Bu yöntem, genetik materyali meme bezi epitel hücrelerine özel, geçici ve kantitatif olarak kontrol edilebilir bir şekilde iletir. Genetik materyalin meme epitel hücrelerine verilmesi özel, geçici ve kantitatif olarak kontrol edildiğinden, bu yöntemle üretilen meme modelleri doğal tümör oluşumunu daha iyi taklit eder. 33 gauge metal göbek iğnelerini yaklaşık bir santimetre uzunluğa kadar keserek ve alkolde saklayarak şırınga hazırlamaya başlayın.
Şırıngaları ve iğneleri alkolden çıkarın ve kalan alkolü şırınga ve iğnelerden dışarı itin. Daha sonra hava kurutması için şırıngayı sökün. Kuruduktan sonra, şırıngayı monte edin.
Viral stok tüplerini eksi 80 santigrat derece dondurucudan çıkarın ve buz üzerinde çözün. Bromofenol mavisi eklemek için, pipet ucunu bromofenol mavisi tozuna bir santimetre derinliğe batırın. Daha sonra ekli eser miktarda bromofenol mavisini virüs süspansiyonuna getirin.
Virüsü buzun üzerine yerleştirmeden önce bromofenol mavisini 10 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek virüs çözeltisiyle karıştırın. Anestezi uygulanan dişi farenin ayak parmağını sıkıştırarak anestezinin derinliğini kontrol edin. Hayvan anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere merhem sürün.
Fareyi sıcak bir ped üzerinde sırtüstü pozisyona getirin ve yapışkan bant kullanarak dört uzuvun tümünü tezgaha takın. Enjekte edilecek meme ucunu tanımlayın ve makas kullanarak çevredeki saçları keserek açığa çıkarın. Meme ucunu temizlemek ve açığa çıkarmak için meme başı bölgesine üç alternatif turda% 70 alkol ve iota dört çubuk uygulayın.
Bir çift sterilize mikro diseksiyon yayı makası kullanarak meme ucunun distal ucunu, bir büyüteç lambasının altında küçük bir merkezi duktal açıklık görülene kadar transekte edin. Daha sonra 10 mikrolitre virüs bromofenol mavisi karışımını şırıngaya yükleyin ve büyüteç lambasının yardımıyla iğneyi dikkatlice meme ucu açıklığına yerleştirin. Virüsün 10 mikrolitresinin tamamını kanal ağacına enjekte edin ve fare tamamen uyanana kadar fareyi 45 santigrat derecede ayarlanmış bir slayt ısıtıcısına yerleştirin.
Virüs enjeksiyonundan üç ila beş gün sonra göğüs boşluğunu açın. Cildi ventral orta çizgi boyunca ve makas kullanarak üst ve alt ekstremiteleri kesin. Cildi kaldırın ve meme bezlerini açığa çıkarın.
Forseps ve makas kullanarak kontrol olarak enjekte edilen meme bezini deriden ve enjekte edilmemiş bir bezden çıkarın. İşiniz bittiğinde, meme bezini bir cam slayt üzerine yerleştirin ve floresan stereo mikroskop altında gözlemlemeden ve görüntülemeden önce bezi orijinal şekline yayın. İntraduktal enjeksiyonun başarısı, meme bezinin açığa çıkarılması ve mavi bir duktal ağacın gözlenmesiyle doğrulandı.
Lenti-EGFPFUCGW virüs enjeksiyonundan iki ila beş gün sonra, meme epitel hücresi enfeksiyonu, floresan stereo mikroskop altında tüm montaj hazırlığı gözlemlenerek değerlendirildi. Virüs tarafından üretilen floresan proteinlerinin veya hücre yüzey belirteçlerinin akış sitometrisi analizi için, enfekte olmayan bezler ve enfekte bezler, viral enfeksiyon oranını tahmin etmek için tek bir hücre süspansiyonunda toplandı ve işlendi. Aktive ERBBB2 birkaç hafta içinde kanser öncesi lezyonlara ve birkaç ay içinde tümörlere yol açtı.
Meme uçlarının büyüklüğü, bireysel fareler arasındaki kütle, yaş, vücut ağırlığı ve güçteki farklılıklar nedeniyle önemli ölçüde değişebilir. Meme kanalının açıklığını ve iğnenin takılmasını ortaya çıkarmak için meme ucunun düzgün bir şekilde kesilmesi, virüsün başarılı bir şekilde enjekte edilmesi için önemli bir adımdır.
