Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması

Hipokampal hücre dışı sıvı ve beyin mikrodiyaliz tekniği ile kalabalık, santral sinir hastalıklarının hastalığa özgü mikro monitörizasyonuna katkıda bulunur. Beyin mikrodiyalizi tekniği, anestezi yapılmamış sıçanların belirli beyin bölgelerinde interstisyel beyin sıvısının dinamik ve sürekli engizisyonunu sağlar. Anestezi uygulanan sıçanı stereotaksik bir beyin bulucuya sabitleyerek başlayın ve traş edilen cerrahi bölgeyi operasyondan önce üç kez povidon iyot ve etanol çubukla silin.

Daha sonra cerrahi makasla ortada 1,5 santimetrelik bir kraniyal yüz kesisi yapın ve cerrahi makas ve oftalmik forseps kullanarak periosteumu çıkarın. Bregma'yı bazal pozisyon olarak düşünürsek, kafatası matkabı kullanmak, hipokampal CA1 bölgesinde iki milimetrelik bir açıklığı delmek için endokranyumu delin. Şimdi kateter stiletini stereotaksik bir beyin bulucunun tutucusuna sabitleyin ve mikrodiyaliz muhafazasının anteroposterior, mediolateral ve dorsal ventral pozisyonlardaki konumunu ayarlayın.

Beyin stereo bulucusunun dorsoventral kapağını ayarlayın ve mikrodiyaliz muhafazasını CA1 bölgesine 3,5 milimetre derinlikte implante edin. İki milimetre çapında üç diyafram açıklığı daha açın, böylece üç açıklık prob açıklığının merkezi olarak yerleştirildiği bir üçgen oluşturur. İmplant, açıklıklara bir milimetre derinlikte vidalar yerleştirir ve prob kateterini diş çimentosu ile sabitler.

Daha sonra cildi kapatmak için 4-O cerrahi bir dikiş kullanın. Mikrodiyaliz pompası mikroşırıngasını ACSF uyanık aktivite cihazı ve kriyojenik numune toplayıcı ile üreticinin talimatlarına göre bağlayın. Daha sonra, boru hattındaki havayı boşaltmak için, mikrodiyaliz pompasını dakikada bir mikrolitre hızına ayarlayın.

Daha sonra boru hattını ve beyin mikrodiyaliz probunu bağlayın ve probun yüzeyi hafif nemli olana kadar proba ACSF enjekte etmek için mikrodiyaliz pompasını dakikada bir mikrolitre hızında çalıştırın. Probu daha sonra kullanmak üzere bir heparin sodyum enjeksiyon çözeltisine daldırın. HECF'yi uyanık sıçandan toplamak için, beyin mikrodiyaliz probunu prob kateterine yerleştirin ve sıçanların hareket etmekte özgür olmalarını sağlamak için sıçanı dolgulu bir odaya yerleştirin.

Sıçanın serbest hareketi sırasında mikrodiyaliz boru hatlarının iç içe geçmesini önlemek için çok kanallı döner kontrolörü açın. Ardından mikroşırınga pompasını açın ve ACSF'yi dakikada bir mikrolitre hızında pompalayın. Mikrodiyaliz HECF toplama sisteminin 60 dakikalık bir dengesinden sonra, periyodik olarak HECF toplayın.

Örnekleme sonlandırmadan sonra, beyin mikrodiyaliz probunu prob kateterinden çıkarın. Probu deiyonize suya batırın ve boru hattından ve probdan mahsur kalmış tuz birikimlerini gidermek için 12 saat boyunca deiyonize suyla lavajlayın. Probu çıkarın ve dört santigrat derecede% 0.05'lik bir tripsin çözeltisine yerleştirin.

Beyin mikrodiyaliz tekniği ile elde edilen hipokampal hücre dışı sıvı, belirlenen örnekleme hızında su benzeri, renksiz ve saydamdır. En önemli prosedürler mikrodiyalizin CA1 bölgesine dikkatlice implante edilmesi ve probun pop kateterine yerleştirilmesidir. Mikrodiyaliz basit tekniği, belirli beyin bölgelerindeki hastalık belirteçlerinin dinamik değişimine, ilacın etkinliğinin maddesine ve ilaç bileşenlerinin doku katabolizmasına yardımcı olmayı mümkün kılar.