出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)におけるシングルコピー遺伝子座クロマチン精製

真核生物の核は、多くの生物学的プロセスが同時に発生し、非常に混雑しています。私たちの研究の範囲は、ゲノムの不安定性やヒトの病気につながるような大きな事故を起こさずに、これらすべてのプロセスがゲノム上でどのように調整されているかを理解することです。このプロトコルは私達が蛋白質DNAの相互作用の測定のような隔離された材料の構成および機能特徴付けを、可能にする原産状態のゲノムの特定の位置を浄化することを可能にする。

このプロトコルは、遺伝子座特異的クロマチン単離の多くの現在の制限を克服する、標的とする遺伝子座の濃縮の膨大なレベルを可能にします。材料は架橋されていません。これにより、in vitro転写やin vitro複製など、多くのダウンストリーム機能解析も可能になります。

従ってこのプロトコルは私達がプロテオミクスの分析を行い、chromatinの要因を相互に作用させる新しい起源を識別することを可能にし、従ってDNAの複製の研究分野を進めるイースト染色体からの明瞭な複製の起源を切除し、浄化することを可能にした。このプロトコルはchromatinの状態、ヒストンの修正を検査し、chromatinの研究を進める内生染色体からの自然なヌクレオソームテンプレートの構造分析を行うために浄化された起源材料を使用して生体外の複製の調査を可能にする。