Nicel fosfor NMR, son otuz yılda lignin ve tanen analitik kimyasındaki en önemli atılımlardan birini temsil ediyor. Bu teknik, numunedeki çeşitli hidroksi grubu için hızlı, güvenilir ve nicel bilgiler sunar. Bu NMR yöntemleri lignanların ve tanenlerin yapısını anlamada muazzam bir değere sahiptir.
Reaktif hidroksil gruplarına sahip çeşitli sistemlere de uygulanmıştır. 40 santigrat derecede bir vakum fırınında bir gecede kurutarak 100 miligram lignin veya tanen örneğini ön işleme alarak başlayın. Kuruduktan sonra, numuneyi oda sıcaklığına ulaşana kadar susuz bir kalsiyum sülfat kurutucuya hızla aktarın.
Numuneyi NMR spektroskopisi için hazırlamak için, karıştırma çubuğu ile donatılmış iki mililitrelik bir şişede numunenin yaklaşık 30 miligramını doğru bir şekilde tartın. Ardından, numune şişesine taze hazırlanmış çözücü çözeltisinin 500 mikrolitresini ekleyin ve şişeyi bir kapakla kapatın. Bir mikropipette kullanarak, numune şişesine 100 mikrolitre iç standart çözelti ekleyin, ardından elde eden dispersiyonu dakikada 500 dönüşte manyetik olarak karıştırın.
Numune tamamen çözüldüğünde, kaputun altında çalışırken numune çözeltisine 100 mikrolitre tetrametrin dioksifosfatolan veya TMDP aktarın ve numuneyi güçlü manyetik karıştırma için yerleştirmeden önce numune çözeltisini kapatın. Bu noktada lignin ve tanen örneklerinde belirtilen reaksiyon meydana gelir. Pasteur pipet kullanarak, numune çözeltisini analiz için bir NMR tüpüne aktarın.
Numunede sarı bir çökelti görülürse, olası tüm nem kirlenmesinin önlenmesini sağlayarak prosedürü tekrarlayın. Numune tüpünü geniş bant probu ile donatılmış NMR cihazına yükleyin ve deneysel parametreleri ayarlayın. Döterlenmiş kloroformun rezonans frekansını kullanarak spektrometredeki frekansı ayarlayın.
Örneği sabitle ve satın almaya başlamadan önce spektrometreyi ayarlayın. Fourier dönüşümü gerçekleştirerek P31 NMR spektroskopisinden ham verileri işlemeye başlayın. İşleme sekmesini genişleterek ve faz düzeltme ve manuel düzeltmeyi seçerek aşamayı manuel faz düzeltme ile ayarlayın.
İşlemeyi tıklatıp taban çizgisi ve çok noktalı taban çizgisi düzeltmesini seçtikten sonra sıfır noktayı dikkatlice ayarlayarak taban çizgisini el ile düzeltin. Sinyal kalibrasyonu için, analiz sekmesini açarak fosforillenmiş suyun sinyalini milyonda 132,2 parça kimyasal kayma değerine ayarlayın, ardından referans sekmesinde referansı seçin. Sinyal entegrasyonu için analiz menüsünde integrali açın.
Entegrasyonu normalleştirmek için, integrali düzenle'yi seçmek ve normalleştirilmiş sekmeye 1.00 değerini girmek için tepeye tıklayarak iç standardı 1.0 olarak ayarlayın, ardından makaleye bildirilen kimyasal kaymalara göre spektrum entegrasyonu gerçekleştirin. Denklemi, iç standardın veya IS'nin molar konsantrasyonunun hesaplayını hesaplamak için kullanın ve numunenin gramı başına belirli sinyalin eşdeğer miktarını tahmin etmek için hesaplanan değeri kullanın. TMDP ile türetilen yumuşak ağaç zanaat lignindeki çeşitli hidroksi gruplarının spektrum nicelemesi 300 megahertz ve 700 megahertz NMR spektrometresi kullanılarak kaydedildi.
NMR spektrumunda, iç standart ve TMD'nin hidroksiilasyonu nedeniyle sırasıyla 144 ve 132 PPM'de keskin ve güçlü zirveler tespit edildi. Hidroksi gruplarının farklı sinyalleri ligninlerin tüm nicel P31 NMR spektrumlarında belirgindi. TMDP kullanılarak türetilen bir tanen örneğinin nicel P31 NMR spektrumunda, farklı alifatik OH pirogallol ve katekolü ünitelerinden karakteristik bir sinyal iyi görülebilirdi.
NMR lignin spektrumu ile oksidasyon sonrası arasındaki karşılaştırma, hidroksi gruplarının zirvelerinin yoğunluğundaki azalmayı gösteren 300 megahertz NMR spektrometresi kullanılarak kaydedildi. Önemli adımlar, numunenin kurutılması ve ağırlıklandırması ve kullanılacak NMR işleme parametreleri ile ilgili adımlardır. Ve en önemlisi, elde edilen spektrumun fazsingi.
Bu yöntem iki boyutlu NMR ve jel geçirgenlik kromatografisi ile birleştiğinde, doğal polifenollerin çok ayrıntılı bir resmi ortaya çıkabilir ve benzeri görülmemiş yapısal bilgiler ve yeni içgörüler sunabilir.
