Bu protokol, tümör heterojenliğini, moleküler çeşitliliği daha iyi yansıtan ve klinik sonuçları tahmin eden ATC ve HNSCC PDX modellerinin oluşturulmasına yardımcı olur. Tekniğin kullanımı kolaydır, yüksek bir başarı oranına sahiptir ve diğer PDX modelleri için de uygun olabilir. Bu teknik, kanser hastasının kişiselleştirilmiş tedavisine rehberlik etmek için anti-kanser ilaç duyarlılığı taramasına doğru genişletilebilir.
Bu tekniği hiç uygulamamış bir birey bazı zorluklarla karşılaşabilir ve şemanın her detayına dikkat edilmesi önerilir. ATC ve HNSCC tümör örneklerini steril HTK çözeltisi içeren 50 milimetrelik bir santrifüj tüpünde elde ettikten sonra,% 75 alkol ile dezenfekte edin. Tümör dokusunu salinle dolu altı santimetrelik bir Petri kabına aktarmak için sterilize edilmiş oftalmik forseps kullanın ve bir bıçak kullanarak küçük parçalara ayırın.
Ardından, parçaları salin içeren yeni bir altı santimetrelik Petri kabına aktarın ve sızdırmazlık filmi ile sarın. Sarılmış tabağı bir buz kutusuna yerleştirin, makas, forseps ve aşılama iğneleri ile patojensiz hayvan odasına taşıyın. Fareyi uyuşturduktan sonra, sağ lateral torakstaki kılları çıkarın ve% 75 alkol ile bölgeyi dezenfekte edin.
Sağ lateral toraksın ortasında iki milimetrelik bir kesi yapmak için makas kullanın. Forseps ile, Petri kabından dokuyu alın ve trokar iğnesine yerleştirin. Fareyi tutun ve cildi delinme bölgesinde sıkın.
Trokarı tümör parçasıyla birlikte deri altı boşluğuna insizyona yerleştirin, ardından omzun arkasına doğru hareket edin ve trokar çekirdeğini itin. Kalan dokuyu steril bir gazlı bez kullanarak rezerve etmek için, tümör yüzeyinden salini çıkarın ve aşırı ıslak olmadığından emin olun. İki mililitrelik hücreli bir kriyoprezervasyon tüpüne dört ila altı doku parçası koyun ve tüpe bir mililitre kriyoprezervasyon çözeltisi ekleyin.
Ardından, tüpü bir gradyan soğutma kutusuna yerleştirin ve gece boyunca eksi 80 santigrat derecede dondurun. Son olarak, sıvı azota aktarın. PDX model tümörleri canlandırmak için, deri altı tümörünün uzunluğunu ve genişliğini haftada bir kez ölçmek için Vernier kumpasları kullanın.
Tümör hacmini hesaplayın ve tümör büyüme eğrisini çizin. Daha sonra, makas kullanarak, tümörü çevreleyen ötenazi fare derisini kesin. Tümörü forseps ile çıkarın ve bir Petri kabına yerleştirin.
Daha önce gösterildiği gibi, beşinci nesil farelere kadar tümör naklini gerçekleştirin. P5 nesil ATC PDX model farenin tümör dokusunu seçin. İki ila dört milimetreküp parçaya bölün.
Bu parçaları daha önce gösterildiği gibi, çıplak, dört ila altı haftalık dişi BALB / c farenin sağ arkasına deri altından aşılayın. Tümör 50 ila 150 kübik milimetre büyüdüğünde, fareleri üç gruba ayırın. Lenvatinib, cisplatin ve kontrolü haftada iki kez uyguladıktan sonra, farenin vücut ağırlığını ölçün.
Ayrıca, tümör hacmini ölçün. Korelasyon analizi, ATC PDX model yapısının başarı oranının yaş, cinsiyet, tümör çapı, tümör derecesi ve farklılaşmaya bağlı olmadığını göstermektedir. HNSCC PDX model yapımında tümör alım hızı, farklılaşma derecesinin model başarı oranı ile ilişkili olduğunu, diğer parametrelerin ise tümör alım oranını etkilemediğini göstermiştir.
Her PDX modeli için tümör büyüme eğrileri, ATC örneklerinin P3 nesline stabil bir şekilde geçirildiğini, iki HNSCC numunesi vakasının ise P1 nesline geçtikten sonra tümör oluşturamadığını göstermiştir. Çoğu PDX modeli için P0 neslinin tümör büyüme hızı, muhtemelen fare mikro ortamının adaptasyonu nedeniyle, daha sonraki pasajlardan nispeten daha yavaştı. Histopatolojik incelemede PDX tümörlerinin primer tümörlerin morfolojik özelliklerini koruduğu saptandı.
Lenvatinib ile tedavi, tümör büyümesini önemli ölçüde inhibe etti ve ATC PDX modelinde kontrol grubuna kıyasla daha düşük tümör ağırlığı gösterdi. Ek olarak, lenvatinib ile tedavi edilen fareler toplam ağırlıklarında fark edilebilir değişiklikler göstermedi. Aşırı sisplatin dozu, kilo kaybı ve hatta ölümle kanıtlandığı gibi önemli toksisiteye neden olmuştur.
Taze tümörler parçalara ayrılmadan önce normal salin ile birkaç kez yıkanmalıdır. Biyopsi yapılan tümör örnekleri ile karıştırılması ve aşılanması muhtemelen tümör oluşumuna neden olacaktır. Bu model tümör biyolojisi araştırmaları, ilaç taraması, kişiselleştirilmiş tedavi için kullanılabilir.
