinin 9,2 milimetre altına ulaşana kadar şırıngayı ilerletin ve ilk 10 mikrolitre kanı enjekte edin. Çalıştır düğmesine tıklayın.
Enjeksiyonu durdurun ve kanın subaraknoid alana akmasını önlemek için şırındıcı 20 dakika bekletin. Uç beyin yüzeyinin dokuz milimetre altına ulaşana kadar şırıngayı geri çek, sonra artık kan tamamen enjekte edilene kadar enjeksiyonu dakikada bir mikrolitre hızında yeniden başlatın. Kan geri akışını önlemek için şırındıcı 10 dakika bekletin.
Şırınnayı beyinden yavaşça çıkarın. Daha sonra kraniyotomi deliğini kapatmak için kemik çimentosu kullanın. Çimento kuruduğunda yarayı dört sıfır poliamid dikiş filamenti ile dikin.
Üç veya dört dikiş diktikten sonra 2 bir-bir standart cerrahi düğüm bağlayın. Sıçanı anesteziden tamamen iyileşene kadar her 15 dakikada bir gözlemleyin, ardından altında bir ısıtma yastığı ile orijinal kafese geri koyun. Sıçanın yiyecek ve suya ücretsiz erişimini sağlayın.
Kontrol için toplam 25 hayvan kullanıldı 30 mikroliter, 60 mikroliter ve 100 mikroliter kan enjeksiyonu. Davranış testleri ameliyattan sonra birinci, üçüncü, yedi ve 14. Pontin kanaması kornea refleksinin azalması ve daire çizilme gibi nörolojik eksikliklere neden oldu.
100 mikrolitre kan enjeksiyonu da miyotoniyi indükler. MR Taraması ameliyattan 24 saat sonra yapıldı. Kan enjeksiyon gruplarında Kanama, göletlerin Basiler kısmında ISO'dan hafif hiperintense çekirdeğe sahip bir hypointense jant olarak tespit edildi.
Enjeksiyon hacmi ile kanama hacmi artmıştır. Sıçanlar ameliyattan 24 saat 14 gün sonra kurban edildi. Ve iki milimetre kalınlığında bölümler yapıldı.
Enjeksiyon bölgesini çevreleyen ve göletlerin tabanında dağıtım yapılan kanama tespit edildi. 100 mikroliter kan enjeksiyon grubunda kanama çevresinde hafif bir ödem vardı. Sıçanların bazıları ameliyattan üç gün sonra kurban edildi ve HE lekeleme için parafin bölümleri yapıldı.
Sonuçlar, kan enjeksiyon gruplarında para kanama bölgesinde zenginleştirilmiş enflamatuar hücrelerde hemoglobinin bozulmamış kırmızı kan hücreleri ile birlikte kaldığını göstermiştir. Bu protokolü denerken enjeksiyon pozisyonunu hatırladığından emin olun. Bu yöntem, herhangi bir serebral bölgede kanamaya neden olmak için kullanılabilir.
