Esse modelo de hemorragia subaracnóidea nos ajuda a entender melhor os mecanismos fisiopatológicos e suas consequências. Espera-se que isso resulte na geração de terapias, reduzindo a carga da doença em pacientes aflitos. A principal vantagem desta técnica é a sua alta reprodutível, pois uma quantidade fixa de sangue é injetada.
Além disso, assemelha-se a uma hemorragia subaracnóidea humana em parâmetros-chave. Para fazer a sonda ICP, queime uma extremidade de um pedaço de tubo de polietileno de 20 milímetros, fazendo uma placa circular e mantendo o lúmen aberto. Em seguida, deslize um anel de tubo de silicone de um milímetro sobre o tubo de polietileno antes de conectar um pedaço de tubo de silicone de 10 milímetros à extremidade do tubo de polietileno.
Em seguida, anestesiar, intubar e cateterizar um rato Sprague Dawley antes de colocá-lo em um quadro estereotáxico. Após a administração da anestesia local, fazer uma incisão cutânea de oito milímetros caudalmente a partir da punção com agulha na linha média. Sob um microscópio dissecante, disseque todos os músculos sem rodeios em camadas para identificar a membrana atlantooccipital.
Em seguida, use o afastador de braço para conter a musculatura do pescoço, colocando o afastador caudalmente se necessário. Depois de verificar se a sonda ICP estéril está conectada ao transdutor ICP, lave a sonda ICP com soro fisiológico, certificando-se de que não há bolhas de ar na sonda. Usando uma agulha de calibre 23, incise a membrana atlantooccipital, fazendo um orifício para persuadir suavemente a sonda de PIC através da membrana.
Puxe a sonda levemente e certifique-se de que ela mostre uma curva pulsante que varia entre zero a cinco milímetros de mercúrio. Caso contrário, remova a sonda, verifique novamente a conexão com o transdutor e confirme o fluxo através do lúmen. Na área onde a membrana atlantooccipital envolve a sonda, aplique duas gotas de cola de tecido.
Em seguida, mova a tubulação de silicone de um milímetro para frente em direção à membrana, antes de aplicar cola adicional para minimizar o risco de deslocamento da sonda ICP. Uma vez colada a sonda ICP, retire-o. Em seguida, com fio monofilamentar 4-0 não reabsorvível, colocar um colchão horizontal na extremidade caudal da incisão e um fio simples interrompido na extremidade cefálica.
Para colocar a sonda laser-doppler, fazer uma incisão de 15 milímetros caudalmente na linha média, começando logo anterior aos olhos. Após a remoção do tecido conjuntivo e dos músculos com pinças, utilizar a extremidade de um cotonete estéril como rougina para identificar o bregma e as suturas coronais. Após a colocação do afastador armado, coloque uma agulha espinhal calibre 25 na armação estereotáxica exatamente sobre o bregma e anote a posição.
Em seguida, retire a agulha do bregma. Mova o quadro anteriormente em 6,5 milímetros. Em seguida, substitua a agulha na linha média para marcar o lado da perfuração.
Broca até que a dura-máter seja identificada abaixo do osso. Usando pinças retas, remova suavemente os fragmentos ósseos. Em seguida, preencha a cavidade com cera de osso.
Em seguida, três a quatro milímetros laterais à direita do bregma e logo anterior à sutura coronal para o laser-doppler, fazer outro furo. Tomando cuidado para não penetrar na dura-máter. Procure os vasos onde o laser-doppler pode medir o fluxo sanguíneo.
Coloque o laser doppler e verifique os valores. É necessário um valor mínimo de 100 unidades de fluxo. Se os valores permanecerem aceitáveis após a remoção do microscópio, adicione uma gota de cola para fixar a sonda.
Verifique novamente se o valor está acima de 80 unidades de fluxo. Para induzir hemorragia subaracnóidea, insira a agulha suavemente através do crânio na linha média entre os hemisférios até que a resistência seja sentida devido à base do crânio. Retrair a agulha em um milímetro para garantir a colocação correta apenas anteriormente ao quiasma óptico.
Para garantir o resultado mais homogêneo ao injetar o sangue, gire a agulha no sentido horário em 90 graus, de modo que a ponta da agulha aponte para a direita. Em seguida, retire o estilete. Após um equilíbrio de 15 minutos, ajustar o nível de anestesia para obter uma pressão arterial média na faixa de 80 a 100 milímetros de mercúrio.
Em seguida, realize uma gasometria para confirmar se o pH, a pressão parcial de dióxido de carbono e a pressão parcial de oxigênio estão dentro dos parâmetros fisiológicos. Em seguida, usando uma seringa de um mililitro com uma agulha romba calibre 23, retire 500 microlitros de sangue do cateter de cauda. Para evitar a injeção de ar, preencha o espaço morto da câmara da agulha espinhal com sangue.
Depois de ajustar o volume do sangue na seringa para 300 microlitros, conecte a seringa à agulha espinhal. Em seguida, segurando firmemente ao redor da seringa, injete o sangue manualmente para superar a pressão arterial média. Observe um aumento acentuado na pressão intracerebral e uma queda acentuada concomitante no fluxo sanguíneo cerebral.
30 minutos após a indução da hemorragia subaracnóidea, retirar a agulha e a sonda laser-doppler. E preencher as cavidades com cera de osso. Com fio monofilamentar 4-0 não reabsorvível, fechar a incisão com dois colchões horizontais.
Para usar a sonda ICP para injeções na cisterna magna, remova a tubulação de silicone e insira um adaptador de porta de pino na tubulação de polietileno. Para realizar uma administração intratecal enquanto o animal está acordado, coloque um injetor de porta de pino em uma seringa de precisão. Em seguida, administre o tratamento através do adaptador de porta do pino.
Se não for necessário realizar administrações intratecais, corte a sutura simples interrompida. Em seguida, usando tesoura, encurte a sonda de PIC o máximo possível e cole a extremidade para evitar vazamento de líquido cefalorraquidiano. Fechar a incisão com fio monofilamentar inabsorvível 4-0.
Na avaliação da função sensório-motora grossa pelo teste da vara rotatória, ratos com hemorragia subaracnóidea experimentalmente induzida apresentaram desempenho significativamente pior 24 e 48 horas após a cirurgia em comparação com animais sham. A sensibilidade à endotelina-1, um agonista da família dos receptores da endotelina-1, aumentou significativamente dois dias após hemorragia subaracnóidea nas artérias basilar e cerebral média dos ratos experimentais em comparação com os controles simulados. Ambas as artérias dos ratos experimentais também exibiram um aumento semelhante na sensibilidade à 5-carboxamidotriptamina, um agonista para a família de receptores 5-hidroxitriptamina.
Após o procedimento, testes neurocomportamentais, bem como análise tecidual, incluindo imunohistoquímica, PCR, analisador de western blotting podem ser realizados para analisar consequências e mecanismos.
