Bu araştırma, Xiamen Şehri Bilim ve Teknoloji Bürosu (3502Z20227197) ve Fujian Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bürosu (No. 2019J01070, No.2021Y0027) tarafından finanse edilmiştir.

Araştırma, Huaqiao Üniversitesi Tıbbi Etik Komitesi'nin kurumsal yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi. Serebral kan pıhtıları cerrahi olarak çıkarıldı ve Fujian Tıp Üniversitesi'ne bağlı Quanzhou Birinci Hastanesi'nde hastalardan bilgilendirilmiş onam alınarak toplandı.
1. Kan pıhtısı ön tedavisi
<ol><li>Pıhtıları temiz bir tabağa koyun, cımbızla 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe sallayın ve salini bir pipetle çıkarın. NOT: Durulamayı üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Pıhtıları bir makasla daha küçük parçalar halinde (5 mm x 5 mm x 5 mm'den küçük) kesin. 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe çalkalayın ve salini bir pipetle çıkarın. NOT: Durulamayı üç kez tekrarlayın. Durulama sırasında pıhtı parçalarının aspire edilmediğinden emin olun.</li>
	<li>Pıhtıları başka bir temiz U plakasına aktarın. NOT: Protokol burada duraklatılabilir (plakayı 2-8 °C'de saklayın) ve daha sonra yeniden başlatılabilir.</li>
</ol>2. Tromboliz
<ol><li>Fizyolojik salin ile sFE konsantrasyonunu 2000 U/mL'ye ayarlayarak sFE çalışma solüsyonunu hazırlayın. NOT: sFE, Tang Lab15'in köklü protokollerine göre hazırlanmıştır.</li>
	<li>Ön işlem görmüş pıhtılara 300 μL sFE çalışma solüsyonu ekleyin.</li>
	<li>İlk bozulma turunu gerçekleştirin.<ol><li>sFE ve pıhtı karışımını 37 °C'de 0,5 saat inkübe edin. NOT: Serum fizyolojik ile tedavi edilen leke negatif kontrol olarak ayarlandı. S'yi döndürmeyinampçalkalayıcı üzerinde.</li>
		<li>Numuneyi yavaşça karıştırın. Sıvı parçayı temiz bir pipetle başka bir temiz tüpe aktarın. NOT: Kalan pıhtılar başka bir bozunma turu için kullanıldı.</li>
		<li>Sıvı kısmı 200 × g'da 4 °C'de 5 dakika santrifüjleyin.</li>
		<li>Geri kazanılan sFE çözeltisini elde etmek için süpernatanı bir pipetle başka bir temiz tüpe aktarın.</li>
		<li>Hücre çökelmesini 50 μL fizyolojik salin ile hafifçe karıştırın. NOT: Hücre karışımı daha sonra kullanılmak üzere 2-8 °C saklanmıştır.</li>
	</ol></li>
	<li>Sonraki bozulmayı gerçekleştirin.<ol><li>Kalan pıhtıları (adım 2.3.2) geri kazanılan sFE çözeltisi (adım 2.3.4) ile 37 °C'de 0,5 saat boyunca bozun. NOT: Geri kalan adımlar ilk bozma turuyla aynıydı. Tüm pıhtılar parçalanana kadar bozunma işlemi tamamlandı.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre toplama işlemini gerçekleştirin.<ol><li>Her bozunma turunun hücre karışımını toplayarak kan hücresi örneğini hazırlayın.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Wright'ın lekelenmesi
<ol><li>Hücre yayması yapın.<ol><li>Hücreleri 1 x 106 hücre/mL yoğunluğa ayarlayın.</li>
		<li>Poli-L lizin kaplı cam slayta 5 μL hücre ekleyin, ardından kapak fişini kullanarak bunları sürün.</li>
		<li>Sıvıyı oda sıcaklığında buharlaştırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Boyamayı gerçekleştirin.<ol><li>Hücre yaymasına nazikçe 200 μL Wright boyası ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve eşit şekilde karıştırmak için 600 μL Wright boyası B ekleyin.  Oda sıcaklığında 10 dakika boyayın.</li>
		<li>Boyayı temiz suyla nazikçe durulayın. NOT: Lekeli hücre yayması daha sonra kullanılmak üzere oda sıcaklığında saklanabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikroskobik görüntüleme yapın.<ol><li>Lekeli hücreleri bir ışık mikroskobu kullanarak inceleyin (bkz.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Rutin kan muayenesi
<ol><li>Hücreleri 1 x 106 hücre/mL yoğunluğa ayarlayın.</li>
	<li>Trombositler, eritrositler, beyaz kan hücreleri, lenfositler, nötrofiller, monositler, eozinofiller, bazofiller ve olgunlaşmamış granülositler gibi hücre bileşenlerini üreticinin talimatlarına göre bir otohematoloji analizörü kullanarak analiz edin (bkz.</li>
</ol>

Serebral Trombüs Hücre Bileşenlerini İncelemek için Fibrinolitik Enzim Tabanlı Bir Yöntem

<ol>
	<li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR:+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial.">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li><li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought:+a+retrospective+population-based+study.">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li><li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century:+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li><li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps:+villains+and+targets+in+arterial,+venous,+and+cancer-associated+thrombosis.">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li><li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity,+inflammation,+and+beyond.">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li><li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation:+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke.">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li><li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke.">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li><li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+(platelet+component)+in+thromboelastometry+and+thrombelastography.">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li><li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images.">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536 (2021).</li><li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization.">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li><li>C W Francis, a., Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concepts+of+clot+lysis.">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li><li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , (2019).</li><li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers:+latest+developments.">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254 (2015).</li><li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer:+What+we+have+vs.+what+we+need.">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446 (2023).</li><li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus.">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631 (2023).</li><li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus.">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023 (2018).</li><li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission.">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li><li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA,+2007-09.">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li></ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

sFE, fibrini doğrudan ve etkili bir şekilde parçalayabilen fibrinolitik bir ajandır12,16. Burada, serebral kan pıhtılarının çapraz bağlı fibrinini parçalamak, pıhtıların içindeki kapalı hücreleri serbest bırakmak ve pıhtıların hücre bileşenlerini kalitatif ve kantitatif olarak analiz etmek için sFE kullanıldı. Mikroskopi verileri ve rutin kan muayenesi, kapalı hücrelerin kan pıhtılarından salındığını gösterdi. Ayrıca, salın...

Serebrovasküler hastalık, insan sağlığını tehdit edebilen üç ana hastalıktan biridir ve bunların arasında iskemik serebrovasküler hastalık% 80'den fazlasını oluşturur. Serebral tromboz ve serebral ven trombozu, günümüzde en çok endişe duyulan iskemik serebrovasküler hastalıklardırve esas olarak serebral kan pıhtılarının neden olduğu 1,2. Tedavi uygun şekilde yapılmazsa, yüksek sakatlık ve mortalite oranlarına ve taburculuk sonrası yüksek nüks oranına sahip olacaktır3.
Son zamanlarda, giderek artan sayıda çalışma, serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin serebral trombozun tanısı, tedavisi ve prognozu ile sıkı bir şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir 4,5,6. Bu nedenle, trombüs bileşimi, özellikle hücre bileşenleri ile ilgili verilerin mevcudiyeti klinik tanı ve tedavi için önemlidir. Ne yazık ki, şu anda mevcut olan yöntemler, kan pıhtısı bileşenini nicel ve nitel olarak kapsamlı bir şekilde analiz edememektedir. Örneğin, Martius Scarlett Blue bazlı in-situ boyama, pıhtının yalnızca belirli dilimlerinin kırmızı/beyaz kan hücrelerini inceleyebilir7. İmmünohistokimya (IHC) tabanlı in-situ boyama, antikorlarını kullanarak pıhtının yalnızca belirli dilimlerinin sınırlı kan bileşenlerini inceleyebilir8. Mikroskobik görüntüye dayalı yöntemler sadece pıhtının spesifik yapısıyla ilgilidir9. Üstelik tüm bu yöntemler zahmetli ve zaman alıcıdır10. Bugüne kadar, serebral trombüs hücre bileşenlerini kantitatif ve kalitatif olarak incelemek için prosedürler bildirilmemiştir. Çapraz bağlı fibrinin pıhtılardaki kan hücrelerini sıkıca sardığı yaygın olarak kabul edilmektedir11. Sonuç olarak, çapraz bağlı fibrinin spesifik bozunması ve sağlam hücrelerin salınması, hücre bileşenlerinin doğru analizi için kritik öneme sahiptir.
Önceki çalışmalar, fibrini spesifik ve hızlı bir şekilde parçalayabilen Sipunculus nudus'tan (sFE) bir fibrinolitik enzimi izole etti12. Burada, sFE'nin benzersiz aktivitesine dayalı olarak serebral trombüsün hücre bileşenlerini analiz etmek için bir yöntem önerilmiştir. Bu protokol, önce pıhtıların fibrinini parçalamak için sFE'yi kullandı ve daha sonra hücre bileşenlerini Wright'ın Boyama ve rutin kan muayenesiile analiz etti 13,14. Bu yönteme göre, serebral trombüsün hücre bileşenleri kantitatif ve kalitatif olarak incelenebilir. Bu basit ve etkili protokol, diğer kan pıhtılarının hücre bileşen analizi için uygulanabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agglutination Reaction Plate</td>
			<td>ROTEST</td>
			<td>RTB-4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Auto Hematology Analyzer</td>
			<td>SYSMEX</td>
			<td>XNB2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer&#160;</td>
			<td>SANYO</td>
			<td>MLS-3750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-15-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean bench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>BLB-1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Incubator</td>
			<td>JINGHONG</td>
			<td>JHS-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture Dish (100 mm)</td>
			<td>NEST</td>
			<td>704001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DHG Series Heating and Drying Oven&#160;</td>
			<td>SENXIN</td>
			<td>DGG-9140AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Analytical Balance</td>
			<td>DENVER</td>
			<td>TP-213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Membrane (0.22 &#181;m)</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033NK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Refrigerated Centrifuge&#160;</td>
			<td>Cence</td>
			<td>H1650-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>CITOGLAS</td>
			<td>01-30253-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Reference</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>Z00QSV0CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>CISEN</td>
			<td>H37022337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>ECLIPSE E100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0221A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (1 mL )</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-1000XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tip (200 &#181;L)</td>
			<td>Axygene</td>
			<td>T-200XT-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY18723</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettor (200 &#181;L)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ZY20280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>MARTOR</td>
			<td>23111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small-sized Vortex Oscillator</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>VORTEX KB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Hystic</td>
			<td>HKQS-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots

Serebral arter veya damardaki bir kan pıhtısı olan serebral tromboz, en yaygın serebral enfarktüs türüdür. Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin incelenmesi tanı, tedavi ve prognoz için önemlidir. Bununla birlikte, pıhtıların hücre bileşenlerini incelemeye yönelik mevcut yaklaşımlar, esas olarak, hücreler pıhtılara sıkıca sarıldığı için hücre bileşenlerinin kapsamlı çalışması için uygun olmayan in situ boyamaya dayanmaktadır. Önceki çalışmalar, çapraz bağlı fibrini doğrudan parçalayarak hücre bileşenlerini serbest bırakabilen bir fibrinolitik enzimi (sFE) Sipunculus nudus'tan başarıyla izole etmiştir. Bu çalışma, serebral trombüsün hücre bileşenlerini incelemek için sFE'ye dayalı kapsamlı bir yöntem oluşturmuştur. Bu protokol pıhtı eritme, hücre salma, hücre boyama ve rutin kan incelemesini içerir. Bu yönteme göre, hücre bileşenleri nicel ve nitel olarak incelenebilir. Bu yöntemi kullanan deneylerin temsili sonuçları gösterilmektedir.

Cerebrovascular disease is one of three major diseases that can threaten human health, among which ischemic cerebrovascular disease accounts for more than 80%. Cerebral thrombosis and cerebral vein thrombosis are the most concerned ischemic cerebrovascular diseases today, mainly caused by cerebral blood clots1,2. If the treatment is not done properly, it will have high disability and mortality rates and a high recurrence rate after discharge3.
Recently, a growing number of studies have shown that the cell components of cerebral blood clots are tightly correlated with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis4,5,6. Therefore, the availability of data on thrombus composition, especially the cell components, is important for clinical diagnosis and treatment. Unfortunately, the currently available methods cannot comprehensively analyze the blood clot component quantitatively and qualitatively. For example, Martius Scarlett Blue based in-situ staining can only study the red/white blood cells of certain slices of the clot7. Immunohistochemistry (IHC) based in-situ staining can only study limited blood components of certain slices of the clot using their antibodies8. The microscopic image-based methods are only concerned with the specific structure of the clot9. Moreover, all those methods are laborious and time-consuming10. To date, the procedures for quantitatively and qualitatively studying cerebral thrombi cell components have not been reported. It is widely acknowledged that the cross-linked fibrin tightly wraps the blood cells in the clots11. Consequently, the specific degradation of the cross-linked fibrin and release of the intact cells is critical for the accurate analysis of cell components.
Previous works isolated a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE), which can degrade the fibrin specifically and quickly12. Herein, a method for analyzing the cell components of the cerebral thrombi based on the unique activity of sFE was proposed. This protocol utilized sFE to degrade the fibrin of clots first and then analyzed the cell components by Wright&#39;s Staining and routine blood examination13,14. According to this method, the cell components of cerebral thrombi can be quantitatively and qualitatively studied. This simple and effective protocol might be applied for the cell component analysis of other blood clots.

Yazar Spotlight: Serebral Kan Pıhtılarının Kapsamlı Hücre Bileşeni Analizi için Yeni Bir Yöntem 

Serebral Kan Pıhtılarının Hücre Bileşenlerini Analiz Etmek İçin Kapsamlı Bir Yaklaşım

Our research mainly focuses on cerebral thrombosis. Many studies have shown that cerebral blood clot cell component correlate with the diagnosis, treatment, and prognosis of cerebral thrombosis. In this study, we established a novel method for the analysis of cell component of cerebral blood clots.This challenge in analyzing cell components of cerebral blood clots is the release of entire shaft from blood clots. This is because the clots leaked fibering tiry rash, the blood cells in the clots. Targeted approaches to starting the cell components of the clots are best done in C2 standing, which is unsuitable for the comprehensive starting of the cell components.On the contrary, our method enables both quantitative and qualitative enlightenings of the cerebral slope cell components. Our method utilizes fibrinolytic enzyme to delay the fibering in blood clots, releasing the intact cells. The data obtained from the analysis of the cell components will facilitate the study of the mechanisms of cerebral thrombosis at a molecular level.Our team will continue to focus on the study of fibrinolysis and coagulation system.

Bozunma sürecinin ilk aşamasında, kan pıhtılarının kırmızı kompakt bir yapıya sahip olduğu ve çalışma çözeltisinin renksiz olduğu bulundu. 30 dakika inkübasyondan sonra, çalışma çözeltisi açık kırmızıya döndü, bu da çapraz kan hücrelerinin çalışma çözeltisine salındığını gösterdi. Kuluçka süresi 5 saate uzatıldığında çoğu pıhtı çözüldü ve çalışma çözeltisi açık kırmızı oldu. Aksine, 10 saatlik inkübasyondan sonra bile fizyolojik salin grubunda (NC) öne...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Comprehensive Cell Component Analysis of Cerebral Blood Clots at JoVE.com

Bu çalışma, pıhtı eritme, hücre boyama ve rutin kan muayenesi yoluyla serebral kan pıhtılarının hücre bileşen analizi için hızlı ve etkili bir yöntemi tanımlamaktadır.

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Araştırmalarımız ağırlıklı olarak serebral tromboz üzerine odaklanmaktadır. Serebral kan pıhtı hücresi bileşeninin serebral trombozun tanı, tedavi ve prognozu ile ilişkili olduğu birçok çalışmada gösterilmiştir. Bu çalışmada, serebral kan pıhtılarının hücre bileşeninin analizi için yeni bir yöntem oluşturduk.Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerini analiz etmedeki bu zorluk, tüm şaftın kan pıhtılarından salınmasıdır. Bunun nedeni, pıhtıların pıhtılardaki kan hücrelerini lifleyerek sızmasıdır. Pıhtıların hücre bileşenlerini başlatmaya yönelik hedefli yaklaşımlar en iyi şekilde, hücre bileşenlerinin kapsamlı bir şekilde başlatılması için uygun olmayan C2 ayakta yapılır.Aksine, yöntemimiz serebral eğim hücresi bileşenlerinin hem nicel hem de nitel olarak aydınlatılmasını sağlar. Yöntemimiz, kan pıhtılarındaki liflenmeyi geciktirmek ve sağlam hücreleri serbest bırakmak için fibrinolitik enzim kullanır. Hücre bileşenlerinin analizinden elde edilen veriler, serebral tromboz mekanizmalarının moleküler düzeyde incelenmesini kolaylaştıracaktır.Ekibimiz fibrinoliz ve pıhtılaşma sistemi çalışmalarına odaklanmaya devam edecektir.

a-comprehensive-approach-to-analyze-cell-components-cerebral-blood

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

437 Görüntüleme.  Quanzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University. Araştırmalarımız ağırlıklı olarak serebral tromboz üzerine odaklanmaktadır. Serebral kan pıhtı hücresi bileşeninin serebral trombozun tanı, tedavi ve prognozu ile ilişkili olduğu birçok çalışmada gösterilmiştir. Bu çalışmada, serebral kan pıhtılarının hücre bileşeninin analizi için yeni bir yöntem oluşturduk.Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerini analiz etmedeki bu zorluk, tüm şaftın kan pıhtılarından salınmasıdır. Bunun nedeni, ...