Bu yöntem, Imidacloprid'in buğdayda nasıl emildiğini, taşındığını ve dağıtıldığını cevaplamaya yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, toprakta, suda, bitkide ve diğer örneklerde imidacloprid'i belirlemek için yaygın olarak kullanılabilen imidacloprid tespitinin yüksek hassasiyetidir. Buğday tohumlarını çimlendirmek için, tam granüllere, bozulmamış embriyolara ve tek tip boyuta sahip 1000 uygun tohum seçin.
Yüzeylerini dezenfekte etmek için tohumları% 10 hidrojen peroksit çözeltisine 15 dakika batırın. Ardından, her seferinde 10 saniye boyunca steril su akıtarak tohumları beş kez durulayın. Şimdi, buğday tohumlarını, embriyolar nemli, steril filtre kağıdı içeren bir cam Petri kabına bakacak şekilde eşit olarak yayın.
Petri kabını 30 santigrat derece ve% 80 bağıl nemde tutulan yapay bir iklim inkübatörüne yerleştirin. Buğday tohumlarını çimlenene ve kökleri gelişene kadar üç gün boyunca karanlıkta kültürleyin. Buğday tohumları çimlendikten sonra, 100 mililitre yarım Hoaglands besin çözeltisi içeren hidroponik bir aparata 15 buğday fidesi yerleştirin.
Ardından, tüm hidroponik kurulumu yedi gün boyunca 25 santigrat derece ve% 80 bağıl nemde yapay bir iklim inkübatörüne yerleştirin. Pestisit maruziyet deneylerini iki farklı imidakloprid konsantrasyonu ile kurmak için, litre başına 0.5 miligram veya litre imidakloprid başına beş miligram ile yarım Hoaglands besin çözeltisi içeren hidroponik cihazlar hazırlayın. Numune alma sırasında yeterli numune alınmasını sağlamak için her imidacloprid konsantrasyon grubu için 15 hidroponik cihaz kurun.
Şimdi, 15 buğday bitkisi, yedi günlük hidroponik dönemlerini hazırlanan her bir hidroponik cihaza naklediyor. Tüm hidroponik kurulumu, üç gün boyunca 25 santigrat derece ve% 80 bağıl nemde yapay bir iklim inkübatörüne yerleştirin. İmidacloprid maruz kalma süresi boyunca, günlük olarak bitkilerden kök ve yaprak toplayın.
Her imidacloprid konsantrasyonu için, 15 hidroponik cihazın her beşte birinden buğday örneklerini paralel bir grup olarak entegre edin. Buğday köklerinden imidacloprid çıkarmak için, buğday köklerini makas kullanarak yaklaşık bir santimetre parçaya bölün. Parçalanmış buğday köklerinin 10 gramını tartın ve 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin.
Daha sonra, santrifüj tüpüne 10 mililitre asetil nitril ekleyin ve tüpe dört gram susuz magnezyum sülfat ve 1.5 gram sodyum klorür eklemeden önce tüpü bir dakika boyunca vorteks edin. Hemen tüpü 30 saniye boyunca vorteks. Daha sonra, tüpü beş dakika boyunca 6.000 G'de santrifüj edin.
Süpernatantı tek kullanımlık bir şırınga ile aspire edin ve numuneyi elde etmek için 0.22 mikronluk bir şırınga filtresinden geçirin. Buğday yapraklarından imidacloprid çıkarmak için, taze yaprakları makas kullanarak yaklaşık bir santimetrelik parçalara ayırın. Kıyılmış buğday yapraklarının 10 gramını tartın ve 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin.
50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde 10 gram rendelenmiş buğday yaprağına 10 mililitre asetonitril ekleyin ve bir dakika boyunca girdap yapın. Daha sonra karışımı susuz magnezyum sülfat ve sodyum klorür ve daha önce gösterildiği gibi santrifüj ile muamele edin. Numuneden pigmentasyonu ve nemi gidermek için, santrifüjlemeden sonra elde edilen süpernatantın iki mililitresini alın ve grafitize karbon siyahı ve susuz magnezyum sülfat içeren beş mililitrelik bir santrifüj tüpüne ekleyin.
30 saniyelik vorteks karıştırmadan sonra, tüpü beş dakika boyunca 6.000 G'de santrifüjleyin, ardından süpernatantı tek kullanımlık bir şırınga ile aspire edin ve numuneyi elde etmek için 0.22 mikronluk bir şırınga filtresinden geçirin. Makalede açıklandığı gibi buğday örneklerinden imidacloprid miktarını ölçmek için sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi kullanın. Buğday örneklerinden imidacloprid'in geri kazanım verimleri, ortalama imidacloprid'in buğday köklerinden ve litre imidacloprid başına 0.5 miligrama maruz kalan yapraklardan veya daha azına maruz kalan yapraklardan, litre imidakloprid başına beş miligrama maruz kalan örneklerden elde edilen ortalama geri kazanımlara kıyasla geri kazanıldığını göstermiştir.
Imidacloprid, buğday bitkilerinin hem köklerinde hem de yapraklarında, bir gün maruz kaldıktan sonra bile tespit edildi, bu da bitkilere hızlı emilimini ve iletkenliğini gösteriyor. Imidacloprid içeriği, maruziyetin üçüncü gününde birinci günden daha yüksekti ve imidacloprid konsantrasyonu köklerde yapraklardan sürekli olarak daha yüksekti. Kontrollere kıyasla imidacloprid'e maruz kalan bitkilerde üç günlük imidacloprid maruziyetinden sonra bile, bitki büyümesinin belirgin bir inhibisyonu gözlenmemiştir.
İşlem görmüş numunelerdeki kök konsantrasyon faktörü veya RCF, birden büyüktü, bu da buğdayın imidakloprid üzerinde zenginleştirici bir etkiye sahip olduğunu gösteriyordu. Bununla birlikte, yapraklar için translokasyon faktörü veya TF, birden azdı, bu da pestisitin buğday köklerinden yapraklara kolayca aktarılmadığını düşündürüyordu. En önemli adımlar imidaklopridin ekstraksiyonu ve saflaştırılmasıdır.
Bu adımlar sırasında imidacloprid'in kayıpsız olarak çıkarıldığından emin olun.
