Shaanxi Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (hibe numarası 2021SF-118) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (hibe numaraları 81973409, 82204631) gelen mali destek için minnettarız.

Deney hayvanları, erkek BALB/c fareleri (12-16 g), Xi'an Jiaotong Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nden satın alındı. Tüm prosedürler, SCXK (Shaanxi) 2021-103 lisans numarası ile Xi'an Jiaotong Üniversitesi Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı.
1. Tampon ve ekipman hazırlığı
<ol><li>Transfect C. albicans yüksek ekspresyonlu plazmid pCaExp ile suşlar.<ol><li>ATCC'den C. albicans (SC5314) satın alın. EGFP geninin tam açık okuma çerçevesini içeren yüksek ekspresyonlu bir plazmid pCaExp ile C. albicans'ı transfekte ederek EGFP yüksek ekspresyonlu floresan suşu22'yi elde edin (plazmit haritası Şekil 1'de gösterilmiştir) ve bunu sonraki deneyler için kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Kültür, transfekte edilmiş C. albicans suşları .<ol><li>Maya ekstraktı pepton dekstroz ortamı (YPD) plakasından ve 5 mL YPD sıvı ortamında (YPD + 50 μg/mL karbenisilin) gece boyunca (30 °C ve 220 rpm) kültürden C. albicans floresan suşunun monoklonal kolonilerini seçin.</li>
		<li>RT'de 5 dakika boyunca 400 x g'da santrifüjlemeden sonra C. albicans'ı normal salin içinde yeniden süspanse edin.</li>
		<li>Bulanıklığı 0,5 McFarland standardıyla karşılaştırarak C. albicans süspansiyonunun konsantrasyonunu 1 x 108 hücre/mL'ye ayarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi aletleri hazırlayın.<ol><li>Tüm cerrahi aletlerin (makas, forseps, hemostatik forseps, iğne tutucular, dikiş iğneleri) 121°C'de 30 dakika otoklavlandığından emin olun. Steril polietilen kateterler (iç çap: 0.28 mm; dış çap: 0.63 mm) kullanılır. NOT: Bu çalışmada kullanılan kateterler etilen oksit gazı ile sterilize edildi ve ambalaj 30 dakikadan fazla UV'ye maruz bırakılan ultra temiz bir masada açıldı. Farelerde implantasyondan önce, kontaminasyonu önlemek için kateterler %75 etanole daldırıldı.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Bir fare CRI modelinin oluşturulması
NOT: Cerrahi prosedür Şekil 2'de gösterilmiştir.
<ol><li>30 BALB/c fareyi (12-16 g, erkek) suya ve yiyeceğe serbest erişim ve 12 saat-12 saat değişen aydınlık ve karanlık döngüsü ile spesifik patojensiz (SPF) koşullarda iklimlendirin.</li>
	<li>30 BALB/c fareyi rastgele üç gruba ayırın (n = 10 fare/grup): (A) normal kontrol grubu; (B) kateter grubu ( C. albicans olmadan implante edilen kateterler); (C) Model grubu ( C. albicans implante edilmiş kateterler).</li>
	<li>Fareleri% 1-4 izofluran ile uyuşturun ve fareleri yüzüstü pozisyonda bir ameliyat masasına yerleştirin. Doğrultma refleksinin kaybı ve ayak parmağı uyarısına yanıt alınamaması anestezinin başarılı olduğunu doğrular. Saçları çıkarın ve cerrahi bölgeyi üç alternatif iyodofor veya klorheksidin ve alkol peelingi ile sterilize edin.</li>
	<li>Fareleri herhangi bir tedavi görmeden normal kontrol grubunda bırakın ve yiyecek ve suya serbest erişim sağlayın.</li>
	<li>Kateter ve model gruplarındaki fareler için anesteziyi% 3 izofluranda tutun. Ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmemesi nedeniyle yeterli anestezik derinliği onaylayın ve izofluran konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın.</li>
	<li>Kateter grubundaki fareler için, bir delik açmak için geri epilasyon alanına intradermal olarak 1 mL'lik steril bir şırınga iğnesi sokun. Şırınga iğnesini çıkardıktan sonra deliğe bir kateter (yaklaşık 1 cm uzunluğunda) yerleştirin.</li>
	<li>Model grubundaki fareler için, ciltte kommensal C. albicans'ı simüle etmek için sırt epilasyon alanına 20 μL C. albicans süspansiyonu pipetleyin.</li>
	<li>Solüsyon cilt tarafından emildikten sonra, adım 2.5'te tarif edilenle aynı prosedürlerle sırt epilasyonlu bölgeye bir kateter yerleştirin.</li>
	<li>Dış ortamda C. albicans'ı simüle etmek için kateter boyunca dokuya 20 μL C. albicans süspansiyonu daha pipetleyin.</li>
	<li>Kateterleri bant ve gazlı bezle sabitleyin ve fareleri beslenmek için kafeslere geri koyun. Tedavinin sonunda, farelere art arda üç gün boyunca analjezi olarak meloksikam (4 mg / kg) enjekte edin. NOT: Ameliyattan sonra fareler dikkatlice su ve yiyecekle beslendi. Fareler günde iki kez izlendi. Fareler, beslenme güçlüğü, önemli kilo kaybı (% 10-20) ve hipotermi yaşarlarsa IACUC onaylı bir yöntemle ötenazi yapıldı.</li>
</ol>3. CRI modelinin değerlendirilmesi
<ol><li>3 gün sonra, fareleri% 3 izofluran ile uyuşturun ve servikal çıkık ile kurban edin. Farelerin arkasından kateterleri ve cilt dokusu örneklerini toplayın.</li>
	<li>Elektron mikroskobu ile kateter üzerindeki C. albicans ve biyofilmleri gözlemleyin.<ol><li>Kateterleri 48 saat boyunca 4 ° C'de% 2,5 glutaraldehit çözeltisine daldırın. Kateterleri steril PBS ile üç kez durulayın.</li>
		<li>Kateterleri 3 saat boyunca% 1 osmik asit ile sabitleyin ve üç kez steril PBS ile durulayın.</li>
		<li>Kateterler üzerindeki hücreleri, artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dakika/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Kateterleri üç kez tert-bütil alkole batırın (her seferinde 30 dakika).</li>
		<li>Kateterleri sıvı nitrojen içinde hızlı bir şekilde dondurun ve numuneyi üreticinin talimatlarına göre bir dondurarak kurutucuda dondurarak kurutun.</li>
		<li>Kateter örneklerini bir iyon ışını biriktirme ile 10 nm altınla püskürtün.</li>
		<li>Taramalı elektron mikroskobu altında (yüksek vakum, 1.5 kV koşullarında) her grubun kateter yüzeyinde C. albicans ve biyofilminin varlığını gözlemleyin ve her gruptaki görüntüleri kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Floresan mikroskobu ile kateter üzerinde C. albicans'ı gözlemleyin.<ol><li>Kateterleri 48 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 4 paraformaldehit çözeltisine daldırın.</li>
		<li>484 nm uyarılma altında bir floresan mikroskobu ile her grubun kateter yüzeyinde C. albicans ve biyofilminin varlığını gözlemleyin ve her gruptaki görüntüleri kaydedin. NOT: Büyütme 400x'tir. Candida albicans'ın floresansı 490 nm'de uyarma ve 510 nm'de emisyon ile gözlemlenebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Fare derisinde bulunan C. albicans'ı gözlemleyin.<ol><li>Farelerin dorsal deri dokularını 4 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 48 paraformaldehit çözeltisine daldırın.</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dk/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Susuz kalmış sırt derisi dokularını 55-60 °C'de parafine gömün. Kırılgan dokuları önlemek için sıcaklığa dikkat edin. Mümkün olduğu kadar çok kirliliği gidermek için bu adımı üç kez tekrarlayın (her biri 30 dakika).</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını (kalınlık = 5 μm) bir mikrotom ile bölümlere ayırın.</li>
		<li>Slaytları 20 dakika boyunca iki kez ksilene batırarak parafin bölümlerini mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca gradyan etanol (mutlak etanol, %90 etanol, %75 etanol, su) ile elüsyon yoluyla bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Bir kez akan su ve iki kez damıtılmış su ile yıkamadan önce bölümü 15 dakika boyunca periyodik asit çözeltisine batırarak bölümleri periyodik asitle boyayın.</li>
		<li>Bölümleri karanlıkta 30 dakika boyunca bir chevron boyama solüsyonuyla (üreticinin talimatlarına göre) boyayın ve bölümleri 5 dakika akan su altında durulayın.</li>
		<li>Sırasıyla akan su (2-3 dakika), farklılaştırılmış çözelti (5-10 dakika) ve akan su ile yıkamadan önce bölümleri 3-5 dakika hematoksilen çözeltisine daldırın.</li>
		<li>Bölümü nötr sakızla kapatmadan önce bölümleri üç kez etanole (her biri 5 dakika) ve iki kez (her biri 5 dakika) ksilene daldırın.</li>
		<li>Numunenin görüntülerini mikroskopla gözlemleyin ve fare derisindeki C. albicans kalıntılarını analiz edin. NOT: Büyütme, göz merceği için 10x ve objektif lens için 4x veya 10x'tir.</li>
	</ol></li>
	<li>Dorsal cilt dokularındaki histopatolojik değişiklikleri gözlemleyin.<ol><li>Dorsal cilt dokularını 4 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 48 paraformaldehit çözeltisine daldırın. Dorsal cilt dokularını artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dk/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Susuz kalmış dorsal cilt dokularını adım 3.4.3'te açıklandığı gibi parafine gömün.</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını (kalınlık = 5 mm) bir mikrotom ile bölümlere ayırın.</li>
		<li>Slaytları 20 dakika boyunca iki kez ksilene batırarak parafin bölümlerini mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca gradyan etanol (mutlak etanol, %90 etanol, %75 etanol, su) ile elüsyon yoluyla bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Şamandıra rengini çıkarmak için musluk suyuyla durulamadan önce bölümleri 4 dakika hematoksilen ile boyayın.</li>
		<li>Slaytları akan su ile durulamadan önce numuneyi% 1 hidroklorik asit-etanol çözeltisi ile ayırt edin.</li>
		<li>Numuneyi 5 dakika boyunca %85 ve %95 etanole batırın ve 3 dakika boyunca eozin çözeltisi ile boyayın.</li>
		<li>Numuneyi gradyan etanol (%70, %90, %95 ve %100) ve her biri 2 dakika ksilene batırarak kurutun.</li>
		<li>Numuneyi nötr reçine ile kapatın.</li>
		<li>Numunenin görüntülerini mikroskopla gözlemleyin ve patolojik değişiklikleri analiz edin.</li>
	</ol></li>
</ol>

Candida albicans ile İlişkili Kateter İlişkili Enfeksiyon için Bir Fare Modeli Oluşturma

<ol>
	<li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infections+of+medical+devices.">Candida infections of medical devices.</a> microbiology reviews. 17 (2), 255-267 (2004).</li><li>Giri, S., Kindo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Candida+species+causing+blood+stream+infection.">A review of Candida species causing blood stream infection.</a> Indian Journal of Medical Microbiology. 30 (3), 270-278 (2012).</li><li>Weinstein, R. A., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Device-associated+infections:+A+macroproblem+that+starts+with+microadherence.">Device-associated infections: A macroproblem that starts with microadherence.</a> Clinical Infectious Diseases. 33 (9), 1567-1572 (2001).</li><li>Mermel, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+intravascular+catheter-related+infections.">Guidelines for the management of intravascular catheter-related infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 32 (9), 1249-1272 (2001).</li><li>Seidler, M., Salvenmoser, S., M&#252;ller, F. -. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+micafungin+against+Candida+biofilms+on+polystyrene+and+central+venous+catheter+sections.">In vitro effects of micafungin against Candida biofilms on polystyrene and central venous catheter sections.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 28 (6), 568-573 (2006).</li><li>Chaves, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+catheter-related+bloodstream+infection:+Clinical+guidelines+of+the+Spanish+Society+of+Infectious+Diseases+and+Clinical+Microbiology+and+(SEIMC)+and+the+Spanish+Society+of+Spanish+Society+of+Intensive+and+Critical+Care+Medicine+and+Coronary+Units+(SEMICYUC).">Diagnosis and treatment of catheter-related bloodstream infection: Clinical guidelines of the Spanish Society of Infectious Diseases and Clinical Microbiology and (SEIMC) and the Spanish Society of Spanish Society of Intensive and Critical Care Medicine and Coronary Units (SEMICYUC).</a> Medicina Intensiva. 42 (1), 5-36 (2018).</li><li>Raad, I. I., Bodey, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+complications+of+indwelling+vascular+catheters.">Infectious complications of indwelling vascular catheters.</a> Clinical Infectious Diseases. 15 (2), 197-208 (1992).</li><li>Paul DiMondi, V., Townsend, M. L., Johnson, M., Durkin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+catheter+lock+therapy+for+the+management+of+a+persistent+Candida+albicans+bloodstream+infection+in+an+adult+receiving+hemodialysis.">Antifungal catheter lock therapy for the management of a persistent Candida albicans bloodstream infection in an adult receiving hemodialysis.</a> Pharmacotherapy. 34 (7), e120-e127 (2014).</li><li>Bouza, E., Guinea, J., Guembe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+antifungals+against+candida+biofilm+in+catheter-related+candidemia.">The role of antifungals against candida biofilm in catheter-related candidemia.</a> Antibiotics (Basel). 4 (1), 1-17 (2014).</li><li>Raad, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+analysis+of+indwelling+vascular+catheters:+a+quantitative+relationship+between+luminal+colonization+and+duration+of+placement.">Ultrastructural analysis of indwelling vascular catheters: a quantitative relationship between luminal colonization and duration of placement.</a> The Journal of Infectious Diseases. 168 (2), 400-407 (1993).</li><li>Yousif, A., Jamal, M. A., Raad, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm-based+central+line-associated+bloodstream+infections.">Biofilm-based central line-associated bloodstream infections.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 830, 157-179 (2015).</li><li>Douglas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+biofilms+and+their+role+in+infection.">Candida biofilms and their role in infection.</a> Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).</li><li>Mack, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+in+medical+device-related+infection.">Biofilm formation in medical device-related infection.</a> International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).</li><li>Schinabeck, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection:+liposomal+amphotericin+B+antifungal+lock+therapy.">Rabbit model of Candida albicans biofilm infection: liposomal amphotericin B antifungal lock therapy.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (5), 1727-1732 (2004).</li><li>Anaissie, E. J., Rex, J. H., Uzun, O., Vartivarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+adverse+outcome+in+cancer+patients+with+candidemia.">Predictors of adverse outcome in cancer patients with candidemia.</a> The American Journal of Medicine. 104 (3), 238-245 (1998).</li><li>Fujimoto, K., Takemoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+liposomal+amphotericin+B+against+four+species+of+Candida+biofilms+in+an+experimental+mouse+model+of+intravascular+catheter+infection.">Efficacy of liposomal amphotericin B against four species of Candida biofilms in an experimental mouse model of intravascular catheter infection.</a> Journal of Infection and Chemotherapy. 24 (12), 958-964 (2018).</li><li>Shuford, J. A., Rouse, M. S., Piper, K. E., Steckelberg, J. M., Patel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+caspofungin+and+amphotericin+B+deoxycholate+against+Candida+albicans+biofilms+in+an+experimental+intravascular+catheter+infection+model.">Evaluation of caspofungin and amphotericin B deoxycholate against Candida albicans biofilms in an experimental intravascular catheter infection model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 194 (5), 710-713 (2006).</li><li>Koh, A. Y., K&#246;hler, J. R., Coggshall, K. T., Van Rooijen, N., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+damage+and+neutropenia+are+required+for+Candida+albicans+dissemination.">Mucosal damage and neutropenia are required for Candida albicans dissemination.</a> PLoS Pathogens. 4 (2), e35 (2008).</li><li>Tucey, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+homeostasis+is+important+for+immune+cell+viability+during+candida+challenge+and+host+survival+of+systemic+fungal+infection.">Glucose homeostasis is important for immune cell viability during candida challenge and host survival of systemic fungal infection.</a> Cell Metabolism. 27 (5), 988-1006 (2018).</li><li>Lawrence, E. L., Turner, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Materials+for+urinary+catheters:+a+review+of+their+history+and+development+in+the+UK.">Materials for urinary catheters: a review of their history and development in the UK.</a> Medical Engineering &amp; Physics. 27 (6), 443-453 (2005).</li><li>Schumm, K., Lam, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Types+of+urethral+catheters+for+management+of+short-term+voiding+problems+in+hospitalized+adults:+a+short+version+Cochrane+review.">Types of urethral catheters for management of short-term voiding problems in hospitalized adults: a short version Cochrane review.</a> Neurourology and Urodynamics. 27 (8), 738-746 (2008).</li><li>Mo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+a+film+forming+system+containing+myricetin+and+miconazole+nitrate+for+preventing+candida+albicans+catheter-related+infection.">Development and evaluation of a film forming system containing myricetin and miconazole nitrate for preventing candida albicans catheter-related infection.</a> Microbial Drug Resistance. 28 (4), 468-483 (2022).</li><li>Balikci, E., Yilmaz, B., Tahmasebifar, A., Baran, E. T., Kara, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+modification+strategies+for+hemodialysis+catheters+to+prevent+catheter-related+infections:+A+review.">Surface modification strategies for hemodialysis catheters to prevent catheter-related infections: A review.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 109 (3), 314-327 (2021).</li><li>Mar&#237;a, L. T., Alejandro, G. S., Mar&#237;a Jes&#250;s, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+venous+catheter+insertion:+Review+of+recent+evidence.">Central venous catheter insertion: Review of recent evidence.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Anaesthesiology. 35 (1), 135-140 (2021).</li><li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infections+of+medical+devices.">Candida infections of medical devices.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 255-267 (2004).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+analysis+of+microbial+colonization+patterns+in+central+venous+catheters,+2013-2017.">Retrospective analysis of microbial colonization patterns in central venous catheters, 2013-2017.</a> Journal of Healthcare Engineering. 2019, 8632701 (2019).</li><li>Mo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+effects+of+the+combination+of+myricetin+and+miconazole+nitrate+incorporated+to+thermosensitive+hydrogels+on+C.">In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels on C.</a> albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).</li><li>Cant&#243;n-Bulnes, M. L., Garnacho-Montero, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+approach+to+the+management+of+catheter-related+bloodstream+infection.">Practical approach to the management of catheter-related bloodstream infection.</a> Revista Espanola de Quimioterapia. 32 Suppl 2 (Suppl 2), 38-41 (2019).</li><li>B&#246;hlke, M., Uliano, G., Barcellos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodialysis+catheter-related+infection:+prophylaxis,+diagnosis+and+treatment.">Hemodialysis catheter-related infection: prophylaxis, diagnosis and treatment.</a> The Journal of Vascular Access. 16 (5), 347-355 (2015).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+tissue+specimen+pretreatment+methods+on+microbial+culture+results+in+the+diagnosis+of+periprosthetic+joint+infection.">Effects of different tissue specimen pretreatment methods on microbial culture results in the diagnosis of periprosthetic joint infection.</a> Bone &amp; Joint Research. 10 (2), 96-104 (2021).</li><li>Naumenko, Z. S., Silanteva, T. A., Ermakov, A. M., Godovykh, N. V., Klushin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenging+diagnostics+of+biofilm+associated+periprosthetic+infection+in+immunocompromised+patient:+A+clinical+case.">Challenging diagnostics of biofilm associated periprosthetic infection in immunocompromised patient: A clinical case.</a> Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences. 7 (5), 786-790 (2019).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomic+next+generation+sequencing+improves+diagnosis+of+prosthetic+joint+infection+by+detecting+the+presence+of+bacteria+in+periprosthetic+tissues.">Metagenomic next generation sequencing improves diagnosis of prosthetic joint infection by detecting the presence of bacteria in periprosthetic tissues.</a> International Journal of Infectious Diseases. 96, 573-578 (2020).</li><li>Samanipour, A., Dashti-Khavidaki, S., Abbasi, M. R., Abdollahi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+patterns+of+microorganisms+isolated+from+nephrology+and+kidney+transplant+wards+of+a+referral+academic+hospital.">Antibiotic resistance patterns of microorganisms isolated from nephrology and kidney transplant wards of a referral academic hospital.</a> Journal of Research in Pharmacy Practice. 5 (1), 43-51 (2016).</li><li>Huang, G., Huang, Q., Wei, Y., Wang, Y., Du, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+and+diverse+regulation+of+the+Ras/cAMP/protein+kinase+A+pathway+in+Candida+albicans.">Multiple roles and diverse regulation of the Ras/cAMP/protein kinase A pathway in Candida albicans.</a> Molecular Microbiology. 111 (1), 6-16 (2019).</li><li>Garlito-D&#237;az, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+antifungal-loaded+sol-gel+can+prevent+candida+albicans+prosthetic+joint+infection.">A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection.</a> Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).</li></ol>

Yazarlar, bu yazıda bildirilen çalışmayı etkilemiş gibi görünebilecek bilinen hiçbir rakip mali çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını beyan ederler.

CRI, klinik pratikte en sık görülen nozokomiyal enfeksiyonlardan biridir23. Epidermis, yağ bezleri ve saç folikülleri gibi cilt uzantılarındaki patojenlerin tümü CRI 23,24'ün olası nedenleridir. Candida, CRI'ye neden olan üçüncü en büyük patojendir ve Candida albicans en yaygın biyofilm enfeksiyonu tipidir25,26. Bu nedenle, ilgili CRI'nin tedavi...

Son yıllarda biyomedikal materyallerin gelişmesi ve uygulanması ile implant ilişkili enfeksiyonlar zor klinik problemler olarak karşımıza çıkmaktadır 1,2. Kliniklerde tıbbi kateterlerin yaygın olarak uygulanmasıyla, ilgili enfeksiyon ve ölümlerin sayısı her yılçok fazladır 3,4. Kateterle ilişkili bir enfeksiyonun (CRI) yaygın enfeksiyon yolları şunları içerir: (1) cilt yüzeyindeki patojenler vücuda sızar ve kateterin dış yüzeyine yapışır 5,6,7; (2) uygun olmayan aseptik operasyondan türetilen patojenler kateteri istila eder, yapışır ve kolonize olur; (3) kan dolaşımındaki patojenler katetere yapışır ve kolonize olur; (4) patojenik mikroorganizma ile kontamine olmuş ilaçlar.
Candida, CRI 8,9'un üçüncü en yaygın nedenidir. İmplant yüzeyinde biyofilmler oluştuktan sonra kan dolaşımı enfeksiyonuna ve diğer hayatı tehdit eden invaziv kandidiyazise neden olma olasılığı çok yüksektir. Prognoz kötüdür ve mortalite oranı yüksektir2. Santral venöz yerleştirildikten sonra 2 hafta içinde kateter yüzeyinde, birkaç hafta sonra ise kateter lümeninde biyofilm oluştuğu bildirilmektedir10,11.
Tıbbi kateterler üzerinde oluşan Candida albicans (C. albicans) biyofilmleri maya, stroma ve miselyumdan oluşan çift katmanlı bir ağ sergiler12,13. C. albicans biyofilmlerinin oluşumu sadece ilaç direnci ve bağışıklıktan kaçınma13 için bir anahtar değil, aynı zamanda daha fazla hematojen enfeksiyona 2,12 yol açan ve daha ciddi ve hatta yaşamı tehdit eden sonuçlara yol açan yayılmış sporların üretilmesi için hayati önem taşır. C. albicans ile ilişkili CRI, klinik fungal kan dolaşımı enfeksiyonlarının önemli bir nedenidir 7,14 ve santral venöz kateterde C. albicans enfeksiyonu olan hastaların %40'ından fazlası bakteriyemiyedönüşecektir 15.
Amerika Enfeksiyon Hastalıkları Derneği'ne göre, Candida CRI'nin önerilen tedavisi şunları içerir: (1) enfekte kateterin çıkarılması; (2) hastaları 14 günlük sistemik antifungal tedaviye tabi tutmak8; (3) yeni bir kateterin yeniden yerleştirilmesi4. Ancak klinik uygulamalarda kateterler bazen tam olarak çıkarılamamaktadır. Bazı hastalar sadece sistemik antibiyotikler ve antimikrobiyal kilit tedavisi ile tedavi edilebilir ve güçlü yan etkiler eşlik eder16,17.
Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi C. albicans 18,19 klinik CRI ile iyi korelasyon gösterememektedir. Bu nedenle, bu çalışmada, farelerde C. albicans ile ilişkili bir CRI modeli oluşturulmuştur. Klinik olarak yaygın olarak kullanılan polietilen kateterler subkutan implantlarolarak kullanıldı 20,21 ve C. albicans'ın tıbbi kateterlere yapışmasını ve biyofilm oluşumunu simüle etmek için cilt yüzeyine C. albicans aşılandı.
Bu model, farklı terapötiklerin anti-biyofilm etkisini taramak için laboratuvarımızda başarıyla kullanılmıştır22. Ek olarak, kateter enfeksiyonundan sonra C. albicans'ın gecikme tespiti nedeniyle, implante edilen kateter üzerindeki C . albicans kolonilerinin ve biyofilmlerinin sezgisel gözlemini kolaylaştırmak için farelerde gelişmiş yeşil floresan proteini (EGFP) içeren bir C . albicans suşu oluşturuldu ve aşılandı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 Mactutrius turbidibris</td>
			<td>Shanghai Lujing Technology Co., Ltd</td>
			<td>5106063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% glutaraldehyde fixative solution</td>
			<td>Xingzhi Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>DF015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C refrigerator</td>
			<td>Electrolux (China) Electric Co., Ltd</td>
			<td>ESE6539TA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd</td>
			<td>01-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balances</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>ATX124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaves Sterilizer</td>
			<td>SANYO</td>
			<td>MLS-3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butanol</td>
			<td>Tianjin Chemio Reagent Co., Ltd</td>
			<td>200-889-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>C0885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ci Nikon upright optical microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse Ts2-FL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Macklin&#160;</td>
			<td>D823520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation ring</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>251586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20210103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAS dye kit</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd</td>
			<td>01-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene catheter</td>
			<td>Shining Plastic Mall</td>
			<td>PE100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine&#160;</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>TM-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature incubator</td>
			<td>Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd</td>
			<td>ZQTY-50N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water water generator</td>
			<td>Heal Force</td>
			<td>NW20VF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound machine</td>
			<td>Do-Chrom</td>
			<td>DS10260D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm&#160; Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10023428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;Oxoid</td>
			<td>LP0021B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a catheter-related candida albicans infection model in mouse

Kateter ilişkili enfeksiyon (CRI), kateter implantasyonu sırasında candida albicans'ın neden olduğu yaygın bir nozokomiyal enfeksiyondur. Tipik olarak, kateterin dış yüzeyinde biyofilmler oluşur ve hastalar için ölümcül olan yaygın enfeksiyonlara yol açar. Kliniklerde etkili bir önleme ve tedavi yönetimi yoktur. Bu nedenle, önlenmesi ve tedavisi için yeni stratejilerin klinik öncesi taranması için bir CRI hayvan modeli oluşturmak acildir. Bu çalışmada, yaygın olarak kullanılan bir tıbbi kateter olan polietilen kateter, epilasyondan sonra BALB/c farelerinin arkasına yerleştirildi. Candida albicans Gelişmiş yeşil floresan proteini eksprese eden ATCC MYA-2876 (SC5314) daha sonra kateter boyunca cildin yüzeyine aşılandı. 3 gün sonra floresan mikroskop altında kateter yüzeyinde yoğun floresan gözlendi. Taramalı elektron mikroskobu ile kateterin yüzeyinde olgun ve kalın biyofilmler bulundu. Bu sonuçlar, kateter yüzeyinde candida albicans'ın adezyonunu, kolonizasyonunu ve biyofilm oluşumunu gösterdi. Epidermisin hiperplazisi ve deri örneklerinde inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu, CRI ile ilişkili derinin histopatolojik değişikliklerini gösterdi. Özetlemek gerekirse, bir fare CRI modeli başarıyla kuruldu. Bu modelin, candida albicans ilişkili CRI için terapötik yönetimin araştırılması ve geliştirilmesinde yardımcı olması beklenmektedir.

In recent years, with the development and application of biomedical materials, implant-related infections are emerging as difficult clinical problems1,2. With the wide application of medical catheters in clinics, the number of related infections and deaths is huge every year3,4. The common infection routes of a catheter-related infection (CRI) include: (1) pathogens on the surface of the skin infiltrate into the body and adhere to the outer surface of the catheter5,6,7; (2) improper aseptic operation-derived pathogens invade, adhere and colonize on the catheter; (3) pathogens in the blood circulation adhere and colonize on the catheter; (4) drugs contaminated by pathogenic microorganism.
Candida is the third most common reason for CRI8,9. It is very likely to cause bloodstream infection and other life-threatening invasive candidiasis after biofilms are formed on the surface of the implant. The prognosis is poor, and the mortality rate is high2. It is reported that biofilms are formed on the surface of the catheter within 2 weeks after central venous insertion and in the lumen of the catheter a few weeks later10,11.
Candida albicans (C. albicans) biofilms formed on medical catheters exhibit a double-layer network composed of yeast, stroma, and mycelium12,13. The formation of C. albicans biofilms is not only a key for drug resistance and immune evasion13 but also vital to produce disseminated spores, which leads to further hematogenous infection2,12 and results in more serious and even life-threatening consequences. C. albicans-associated CRI is a major cause of clinical fungal bloodstream infections7,14, and more than 40% of patients with C. albicans infection in the central venous catheter will develop into bacteremia15.
According to the Infectious Disease Society of America, the recommended treatment of Candida CRI includes (1) removal of the infected catheter; (2) subjecting the patients to a 14 days-systemic antifungal therapy8; (3) reimplanting a new catheter4. However, in clinical applications, catheters cannot be fully removed sometimes. Some patients can only be treated with systemic antibiotics and antimicrobial lock therapy, accompanied by strong side effects16,17.
Existing animal models of C. albicans, such as the oropharyngeal candidiasis model, vaginal candidiasis model, and invasive systemic infection model caused by candidiasis18,19 cannot correlate well with the clinical CRI. Therefore, in this study, a C. albicans-associated CRI model in mice was established. Clinical commonly used polyethylene catheters were used as subcutaneous implants20,21, and C. albicans were inoculated on the skin surface to simulate the adhesion of C. albicans to the medical catheters and the formation of biofilms.
This model has been successfully used in our laboratory to screen the anti-biofilm effect of different therapeutics22. In addition, due to the lag detection of C. albicans after catheter infection, a C. albicans strain containing enhanced green fluorescent protein (EGFP) was constructed and inoculated in mice to facilitate the intuitive observation of the colonies and biofilms of C. albicans on the implanted catheter.

Yazar Spotlight: Floresan Protein Etiketleme Kullanarak Kateter Enfeksiyonlarında Candida albicans Tespitinin Geliştirilmesi 

Farede Kateterle İlişkili Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Our research aims to establish a mouse model of Candida albicans associated catheter-related infection, in which biofilm forms on the catheter. This model is helpful for correlating with the clinical CRI and the interaction between Candida albicans and host. The existing animal models of Candida albicans, such as the oropharyngeal candidiasis model, vaginal candidiasis model, and invasive systemic infection model caused by candidiasis cannot correlate well with the clinical CRI.To improve Candida albicans detection in catheter infections, our protocol employed a stain with enhanced green fluorescein protein. This allowed for clear visualization of Candida albicans colony and biofilms on catheters in mice, and in timely detection.

Kateterler üzerindeki C. albicans ve biyofilmler SEM tarafından izlenebildi. Şekil 322'de görüldüğü gibi, kateter grubundaki polietilen kateterlerin yüzeyi pürüzsüzdü ve yapışmış patojen mikroorganizma gözlenmedi. Bununla birlikte, model grubundaki polietilen kateterlerin yüzeyinde olgun ve yoğun C. albicans biyofilmleri görüldü, bu da C. albicans'ın deney koşulları altında farelerde kateter yüzeyinde başarılı ...

Watch this Scientific Journal Video about Enhancing Candida albicans Detection in Catheter Infections Using Fluorescent Protein Tagging at JoVE.com

Kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu ve C.albicans ile konakçı arasındaki etkileşimin klinik CRI ile iyi korelasyon gösterdiği C.albicans ile ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun (CRI) bir fare modelini oluşturduk. Bu model, C.albicans biyofilmle ilişkili CRI için tarama tedavilerine yardımcı olarak klinik dönüşüm için bir temel oluşturur.

Catheter-related infection (CRI) is a common nosocomial infection caused by candida albicans during catheter implantation. Typically, biofilms are formed ...

Araştırmamız, kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu Candida albicans ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun bir fare modelini oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu model, klinik CRI ve Candida albicans ile konakçı arasındaki etkileşim ile korelasyon için yararlıdır. Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi Candida albicans'ın mevcut hayvan modelleri klinik CRI ile iyi bir korelasyon gösterememektedir.Kateter enfeksiyonlarında Candida albicans tespitini iyileştirmek için, protokolümüzde gelişmiş yeşil floresein proteini içeren bir leke kullanıldı. Bu, Candida albicans kolonisinin ve biyofilmlerin farelerde kateterler üzerinde net bir şekilde görüntülenmesine ve zamanında tespit edilmesine izin verdi.

a-catheter-related-candida-albicans-infection-model-in-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Catheter-Related Candida albicans Infection Model in Mouse

953 Görüntüleme.  Xi’an Jiaotong University. Araştırmamız, kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu Candida albicans ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun bir fare modelini oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu model, klinik CRI ve Candida albicans ile konakçı arasındaki etkileşim ile korelasyon için yararlıdır. Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi Candida albicans'ın mevcut hayvan modelleri klinik CRI ile iyi bir korelasyon gös...