Yazarlar Burada kullanılan deneysel dokuları toplamak için fırsatlar sağlamak için Ryan Chaplin ve Kentucky etler Lab ve Hayvan ve Gıda Bilimleri Bölümü Üniversitesi&#39;nden Dr Gregg Rentfrow kabul.

Hiçbir canlı hayvan kullanılmıştır, çünkü bu çalışmada kullanılan Prosedürler Kentucky Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Üniversitesi&#39;nden onay gerektiren vermedi. Burada kullanılan herhangi bir numune toplamadan önce, tüm hayvanlar bir esir cıvata ile hayrete ve kan kaybetmiştir. Bu Kentucky Üniversitesi&#39;nde federal teftiş mezbaha tesisinde gerçekleştirildi. USDA Gıda Güvenliği ve Kontrol Servisi resmi bir temsilci karkas canlı hayvan ve kullanımı ile ele tüm faaliyetleri gözlendi. Enstrümantasyon hazırlanması 1. <ol><li> Bir deneyin başlamasından doku örneklerinin koleksiyonları arasında geçen zaman miktarını ayarlamak ekipman en aza indirmek ve (ek personel mevcut olup olmadığını veya bu görevler, eş zamanlı olarak) deney doku toplanmasından önce, tamponlar hazırlamak. NOT: Bu doku deneyler için canlı kalır zaman büyük miktarda sağlar, ancak bazı sadecebu nedenle genellikle mümkün olduğunca erken başlamak için arzu edilir, deneyler uzun süre için çalıştırabilirsiniz (veya bir gün içinde birden çok deneyler tamamlamak için bir arzusu var). </li><li> Güç kadar ilişkili bilgisayar, veri satın almalar ekipmanları, (tampon (s)) su banyosu ve myograph birim (ler). Myograph birim (ler) hakkında kalibrasyon ekipmanları yerleştirin ve sıcaklıkları önceden ısınmaya birimleri ve kalibrasyon ekipmanları (37.5 ° C ayar) myograph ısı açmak ve izin verir. <ol><li> Bilgisayarda önceden oluşturulmuş Grafik yazılım ayarları dosyasını açın ve bir çalışma başlatmak (ancak veri elde değil). </li></ol></li><li> 10 dakika boyunca ekipmanı ısıtın. <ol><li> Veri edinme başlatın. </li><li> Tüm kanalları sıfır. </li><li> Kontrol ve sertifikalı bir ağırlık tarafından sağlanan bir 2-g kuvveti bu kanala ait olan ilgili bir kuvvet transdüktörüne sağlanan elektrik sinyali standardize etmek için her kanalı (multimyograph 4 kanal) (gerekirse) kalibrasyonu yürütmektedirler. </li><li> Kalibrasyon ve bir tane dönüşüm tamamlandıktan sonra, gram olarak sonraki tüm veri depolamak. Her ayrı laboratuvar arzuları dayalı buna göre değişir; donanım ve yazılım gibi milinewton ve volt gibi diğer birimlerin kullanımına izin verir. </li></ol></li><li> Gaz hatları tıkanmalar açık olduğundan emin olun ve (ler) birimleri myograph gaz sağlama (% 95 O 2 /% 5 CO 2) açın. Sürekli bütün prosedür sırasında (myograph odalarına) tüm tamponları gaz. </li><li> % 70 etanol ile tüm myograph haznelerine ve 10 dakika için ıslanmaya, etanol çıkarmak, ve bir ikinci 10 dakika emmek için tekrar edin. <ol><li> Etanol uzaklaştırıldıktan sonra, odacıklar içinde tampon üçüncü ilave bırakarak hazırlanan tampon maddesi (tampon hazırlanması için bakınız bölüm 2) ile üç kez durulanır iyonu giderilmiş su ile üç kez yıkayın. NOT: tampon ve doku hazırlanıncaya kadar bu noktada ekipmanların bu durumda boşta kalabilir ve personel experimen ile devam etmeye hazır olduğunut. </li></ol></li></ol> Tamponlarının 2. Hazırlık <ol><li> 11.1 mM D-glikoz son konsantrasyonları elde etmek için ulaşım ve doku örneklerinin işlemede kullanmak için bir 1 L&#39;lik, Krebs-Henseleit-tampon çözeltisi hazırlayın; 1.2 mm 4 MgSO; 1.2 mM KH 2 PO 4; 4.7 mM KCI; 118.1 mM NaCI; 3,4 mM CaCl2; 24.9 mM NaHCO3. <ol><li> Bir karıştırma plakası üzerinde de-iyonize su, yaklaşık 900 ml Krebs tuzları, 9.6 g karıştırın. </li><li> Istenilen tamponun her bir L başına 2.1 gram sodyum bikarbonat, ardından 0.373 gr kalsiyum klorür dihidrat ilave edin. </li><li> % 95 O 2/5% CO2 ile 20 dakika boyunca gaz tampon çözeltisi. </li><li> L ve 1 hacim ayarlamak; gazı sonra 7,05 pH&#39;ı ayarlamak (nihai hedeflenen pH 7,4 olmalıdır tamponu pH oranını yükselterek, filtrasyon) </li><li> Filtre kullanıma hazır olana kadar 4 ° C&#39;de temiz otoklavlandı 1 L medya şişe ve mağaza tampon içine tampon sterilize. </li></ol></li><li> Ayrı bir Krebs-H &#39;nin HazırlanmasıKrebs-Henseleit kontraktilite deneyler ile ilişkili olan ek bileşikler tamponu taşıma Aşama 2.1 &#39;de tarif edildiği gibi myograph deneylerinde kullanılmak üzere enseleit tampon çözeltisi. NOT: Genellikle 2 L Bu makalede açıklanan deneyler için yeterli olacaktır, ama bu hacim artışı veya deney uzunluğuna göre azalır gerekebilir, myograph odaları ve (tedavi eklemeler göre) sayı tampon değiştirmeleri sayısı. <ol><li> Gazlaştırma aşama (aşama 2.1.3) önce, 9.1 mg eklemek tampona desipramin-HCl tampon (L başına hazırlanmaktadır). </li><li> Propranolol-HCl, 1.0 uM çözeltisi hazırlayın ve Krebs-Henseleit-tampon çözeltisi için bu çözeltinin (tampon hazırlanan her bir L başına) 1 ml. Kullanım gününde bu tampon yapmak ve myograph çalışma sıcaklıklarında (myograph 37,5 ° C sıcaklık veren bir sıcaklıkta) tutun. Not: desipramin biyojenik amin, yeniden alım mekanizmaları önlemek için ilave edilirve daha hızlı gerçekleşmesi için kan damarlarını banyo tampon deneysel eklemeler temizlenmesini sağlar. Propranolol ilavesi adrenerjik reseptörlerinin β muamele bileşiklerin bağlanması belirli olmayan engeller. </li></ol></li></ol> 3. Toplama ve vaskülatürüne hazırlanması <ol><li> En kısa sürede, karkas gastrointestinal sistem kaldırın. Hayvan artık istemsiz refleks sergileyen sonra, baş kaldırmak ve gizlemek ve sonra dikey karkas yükseltmek. Karkas gastrointestinal iç organları (anüs özofagus) kaldırılması onaylı mezbaha personeli (&lt;20 dk zaman ve çarpıcı) tarafından doldurulmalıdır. NOT: Genellikle bağırsak, standart işletim prosedürleri veya tesis personelinin ardından federal zorunlu prosedürler ve toplanan ediliyor konum / tesis ile sınırlıdır nasıl yakında. <ol><li> En tesislerde, mide-bağırsak sisteminin işler gerçekleştirmedengıda kaynağı girmeye yönlendirilmiş olan karkasın işleme ayrı bir yerde. Gastrointestinal sistem almış ve inceleme için dışarı yayılır yakındaki bir konuma kullanın. </li></ol></li><li> Gastrointestinal sistem yayılmış sonra, ince bağırsak, çekuma ince bağırsağa bağlantı ileoçekal kapağı ve ileoçekal kat (Şekil 1A) proksimal olarak uzanan bir flanş ileum tanımlar. <ol><li> Bir neşter veya bıçak kullanarak, çok hafifçe İleal flanş merkezinde mezenterik zarında bir kesi yapmak. Iki işaret parmaklarını kullanarak, açık açık mezenterik damarsal (Şekil 1B) açığa yağ ve bağ dokusu uzak teşrih. </li></ol></li><li> Bağırsak mezenterinde bu flanş veya şişkinlik, birden fazla şubesi teşrih (~ 2 cm uzunluğunda) ileum (Şekil 1C) bu kısmını destekleyen maruz mezenterik arter ve ven demetleri. <ol><li> If u, doku kavramak doğrudan kavramak veya zarar ve olumsuz doku performansı 14 etkileyebilir germe herhangi bir tür olarak çıkarılırken, tüm kan damarları üzerinde çekmeyin dikkat çekmek için forseps şarkı. Kan damarı çıkarılması iyi kaldırılacak bölümün her iki ucunda arasında kesilmesi ve daha sonra, izole bölümüne yanında ya da paralel olarak kesilmesi ile, yapılır. Kolaylığı için, gemiler forseps bir çift ile kavramak için bazı doku sağlamak için birlikte çevreleyen doku bazı kaldırmak. </li><li> Forseps bir çift, buzla soğutulmuş Krebs-Henseleit tamponu içeren bir tüpe doku numunesi daldırın ve işleme laboratuarda oluşabilir kadar buz üzerinde muhafaza edin. </li></ol></li><li> Bir kesme yüzeyi veya bir petri ince dokulu numuneyi, kısmen buz soğukluğunda Krebs-Henseleit daldırın. <ol><li> Kapsamını # 5 kuyumcular forseps, Noyes iris makası kullanarak ve lamba büyüteç veya kesme, dikkatle çevreleyen yağ ve bağlant uzak teşrih (5,0X büyütme 2,5 yeterlidir)dokuları ettik ve arter ve ven ayrı. Bölümün bir ucunda kap açıklığı belirlenmesi ve dikkatli bir forseps ile kabı çevreleyen fasya tutun. </li><li> Makasla kesme yükseltilmiş Kaplamanın altına makas ucu kaydırarak kabına paralel olun. İlk kesildikten sonra, yağ, bağ dokusu ve bundan başka, bir makas ile iki tarafı da keserek tekneden ayrılabilir. Gemiler bankta harcamak süreyi en aza indirerek gemiler mümkün olduğunca temiz olduğundan emin olun. </li><li> (Örnekler alındıktan sonra en fazla 24 saat için depolanmış ve halen geçerli veri üretmek kontraktilite kalabilir), 4 ° C &#39;de taze Krebs-Henseleit tamponu ve mağaza tüplere kan damarlarının dönün. </li><li> Bir jilet kullanarak, dilim damar 2-mm kesit istenilen sayıda içine myograph kullanılacak (tutarlı kesitler elde etmek için bir doku dilimleme makinesi kullanmak yararlı olur). </li><li> Diseksiyon sco altında her bölümü inceleyinpe (12,5X büyütme) her bölüm yanlışlıkla diseksiyon ve temizlenmesi sırasında yapılan herhangi bir anormallik, şube, vanalar, ya da yüzeysel hasar sahip olmasını sağlamak. Herhangi bir anormallik, şube, kapak, ya da yüzeysel hasar varsa damar bölümü değiştirin. </li></ol></li><li> Myograph odaları (genellikle &lt;30 dk) montaj için hazır olana kadar C buz üzerinde veya 4 ° (Krebs-Henseleit tamponunda batık) Mağaza kabul dilimlenmiş gemi bölümleri. </li><li> Yavaşça bir lümen aracılığı ile destek takarak myograph üzerindeki toplama kabı yuvası ve bir 2-3 g okumasının oldukça üzerindedir damarları germek için dikkatli olmak (myograph üzerindeki micropositioner kullanarak) gerilimi arttırır. </li><li> Tüm odaları kaplıdır sonra, tüm odalarından tampon vakum ve tampon 5.0 ml dolum ve dengeleme dönemi ve deney başlamak için 15 dakika zamanlayıcı başlar. </li></ol> 4. Deney <ol><li> Istikrarlı res elde etmek için 1.5 saat boyunca, tüm gemi bölümleri dengeye1.0 g ting gerilim. <ol><li> Krebs-Henseleit inkübasyon tamponu her 15 dakikada bir değiştirin. </li><li> Dengeleme sırasında, sürekli olarak 2 g, kan damarı bölümleri üzerindeki gerilimi ayarlamak kadar ve daha sonra yaklaşık 0.80 g aşağı rahatlamak için izin verir. Gemiler (onlar bağlar kayabilir) çok dinlenmek için izin çalışın. Damar ayarı gerekmeksizin 1 gr gerginliği tutan bir sabit başlangıç ​​gerilimi elde etmek için deneyin. </li></ol></li><li> Dengeleme sırasında, KCI sulu 1.32 M çözelti, bir referans olarak kullanılmak üzere hazırlanması. </li><li> Tatmin edici bir dengeleme tamamlanmasından sonra, banyo kabına 5.5 ml çözelti içinde 0.12 M çözelti ile sonuçlandığı 1.32 M KCI çözeltisi 500 ul ilave edin. <ol><li> Bu ilave gelen azami tepki doku canlılığını ölçmek için kullanılmaktadır ve bir A (tedavi verileri normalize etmek için, örneğin konsantrasyon yanıtlar kullanılabilir üzere manüel olarak gerginliğini ayarlamak için değil, 1.32 M KCl eklenmesini takibengonist). </li><li> Gerilim 1.0 g başlangıç ​​değerine geri dönene kadar 15 dakikalık aralıklarla tampon değiştirin. </li></ol></li><li> Temel ulaşıldığında, tampon değiştirme ve aynı zamanda, 1 dakika süre zamanlayıcı başlar. Başlangıç ​​kez şaşırtıcı önlemek için aynı anda tüm odaları için bunu yapın. <ol><li> Eklenecek standart vorteks ve 1 dakika geri sayım esnasında gözün 1 yorum hazırlar. </li><li> (Bu toplam hacminin% 0.5 altında tutan tedavi) verildi gerektirdiği her bölmeye 25 ul alikolar içinde standart ekleyin. </li><li> Son standart eklendiğinde, 9 dakika zamanlayıcı başlar. </li><li> 9 dk standart İnkübasyonun sonunda, bölmeden gelen tedavi içeren tampon kaldırmak ve taze tampon maddesi içinde 5.0 ml ekleyin ve 2.5 dakika zaman ölçeri başlat. </li><li> Adımı tekrarlayın 4.4.4. </li><li> İkinci 2.5 dakika çalkalama sonunda odacıkları, vakum ve taze tampon eklemek ve Secon başlamasından geri sayım, 1 dakika süre zaman ölçeri başlatd standart ekleme. </li></ol></li><li> Günün standart eklemeler için tüm bu döngüyü devam edin. </li><li> Nihai standart ek ve sonraki 9 dakika inkübasyon sırasında 500 ul çalışma referans dozunun yanı sıra bir sonu için 1.32 M KCI referans bileşik hazırlamak. </li><li> Son bir muamele ilave edilmesinden sonra 1 dakika aranın ardından KCI ekleyin ve 9 dk zaman ölçeri başlat. NOT: KCI ilaveli deney sonuca doku canlılığını onaylamak ve önemsiz tepki ile sonuçlanan bir tedaviyi tatbik durumunda yararlıdır. </li><li> Nihai 9 dk referans bileşiği İnkübasyonun sonunda, vakum odası ya da tümünden tampon çıkarın. Taze tampon katmayın. Denemeyi sonlandırın. </li><li> , Grafik dosyayı kaydedin kan damarı bölümleri çıkarmak ve imha ediniz ve yukarı temiz protokolü takip (üretici tarafından sağlanan ve laboratuvar spesifik olabilir) myograph ekipman için. </li></ol>

<ol>
	<li>Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intestinal+blood+flow.">Regulation of intestinal blood flow.</a> The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).</li><li>Dobson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+and+absorption+from+the+rumen.">Blood flow and absorption from the rumen.</a> Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Nielsen-Kudsk, F., Poulsen, B., Ryom, C., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strain-gauge+myograph+for+isometric+measurements+of+tension+in+isolated+small+blood+vessels+and+other+muscle+preparations.">A strain-gauge myograph for isometric measurements of tension in isolated small blood vessels and other muscle preparations.</a> Journal of pharmacological. 16, 215-225 (1986).</li><li>Mulvany, M. J., Aalkjaer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+small+arteries.">Structure and function of small arteries.</a> Physiological reviews. 70, 921-961 (1990).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+vasoconstrictive+potential+of+D-lysergic+acid+using+an+isolated+bovine+lateral+saphenous+vein+bioassay.">Assessment of vasoconstrictive potential of D-lysergic acid using an isolated bovine lateral saphenous vein bioassay.</a> Journal of animal science. 84, 3167-3175 (2006).</li><li>Klotz, J. L., Bush, L. P., Strickland, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+vascular+contractility+bioassay+using+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">A vascular contractility bioassay using bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 1944-1951 (2011).</li><li>Westendorf, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+ruminal+and+physiological+responses+to+endophyte-infected+tall+fescue.">In vitro and in vivo ruminal and physiological responses to endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of dairy science. 76, 555-563 (1993).</li><li>Strickland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Board-invited+review:+St.+Anthony&amp;#34;s+Fire+in+livestock:+causes,+mechanisms,+and+potential+solutions.">Board-invited review: St. Anthony&amp;#34;s Fire in livestock: causes, mechanisms, and potential solutions.</a> Journal of animal science. 89, 1603-1626 (2011).</li><li>Eckert, H., Kiechel, J. R., Rosenthaler, J., Schmidt, R., Schreier, E., B, B. e. r. d. e., HO, S. c. h. i. l. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+11.">Ch. 11.</a> Ergot Alkaloids and Related Compounds. , (1978).</li><li>Rhodes, M. T., Paterson, J. A., Kerley, M. S., Garner, H. E., Laughlin, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+blood+flow+to+peripheral+and+core+body+tissues+in+sheep+and+cattle+induced+by+endophyte-infected+tall+fescue.">Reduced blood flow to peripheral and core body tissues in sheep and cattle induced by endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 69, 2033-2043 (1991).</li><li>Foote, A. P., Harmon, D. L., Strickland, J. R., Bush, L. P., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ergot+alkaloids+on+contractility+of+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">Effect of ergot alkaloids on contractility of bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 2944-2949 (2011).</li><li>Foote, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ergot+alkaloids+from+endophyte-infected+tall+fescue+decrease+reticuloruminal+epithelial+blood+flow+and+volatile+fatty+acid+absorption+from+the+washed+reticulorumen.">Ergot alkaloids from endophyte-infected tall fescue decrease reticuloruminal epithelial blood flow and volatile fatty acid absorption from the washed reticulorumen.</a> Journal of animal science. 91, 5366-5378 (2013).</li><li>Hocking, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+mechanical+stretch+on+smooth+muscle+function+in+saphenous+veins.">Detrimental effects of mechanical stretch on smooth muscle function in saphenous veins.</a> Journal of vascular surgery. 53, 454-460 (2011).</li><li>Smith, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+intestinal+surgery.">Bovine intestinal surgery.</a> Modern veterinary practice. 65, 705-710 (1984).</li><li>Budras, K. D., Habel, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bovine Anatomy An Illustrated Text. , (2003).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+lateral+saphenous+vein+serotonin+receptors+from+steers+grazing+endophyte-free,+wild-type,+or+novel+endophyte-infected+tall+fescue.">Antagonism of lateral saphenous vein serotonin receptors from steers grazing endophyte-free, wild-type, or novel endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 91, 4492-4500 (2013).</li><li>Egert, A. M., Kim, D. H., Schrick, F. N., Harmon, D. L., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+exposure+to+ergot+alkaloids+decreases+contractility+of+bovine+mesenteric+vasculature.">Dietary exposure to ergot alkaloids decreases contractility of bovine mesenteric vasculature.</a> Journal of animal science. 92, 1768-1779 (2014).</li></ol>

Ticari adı, tescilli ürün veya belirtilen ekipmanların Mansiyon USDA tarafından bir garanti anlamına gelmez ve mevcut olabilecek diğer ürünlerin dışlayarak onay anlamına gelmez.

Bu biyoanalizde gelişiminde ilk zorluk mezenterik damarların bir tekrarlanabilir toplama sitenin kurulması oldu. Ileum ve sonuç olarak mezenter yoluyla jejunumda ilerlemesi sırasında, ince bağırsak değişim bazı fonksiyonlarını benzer bir modeli farklılaşabilecektir olarak Örnek Alanı tutarlılığı büyük önem taşımaktadır. Mezenterik arter ve ven İleal dalları en kolay tespit anatomik noktalara aracılığıyla vardı. Çekum bulma ve mezenter sol tarafında kendi terminaline ileosekal kat izle...

Bir doku yatağına kan akışında değişimler organ fonksiyonu üzerinde büyük bir etkiye sahip olabilir. İnce bağırsağın birincil fonksiyonu, besin emilmesidir. Besin emilimini ve kan akışı artar yüzeyi boyunca digesta 1 hareket ederken, besin emilimini yardımcı olmak için barsağın emme yüzeyine arter kan akışı gerekmektedir. Kan akışında bir azalma, transepitelyal gradyanı 2 bir azalmaya besin emilimini bir azalmaya neden olabilir. Besin ek olarak, ince bağırsak, aynı zamanda mezenter lokalize kan akışı üzerinde bir etki gösterebilir sekonder metabolitler, ilaçlar veya toksinlere maruz kalabilir. Geviş getiren hayvanın durumunda, bileşikler, bir yem serbest bırakılabilir (örneğin, amino asitler, veya ergot alkaloitler gibi toksinler gibi besinler) ön bağırsağının fermantasyon süreçleri yoluyla. Bu bileşikler, rumen fermentasyon mikrobik metabolizmanın hayatta, şimdi emilim için kullanılabilirya da etkileşim ve hayvanın mide-bağırsak sistemi boyunca hareket ederken. In vivo kan akışını ölçmek için kullanılabilir farklı yöntemler vardır (örneğin, Doppler ultrason, kan akış ölçerler, radyoaktif işaretli mikroküreler ve gösterge-seyreltme teknikleri kalıcı) çeşitli deneysel senaryolar veya tedavilerin değerlendirilmesine imkan. Mulvany ve Halpern 3 tel tekniğini açıklayan bir makale bir myograph vasküler halka hazırlıklarını monte zamana kadar yayınlanmış Ancak, damar düz kas mekanik veya farmakolojik özellikleri hakkında bilgi edinmek için, yöntem büyük damarların sınırlı kalmıştır. Bu tekniğin geliştirilmesi için, modifikasyonlar tüp şekilli yapıların değerlendirilmesi için çeşitli uygulamaların çeşitli izin ilişkili myograph sistemlere yapılacak devam etmektedir. Sistem ayrıca nerede perfüzyon daha büyük gemilerin 4 montaj için sabit çubuklar kullanmak için adapte edilmiştirteknikler arzu edilmez. Damar ve hayvan türünden farklı hayvan türleri, verilerden aynı damarlarda anatomik kökeni ve ayrımlar gelen damar farklılıklardan dolayı kolay bir şekilde farklı damarlar ya da farklı hayvan türlerine 5, aynı kap üzerinde tahmin edilemez. Sonuç olarak, ayrı biyotahliller geliştirilmiş ve bu yönleri değişti zaman valide edilmelidir. Son zamanlarda birçok biyoassayler safen ven ve sağ rumen arter ve ven 6,7 sığırlarda kullanılan bu teknolojiler ile yanal geliştirilmiştir. Bu biyoanaliz ergo alkaloidleri ince bağırsağa destekleyen damar üzerinde sahip olduğu özel etkilerini araştırmak için geliştirilmiştir. Bu beslenen alkaloit% 50-60 abomasal içeriği görünür olduğu bildirildi, ancak sadece% 5 dışkı 8 kurtarıldı. Strickland ve diğ. 9, ergo alkaloidleri bir yorumda bu mevcut veriler Sugg belirttiest ince bağırsak ergopeptine emilmesi için en önemli site olabilir. Eckert ve ark. Ergo alkaloidleri 10 biofarmasötik yönleri ve epitel bariyeri geçmeye kez, ergo alkaloidleri subklavian ven veya mezenterik ven yoluyla ve portal kana lenfatik sistem tarafından ya taşınan belirtti. Rhodes vd. 11 yüksek endofit-enfekte (yüksek ergot) diyet tüketen yükleyiciler bir duodenum kan akımında azalma ve kolon bildirdi. Doğru rumen arter ve ven biyolojik tayini kullanılarak, Foote ve ark. Ergot alkaloitleri, 12 rumen damar vazoaktif olduğunu göstermiştir. Foote ve ark. 13, daha sonra in vivo koşullarında ortaya bir azalma işkembe epitel kan akışında ergot alkaloitleri, sonuçlar rumen maruz kalma. Rumen emilim yüzeyi kan akışındaki bu azalma beraberinde besin (uçucu yağ asidi) akı bir azalmaya neden olmuştur. Qu göz önüne alındığındaforegut gelen ince bağırsağa aktarılması ergo alkaloidleri Antite; küçük bağırsak damar ve besin emilimi üzerinde benzer bir etki meydana olacağı varsayılmıştır. Bu sığır proksimal ileal mezenterik arter ve ven biyoassay geliştirilmesini gerekli kılmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="611">
	<tbody>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:127px;">Company</td>
			<td style="width:120px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:259px;">Comment/Description (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Multi Myograph</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">610M</td>
			<td style="width:259px;">A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">Powerlab 8/sp</td>
			<td style="width:127px;">ADIntruments</td>
			<td style="width:120px;">ML785</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">LabChart 7</td>
			<td style="width:127px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:120px;">Version 7</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Force Calibration Kit</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">100055</td>
			<td style="width:259px;">Specific to DMT myographs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Bottle-top Filter</td>
			<td style="width:127px;">Nalgene</td>
			<td style="width:120px;">595-4520</td>
			<td style="width:259px;">0.22 um pore size; 45 mm neck size</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">#5 Jewler&#8217;s Forceps</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">555008FT</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of forceps can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Noyes Iris Scissors</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">18-1510</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of scissors can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Dissecting Scope</td>
			<td style="width:127px;">Zeiss</td>
			<td style="width:120px;">Stemi 2000-C</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of dissecting light microscope will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Adjustable Tissue Matrice</td>
			<td style="width:127px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:120px;">TM C12</td>
			<td style="width:259px;">This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Krebs-Hensleit Buffer</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">K3753-10x1L</td>
			<td style="width:259px;">It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Calcium chloride dehydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">C7902-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">S5761-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Desipramine-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">D3900-5G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Propranolol-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P0884-1G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">KCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P9333-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:105px;">95% O2/5% CO2</td>
			<td style="width:127px;">Scott Gross</td>
			<td style="width:120px;">UN3156</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

Memeli mide-bağırsak sistemlerinin sürekli ve bu sistemi için kan akışı üzerinde bir etkiye sahip olabilir bileşikler (istenen ve istenmeyen) maruz kalır. Ince bağırsağa kan akışında değişimler organın emme işlevlerine etkilere neden olabilir. Fermantatif ve sindirim süreçleri ile yemlerin kurtuldu toksinler özellikle faiz üretken verimliliği gelişmiş olabilir bir alanda gibi geviş getiren hayvanlarda gelişmiştir. Bu makale ile ilişkili video sığır mezenterik arter izole enine kesitlerde vazoaktiviteye ve bir multimyograph kullanarak damar bileşikleri taramak için geliştirilmiş bir in vitro biyo-tahlili tarif eder. Kan damarlarının monte edilir ve myograph içinde dengelenmiş sonra, biyolojik tayin kendisi kullanılabilir: gerilme tepkisini ya da ilgi çekici bir bileşik vazoaktiviteye değerlendirmek için bir tarama aracı olarak; farmakolojik olarak spesifik bir agoniste sahip reseptörleri hedefleyerek reseptör tiplerinin varlığını belirlemeks; Bir veya daha fazla antagonistlerinin varlığında bir reseptörünün rolünü belirlemek; veya antagonistleri ile ilgi çekici bir bileşik olası etkileşimleri belirler. Tüm bu sayesinde, verileri gerçek zamanda toplanır, tek bir hayvandan alınan doku farklı deneysel tedavilerin büyük sayıda (bir in vitro avantaj) maruz bırakılmış, ve doğru bir temin etmek üzere, kılcal damar yataklarının her iki tarafında damar sistemini temsil edilebilir ince bağırsağa destekleyen afferent ve efferent kanlanma oluyor ne olabilir resim.

Dahil sonuçları üretmek için kullanılan kan damarları, 3 hafta aralığında olan 6 Holstein yükleyiciler (425 ± 8 kg) toplanmıştır. KCl ve konsantrasyon içerisinde arttırılarak tedavi eklemeler için tipik damar mezenterik kasılma tepkisinin bir örneği cevabının büyüklüğü (verici hayvanın boyutu ile ilişkili) kabın boyutu ile bir değişir. Şekil 2&#39;de sunulmuştur, ama aynı zamanda bir can yanlış kullanım sonucu (olumsuz) etkilenir toplanması ve temizlenmesi sıras?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine at JoVE.com

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Görüntüleme.  USDA-Agricultural Research Service.  Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir. 

Video: Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, the de novo mutation rate in humans is relatively high, so new mutations are generated at a high frequency in the population. However, de novo mutations have not been reported in most common diseases. Mutations in genes leading to severe diseases where there is a strong negative selection against the phenotype, such as lethality in embryonic stages or reduced reproductive fitness, will not be transmitted to multiple family members, and therefore will not be detected by linkage gene mapping or association studies. The observation of very high concordance in monozygotic twins and very low concordance in dizygotic twins also strongly supports the hypothesis that a significant fraction of cases may result from new mutations. Such is the case for diseases such as autism and schizophrenia. Second, despite reduced reproductive fitness1 and extremely variable environmental factors, the incidence of some diseases is maintained worldwide at a relatively high and constant rate. This is the case for autism and schizophrenia, with an incidence of approximately 1% worldwide. Mutational load can be thought of as a balance between selection for or against a deleterious mutation and its production by de novo mutation. Lower rates of reproduction constitute a negative selection factor that should reduce the number of mutant alleles in the population, ultimately leading to decreased disease prevalence. These selective pressures tend to be of different intensity in different environments. Nonetheless, these severe mental disorders have been maintained at a constant relatively high prevalence in the worldwide population across a wide range of cultures and countries despite a strong negative selection against them2. This is not what one would predict in diseases with reduced reproductive fitness, unless there was a high new mutation rate. Finally, the effects of paternal age: there is a significantly increased risk of the disease with increasing paternal age, which could result from the age related increase in paternal de novo mutations. This is the case for autism and schizophrenia3. The male-to-female ratio of mutation rate is estimated at about 4&#x2013;6:1, presumably due to a higher number of germ-cell divisions with age in males. Therefore, one would predict that de novo mutations would more frequently come from males, particularly older males4. A high rate of new mutations may in part explain why genetic studies have so far failed to identify many genes predisposing to complexes diseases genes, such as autism and schizophrenia, and why diseases have been identified for a mere 3% of genes in the human genome. Identification for de novo mutations as a cause of a disease requires a targeted molecular approach, which includes studying parents and affected subjects. The process for determining if the genetic basis of a disease may result in part from de novo mutations and the molecular approach to establish this link will be illustrated, using autism and schizophrenia as examples.

Molecular genetic strategy for finding de novo mutations causing common disorders such as autism and schizophrenia.

Ortak Bozuklukları de Novo Mutasyonlar, otizm ve şizofreni gibi tanımlayın Bir Strateji

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Tıp

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

Yetişkin Fare Venöz Hipertansiyon Modeli: Dış Boyun Ven Anastomoza Ortak Karotis Arter.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

Karotis Arter ve Ven Juguler kateterizasyon bir Bilinçli Rat Modelinde, İnfüzyonları ve Kan Örnekleme hemodinamik Tedbirleri Gerçekleştirme

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Basit Aygıt Hızla Fare Bağırsak Tüm Mounts Hazırlanır

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a promising therapeutic target in many disorders, such as autoimmune diseases, atherosclerosis, and cancer. RNAi-mediated gene silencing is a valuable approach of choice to probe and manipulate macrophage function; however, the transfection of macrophages with siRNA is often considered to be technically challenging, and, at present, few methodologies dedicated to the siRNA transfer to macrophages are available. Here, we present a protocol of using polyethyleneimine-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles (PEI-SPIONs) as a vehicle for the targeted delivery of siRNA to macrophages. PEI-SPIONs are capable of binding and completely condensing siRNA when the Fe:siRNA weight ratio reaches 4 and above. In vitro, these nanoparticles can efficiently deliver siRNA into primary macrophages, as well as into the macrophage-like RAW 264.7 cell line, without compromising cell viability at the optimal dose for transfection, and, ultimately, they induce siRNA-mediated target gene silencing. Apart from being used for in vitro siRNA transfection, PEI-SPIONs are also a promising tool for delivering siRNA to macrophages in vivo. In view of its combined features of magnetic property and gene-silencing ability, systemically administered PEI-SPION/siRNA particles are expected not only to modulate macrophage function but also to enable macrophages to be imaged and tracked. In essence, PEI-SPIONs represent a simple, safe, and effective nonviral platform for siRNA delivery to macrophages both in vitro and in vivo.

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

We describe a method of using polyethyleneimine (PEI)-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles for transfecting macrophages with siRNA. These nanoparticles can efficiently deliver siRNA to macrophages in vitro and in vivo and silence target gene expression.

Polyethyleneimine kaplı demir oksit nano tanecikleri küçük müdahale RNA makrofajlar için teslim için bir araç olarak Vitro ve In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...