Bu yöntem, soğuk sıcaklıklarda deterjanperfüzyon yoluyla bağlantı, duodenal ve dalak lobları içeren domuz pankreas diseksiyonu ve nihai desellüleriçin kullanılabilir. Decellularization Bu yöntem domuz pankreas içine fikir sağlar rağmen, aynı zamanda diğer büyük hayvanlardan pankreata uygulanabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, daha fazla doku mühendisliği uygulamaları için, pankreas gibi karmaşık bir organ, bozulmamış alma kolaylaştırır olmasıdır.
Genel olarak, bireyler bu yönteme yeni, onlar tespit ederken bozulmamış pankreas diseksiyon ve çevredeki kan damarlarının tüm ligating master pratik bir sürü gerektirir çünkü mücadele edecek. İşleme başlamadan önce, deterjan kabını peristaltik pompaya bağlamak için üçe beş milimetrelik bir silikon tüp ve peristaltik pompayı gaz giderici aracılığıyla organ odasına bağlamak için ikinci bir üç ila beş milimetrelik silikon tüp kullanın. İkinci tüpün serbest ucuna bir erkek Luer bağlayın ve peristaltik pompa ile deterjan toplama kabına organ odası bağlamak için üçüncü bir üç beş milimetrelik silikon tüp kullanın.
Son olarak, deterjan kabındaki tüplerin ve deterjan toplama kabının serbest uçlarına iki milimetrelik etiketsiz pipet bağlayın. Sonra, hücre dışılaştırma kurulumunu dört santigrat dereceye yerleştirin. Pankreas hasat için, bir heparinized yerleştirin, 45 kilogram, supine pozisyonda bir diseksiyon masası üzerine dişi domuz, ve karın organları ortaya çıkarmak için kasık kemiği için ksifoid sürecinden 40 santimetrelik orta insizyon yapmak için bir neşter kullanın.
Dalak, duodenal ve bağlantı loblarını tanımladıktan sonra, büyük duodenal papillayı bulun ve duodenumu siteden sözlü olarak çıkarmak için iki ayrı dikiş kullanın. Ek dikişler ile inferior yemek borusu ligate, ve mide kaldırılmasını kolaylaştırmak için makas ile ligatürler arasında kesilmiş. İnce bağırsak ulaşmak için kolon bağ dokuları ayırın, ve pankreas dalak splenik lob bağlı kolonun bağ dokusu.
İnce bağırsaklar dalak lob bağ dokusu ile pankreas bağlı, ama aynı zamanda pankreas çevreleyen. Dikkatle detangle ve bağırsak ve pankreas arasında bağ dokusu ayırmak için bağırsak yolunu takip etmek zorunda. Arterler ligating sonra, ince bağırsak kolon kaldırmak.
Inferior mezenterik ven tanımlayın, inferior mezenterik arter ağacı, ve pankreas için bir dikiş caudal ile damarları ligate ve makas ile kesilmiş. Hilum birlikte dalak arter ve ven ligate, dalak yakın, ve dalak kaldırmak için makas ile distal kesti. Duodenal ve bağlantı lobları temizlenene kadar duodenum izleyin ve iki ayrı dikiş ile sonunda duodenum ligate.
Bağlantı ve duodenal loblar ile yakın temas duodenum parçası pankreas ile kaldırılır, iki organ arasındaki tüm küçük kan damarlarının ligasyonu çok zor olduğu gibi. Portal ven diseksiyon sonra, karaciğerden herhangi bir kan sızıntısını önlemek için bir dikiş ile damar ligate, ve incelemek ve iki dikiş ile safra kanalı ve hepatik arter ligate. Sonra, portal ven, hepatik arter ve makas ile safra kanalı kesti.
Böbrek ven altında aort bulun ve damar pankreas ulaşana kadar kas ve bağ dokusundan kranial yönde aort incelemek. Şimdi, pankreası yavaşça ters çevirin ve aortu inceleyin, üstün mezenterik arteri ve çölyak gövdesini sağlam tutarak. Çölyak gövdesine aort kranial kesin ve pankreas hasat sağlamak için kalan çevre doku künt incelemek.
Daha sonra, tüm organ perfüzyon veya tüm organ soğuyana kadar çözelti iki ile aort yoluyla organ floş dört milimetrelik arteriyotomi kanül bağlı bir 50 mililitrelik şırınga kullanın. Çözeltiyi buz üzerinde metal bir tepsiüzerine iki perfüzyon pankreas yerleştirin, aort yukarı bakacak şekilde, ve duodenum dikişleri kesmek için makas kullanın. Duodenumu 50 ila 150 mililitre ultra saf suyla yıkamak için 25 mililitrelik bir pipet kullanın ve tkuyu taze dikişlerle yeniden temizleyin.
Aort bir ucunu ve tüm dalları ligate, superior mezenterik arter ve çölyak gövde hariç, sızıntıyı önlemek için, ve aort diğer ucuna dört milimetrelik arteriyotomi kanül eklemek. Sonra, organ odasına pankreas yerleştirin ve bir erkek Luer pankreas kanül bağlayın. Sonra, dakikada 20 mililitre bir saat için solüsyon üç pankreas perfuse, ve decellularization başlayana kadar çözelti dört eksi 20 derece santigrat çift perfüzyon pankreas dondurun.
Hücredışılaştırma nın başladığı gün, pankreası dört santigrat derecede eritin ve çözülmüş pankreası hücredışı organ odasına yerleştirin. Pankreas aort deterjan giriş tüpü bağlayın, ve dört derece santigrat gecede dakikada 20 mililitre çözelti üç ile pankreas yıkayın. Ertesi sabah, organ odasında kalan herhangi bir çözeltide, ve pankreası dakikada 20 mililitrede 30 dakika boyunca 4 santigrat derecede çözelti beşte perfüzyon.
Çözelti beş perfüzyon sonunda, çözelti altı ve dört derece santigrat dakikada 20 mililitre sekiz saat pankreas perfuse, dakikada 20 mililitre ve dört derece Santigrat taze çözelti beş bir 96 saatlik yıkama izledi. Yıkamayı 37 santigrat derecede 30 dakika kalsiyum ve magnezyum la takviye 500 mililitre DPBS ile değiştirin, ardından perfüzyon 250 mililitre çözelti yedi ile dört saat boyunca dakikada 20 mililitre ve 37 santigrat derece. Daha sonra, dakikada 20 mililitre ve dört santigrat derece taze çözelti beş ile başka bir 120 saat boyunca organ yıkayın ve çözelti sekiz organ saklayın.
Burada, açık pembe görünen ve dalak, bağlantı ve duodenal loblar içeren normal bir pankreasın brüt morfolojisi görülebilir. Hücredışılaştırma dan sonra, pembe renk kaybolur, ve işlenmiş pankreas renk soluk beyaz görünür. Normal bir pankreasta, birçok mavi çekirdekH ve E boyama ile belirgindir, bir decellularized pankreas çekirdekleri artık görselleştirilebilir ise, onların kaybını doğrulayan.
İzole bozulmamış domuz pankreas, Bu prosedürü takip, bu yapıyı koruyarak ve aynı zamanda bazı ekstrasellüler matriks proteinlerelde edilmesine izin verirken tam bir perfüzyon ve başarılı desellülerizasyon sağlayacaktır. Desellize pankreas ilgili hücre tipleri ile biyoreaktör sistemlerinde tüm organ recellularization stratejileri geliştirmek için kullanılabilir. Alıcı kök hücreler ile recellularization sonra, doku mühendisliği pankreas klinik uygulamalar ve ilaç testi için kullanılabilir.
Triton X-100 ve SDC ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven takmak ve duman kaputu altında çözümler hazırlamak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
