Shaanxi Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (hibe numarası 2021SF-118) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (hibe numaraları 81973409, 82204631) gelen mali destek için minnettarız.

Deney hayvanları, erkek BALB/c fareleri (12-16 g), Xi'an Jiaotong Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi, Laboratuvar Hayvanları Merkezi'nden satın alındı. Tüm prosedürler, SCXK (Shaanxi) 2021-103 lisans numarası ile Xi'an Jiaotong Üniversitesi Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı.
1. Tampon ve ekipman hazırlığı
<ol><li>Transfect C. albicans yüksek ekspresyonlu plazmid pCaExp ile suşlar.<ol><li>ATCC'den C. albicans (SC5314) satın alın. EGFP geninin tam açık okuma çerçevesini içeren yüksek ekspresyonlu bir plazmid pCaExp ile C. albicans'ı transfekte ederek EGFP yüksek ekspresyonlu floresan suşu22'yi elde edin (plazmit haritası Şekil 1'de gösterilmiştir) ve bunu sonraki deneyler için kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Kültür, transfekte edilmiş C. albicans suşları .<ol><li>Maya ekstraktı pepton dekstroz ortamı (YPD) plakasından ve 5 mL YPD sıvı ortamında (YPD + 50 μg/mL karbenisilin) gece boyunca (30 °C ve 220 rpm) kültürden C. albicans floresan suşunun monoklonal kolonilerini seçin.</li>
		<li>RT'de 5 dakika boyunca 400 x g'da santrifüjlemeden sonra C. albicans'ı normal salin içinde yeniden süspanse edin.</li>
		<li>Bulanıklığı 0,5 McFarland standardıyla karşılaştırarak C. albicans süspansiyonunun konsantrasyonunu 1 x 108 hücre/mL'ye ayarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi aletleri hazırlayın.<ol><li>Tüm cerrahi aletlerin (makas, forseps, hemostatik forseps, iğne tutucular, dikiş iğneleri) 121°C'de 30 dakika otoklavlandığından emin olun. Steril polietilen kateterler (iç çap: 0.28 mm; dış çap: 0.63 mm) kullanılır. NOT: Bu çalışmada kullanılan kateterler etilen oksit gazı ile sterilize edildi ve ambalaj 30 dakikadan fazla UV'ye maruz bırakılan ultra temiz bir masada açıldı. Farelerde implantasyondan önce, kontaminasyonu önlemek için kateterler %75 etanole daldırıldı.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Bir fare CRI modelinin oluşturulması
NOT: Cerrahi prosedür Şekil 2'de gösterilmiştir.
<ol><li>30 BALB/c fareyi (12-16 g, erkek) suya ve yiyeceğe serbest erişim ve 12 saat-12 saat değişen aydınlık ve karanlık döngüsü ile spesifik patojensiz (SPF) koşullarda iklimlendirin.</li>
	<li>30 BALB/c fareyi rastgele üç gruba ayırın (n = 10 fare/grup): (A) normal kontrol grubu; (B) kateter grubu ( C. albicans olmadan implante edilen kateterler); (C) Model grubu ( C. albicans implante edilmiş kateterler).</li>
	<li>Fareleri% 1-4 izofluran ile uyuşturun ve fareleri yüzüstü pozisyonda bir ameliyat masasına yerleştirin. Doğrultma refleksinin kaybı ve ayak parmağı uyarısına yanıt alınamaması anestezinin başarılı olduğunu doğrular. Saçları çıkarın ve cerrahi bölgeyi üç alternatif iyodofor veya klorheksidin ve alkol peelingi ile sterilize edin.</li>
	<li>Fareleri herhangi bir tedavi görmeden normal kontrol grubunda bırakın ve yiyecek ve suya serbest erişim sağlayın.</li>
	<li>Kateter ve model gruplarındaki fareler için anesteziyi% 3 izofluranda tutun. Ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmemesi nedeniyle yeterli anestezik derinliği onaylayın ve izofluran konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın.</li>
	<li>Kateter grubundaki fareler için, bir delik açmak için geri epilasyon alanına intradermal olarak 1 mL'lik steril bir şırınga iğnesi sokun. Şırınga iğnesini çıkardıktan sonra deliğe bir kateter (yaklaşık 1 cm uzunluğunda) yerleştirin.</li>
	<li>Model grubundaki fareler için, ciltte kommensal C. albicans'ı simüle etmek için sırt epilasyon alanına 20 μL C. albicans süspansiyonu pipetleyin.</li>
	<li>Solüsyon cilt tarafından emildikten sonra, adım 2.5'te tarif edilenle aynı prosedürlerle sırt epilasyonlu bölgeye bir kateter yerleştirin.</li>
	<li>Dış ortamda C. albicans'ı simüle etmek için kateter boyunca dokuya 20 μL C. albicans süspansiyonu daha pipetleyin.</li>
	<li>Kateterleri bant ve gazlı bezle sabitleyin ve fareleri beslenmek için kafeslere geri koyun. Tedavinin sonunda, farelere art arda üç gün boyunca analjezi olarak meloksikam (4 mg / kg) enjekte edin. NOT: Ameliyattan sonra fareler dikkatlice su ve yiyecekle beslendi. Fareler günde iki kez izlendi. Fareler, beslenme güçlüğü, önemli kilo kaybı (% 10-20) ve hipotermi yaşarlarsa IACUC onaylı bir yöntemle ötenazi yapıldı.</li>
</ol>3. CRI modelinin değerlendirilmesi
<ol><li>3 gün sonra, fareleri% 3 izofluran ile uyuşturun ve servikal çıkık ile kurban edin. Farelerin arkasından kateterleri ve cilt dokusu örneklerini toplayın.</li>
	<li>Elektron mikroskobu ile kateter üzerindeki C. albicans ve biyofilmleri gözlemleyin.<ol><li>Kateterleri 48 saat boyunca 4 ° C'de% 2,5 glutaraldehit çözeltisine daldırın. Kateterleri steril PBS ile üç kez durulayın.</li>
		<li>Kateterleri 3 saat boyunca% 1 osmik asit ile sabitleyin ve üç kez steril PBS ile durulayın.</li>
		<li>Kateterler üzerindeki hücreleri, artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dakika/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Kateterleri üç kez tert-bütil alkole batırın (her seferinde 30 dakika).</li>
		<li>Kateterleri sıvı nitrojen içinde hızlı bir şekilde dondurun ve numuneyi üreticinin talimatlarına göre bir dondurarak kurutucuda dondurarak kurutun.</li>
		<li>Kateter örneklerini bir iyon ışını biriktirme ile 10 nm altınla püskürtün.</li>
		<li>Taramalı elektron mikroskobu altında (yüksek vakum, 1.5 kV koşullarında) her grubun kateter yüzeyinde C. albicans ve biyofilminin varlığını gözlemleyin ve her gruptaki görüntüleri kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Floresan mikroskobu ile kateter üzerinde C. albicans'ı gözlemleyin.<ol><li>Kateterleri 48 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 4 paraformaldehit çözeltisine daldırın.</li>
		<li>484 nm uyarılma altında bir floresan mikroskobu ile her grubun kateter yüzeyinde C. albicans ve biyofilminin varlığını gözlemleyin ve her gruptaki görüntüleri kaydedin. NOT: Büyütme 400x'tir. Candida albicans'ın floresansı 490 nm'de uyarma ve 510 nm'de emisyon ile gözlemlenebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Fare derisinde bulunan C. albicans'ı gözlemleyin.<ol><li>Farelerin dorsal deri dokularını 4 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 48 paraformaldehit çözeltisine daldırın.</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dk/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Susuz kalmış sırt derisi dokularını 55-60 °C'de parafine gömün. Kırılgan dokuları önlemek için sıcaklığa dikkat edin. Mümkün olduğu kadar çok kirliliği gidermek için bu adımı üç kez tekrarlayın (her biri 30 dakika).</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını (kalınlık = 5 μm) bir mikrotom ile bölümlere ayırın.</li>
		<li>Slaytları 20 dakika boyunca iki kez ksilene batırarak parafin bölümlerini mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca gradyan etanol (mutlak etanol, %90 etanol, %75 etanol, su) ile elüsyon yoluyla bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Bir kez akan su ve iki kez damıtılmış su ile yıkamadan önce bölümü 15 dakika boyunca periyodik asit çözeltisine batırarak bölümleri periyodik asitle boyayın.</li>
		<li>Bölümleri karanlıkta 30 dakika boyunca bir chevron boyama solüsyonuyla (üreticinin talimatlarına göre) boyayın ve bölümleri 5 dakika akan su altında durulayın.</li>
		<li>Sırasıyla akan su (2-3 dakika), farklılaştırılmış çözelti (5-10 dakika) ve akan su ile yıkamadan önce bölümleri 3-5 dakika hematoksilen çözeltisine daldırın.</li>
		<li>Bölümü nötr sakızla kapatmadan önce bölümleri üç kez etanole (her biri 5 dakika) ve iki kez (her biri 5 dakika) ksilene daldırın.</li>
		<li>Numunenin görüntülerini mikroskopla gözlemleyin ve fare derisindeki C. albicans kalıntılarını analiz edin. NOT: Büyütme, göz merceği için 10x ve objektif lens için 4x veya 10x'tir.</li>
	</ol></li>
	<li>Dorsal cilt dokularındaki histopatolojik değişiklikleri gözlemleyin.<ol><li>Dorsal cilt dokularını 4 saat boyunca 4 ° C'de fiksasyon için% 48 paraformaldehit çözeltisine daldırın. Dorsal cilt dokularını artan konsantrasyonlarda (%50, %70, %80, %90 ve %100, 15 dk/gradyan) gradyan etanol çözeltisinde kurutun.</li>
		<li>Susuz kalmış dorsal cilt dokularını adım 3.4.3'te açıklandığı gibi parafine gömün.</li>
		<li>Dorsal cilt dokularını (kalınlık = 5 mm) bir mikrotom ile bölümlere ayırın.</li>
		<li>Slaytları 20 dakika boyunca iki kez ksilene batırarak parafin bölümlerini mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca gradyan etanol (mutlak etanol, %90 etanol, %75 etanol, su) ile elüsyon yoluyla bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Şamandıra rengini çıkarmak için musluk suyuyla durulamadan önce bölümleri 4 dakika hematoksilen ile boyayın.</li>
		<li>Slaytları akan su ile durulamadan önce numuneyi% 1 hidroklorik asit-etanol çözeltisi ile ayırt edin.</li>
		<li>Numuneyi 5 dakika boyunca %85 ve %95 etanole batırın ve 3 dakika boyunca eozin çözeltisi ile boyayın.</li>
		<li>Numuneyi gradyan etanol (%70, %90, %95 ve %100) ve her biri 2 dakika ksilene batırarak kurutun.</li>
		<li>Numuneyi nötr reçine ile kapatın.</li>
		<li>Numunenin görüntülerini mikroskopla gözlemleyin ve patolojik değişiklikleri analiz edin.</li>
	</ol></li>
</ol>

Candida albicans ile İlişkili Kateter İlişkili Enfeksiyon için Bir Fare Modeli Oluşturma

<ol>
	<li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infections+of+medical+devices.">Candida infections of medical devices.</a> microbiology reviews. 17 (2), 255-267 (2004).</li><li>Giri, S., Kindo, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Candida+species+causing+blood+stream+infection.">A review of Candida species causing blood stream infection.</a> Indian Journal of Medical Microbiology. 30 (3), 270-278 (2012).</li><li>Weinstein, R. A., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Device-associated+infections:+A+macroproblem+that+starts+with+microadherence.">Device-associated infections: A macroproblem that starts with microadherence.</a> Clinical Infectious Diseases. 33 (9), 1567-1572 (2001).</li><li>Mermel, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+intravascular+catheter-related+infections.">Guidelines for the management of intravascular catheter-related infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 32 (9), 1249-1272 (2001).</li><li>Seidler, M., Salvenmoser, S., M&#252;ller, F. -. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+micafungin+against+Candida+biofilms+on+polystyrene+and+central+venous+catheter+sections.">In vitro effects of micafungin against Candida biofilms on polystyrene and central venous catheter sections.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 28 (6), 568-573 (2006).</li><li>Chaves, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+catheter-related+bloodstream+infection:+Clinical+guidelines+of+the+Spanish+Society+of+Infectious+Diseases+and+Clinical+Microbiology+and+(SEIMC)+and+the+Spanish+Society+of+Spanish+Society+of+Intensive+and+Critical+Care+Medicine+and+Coronary+Units+(SEMICYUC).">Diagnosis and treatment of catheter-related bloodstream infection: Clinical guidelines of the Spanish Society of Infectious Diseases and Clinical Microbiology and (SEIMC) and the Spanish Society of Spanish Society of Intensive and Critical Care Medicine and Coronary Units (SEMICYUC).</a> Medicina Intensiva. 42 (1), 5-36 (2018).</li><li>Raad, I. I., Bodey, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+complications+of+indwelling+vascular+catheters.">Infectious complications of indwelling vascular catheters.</a> Clinical Infectious Diseases. 15 (2), 197-208 (1992).</li><li>Paul DiMondi, V., Townsend, M. L., Johnson, M., Durkin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+catheter+lock+therapy+for+the+management+of+a+persistent+Candida+albicans+bloodstream+infection+in+an+adult+receiving+hemodialysis.">Antifungal catheter lock therapy for the management of a persistent Candida albicans bloodstream infection in an adult receiving hemodialysis.</a> Pharmacotherapy. 34 (7), e120-e127 (2014).</li><li>Bouza, E., Guinea, J., Guembe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+antifungals+against+candida+biofilm+in+catheter-related+candidemia.">The role of antifungals against candida biofilm in catheter-related candidemia.</a> Antibiotics (Basel). 4 (1), 1-17 (2014).</li><li>Raad, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+analysis+of+indwelling+vascular+catheters:+a+quantitative+relationship+between+luminal+colonization+and+duration+of+placement.">Ultrastructural analysis of indwelling vascular catheters: a quantitative relationship between luminal colonization and duration of placement.</a> The Journal of Infectious Diseases. 168 (2), 400-407 (1993).</li><li>Yousif, A., Jamal, M. A., Raad, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm-based+central+line-associated+bloodstream+infections.">Biofilm-based central line-associated bloodstream infections.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 830, 157-179 (2015).</li><li>Douglas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+biofilms+and+their+role+in+infection.">Candida biofilms and their role in infection.</a> Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).</li><li>Mack, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilm+formation+in+medical+device-related+infection.">Biofilm formation in medical device-related infection.</a> International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).</li><li>Schinabeck, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection:+liposomal+amphotericin+B+antifungal+lock+therapy.">Rabbit model of Candida albicans biofilm infection: liposomal amphotericin B antifungal lock therapy.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (5), 1727-1732 (2004).</li><li>Anaissie, E. J., Rex, J. H., Uzun, O., Vartivarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+adverse+outcome+in+cancer+patients+with+candidemia.">Predictors of adverse outcome in cancer patients with candidemia.</a> The American Journal of Medicine. 104 (3), 238-245 (1998).</li><li>Fujimoto, K., Takemoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+liposomal+amphotericin+B+against+four+species+of+Candida+biofilms+in+an+experimental+mouse+model+of+intravascular+catheter+infection.">Efficacy of liposomal amphotericin B against four species of Candida biofilms in an experimental mouse model of intravascular catheter infection.</a> Journal of Infection and Chemotherapy. 24 (12), 958-964 (2018).</li><li>Shuford, J. A., Rouse, M. S., Piper, K. E., Steckelberg, J. M., Patel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+caspofungin+and+amphotericin+B+deoxycholate+against+Candida+albicans+biofilms+in+an+experimental+intravascular+catheter+infection+model.">Evaluation of caspofungin and amphotericin B deoxycholate against Candida albicans biofilms in an experimental intravascular catheter infection model.</a> The Journal of Infectious Diseases. 194 (5), 710-713 (2006).</li><li>Koh, A. Y., K&#246;hler, J. R., Coggshall, K. T., Van Rooijen, N., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+damage+and+neutropenia+are+required+for+Candida+albicans+dissemination.">Mucosal damage and neutropenia are required for Candida albicans dissemination.</a> PLoS Pathogens. 4 (2), e35 (2008).</li><li>Tucey, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+homeostasis+is+important+for+immune+cell+viability+during+candida+challenge+and+host+survival+of+systemic+fungal+infection.">Glucose homeostasis is important for immune cell viability during candida challenge and host survival of systemic fungal infection.</a> Cell Metabolism. 27 (5), 988-1006 (2018).</li><li>Lawrence, E. L., Turner, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Materials+for+urinary+catheters:+a+review+of+their+history+and+development+in+the+UK.">Materials for urinary catheters: a review of their history and development in the UK.</a> Medical Engineering &amp; Physics. 27 (6), 443-453 (2005).</li><li>Schumm, K., Lam, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Types+of+urethral+catheters+for+management+of+short-term+voiding+problems+in+hospitalized+adults:+a+short+version+Cochrane+review.">Types of urethral catheters for management of short-term voiding problems in hospitalized adults: a short version Cochrane review.</a> Neurourology and Urodynamics. 27 (8), 738-746 (2008).</li><li>Mo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+a+film+forming+system+containing+myricetin+and+miconazole+nitrate+for+preventing+candida+albicans+catheter-related+infection.">Development and evaluation of a film forming system containing myricetin and miconazole nitrate for preventing candida albicans catheter-related infection.</a> Microbial Drug Resistance. 28 (4), 468-483 (2022).</li><li>Balikci, E., Yilmaz, B., Tahmasebifar, A., Baran, E. T., Kara, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+modification+strategies+for+hemodialysis+catheters+to+prevent+catheter-related+infections:+A+review.">Surface modification strategies for hemodialysis catheters to prevent catheter-related infections: A review.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 109 (3), 314-327 (2021).</li><li>Mar&#237;a, L. T., Alejandro, G. S., Mar&#237;a Jes&#250;s, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+venous+catheter+insertion:+Review+of+recent+evidence.">Central venous catheter insertion: Review of recent evidence.</a> Best Practice &amp; Research. Clinical Anaesthesiology. 35 (1), 135-140 (2021).</li><li>Kojic, E. M., Darouiche, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infections+of+medical+devices.">Candida infections of medical devices.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 255-267 (2004).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+analysis+of+microbial+colonization+patterns+in+central+venous+catheters,+2013-2017.">Retrospective analysis of microbial colonization patterns in central venous catheters, 2013-2017.</a> Journal of Healthcare Engineering. 2019, 8632701 (2019).</li><li>Mo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+effects+of+the+combination+of+myricetin+and+miconazole+nitrate+incorporated+to+thermosensitive+hydrogels+on+C.">In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels on C.</a> albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).</li><li>Cant&#243;n-Bulnes, M. L., Garnacho-Montero, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+approach+to+the+management+of+catheter-related+bloodstream+infection.">Practical approach to the management of catheter-related bloodstream infection.</a> Revista Espanola de Quimioterapia. 32 Suppl 2 (Suppl 2), 38-41 (2019).</li><li>B&#246;hlke, M., Uliano, G., Barcellos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodialysis+catheter-related+infection:+prophylaxis,+diagnosis+and+treatment.">Hemodialysis catheter-related infection: prophylaxis, diagnosis and treatment.</a> The Journal of Vascular Access. 16 (5), 347-355 (2015).</li><li>Fang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+tissue+specimen+pretreatment+methods+on+microbial+culture+results+in+the+diagnosis+of+periprosthetic+joint+infection.">Effects of different tissue specimen pretreatment methods on microbial culture results in the diagnosis of periprosthetic joint infection.</a> Bone &amp; Joint Research. 10 (2), 96-104 (2021).</li><li>Naumenko, Z. S., Silanteva, T. A., Ermakov, A. M., Godovykh, N. V., Klushin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenging+diagnostics+of+biofilm+associated+periprosthetic+infection+in+immunocompromised+patient:+A+clinical+case.">Challenging diagnostics of biofilm associated periprosthetic infection in immunocompromised patient: A clinical case.</a> Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences. 7 (5), 786-790 (2019).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomic+next+generation+sequencing+improves+diagnosis+of+prosthetic+joint+infection+by+detecting+the+presence+of+bacteria+in+periprosthetic+tissues.">Metagenomic next generation sequencing improves diagnosis of prosthetic joint infection by detecting the presence of bacteria in periprosthetic tissues.</a> International Journal of Infectious Diseases. 96, 573-578 (2020).</li><li>Samanipour, A., Dashti-Khavidaki, S., Abbasi, M. R., Abdollahi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+resistance+patterns+of+microorganisms+isolated+from+nephrology+and+kidney+transplant+wards+of+a+referral+academic+hospital.">Antibiotic resistance patterns of microorganisms isolated from nephrology and kidney transplant wards of a referral academic hospital.</a> Journal of Research in Pharmacy Practice. 5 (1), 43-51 (2016).</li><li>Huang, G., Huang, Q., Wei, Y., Wang, Y., Du, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+and+diverse+regulation+of+the+Ras/cAMP/protein+kinase+A+pathway+in+Candida+albicans.">Multiple roles and diverse regulation of the Ras/cAMP/protein kinase A pathway in Candida albicans.</a> Molecular Microbiology. 111 (1), 6-16 (2019).</li><li>Garlito-D&#237;az, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+antifungal-loaded+sol-gel+can+prevent+candida+albicans+prosthetic+joint+infection.">A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection.</a> Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).</li></ol>

Yazarlar, bu yazıda bildirilen çalışmayı etkilemiş gibi görünebilecek bilinen hiçbir rakip mali çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını beyan ederler.

CRI, klinik pratikte en sık görülen nozokomiyal enfeksiyonlardan biridir23. Epidermis, yağ bezleri ve saç folikülleri gibi cilt uzantılarındaki patojenlerin tümü CRI 23,24'ün olası nedenleridir. Candida, CRI'ye neden olan üçüncü en büyük patojendir ve Candida albicans en yaygın biyofilm enfeksiyonu tipidir25,26. Bu nedenle, ilgili CRI'nin tedavi...

Son yıllarda biyomedikal materyallerin gelişmesi ve uygulanması ile implant ilişkili enfeksiyonlar zor klinik problemler olarak karşımıza çıkmaktadır 1,2. Kliniklerde tıbbi kateterlerin yaygın olarak uygulanmasıyla, ilgili enfeksiyon ve ölümlerin sayısı her yılçok fazladır 3,4. Kateterle ilişkili bir enfeksiyonun (CRI) yaygın enfeksiyon yolları şunları içerir: (1) cilt yüzeyindeki patojenler vücuda sızar ve kateterin dış yüzeyine yapışır 5,6,7; (2) uygun olmayan aseptik operasyondan türetilen patojenler kateteri istila eder, yapışır ve kolonize olur; (3) kan dolaşımındaki patojenler katetere yapışır ve kolonize olur; (4) patojenik mikroorganizma ile kontamine olmuş ilaçlar.
Candida, CRI 8,9'un üçüncü en yaygın nedenidir. İmplant yüzeyinde biyofilmler oluştuktan sonra kan dolaşımı enfeksiyonuna ve diğer hayatı tehdit eden invaziv kandidiyazise neden olma olasılığı çok yüksektir. Prognoz kötüdür ve mortalite oranı yüksektir2. Santral venöz yerleştirildikten sonra 2 hafta içinde kateter yüzeyinde, birkaç hafta sonra ise kateter lümeninde biyofilm oluştuğu bildirilmektedir10,11.
Tıbbi kateterler üzerinde oluşan Candida albicans (C. albicans) biyofilmleri maya, stroma ve miselyumdan oluşan çift katmanlı bir ağ sergiler12,13. C. albicans biyofilmlerinin oluşumu sadece ilaç direnci ve bağışıklıktan kaçınma13 için bir anahtar değil, aynı zamanda daha fazla hematojen enfeksiyona 2,12 yol açan ve daha ciddi ve hatta yaşamı tehdit eden sonuçlara yol açan yayılmış sporların üretilmesi için hayati önem taşır. C. albicans ile ilişkili CRI, klinik fungal kan dolaşımı enfeksiyonlarının önemli bir nedenidir 7,14 ve santral venöz kateterde C. albicans enfeksiyonu olan hastaların %40'ından fazlası bakteriyemiyedönüşecektir 15.
Amerika Enfeksiyon Hastalıkları Derneği'ne göre, Candida CRI'nin önerilen tedavisi şunları içerir: (1) enfekte kateterin çıkarılması; (2) hastaları 14 günlük sistemik antifungal tedaviye tabi tutmak8; (3) yeni bir kateterin yeniden yerleştirilmesi4. Ancak klinik uygulamalarda kateterler bazen tam olarak çıkarılamamaktadır. Bazı hastalar sadece sistemik antibiyotikler ve antimikrobiyal kilit tedavisi ile tedavi edilebilir ve güçlü yan etkiler eşlik eder16,17.
Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi C. albicans 18,19 klinik CRI ile iyi korelasyon gösterememektedir. Bu nedenle, bu çalışmada, farelerde C. albicans ile ilişkili bir CRI modeli oluşturulmuştur. Klinik olarak yaygın olarak kullanılan polietilen kateterler subkutan implantlarolarak kullanıldı 20,21 ve C. albicans'ın tıbbi kateterlere yapışmasını ve biyofilm oluşumunu simüle etmek için cilt yüzeyine C. albicans aşılandı.
Bu model, farklı terapötiklerin anti-biyofilm etkisini taramak için laboratuvarımızda başarıyla kullanılmıştır22. Ek olarak, kateter enfeksiyonundan sonra C. albicans'ın gecikme tespiti nedeniyle, implante edilen kateter üzerindeki C . albicans kolonilerinin ve biyofilmlerinin sezgisel gözlemini kolaylaştırmak için farelerde gelişmiş yeşil floresan proteini (EGFP) içeren bir C . albicans suşu oluşturuldu ve aşılandı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 Mactutrius turbidibris</td>
			<td>Shanghai Lujing Technology Co., Ltd</td>
			<td>5106063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% glutaraldehyde fixative solution</td>
			<td>Xingzhi Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>DF015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 &#176;C refrigerator</td>
			<td>Electrolux (China) Electric Co., Ltd</td>
			<td>ESE6539TA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd</td>
			<td>01-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balances</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>ATX124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclaves Sterilizer</td>
			<td>SANYO</td>
			<td>MLS-3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butanol</td>
			<td>Tianjin Chemio Reagent Co., Ltd</td>
			<td>200-889-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>C0885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ci Nikon upright optical microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse Ts2-FL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Macklin&#160;</td>
			<td>D823520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inoculation ring</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>251586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20210103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>P0099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAS dye kit</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G1285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd</td>
			<td>01-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene catheter</td>
			<td>Shining Plastic Mall</td>
			<td>PE100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine&#160;</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>TM-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature incubator</td>
			<td>Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd</td>
			<td>ZQTY-50N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water water generator</td>
			<td>Heal Force</td>
			<td>NW20VF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound machine</td>
			<td>Do-Chrom</td>
			<td>DS10260D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm&#160; Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10023428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;Oxoid</td>
			<td>LP0021B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a catheter-related candida albicans infection model in mouse

Kateter ilişkili enfeksiyon (CRI), kateter implantasyonu sırasında candida albicans'ın neden olduğu yaygın bir nozokomiyal enfeksiyondur. Tipik olarak, kateterin dış yüzeyinde biyofilmler oluşur ve hastalar için ölümcül olan yaygın enfeksiyonlara yol açar. Kliniklerde etkili bir önleme ve tedavi yönetimi yoktur. Bu nedenle, önlenmesi ve tedavisi için yeni stratejilerin klinik öncesi taranması için bir CRI hayvan modeli oluşturmak acildir. Bu çalışmada, yaygın olarak kullanılan bir tıbbi kateter olan polietilen kateter, epilasyondan sonra BALB/c farelerinin arkasına yerleştirildi. Candida albicans Gelişmiş yeşil floresan proteini eksprese eden ATCC MYA-2876 (SC5314) daha sonra kateter boyunca cildin yüzeyine aşılandı. 3 gün sonra floresan mikroskop altında kateter yüzeyinde yoğun floresan gözlendi. Taramalı elektron mikroskobu ile kateterin yüzeyinde olgun ve kalın biyofilmler bulundu. Bu sonuçlar, kateter yüzeyinde candida albicans'ın adezyonunu, kolonizasyonunu ve biyofilm oluşumunu gösterdi. Epidermisin hiperplazisi ve deri örneklerinde inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu, CRI ile ilişkili derinin histopatolojik değişikliklerini gösterdi. Özetlemek gerekirse, bir fare CRI modeli başarıyla kuruldu. Bu modelin, candida albicans ilişkili CRI için terapötik yönetimin araştırılması ve geliştirilmesinde yardımcı olması beklenmektedir.

Kateterler üzerindeki C. albicans ve biyofilmler SEM tarafından izlenebildi. Şekil 322'de görüldüğü gibi, kateter grubundaki polietilen kateterlerin yüzeyi pürüzsüzdü ve yapışmış patojen mikroorganizma gözlenmedi. Bununla birlikte, model grubundaki polietilen kateterlerin yüzeyinde olgun ve yoğun C. albicans biyofilmleri görüldü, bu da C. albicans'ın deney koşulları altında farelerde kateter yüzeyinde başarılı ...

Watch this Scientific Journal Video about Enhancing Candida albicans Detection in Catheter Infections Using Fluorescent Protein Tagging at JoVE.com

Yazar Spotlight: Floresan Protein Etiketleme Kullanarak Kateter Enfeksiyonlarında Candida albicans Tespitinin Geliştirilmesi 

Kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu ve C.albicans ile konakçı arasındaki etkileşimin klinik CRI ile iyi korelasyon gösterdiği C.albicans ile ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun (CRI) bir fare modelini oluşturduk. Bu model, C.albicans biyofilmle ilişkili CRI için tarama tedavilerine yardımcı olarak klinik dönüşüm için bir temel oluşturur.

Farede Kateterle İlişkili Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Catheter-related infection (CRI) is a common nosocomial infection caused by candida albicans during catheter implantation. Typically, biofilms are formed ...

Araştırmamız, kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu Candida albicans ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun bir fare modelini oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu model, klinik CRI ve Candida albicans ile konakçı arasındaki etkileşim ile korelasyon için yararlıdır. Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi Candida albicans'ın mevcut hayvan modelleri klinik CRI ile iyi bir korelasyon gösterememektedir.Kateter enfeksiyonlarında Candida albicans tespitini iyileştirmek için, protokolümüzde gelişmiş yeşil floresein proteini içeren bir leke kullanıldı. Bu, Candida albicans kolonisinin ve biyofilmlerin farelerde kateterler üzerinde net bir şekilde görüntülenmesine ve zamanında tespit edilmesine izin verdi.

a-catheter-related-candida-albicans-infection-model-in-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Catheter-Related Candida albicans Infection Model in Mouse

991 Görüntüleme.  Xi’an Jiaotong University. Araştırmamız, kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu Candida albicans ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun bir fare modelini oluşturmayı amaçlamaktadır. Bu model, klinik CRI ve Candida albicans ile konakçı arasındaki etkileşim ile korelasyon için yararlıdır. Orofaringeal kandidiyazis modeli, vajinal kandidiyazis modeli ve kandidiyazisin neden olduğu invaziv sistemik enfeksiyon modeli gibi Candida albicans'ın mevcut hayvan modelleri klinik CRI ile iyi bir korelasyon gös...

Video: Yazar Spotlight: Floresan Protein Etiketleme Kullanarak Kateter Enfeksiyonlarında Candida albicans Tespitinin Geliştirilmesi 

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third most common infection in US hospitals. Different manifestations of candidiasis are associated with biofilm formation, both on host tissues and/or medical devices (i.e. catheters). Biofilm formation carries negative clinical implications, as cells within the biofilms are protected from host immune responses and from the action of antifungals. We have developed a simple, fast and robust in vitro model for the formation of C. albicans biofilms using 96 well microtiter-plates, which can also be used for biofilm antifungal susceptibility testing. The readout of this assay is colorimetric, based on the reduction of XTT (a tetrazolium salt) by metabolically active fungal biofilm cells. A typical experiment takes approximately 24 h for biofilm formation, with an additional 24 h for antifungal susceptibility testing. Because of its simplicity and the use of commonly available laboratory materials and equipment, this technique democratizes biofilm research and represents an important step towards the standardization of antifungal susceptibility testing of fungal biofilms.

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

We describe a simple, rapid and robust method for the formation of Candida albicans biofilms using 96 well microtiter plates and its utility in antifungal susceptibility testing of cells within biofilms.

İzleme Oluşumu ve Antifungal Duyarlılık Testi için 96 Şey microtiter Levha tabanlı Yöntemi Candida albicans Biyofilmler

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt;: Arası Ana aracılı Etkileşim Modeli<em&gt; Candida albicans</em&gt; Ve<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. albicans is its ability to form biofilms, structured communities of cells attached to biotic and abiotic surfaces. C. albicans biofilms can form on host tissues, such as mucosal layers, and on medical devices, such as catheters, pacemakers, dentures, and joint prostheses. Biofilms pose significant clinical challenges because they are highly resistant to physical and chemical perturbations, and can act as reservoirs to seed disseminated infections. Various in vitro assays have been utilized to study C. albicans biofilm formation, such as microtiter plate assays, dry weight measurements, cell viability assays, and confocal scanning laser microscopy. All of these assays are single end-point assays, where biofilm formation is assessed at a specific time point. Here, we describe a protocol to study biofilm formation in real-time using an automated microfluidic device under laminar flow conditions. This method allows for the observation of biofilm formation as the biofilm develops over time, using customizable conditions that mimic those of the host, such as those encountered in vascular catheters. This protocol can be used to assess the biofilm defects of genetic mutants as well as the inhibitory effects of antimicrobial agents on biofilm development in real-time.

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

This protocol describes the use of a customizable automated microfluidic device to visualize biofilm formation in Candida albicans under host physiological conditions.

Görselleştirme bir otomatik mikrosıvısal aygıtı kullanarak Candida albicans biyofilm oluşumu

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

Derin Dermal enjeksiyon olarak bir Model Candida albicans deri enfeksiyonu histolojik analizler için

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic growth of C. albicans SN425, the inoculums grew on Yeast Nitrogen Base media. For biofilm formation, RPMI 1640 media, which have high concentrations of amino acids, were applied to help biofilm growth. Biofilms of 48 h were treated twice a day for a period of 1 min with a non-coherent light device (red light; wavelength = 635 nm; energy density = 87.6 J&#183;cm-2). As a positive control (PC), 0.12% chlorhexidine (CHX) was applied, and as a negative control (NC), 0.89% NaCl was applied to the biofilms. Colony forming units (CFU), dry-weight, soluble and insoluble exopolysaccharides were quantified after treatments. Briefly, the protocol presented here is simple, reproducible and provides answers regarding viability, dry-weight and extracellular polysaccharide amounts after red light treatment.

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcome of red light application on the growth of Candida albicans biofilm. A non-coherent red light device with the wavelength of 635 nm and energy density of 87.6 J&#183;cm-2 was applied throughout the growth of Candida albicans biofilms for 48 h.

Kırmızı ışık düzenlemek Candida albicans biyofilm büyüme ile günlük fototerapi

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most colonized hosts, the commensal reservoir does serve as a repository for infectious disease, and the presence of high fungal titers in the gut is associated with inflammatory bowel disease. Here, we describe a method to visualize C. albicans cell morphology and localization in a mouse model of stable gastrointestinal colonization. Colonization is established using a single dose of C. albicans in animals that have been treated with oral antibiotics. Segments of gut tissue are fixed in a manner that preserves the architecture of luminal contents (microorganisms and mucus) as well as the host mucosa. Finally, fluorescent in situ hybridization is performed using probes against fungal rRNA to stain for C. albicans and hyphae. A key advantage of this protocol is that it allows for simultaneous observation of C. albicans cell morphology and its spatial association with host structures during gastrointestinal colonization.

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

The purpose of this protocol is to visualize Candida albicans cell shape and localization in the mammalian gastrointestinal tract.

Situ Hibridizasyonfloresan Kullanarak Murine Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Görselleştirilmesi

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch from yeast-form growth to hyphal growth. Cells initiating this process become adherent to surfaces as well as to each other, with the resulting development of a biofilm colony. This commonly occurs not only on mucosal tissue surfaces in yeast infections, but also on medical implants such as catheters. It is well known that biofilm cells are resistant to antifungal drugs, and that cells that shed from the biofilm can lead to dangerous systemic infections. Biofilms range from heavily translucent to opaque due to refractive heterogeneity. Therefore, fungal biofilms are difficult to study by optical microscopy. To visualize internal structural, cellular, and subcellular features, we clarify fixed intact biofilms by stepwise solvent exchange to a point of optimal refractive index matching. For C. albicans biofilms, sufficient clarification is attained with methyl salicylate (n = 1.537) to enable confocal microscopy from apex to base in 600 &#181;m biofilms with little attenuation. In this visualization protocol we outline phase contrast refractometry, the growth of laboratory biofilms, fixation, staining, solvent exchange, the setup for confocal fluorescence microscopy, and representative results.

Clarifying and Imaging Candida albicans Biofilms

To view and quantify the internal features of Candida albicans biofilms, we prepare fixed intact specimens that are clarified by refractive index matching. Then, optical sectioning microscopy can be used to obtain three-dimensional image data though the full thickness of the biofilm.

Aydınlatma ve Görüntüleme Candida albicans Biyofilmler

The microbial fungus Candida albicans can undergo a change from commensal colonization to virulence that is strongly correlated with its ability to switch ...

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important role in the dissemination and pathogenesis of this opportunistic fungal pathogen. However, methods to visualize fungal hyphae in the GI tract in vivo are challenging which limits the understanding of environmental signals in controlling this morphogenesis process. The protocol described here demonstrates a novel ex vivo method for visualization of hyphal morphogenesis in gut homogenate extracts. Using an ex vivo assay, this study demonstrates that cecal contents from antibiotic treated mice, but not from untreated control mice, promote C. albicans hyphal morphogenesis in the gut content. Further, adding back specific groups of gut metabolites to the cecal contents from antibiotic-treated mice differentially regulates hyphal morphogenesis ex vivo. Taken together, this protocol represents a novel method to identify and investigate the environmental signals that control C. albicans hyphal morphogenesis in the GI tract.

An Ex vivo Assay to Study Candida albicans Hyphal Morphogenesis in the Gastrointestinal Tract

The ex vivo assay described in this study using gut homogenate extracts and immunofluorescence staining represents a novel method to examine the hyphal morphogenesis of Candida albicans in the GI tract. This method can be utilized to investigate the environmental signals regulating morphogenetic transition in the gut.

Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma

Candida albicans hyphal morphogenesis in the gastrointestinal (GI) tract is tightly controlled by various environmental signals, and plays an important ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, mouth, vagina, and skin. Despite the availability of antifungal medication, the mortality rate of invasive candidiasis remains ~50%. Unfortunately, the incidence of drug-resistant C. albicans is increasing globally. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer an alternative or adjuvant treatment to inhibit C. albicans biofilm formation and overcome drug resistance. Rose bengal (RB)-mediated aPDT has shown effective cell killing of bacteria and C. albicans. In this study, the efficacy of RB-aPDT on multidrug-resistant C. albicans is described. A homemade green light-emitting diode (LED) light source is designed to align with the center of a well of a 96-well plate. The yeasts were incubated in the wells with different concentrations of RB and illuminated with varying fluences of green light. The killing effects were analyzed by the plate dilution method. With an optimal combination of light and RB, 3-log growth inhibition was achieved. It was concluded that RB-aPDT might potentially inhibit drug-resistant C. albicans.

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

The growing incidence of drug-resistant Candida albicans is a serious health issue worldwide. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer a strategy to fight against drug-resistant fungal infections. The present protocol describes Rose bengal-mediated aPDT efficacy on a multidrug-resistant C. albicans strain in vitro.

Candida albicans'ı İnhibe Etmek için Gül Bengal Aracılı Fotodinamik Terapi

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic changes are regulated by a complex signaling network controlled in response to environmental stimuli. These regulatory components have been highly studied, but almost all studies use a variety of in vitro stimuli to trigger filamentation. To determine how morphogenesis is regulated during the pathogenesis process, we developed an in vivo microscopy system to obtain high spatial resolution images of organisms undergoing hyphal formation within the mammalian host. The protocol presented here describes the use of this system to screen small collections of C. albicans mutant strains, allowing us to identify key regulators of morphogenesis as it occurs at the site of infection. Representative results are presented, demonstrating that some regulators of morphogenesis, such as the transcriptional regulator Efg1, have consistent phenotypes in vitro and in vivo, whereas other regulators, such as adenyl cyclase (Cyr1), have significantly different phenotypes in vivo compared to in vitro.

Use of In Vivo Imaging to Screen for Morphogenesis Phenotypes in Candida albicans Mutant Strains During Active Infection in a Mammalian Host

This manuscript describes a method for screening moderately sized Candida albicans mutant libraries for morphogenesis phenotypes during active infection in a mammalian host using non-invasive confocal microscopy.

Bir Memeli Konağında Aktif Enfeksiyon Sırasında Candida albicans Mutant Suşlarında Morfogenez Fenotiplerini Taramak için In Vivo Görüntülemenin Kullanımı

Candida albicans is an important human pathogen. Its ability to switch between morphologic forms is central to&#160;its pathogenesis; these morphologic ...