Zebra balığı çekici bir modeldir, ancak bilim adamları organizmanın su bazlı dozlama ile ne kadar aldığını bilmiyorlar. Maruz kaldıktan sonra dokuyu sindirmek ve ICPMS aracılığıyla metalleri ölçmek için bir teknik geliştirdik. Bu teknik, ICPMS kullanarak doz yanıtını doğru bir şekilde ölçmemizi ve doğrulamamızı sağlar.
Bu yöntemin çok fazla potansiyeli var. Farmakolojik veya çevresel metal maruziyetleri, hayvan modellerinde hücresel seviyeden tüm organ sistemlerine kadar uygulanabilir. 10 larvaya kadar 15 mililitrelik polipropilen santrifüj tüplerine yaklaşık 0,25 mililitre yüksek saflıkta nitrik asit ekleyin.
Örnekleri önceden sindirmek için bir saat boyunca ultrasonikleştirin. Ultrasonikasyon için, tüm doku gözle görülür şekilde oksitlenene kadar asit güvenli bir mikrodalga çürütücüde beş dakikalık aralıklarla kısa doku sindirim döngüleri gerçekleştirin ve üniforma, berrak sarı bir çözelti üretin. Yırtılmayı önlemek için tüplerin bütünlüğünü dikkatlice izleyin ve döngüler arasında santrifüjde kısa dönüşler yapın.
Doku gözle görülür şekilde oksitlendikten sonra, numuneleri iyice karıştırmak için 6.75 mililitre yüksek saflıkta su ve vorteks kullanarak% 3.5 nitrik aside bir duman davlumbazında seyreltin. Ardından, herhangi bir potansiyel izobarik girişimi hesaba katmak için matris eşleşmiş, 7 noktalı bir kalibrasyon eğrisi yürütmek. Sulu sertifikalı element standardının stok konsantrasyonunu kullanarak, 0,1 mililitrelik bir aliquot alın ve pipet ile yeni bir 15 mililitrelik santrifüj tüpüne alın.
Milyarda 10 parça standart çözelti üretmek için %3,5 nitrik asitle 10 mililitrelik son hacme kadar seyreltin. Milyar stokta 10 parça kullanarak, seri seyreltmeleri %3,5 nitrik asit içinde milyarda 0,1, 1,0 ve 5,0 parça standart çözeltiler haline getirin. 0,1 stoğu kullanarak, seri seyreltmeleri %3,5 nitrik asit içinde milyarda 0,001, 0,005 ve 0,01 parça standart çözeltiler haline getirin.
Daha sonra ICPMS cihazını numune analizi için hazırlamadan önce, argon gazı vanasının açık olduğundan, tüm boruların güvenli bir şekilde bağlandığından ve temizlendiğinden, numune analizleri arasında boru ve cam eşyaların durulanması için %5 nitrik asidin açık olduğundan emin olun. Torç ve konilerin durumunu kontrol edin ve torç kutusunun güvenli bir şekilde kilitlendiğinden emin olun. Ve püskürtme odası drenaj borusu peripump'a doğru şekilde bağlanır.
Yazılımı açın, vakum okumalarını kontrol edin ve tüm turbo pompaların çalıştığından emin olun Başlatma sırasını başlatmak için Plazma Kontrol sistemi durum penceresinde BAŞLAT'a %100 tıklayın. Plazma pompasını ve plazma soğutucusunu açın, nebülizörü levrek ve plazmayı aydınlatın. Durum penceresi başlatma sırasının tamamlandığını gösterdiğinde plazmanın yanmasını ve kararmasını bekleyin.
Bu noktada, sistem durumu penceresinde tüm güç kaynaklarının açık olduğunu gösteren yeşil noktalara dikkat edin. Menü çubuğunda, açılır menüde Kontrol, Otomatik Örnekleyici'ye tıklayın. %5 nitrik asit içeren tüp için otomatik numune alma rafı konumuna girin, asidin plazmaya girmesine izin verin.
Menü çubuğunda, açılır menüde Taramalar, Mıknatıs'a tıklayın. MagnetScan penceresinde, İşaretçi Kütlesi Konumu alanına 115 yazın ve enter'a tıklayın. Cihaz ısınırken mıknatısın kütle aralığında 30 dakika boyunca tarama yapmasına izin verin.
30 dakika sonra, otomatik örnekleyici denetimini kullanarak milyarda bir parça çok öğeli ayarlama çözümünün konumuna geçin. Akort çözümünü aspire edin ve sinyal okumayı optimize etmek için cihazı ayarlayın. Torç konumunu X, Y, Z koordinatları için ayarlayın, böylece torç konilerin merkezi ve Plazma Kontrol penceresindeki nebülizör akış hızı ile hizalanır.
İyon Optik Ayarlama penceresinde Kaynak, Dedektör ve Analizör için gerekli ayarlamaları yapın. Sinyal okuması optimize edildikten sonra, Mıknatıs Taraması penceresinde Durdur'u tıklatın, Mıknatısı Kalibre Et'i tıklatın ve açılır pencerede bir Düşük Çözünürlük seçin. Tamam'ı tıklatın ve mıknatısı kalibre etmek için Kütle Kalibrasyonu smc dosyasını açın.
Mevcut mıknatıs kalibrasyonunu analizlere uygulamak için Kaydet, Kullan'ı tıklatın. Çok çeşitli konsantrasyonlara sahip bilinmeyen numuneleri ölçerken, düşük konsantrasyonlardaki iyon darbe sayısı sinyallerini daha yüksek konsantrasyonlarda üretilen zayıflatılmış iyon sinyalleriyle karşılaştırmak için bir dedektör kalibrasyonu gerçekleştirin. Veri Toplama'ya tıklayarak örnek analizi başlatın, ardından açılır menüden Yöntem Kurulumu'na tıklayın.
Üretici tarafından sağlanan mevcut bir yöntemi kullanın veya ilgilenilen öğelere dayalı bir yöntem oluşturun. Gerekirse, deflektör ayarları için Analiz Modu, Bekleme Süresi, Anahtar Gecikmesi, Süpürme ve Döngü Sayısı, Çözünürlük, Algılama Modu ve Park Kütlesi'ni ayarlayın. Yöntem ayarlarını kaydetmek için Kaydet'i tıklatın.
Her metal ve izotip için parametreleri optimize edin. Menü çubuğunda, Veri Toplama'ya tıklayın. Açılır menüden Toplu Çalıştırma'ya tıklayın.
Alternatif olarak, menü çubuğunun altındaki BATCH simgesine tıklayın, toplu iş parametrelerini bir elektronik tablodan içe aktarın veya Toplu Çalıştırma penceresinde bir dizi oluşturun. Örnek türünü, otomatik örnekleyici raf konumunu, aktarım süresini, yıkama süresini, çoğaltmaları, örnek kimliğini ve yöntem dosyasını girin. Kalibrasyon eğrisi için standart çözeltiler için parti çalışmasını düzenleyin, ardından bir kalite kontrol standardı, ardından bilinmeyen numuneler.
Her 5 ila 10 numunede bir milyarda 0,5 parça kalite kontrol standardı ekleyerek cihaz sürüklenmesini ve numune tekrarlanabilirliğini izleyin. Doku alım çalışmaları, sisplatinin su kaynaklı maruziyetleri ve yeni bir rutenyum bazlı anti-kanser bileşiği PMC79 ile gerçekleştirilmiştir. Öldürücülük ve gecikmiş kuluçka, sisplatinin nominal konsantrasyonları için değerlendirildi.
0, 3.75, 7.5 Litre sisplatin başına 15, 30 ve 60 miligram. Organizma dokusunda platin birikimi ICPMS analizi ile belirlendi ve organizma dokusu organizma başına 0.05, 8.7, 23.5, 59.9, 193.2 ve 461.9 nanogram dozlarını içeriyordu. Tüm sisplatin konsantrasyonlarında gecikmiş kuluçka gözlendi.
Dekoryonasyon sonrası, koryonlar toplandı ve platin için ayrı ayrı analiz edildi. Dekoryonasyon çalışmaları için kullanılan ölümcül olmayan sisplatin dozları, toplam verilen sisplatin dozunun% 93 ila% 96'sının koryonda biriktiğini ve kalan dozun larva dokusunda kaldığını belirlemiştir. Zebra balığı larvaları, PMC79'un litresi başına 0, 3.1, 6.2, 9.2 ve 12.4 miligrama maruz kaldı.
Bu konsantrasyonların analitik olarak litre rutenyum başına 0, 0.17, 0.44, 0.66 ve 0.76 miligram içerdiği belirlendi. Bu sisplatinin aksine, PMC79'a maruz kalan larvalarda gecikmiş kuluçka gözlenmedi. Koryonlar, larva toplanmasından önce doğal olarak parçalandıkları için rutenyum analizine dahil edilmedi.
Her konsantrasyonda analiz edilen larva dokuları içindeki masif metal, larva başına 0.19, 0.41 ve 0.68 nanogram rutenyum idi. Maruziyet protokolüne eklenen reaktiflerden herhangi biri, izobarik girişim potansiyeli verir. Mümkün olduğunda, trikaine kıyasla hızlı soğutma gibi alternatifleri düşünün.
Bu yöntem, toksisite, etkinlik ve deneyler için metal doz ölçümünün daha yüksek omurgalılar arasında karşılaştırılmasını sağlar. Özellikle eşik dozumuzun hastalara verilen büyüklük sırasına göre olması bizi heyecanlandırdı.
