Saccharomyces cerevisiae'de Tek Kopya Gen Lokus Kromatin Saflaştırması

Ökaryotik bir çekirdek, aynı anda meydana gelen birçok biyolojik süreçle çok kalabalıktır. Araştırmamızın kapsamı, tüm bu süreçlerin, aksi takdirde genomik kararsızlığa ve insan hastalıklarına yol açacak büyük kazalar olmadan genomlarımız üzerinde nasıl koordine edildiğini anlamaktır. Bu protokol, genomun belirli bir lokusunu doğal durumunda saflaştırmamıza izin vererek, protein DNA etkileşimlerinin ölçümleri gibi izole edilmiş materyalin hem bileşimsel hem de fonksiyonel karakterizasyonuna izin verir.

Bu protokol, lokusa özgü kromatin izolasyonunun mevcut birçok sınırlamasının üstesinden gelen, hedeflenen bir lokusun muazzam düzeyde zenginleştirilmesini sağlar. Malzeme çapraz bağlanmamıştır. Bu aynı zamanda in vitro transkripsiyon veya in vitro replikasyon gibi birçok aşağı akış fonksiyonel analizine de izin verir.

Bu protokol, maya kromozomlarından farklı replikasyon kökenlerini çıkarmamızı ve saflaştırmamızı sağlayarak, proteomik bir analiz yapmamıza ve yeni orijin etkileşimli kromatin faktörlerini tanımlamamıza ve dolayısıyla DNA replikasyonunun araştırma alanını ilerletmemize olanak sağladı. Bu protokol, kromatin durumlarını, histon modifikasyonlarını incelemek ve endojen kromozomlardan alınan doğal nükleozomal şablonlar üzerinde yapısal analiz yapmak için saflaştırılmış orijin materyalini kullanarak in vitro replikasyon çalışmalarını mümkün kılar ve kromatin araştırmalarını ilerletir.