Yazarlar Dr teşekkür etmek istiyorum. Cerrahi eğitim onların yardım için Wenjun Li ve Daniel Kreisel (St Louis Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi). RYL Sağlık Hibe R01 DK068057 Ulusal Enstitüleri ve Saint Louis Üniversitesi Rektörlük Araştırma Fonu tarafından desteklenmektedir.

1. Hücre Hazırlanması Notlar:, 2) bir yer Matrigel 1) tam RPMI 1640 kültür ortamı tabanlı tarifi (500 mi) 435 ml RPMI 1640, 50 mi ısı ile deaktive edilmiş FBS, 5 ml esansiyel olmayan amino asitler, sodyum piruvat 5 mi, 5 ml antibiyotik antimikotik içerir 4 ° C hücre hasat öncesinde bir gün. <ol><li> İnsan ATC hücre hattı THJ-11T 8 6 kuyu kültür plakaları yetişen ve% 80-90 birleşik bir kez hasat edilir. </li><li> Oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüj ile topak hücrelere. </li><li> RPMI 1640 medya [2 ml / 6 plaka] medya ve tekrar süspansiyon hücreleri aspire. </li><li> % 0.4 tripan mavi boya, bir hacim eklemek ve TC10 Otomatik Hücre Sayaç kullanılarak hücre yoğunluğu belirlemek için, hücre süspansiyonu, küçük bir hacme al. </li><li> Enjekte 5 x 10 5 hücre / fare kat daha fareler elde etmek için gerekli hücre süspansiyonu hacmi hesaplayın. </li></ol> Not: ad sağlamak için<html> Eğer farelerin çift sayısı (örneğin 5 farelere enjekte eğer 10 farelere enjekte sanki, daha sonra hücre süspansiyonu hazırlamak) enjekte edilir sanki enjeksiyon için hücre süspansiyonu eşit, hücreleri hazırlamak. <ol start="6"><li> 15 ml konik bir tüp içine hücre süspansiyonu gerekli hacmi aktarın. </li><li> Oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüj ile topak hücrelere. </li><li> Tam RPMI 1640 medya medya ve tekrar süspansiyon hücreleri aspire. </li><li> 1.6 ml tüp hücreleri aktarın, matrigel 1 hacim ekleyin ve yavaşça pipetleme ve dışarı ile hafifçe karıştırın. </li></ol> Not: Her fare hücre süspansiyonu / matrigel kokteyl 10 ul alacaksınız. 10 ul enjekte hacmi asılı 5 x 10 5 hücre başarıyla önceki ATC ortotopik çalışmalarda 9-10 kullanılmıştır bu yana, bu raporda bu parametreler kullanılır. <ol start="10"><li> Kullanıma hazır olana kadar buz üzerinde hücre süspansiyonu yerleştirin. </li></ol>Yurt İçi &quot;&gt; 2. Fare Hazırlama <ol><li> % 70 etanol ile tüm yüzeyleri silerek diseksiyon kapsamı ve çevresi, içeren cerrahi bölge, temizleyin. </li><li> Hayvanlar ameliyat sonrası iyileşme olacak ısıtma lambaları / pedleri açın. </li><li> 1 ml, 27G ½ &quot;Tüberkülin şırınga kullanarak 10 g vücut ağırlığı intraperitoneal başına 0.1 ml ketamin / ksilazin (ketamin 9 mg / ml ve ksilizin 1mg/ml oluşan ilaç kokteyli) yönetmek. </li><li> Cerrahi Hazırlık fare: 1) betadin batırılmış gazlı bez, 4 ile yapılan son fırçalayın) chorhexadine batırılmış gazlı bez kareler, 3 ile cerrahi alan üç kez fırçalayın fare boyun bölgesi (çene çizgisinden sternum ve silah dışarı başına), 2) tıraş ) hafifçe kurumasını gözleri önlemek için göz merhemi uygulanır. </li><li> Fare yeterli sedasyon sağlamak için refleks pedal kontrol edin. </li><li> Diseksiyon kapsamında tek kullanımlık steril alana bariyer üzerinde sırt yatma hayvan yerleştirin ve bez bant ile yerde hayvan sabitleyin. </li><li> Scrubs Eller ve ayaklaringernails sonra steril cerrahi eldiven koymak. </li><li> Steril bir şekilde, açık cerrahi paketi ve aletleri düzenlemek. </li><li> Sadece cerrahi alan maruz bırakarak, hayvan üzerinde steril örtüyü yerleştirin. </li></ol> 3. Tiroid ve Hücre Enjeksiyon için cerrahi Erişim <ol><li> Steril, tek kullanımlık neşter kullanarak, boğazın orta hat boyunca bir 1-to-1.5 cm boyuna kesi yapmak. </li></ol> Not: orta hat sapma trakea erişmek için daha derin kesme zorlaştırmaktadır. Oldukça hassas orta hat kesi birlikte sağ ve sol tükürük bezleri tutan membranöz doku ile alay ve kesmek için izin verir ve büyük arterler nicklemek veya kesilmesinin şansı azaltır. <ol start="2"><li> Trakea çevreleyen kayış kas içine ikinci bir kesi yapmak sonra sağ tiroid bezi ortaya çıkarmak için yan kesik kas sağ tarafında çekin. </li><li> Hemostat bir kas tabakası tutmak için bu noktada kullanılabilirTiroid bezinin kolay erişim (Şekil 1) için parça. </li></ol> Not: prosedürü iki cerrahi personel tarafından gerçekleştirilen, bir hazır enjektabl şırınga yardımcı personeli tarafından cerrah teslim ederken Alternatif olarak, kas tabakası sadece forseps ile geri tutulabilir. <ol start="4"><li> Yavaş yavaş yavaşça iğne kaldırmak için, 31G 5/16 &quot;insülin şırınga kullanarak sağ tiroid bezi içine hücre süspansiyonu 10 ul enjekte. </li></ol> 4. Cerrahi Site ve Fare Kurtarma kapatılması <ol><li> Ya sürekli ya da kesik kesik dikiş stili kullanarak 6.0 dikiş materyali ile dikiş kas tabakası. </li><li> Aynı şekilde dikiş cilt. </li><li> Doğrudan kesi sitesi üzerinden üçlü antibiyotik merhem tabakası uygulayın. </li><li> Sıcak ısıtma yastığı sırt yatma kurtarmak için hayvan izin verin. Hayvan yardım almadan sternum yatma elde edilebilir sonra, bu diğer farenin sırt ile yerleştirilebilir. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Ameliyat sonrası İzleme ve Doku Koleksiyon <ol><li> Cerrahi sonrası bir hafta boyunca her gün kesi ve hayvanın genel sağlık kontrol edin ve ardından haftada bir kontrol edin. Dikişler 14 gün sonra hala bozulmamış ise, bunlar kaldırılır. </li></ol> Not: azalan sağlık (örneğin önemli kilo kaybı, dağınık saç, nefes darlığı) belirtileri gösteren Hayvanlar ötenazi olmalı ve dokuların topladı. <ol start="2"><li> Bir kez fareler ksilizin / ketamin oturaklı için yukarıda tarif olarak yönetmek, önceden belirlenmiş bir ameliyat sonrası zaman noktası ulaşmıştır. </li><li> Intrakardiyak hayvan serpmek ve hasat tiroid / trakea ve ilgi diğer dokuları (burada ayrıntılı olarak açıklanmayan). </li></ol>

<ol>
	<li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li><li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice.">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice.">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma.">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li><li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells.">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li><li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer.">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li><li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target.">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li><li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+Intervention+with+anti-BRAF+(V600E)+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer.">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li><li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer.">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bizim modelde, hayvanlar 4 hafta sonrası enjeksiyon yoluyla kaşeksi ve solunum sıkıntısı ile ilgili tiroid tümör metastazı ve hastalık gösterdi. Diğer birçok ortotopik modellerinde hedef dışına yayılır çevreleyen doku ve enjeksiyon sonrası kaçak bir hücre süspansiyonu enjekte teslimat, enjeksiyon kullanan ile de mümkündür. Bu söyleniyor, bu işlem ile üretilen bir tanınabilir potansiyel bilinmeyen olmayan hastalığı ile ilgili metastaz veya komplikasyonlara kapalı hedef maruz kalma etkisidir. Bu durum, hastalığın araştırılmaktadır, çoğu xenographic nakli ile genel bir husustur. Bununla birlikte, metastaz gelen kasıtsız sonuçları önemli ölçüde rahatça tiroid bezi kaplayan zarın nüfuz iğne ucu, tüm konik sağlanması ve yavaş yavaş hücresel süspansiyon atarak en aza indirilebilir. Sızıntı enjeksiyon sırasında ya da sonrasında gözlenirse, bu hayvanlar çalışma atlanabilir. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu hayvanlar tiroid / trakea ve diğer dokuları önce perfüze esastır. Yararları) iki kat, 1 olan kırmızı kan hücreleri) temizlenir ve histolojik örnekleri ve 2 karmakarışık olmaz doku morfolojisi ve bütünlüğü korunur. Ayrıca, rezeke tiroid / trakea bağlı ya bir tümöral kitle ya da anatomik histolojik hazırlanması için gömülü önce tespit edilebilir bir şekilde kesilmelidir içinde entombed olduğunu. Bu önemli ölçüde numune hazırlama süresini azaltır. Bu yazıda ATC hücrelerinin ortotopik enjeksiyonu takiben gelişmiş tiroid tümörün lokal büyüme ve invazyon açıklar. ATC metastaz gibi hematoksilen ve eozin gibi standart histolojik lekeleri, kullanan diğer dokuların histolojik hazırlıkları analiz ederek, ya da immünhistokimya hücre veya patoloji ilgili işaretleri kullanılarak incelenmiştir olabilir. Bu sistem daha g tarafından geliştirilebilircanlı görüntüleme metastaz ve tedavi tedavilerin etkinliğini izlemek için kullanılabilir, böylece enetically floresan gazetecilere tiroid kanser hücrelerini değiştirerek.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI 1640 cell culture media</td>
 <td>Mediatech</td>
 <td>10-041-CV</td>
 <td>Media and additives used depend on cell line</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TC10 Automated Cell Counter</td>
 <td>Bio-Rad</td>
 <td>145-0001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Matrigel</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>354234</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4"</td>
 <td>Roboz</td>
 <td>RS-5135</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disposable scalpel, No. 15</td>
 <td>Feather</td>
 <td>2975#15</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olsen Hegar Needle Holder - 4 &frac12;" delicate serrated</td>
 <td>gSource</td>
 <td>gS 21.5400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 nylon black monofilament suture</td>
 <td>Surgical Specialties Corporation</td>
 <td>1279B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heating Pad, reusable, 8" x 12"</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cloth tape, 1" X 10 yds</td>
 <td>Medline</td>
 <td>MIINON260101</td>
 <td>For restraining anesthetized mouse</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peanut Clipper/Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>8655</td>
 <td>For removing hair from surgical site</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td>
 <td>Penn Veterinary Supply</td>
 <td>VED1222</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Betadine</td>
 <td>Henry Schein Company</td>
 <td>6906727</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum ophthalmic ointment</td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 x 2 gauze, 12-ply</td>
 <td>Butler Animal Health Supply</td>
 <td>6936</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Field, Barrier, 18" x 26"</td>
 <td>Busse</td>
 <td>696</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Drapes (CSR Wrap)</td>
 <td>Cardinal Health</td>
 <td>AT 21 412</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G &frac12;" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>309623</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>31G 5/16" needle</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>328438</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triple antibiotic ointment</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma

Insan tiroid kanserlerinin hayvan modellerinde çeşitli deri altı ksenogreft ve bağışık yetmezliği olan farelere kanser hücrelerinin ortotopik implantasyonu da dahil olmak üzere, kurulmuştur. Cilt altı ksenogreft modelleri klinik öncesi tarama ve yeni tedavi tedavilerin değerlendirilmesi için değerli olmuştur. Deri altı bir modelini kullanarak bir çok avantaj bulunmaktadır: 1), hızlı, 2), yeniden üretilebilir, ve 3) tümör kurulması, büyüme ve terapötik ajanlara yanıt görsel muayene ile izlenebilir. Ancak, önemli kanıtlar 1-3 deri altı ksenogreft modellerinin kısa geliş ışık tutmuştur. Örneğin, deri altı ksenograft modellerinde tedavi edici özellikleri gösteren tıbbi tedaviler genellikle, insan hastalığı üzerinde kayda değer bir etkisi vardır. Xenographic nakli veya enjeksiyon sitenin mikro bu farklılık kalbinde yer alır. Ortotopik tümör xenograft modelleri daha biolo sağlamakHastalığın incelemek için gically ilgili bağlam. Bir dizi hayvan içindeki anatomik kökenli eşdeğer içine hastalıklı hücre veya doku implante avantajları uygun bir tümör-konak etkileşimleri için site, hastalıkla ilgili metastaz geliştirme ve araştırma tedavi ilaçları üzerinde siteye özgü etkisini incelemek için yeteneğini de içerir. Onlar yakın insan hastalığı yeniden nedenle, ortotopik ksenogreft modelleri çok daha fazla klinik değeri liman. Bu nedenlerle, gruplar bir dizi bir araştırma aracı 4-7 olarak ortotopik tiroid kanseri modeli yararlanmaktadır. Burada, biz, son derece invaziv anaplastik tiroid kanseri (ATC), çalışma için bir ortotopik modeli kurar tedavi direnir ve tüm tanısı alan hastalarda neredeyse ölümcül bir yaklaşım açıklar. Kültürlü hücreler, ATC taban membran matrisi içeren bir çözelti içinde bir ayrışmış hücresel süspansiyon olarak hazırlanır. Küçük bir hacim yavaş yavaş inj olansağ tiroid bezine ected. Farelerin genel görünüm ve sağlık minimal postoperatif komplikasyonlar sağlamak ve kanser patolojik penetranslı ölçmek için izlenir. Fareler 4 hafta sonra kurban edilir ve doku histolojik analiz için toplanır. Hayvanlar hastalığın daha ileri ilerleme incelemek için daha sonra-noktalarında alınabilir. Bizim ATC patoloji anlayış ve etkinliği için 2) ekran mevcut ve gelecekteki terapötik ajanlar ATC mücadelede daha 1): Bu ortotopik fare modeli üretimi iki amacı gerçekleştirir bir platform kurar.

4 hafta sonra ATC hücreleri enjekte farenin 20 bir toplam 19 invaziv tiroid tümörleri tespit edildi. Şekil 2A&#39;da gösterilen örnekte, ekli koşullar altında yetiştirilen 5X10 5 ATC hücre ortotopik enjeksiyon alan farenin, 4 hafta sonrası enjeksiyon içine tiroid kanseri hücrelerinin önemli infiltrasyonu gösterirler. Eozinofilik sitoplazma ve büyük çekirdeklere sahip karakteristik bir spindled hücreleri ve orta-boyutlu dev hücreler ile işgal ATC hücrelerin yapısı hematoksilin ve eozin (H &amp; E) boyama ile doğrulandı. Karşılaştırma için, enjeksiyon yapılmamış kontrol hayvan tiroid ve trakea, Şekil 2B&#39;de gösterilmiştir. Uninjected hayvan köklerinin yakın, ama gevşek, dernek görüntülemek ve aslında bir yuvarlak morfoloji var. Enjektabl teslim tiroid ve kullanım küçük boyutu nedeniyle, istenmeyen sonuçlar ortaya çıkabilir. Şekil 3A göstermektedirEn yaygın olarak gözlemlenen, bunun dışında, bir tümör kitlesi gelişmedir, ancak, tiroid kapsayan değildir. Hücreleri sınırdışı zaman bu ile ve tiroid ötesinde iğne penetrasyon olasılığı daha kaynaklanmaktadır. Şekil 3B&#39;de gösterildiği gibi, zaman zaman, tümör büyümesi ile kendini gösteren fareler, her iki ağır ve histolojik olarak tespit edilir. Tespit tümör gelişme olmaması komşu doku ve boşluklar içine enjeksiyon yeri ve yayılması gelen hücre süspansiyonu sınırdışı neden olabilir. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1. Tiroid açığa. Etiketler trakea yan sağ ve sol tiroid bezleri gösterir. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Şekil 2,"/> Şekil 2. Tümör büyümesinin ve histolojik incelemesiBaşarılı tiroid enjeksiyon sonrası vasion. Doku örnekleri koronal düzlemi boyunca kesitler alındı. eozinofilik sitoplazmalı ve HE büyük çekirdekleri (ile karakteristik iğsi hücreli ve orta-dev boyutlu hücreleri ile önemli tümör büyümesi sergileyen fare 200X alınan A) Görüntü H &amp; E) leke Tu tümör hücreleri tiroid istila hangi birincil lezyon gösterir B) Trakea ve kontrol hayvan tiroid (100X alınan görüntü) Tu, Tümörler,... S, düz kas, Tr, trakea, Thy, tiroid bezi. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3,. Ortotopik enjeksiyon kasıtsız sonuçları. Doku örnekleri koronal düzlemi boyunca kesitler alındı. A) Periferik tümör büyümesi thyroi belirgin bir büyüme iled (siyah ok, 100X alınan görüntü). B) brüt üzerine tümör tespit eksikliği (gösterilmemiştir) veya histolojik inceleme (50X alınan görüntü). Thy, tiroid bezi.

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma at JoVE.com

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Anaplastik tiroid kanseri ortotopik fare modeli Üretimi burada açıklanmıştır. Bu teknik böylece hastalığın ilerlemesi hem de ekran yenilikçi tedavi yaklaşımları incelemek için daha klinik ortam yaratan, bağışık yetmezliği olan farelerin tiroid, insan anaplastik tiroid kanser hücrelerinin cerrahi yerleştirme kullanır.

Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

21.0K Görüntüleme.  Saint Louis University School of Medicine. Anaplastik tiroid kanseri ortotopik fare modeli Üretimi burada açıklanmıştır. Bu teknik böylece hastalığın ilerlemesi hem de ekran yenilikçi tedavi yaklaşımları incelemek için daha klinik ortam yaratan, bağışık yetmezliği olan farelerin tiroid, insan anaplastik tiroid kanser hücrelerinin cerrahi yerleştirme kullanır.

Video: An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Tıp

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak&gt; Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.