Sıvılar, nanopartiküller, mikropartiküller, kapsüllenmiş ilaçlar ve hatta canlı hücreler gibi aktif bileşenlerin su jeti enjeksiyonları, hedeflenen farklı dokulardaki iğne enjeksiyonlarına kıyasla çok daha hassas bir şekilde uygulanabilir. Minimal invaziv yaklaşımlar, enjeksiyon basınçlarını önceden seçerek ilacın hedeflenen dokunun önceden belirlenmiş katmanlarında hassas lokalizasyonunu gerektirir. Şu anki odak noktamız üriner inkontinans için hücre tedavisidir.
Bununla birlikte, bu teknik zaten ciddi kalp krizlerinden sonra enfekte kas dokusunun yenilenmesine kadar genişletilmiştir. Şu anda, teknik sadece klinik öncesi çalışmalarda deneyimli araştırmacılar veya lisanslı doktorlar tarafından uygulanabilir. Gelecekteki klinik amaçlar için geliştirildiği için rutin laboratuvar prosedürlerinde kullanılması amaçlanmamıştır.
Başlamak için, üretrayı, yetişkin bir dişi landrace domuzundan disseke edilmiş bağlantı mesanesi ile alt pelvik tabanın elastikiyetini taklit eden bir sünger üzerine yerleştirin. Daha sonra mesaneyi kullanarak, üretranın oryantasyonunu belirleyin. Bu, üreterin lokalizasyonu ve mesaneyi karın ve pelvik boşlukta sabitleyen üç ligament nedeniyle mümkündür.
Üretrayı doğru bir şekilde yönlendirdikten sonra, bir kateter yardımıyla dorsal tarafta uzunlamasına açın. Domuz yağı dokusundan türetilmiş stromal hücrelerin hücre yoğunluğunu mililitre başına altıncı hücrelere 2.4 kat 10 ila 2.4 kez ayarladıktan sonra, hücreleri yeşil floresan membran geçirgen canlı hücre lekesi ile etiketleyin, ardından hücre süspansiyonunu şırınga ile aspire edin ve Williams sitoskopik enjeksiyon iğnesini uygulayın. Daha sonra, iğneyi 15 mililitrelik bir santrifüj tüpünde iki mililitre büyüme ortamının biraz üzerinde tutun veya iğneyi açık üretra dokusuna yerleştirin.
Her iki durumda da, hücre süspansiyonunun 250 mikrolitresini manuel olarak enjekte edin. Bir enjeksiyon kubbesinden kadavra üretraya enjekte edilen hücreler. Santrifüjleme yoluyla doğrudan ortama enjekte edilen hücreleri toplayın.
Kadavra üretraya enjekte edilen hücreler için, bir şırınga üzerine uygulanan 18 gauge iğne ile enjeksiyon kubbesinden aspire edin. Aspire edilen hücreleri bir santrifüjleme tüpüne aktarın ve santrifüjleme yoluyla pelet edin. Her iki hücre peletini de dört mililitre büyüme ortamında yeniden askıya alın.
Hücre verimini ve canlılığını belirlemek için, hücre süspansiyonunun 20'sini 20 mikrolitre tripan mavisi ile iyice karıştırın. Daha sonra hemositometrenin her odasına bu karışımın 10 mikrolitresini doldurun. Mikroskop altında dört köşe karesinin tümündeki hücreleri sayın.
Lekesiz beyaz hücreleri canlı hücreler ve mavi lekeli hücreleri ölü hücreler olarak sayın, ardından mililitre başına hücre sayısını hesaplayın. Su jeti yoluyla enjeksiyonlar için, domuz yağ dokusundan türetilmiş stromal hücrelerin yoğunluğunu mililitre başına altı kat 10 ila altıncı hücrelere ayarlayın. Bunları daha önce gösterildiği gibi etiketleyin ve hücre süspansiyonunu iğnesiz su jeti cihazının dozaj ünitesine doldurun.
Daha sonra enjeksiyon nozulunu 15 mililitrelik bir santrifüjleme tüpünde iki mililitre büyüme ortamının kısa bir süre üzerinde veya açık üretra dokusunun kısa bir süre üzerinde tutun. Her iki durumda da, hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini enjekte edin. Doku penetrasyonu için yüksek basınç ve ardından hücre enjeksiyonları için düşük basınç fazı kullanın.
Kadavra üretrayına enjekte edilen hücreler bir enjeksiyon kubbesi oluşturur. Doğrudan santrifüjleme yoluyla ortama enjekte edilen hücreleri toplayın. Kadavra üretraya enjekte edilen hücreler için, onları enjeksiyon kubbesinden aspire edin.
Aspire edilen hücreleri bir santrifüjleme tüpüne aktarın ve daha önce gösterildiği gibi santrifüjleme kullanarak pelet edin. Santrifüjlemeden sonra, her iki peleti de dört mililitre büyüme ortamında yeniden askıya alın. Doku kültürü kaplarına enjeksiyonlardan sonra elde edilen hücreleri, çanak başına beş kat 10 ila beşinci hücre yoğunluğunda tohumlayın.
37 santigrat derecede üç saatlik bir inkübasyondan sonra ve AFM ölçümünden hemen önce, büyüme ortamını L-glutaminsiz üç mililitre Leibovitz'in L-15 ortamı ile değiştirin. Tek tek hücrelerin elastikiyetini ölçmek için, bir hücreyi görsel olarak tanımlayın ve ona odaklanın. Ardından bilgisayar faresini hücrenin ortasına yerleştirin ve ölçüm hassasiyetini artırmak için AFM ucunu doğrudan hücre çekirdeğinin üzerine yerleştirin.
Ardından, konsola odaklanın ve bilgisayar faresinde hareket ettirin. Ardından ölçümü run ile başlatın ve en az 50 hücreyi ölçün. Konsol kalibrasyonu ile elde edilen ayar noktası parametresi kullanılır ve bir hücre üç kez ölçülür.
Williams iğnesi yoluyla verilen hücrelerin yaşayabilirliği, E60-10 ayarlarını kullanarak su jeti tarafından yapılan enjeksiyonlardan daha yüksekti. Yakalama sıvısındaki enjeksiyonların biyomekanik değerlendirmesi, Williams iğne enjeksiyonlarının kontrollere kıyasla elastik modülde anlamlı bir fark göstermediğini, su jeti enjeksiyonlarının hücresel elastik modüli% 40 ila% 50 oranında önemli ölçüde azalttığını ortaya koymuştur Benzer şekilde, kadavra üretra doku örneklerinde, Williams iğne enjeksiyonları, kontrollere kıyasla hücresel elastik modülde anlamlı bir fark vermemiştir. Bununla birlikte, su jeti enjeksiyonlarından sonra% 51'lik önemli bir azalma gözlenmiştir.
Kişi sadece iğne enjeksiyonlarının yaralanmaya neden olan dokuya tam olarak nüfuz etmediğinden emin olmalıdır. Su jeti ile, cihazı yalnızca enjeksiyon alanında doğru konuma yerleştirmek gerekirken, geri kalanı cihazın kendisi tarafından otomatik olarak yapılır. Su jeti cihazı endoskopik cihazlarla eşleşecek ve bunlara uyacak şekilde geliştirildiğinden, dokuları yenilemek ve onarım işini yapmak için bu sistoskopik veya endoskopik teknolojilerle ulaşılabilen vücudun herhangi bir bölgesi için su jeti uygulamalarını kullanabilirsiniz.
