Einzelkopien-Genlocus-Chromatin-Aufreinigung in Saccharomyces cerevisiae

Ein eukaryotischer Kern ist sehr überfüllt und viele biologische Prozesse laufen gleichzeitig ab. Ziel unserer Forschung ist es, zu verstehen, wie all diese Prozesse auf unseren Genomen koordiniert werden, ohne dass es zu größeren Unfällen kommt, die sonst zu genomischer Instabilität und menschlichen Krankheiten führen würden. Dieses Protokoll ermöglicht es uns, einen bestimmten Locus des Genoms in seinem nativen Zustand zu reinigen, was sowohl die Zusammensetzung als auch die funktionelle Charakterisierung des isolierten Materials ermöglicht, wie z. B. die Messung von Protein-DNA-Interaktionen.

Dieses Protokoll ermöglicht ein enormes Maß an Anreicherung eines Ziellocus, wodurch viele derzeitige Einschränkungen der locusspezifischen Chromatinisolierung überwunden werden. Das Material wurde nicht vernetzt. Dies ermöglicht auch viele nachgelagerte Funktionsanalysen, wie z. B. die In-vitro-Transkription oder die In-vitro-Replikation.

Dieses Protokoll ermöglichte es uns, unterschiedliche Replikationsursprünge aus Hefechromosomen herauszuschneiden und zu reinigen, was es uns ermöglichte, eine proteomische Analyse durchzuführen und neuartige interagierende Chromatinfaktoren zu identifizieren und somit das Forschungsfeld der DNA-Replikation voranzutreiben. Dieses Protokoll ermöglicht In-vitro-Replikationsstudien mit dem gereinigten Ursprungsmaterial, um Chromatinzustände und Histonmodifikationen zu untersuchen und Strukturanalysen an den nativen nukleosomalen Templates von endogenen Chromosomen durchzuführen, wodurch die Chromatinforschung vorangebracht wird.