Bu çalışma, Hubei Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (2022CFC057) alınan Hibeler tarafından desteklenmiştir.

Deney protokolü, Jianghan Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı ve Çin Hastalık Kontrol Merkezi tarafından yayınlanan Deney Hayvanları Etik Yönergelerine uygun olarak yürütüldü. Bu protokolde 10 haftalık, 24-26 g ağırlığında yetişkin erkek C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Tüm fareler, yiyecek ve su ad libitum ile 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsü kontrollü bir ortam altında barındırıldı.
1. Ameliyat öncesi hazırlık
NOT: Bu protokol için gerekli olan temel aletler ve ekipmanlar Şekil 1'de gösterilmiştir.
<ol><li>İşlemden önce cerrahi aletleri otoklavlama ile sterilize edin.</li>
	<li>Ameliyattan 60 dakika önce analjezi için 5 mg / kg'lık bir dozda deri altından meloksikam uygulayın.</li>
	<li>Fareyi bir indüksiyon odasında% 5 izofluran ile uyuşturun.</li>
	<li>Isıtma ameliyat panelini %75 etanol ile silin ve sıcaklık 37 °C'ye ayarlandığında ısıtma anahtarını etkinleştirin. Ardından, fareyi, başı cerrahtan uzağa ve kuyruğu cerraha bakacak şekilde tahta üzerinde sol yanal konuma getirin.</li>
	<li>Fare yüzüne, idame anestezisi için sabit bir %2 izofluran ve 0,3 L/dk oksijen sağlayan bir maske takın. İşlem sırasında kurumasını önlemek için korneanın üzerine göz merhemi sürün.</li>
	<li>Kürkü sol yörüngeden sol kulak kanalına kadar bir tıraş makinesi ile tıraş edin. Sterilizasyon için kalan kürkü çıkarmak için tüy dökücü kremler kullanın.</li>
	<li>Üç kez povidon-iyot dezenfektan ve% 75 etanol uygulayarak ameliyat bölgesini hazırlayın.</li>
</ol>2. Distal MCAO modeli
<ol><li>Ayak parmağı tutamının reflekslerini değerlendirerek farenin derin anestezi uygulanıp uygulanmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Steril bir neşter bıçağı kullanarak sol yörünge ile sol kulak kanalı arasında dikey bir kesi yapın.</li>
	<li>Cildin yumuşak dokusunu ekartörlerle geri çekin ve temporal kası açığa çıkarın.</li>
	<li>Temporal kasın apikal ve dorsal segmentlerini kafatasından ayırmak için düz mikroforseps kullanın.</li>
	<li>Temporal kemiğin altında kafatasının tabanına doğru bir önyargı ile "Y" şeklini alan MCA'nın çatallanmasını tanımlayın (Şekil 2A). NOT: MCA'nın çatallanması görsel olarak fark edilemezse (anatomik olarak normal bir varyasyon nedeniyle), en rostral damarı belirleyin.</li>
	<li>Yarı saydam dokusu ile dura mater görünür hale gelene kadar bir kemik penceresi (4 mm çapında) yapmak için kafatasını inceltmek için elektrikli bir kraniyal matkap kullanın. NOT: Bu işlem sırasında aşırı ısınmayı önlemek için kafatasına aralıklı olarak normal salin damlaları ekleyin.</li>
	<li>MCA dalını ortaya çıkarmak için arterin üzerindeki dura materini kavisli mikro forseps ile çıkarın.</li>
	<li>Elektrokoteriyi 7 W'a ayarlayın MCA'nın bifurkasyonunun proksimal ve distal bölgelerinde elektrikli pıhtılaşma forsepslerini kullanarak arteri pıhtılaştırın (Şekil 2A). Anatomik bir varyasyon nedeniyle çatallanma görünmediğinde, pıhtılaşmayı doğru bir şekilde tanımlanmış MCA dalı üzerinde (yukarıda belirtildiği gibi) yaklaşık 1 mm aralıklarla iki ayrı yerdegerçekleştirin 13.</li>
	<li>Bir lazer benekli kan akış ölçer kullanarak sol MCA kortikal dalının kan akışını izleyin. NOT: Elektrokoagülasyonu takiben başlangıç değerinin% 40'ından daha az kan akışı azalması gösteren fareler çalışmadan çıkarıldı.</li>
	<li>5-0 poliglikolik asit sütürler kullanarak kas ve cildi ayrı ayrı dikin. Steril bir pamuklu çubuk kullanarak cilt insizyonuna diklofenak sodyum jeli ve mupirosin merhem uygulayın.</li>
	<li>Fareyi bir kurtarma odasına yerleştirin. Tüm fareleri tamamen uyanana kadar izleyin. Her 24 saatte bir 72 saate kadar analjezi için meloksikam (5 mg / kg, SC) sağlayın.</li>
</ol>3. Sahte Operasyon
<ol><li>Arteriyel pıhtılaşma süreci hariç, yukarıda belirtilenlerle aynı prosedürü çoğaltın.</li>
</ol>4. Davranış testleri
NOT: dMCAO'dan önce, farelere 3 gün boyunca günde iki kez davranış eğitimi verildi. dMCAO'dan sonraki 3. günde , testten önce 2 saatlik bir çevresel adaptasyon için fareleri davranışsal test odasına taşıyın.
<ol><li>Kavrama gücü testi14 NOT: Kavrama gücü ölçer, bir itme-çekme gerinim ölçer ve bir metal yatay çubuk içerir.<ol><li>Fare kuyruğunun tabanını kavrayın. Fareyi, her iki ön ayağıyla yatay çubuğu kavrayana kadar kademeli olarak metal tutma çubuğuna doğru indirin (Şekil 2B).</li>
		<li>Fareyi yaklaşık 2 cm/sn'lik sabit bir hızla geriye doğru çekin ve gövdesini yatay tutun.</li>
		<li>Fare ön ayaklarını çubuktan serbest bıraktığında en yüksek kuvveti gram (g) cinsinden kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Kutup testi15<ol><li>Fareyi dikey bir ahşap direğin (50 cm yüksekliğinde, 1 cm çapında) tepesine, başı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve direkten aşağı inmesine izin verin (Şekil 2B).</li>
		<li>Farenin dönmesi için geçen süreyi (T dönüşü) ve direğe inmek için toplam süreyi (T toplamı) 60 saniyelik bir kesme süresiyle kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Yapışkan bant çıkarma testi16<ol><li>Fareyi tutun ve farenin sağ ön kısmına bir parça yapışkan bant (2 × 2 mm) yapıştırın (Şekil 2B).</li>
		<li>Fareyi yetiştirme kafesine geri koyun ve serbestçe hareket etmesine izin verin.</li>
		<li>Yapıştırıcıyı çıkarmak için farenin harcadığı süreyi 60 s sınırıyla kaydedin.</li>
	</ol></li>
	<li>Silindir testi17<ol><li>Fareyi üstü açık, şeffaf bir cam silindire (çap: 14 cm; yükseklik: 20 cm) yerleştirin ve bir kamera kullanarak 3 dakika boyunca spontan ayakta keşif davranışını kaydedin (Şekil 2B). NOT: Deneysel prosedür sırasında, ön ayak hareketlerinin en iyi şekilde kaydedilmesini sağlamak için silindirin yanına iki ayna yerleştirildi.</li>
		<li>Sonraki fareyi test etmeden önce kalıntı koku ipuçlarını ortadan kaldırmak için silindiri %75 etanol ile silin.</li>
		<li>Videonun oynatma hızını gerçek hızın 1 / 5'ine düşürün ve sol (L) veya sağ ön pençe ( R ) ile duvar dokunuşlarının sayısını veya her iki ön panın (B) aynı anda kullanımını sayın. Sağ ön pençenin kullanım oranını (L-R)/(L + R + B) × %100 olarak hesaplayın.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Perfüzyon ve numune hazırlama
<ol><li>Fareyi periton enjeksiyonu aşırı dozda pentobarbital (300 mg / kg) ile ötenazi yapın. Fareyi sırtüstü yatırın ve uzuvları hareketsiz hale getirin.</li>
	<li>Ciltte orta karın boşluğundan başlayıp üst göğüs bölgesine doğru uzanan orta hat kesisi yapın.</li>
	<li>Cerrahi makas kullanarak göğsü açın ve bir hemostat kullanarak ksifoidi yukarı doğru katlayın. Kalbi ortaya çıkarmak için akciğeri ve diyaframı dikkatlice çıkarın.</li>
	<li>Perfüzyon iğnesinin ucunu sol ventriküle yerleştirin ve sağ atriyumu makasla delin. Sol ventrikül yoluyla kalbi 20 mL normal salin ile perfüze edin.</li>
	<li>Farenin başını kesin ve kafa derisini gözler arasındaki orta hat boyunca kesin. Kafatası tabanından başlayarak göz yuvasına kadar açılan kemiği her iki taraftan kesin.</li>
	<li>Kalvaryumu kaldırın ve bir forseps kullanarak beyni kafatasının tabanından nazikçe ayırın. NOT: Farelerin yarısının beyinleri 2,3,5-trifenil tetrazolyum klorür (TTC) boyamasına tabi tutulurken, diğer yarısının beyinleri histolojik incelemeye tabi tutuldu.</li>
	<li>Takip histolojik analizi için beyinleri gece boyunca %4 paraformaldehit solüsyonuna batırın.</li>
</ol>6. Enfarktüs hacminin tanımlanması
<ol><li>Beyni buzdolabının -20 °C'lik dondurucu bölmesine 20 dakika boyunca yerleştirin.</li>
	<li>Beyni 1 mm'lik beyin matriksinin içine yerleştirin ve mikrotom bıçakları kullanarak beyni 2 mm kalınlığında koroner bölümlere ayırın.</li>
	<li>Beyin bölümlerini 24 oyuklu bir kültür plakasına aktarın ve beyin dokusunu kaplamak için% 2 TTC ekleyin. 24 oyuklu kültür plakasını, sıcaklık 37 °C'ye ayarlanmış olarak 30 dakika boyunca sabit sıcaklıktaki bir fırına koyun.</li>
	<li>Beyin bölümlerini dikkatlice kaldırın ve 15 dakika boyunca% 4 paraformaldehit çözeltisine sabitleyin.</li>
	<li>Bu beyin bölümlerinin bir tarama cihazı ile 1200 x 1200 dpi çözünürlükte optik taramasını gerçekleştirin.</li>
	<li>Görüntü J yazılımını kullanarak her bölümün enfarktüs alanını (sağ hemisferin alanı eksi sol hemisferin yaralanmamış alanı) toplayarak serebral enfarktüs hacmini ölçün (https://imagej.net/software/imagej/index)18. Enfarktüs hacmi yüzdesini, sağ hemisferin enfarktüs hacmi/hacmi × %100 olarak hesaplayın.</li>
</ol>7. Histopatolojik ve immünofloresan boyama analizi
<ol><li>Beyin örneklerini paraformaldehit solüsyonundan alın ve 1 saat boyunca akan su ile yıkayın.</li>
	<li>Beyin örneklerini otomasyon-doku-dehidrasyon makinesine aktarın. Dehidrasyon, vitrifikasyon ve balmumu daldırma için önceden ayarlanmış programı başlatın. Susuz kalmış beyin örneklerini parafine gömün ve bir mikrotom ile 5 μm kalınlığında bölümler halinde dilimleyin.</li>
	<li>Hematoksilen ve eozin (H&E) boyama<ol><li>Bölümleri her biri 8 dakika boyunca 3 kez ksilen ile mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca gradyan etanol (%100, %95, %90, %80, %70) ve damıtılmış suya art arda daldırarak bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Bölümleri hematoksilen çözeltisi ile 5 dakika boyayın.</li>
		<li>Kalan hematoksilen kalıntısını yıkamak için bölümleri damıtılmış suyla durulayın, ardından 5 saniyelik bir farklılaşma için %5 hidroklorik asit alkole batırın. Bölümleri 2 dakika damıtılmış su ile yıkayın.</li>
		<li>Bölümleri 30 saniye boyunca eozin solüsyonu ile boyayın ve fazla boyama sıvısını damıtılmış su kullanarak durulayın.</li>
		<li>Bölümleri her seferinde 5 dakika boyunca art arda %90 etanol, %95 etanol, %100 etanol ve ksilene (2 kez) daldırın. Bölümleri nötr bir balsam montaj ortamı ile monte edin.</li>
	</ol></li>
	<li>İmmünofloresan boyama<ol><li>Bölümleri her seferinde 8 dakika boyunca 3 kez ksilen ile mumdan arındırın.</li>
		<li>Her seferinde 5 dakika boyunca art arda gradyan etanol (%100, %95, %90, %80, %70) ve damıtılmış suya batırarak bölümleri yeniden sulandırın.</li>
		<li>Sitrat antijen alma solüsyonunu mikrodalgada kaynatmak için önceden ısıtın. Bölümleri antijen alma çözeltisine daldırın. Antijen alma tamponunu düşük güçte (20 W) 20 dakika boyunca tekrar ısıtın.</li>
		<li>Mikrodalgayı kapatın ve antijen alma tamponunun oda sıcaklığına (RT) soğumasını bekleyin.</li>
		<li>Bölümleri her seferinde 5 dakika boyunca 0.1 mM fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile üç kez yıkayın.</li>
		<li>İmmünoglobulinin spesifik olmayan bağlanmasını bloke etmek için bölümleri RT'de 1 saat boyunca bir bloke edici solüsyon (% 5 sığır serum albümini) ile inkübe edin.</li>
		<li>Bölümleri tavşan anti-NeuN antikoru (1: 300), tavşan anti-Iba-1 antikoru (1: 500) ve fare anti-GFAP antikoru (1: 500) ile gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.</li>
		<li>Bölümleri her seferinde 5 dakika boyunca 0.1 mM PBS ile üç kez yıkayın.</li>
		<li>Bölümleri keçi anti-tavşan Alexa 594-konjuge IgG (1:500) veya keçi anti-fare Alexa 488-konjuge IgG (1:500) ile RT'de 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Bölümleri 0.1 mM PBS ile yıkayın ve bunları 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) içeren bir antifade montaj ortamı ile monte edin.</li>
		<li>Sırasıyla 594 nm × 488 nm'de bir floresan mikroskop kullanarak iskemik penumbra içindeki üç mikroskobik alanın (300 μm 300 μm) görüntülerini alın.</li>
		<li>ImageJ yazılımını (https://imagej.net/software/imagej/index) kullanarak, iskemik penumbra19'daki sayımların ortalamasını alarak pozitif boyanmış hücre yoğunluğunu tahmin edin.</li>
	</ol></li>
</ol>

İskemik İnme Fare Modeli Geliştirmek için Distal Orta Arter Oklüzyonu

<ol>
	<li>Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperacute+management+of+ischemic+strokes:+JACC+Focus+Seminar.">Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).</li><li>GBD 2016 Stroke Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+burden+of+stroke,+1990-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+study+2016.">Global, regional, and national burden of stroke, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease study 2016.</a> Lancet Neurol. 18 (5), 439-458 (2019).</li><li>Joo, H., Wang, G., George, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+literature+review+of+cost-effectiveness+of+intravenous+recombinant+tissue+plasminogen+activator+for+treating+acute+ischemic+stroke.">A literature review of cost-effectiveness of intravenous recombinant tissue plasminogen activator for treating acute ischemic stroke.</a> Stroke Vasc Neurol. 2 (2), 73-83 (2017).</li><li>Jones, A. T., O'Connell, N. K., David, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+functional+stroke+mimic+patients:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Epidemiology of functional stroke mimic patients: a systematic review and meta-analysis.</a> Eur J Neurol. 27 (1), 18-26 (2020).</li><li>Tamura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 1 (1), 53-60 (1981).</li><li>Kuraoka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+experimental+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery+induces+high+reproducibility+of+brain+ischemia+in+mice.">Direct experimental occlusion of the distal middle cerebral artery induces high reproducibility of brain ischemia in mice.</a> Exp Anim. 58 (1), 19-29 (2009).</li><li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion.">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Candelario-Jalil, E., Paul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+aging+and+comorbidities+on+ischemic+stroke+outcomes+in+preclinical+animal+models:+A+translational+perspective.">Impact of aging and comorbidities on ischemic stroke outcomes in preclinical animal models: A translational perspective.</a> J Exp Neurol. 335, 113494 (2021).</li><li>Zuo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+of+secondary+damage+and+A&#946;+deposits+in+the+ipsilateral+thalamus+of+dMCAO+rats+through+reduction+of+cathepsin+B+by+bis(propyl)-cognitin,+a+multifunctional+dimer.">Attenuation of secondary damage and A&#946; deposits in the ipsilateral thalamus of dMCAO rats through reduction of cathepsin B by bis(propyl)-cognitin, a multifunctional dimer.</a> Neuropharmacology. 162, 107786 (2020).</li><li>Shabani, Z., Farhoudi, M., Rahbarghazi, R., Karimipour, M., Mehrad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular,+histological,+and+behavioral+pathological+alterations+associated+with+the+mouse+model+of+photothrombotic+ischemic+stroke.">Cellular, histological, and behavioral pathological alterations associated with the mouse model of photothrombotic ischemic stroke.</a> J Chem Neuroanat. 130, 102261 (2023).</li><li>Caleo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rehabilitation+and+plasticity+following+stroke:+Insights+from+rodent+models.">Rehabilitation and plasticity following stroke: Insights from rodent models.</a> Neuroscience. 311, 180-194 (2015).</li><li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice:+permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery.">Modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> J Vis Exp. (89), e51729 (2014).</li><li>Lavayen, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotection+by+the+cannabidiol+aminoquinone+VCE-004.8+in+experimental+ischemic+stroke+in+mice.">Neuroprotection by the cannabidiol aminoquinone VCE-004.8 in experimental ischemic stroke in mice.</a> Neurochem Int. 165, 105508 (2023).</li><li>Hu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+B+knockout+confers+significant+brain+protection+in+the+mouse+model+of+stroke.">Cathepsin B knockout confers significant brain protection in the mouse model of stroke.</a> J Exp Neurol. 368, 114499 (2023).</li><li>Yu, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optochemogenetic+stimulation+of+transplanted+iPS-NPCs+enhances+neuronal+repair+and+functional+recovery+after+ischemic+stroke.">Optochemogenetic stimulation of transplanted iPS-NPCs enhances neuronal repair and functional recovery after ischemic stroke.</a> J Neurosci. 39 (33), 6571-6594 (2019).</li><li>Lin, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opening+a+new+time+window+for+treatment+of+stroke+by+targeting+HDAC2.">Opening a new time window for treatment of stroke by targeting HDAC2.</a> J Neurosci. 37 (28), 6712-6728 (2017).</li><li>Shi, X. F., Ai, H., Lu, W., Cai, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SAT:+Free+software+for+the+semi-automated+analysis+of+rodent+brain+sections+with+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+staining.">SAT: Free software for the semi-automated analysis of rodent brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride staining.</a> Front Neurosci. 13, 102 (2019).</li><li>Jensen, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+histological+staining+and+fluorescence+using+ImageJ.">Quantitative analysis of histological staining and fluorescence using ImageJ.</a> Anat Rec. 296 (3), 378-381 (2013).</li><li>Donahue, J., Wintermark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+CT+and+acute+stroke+imaging:+foundations,+applications,+and+literature+review.">Perfusion CT and acute stroke imaging: foundations, applications, and literature review.</a> J Neuroradiol. 42 (1), 21-29 (2015).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+L-3-n-butylphthalide+pretreatment+attenuates+ischemic+brain+injury+in+mice+with+permanent+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+through+the+Nrf2+pathway.">Long-term L-3-n-butylphthalide pretreatment attenuates ischemic brain injury in mice with permanent distal middle cerebral artery occlusion through the Nrf2 pathway.</a> Heliyon. 8 (7), e09909 (2022).</li><li>Balkaya, M. G., Trueman, R. C., Boltze, J., Corbett, D., Jolkkonen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+outcome+measures+to+improve+experimental+stroke+research.">Behavioral outcome measures to improve experimental stroke research.</a> Behav Brain Res. 352, 161-171 (2018).</li><li>Hao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mechanism+of+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+with+treatment+of+stepharine+in+rats.">Inflammatory mechanism of cerebral ischemia-reperfusion injury with treatment of stepharine in rats.</a> Phytomedicine. 79, 153353 (2020).</li><li>Pietrogrande, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+oxygen+post+conditioning+prevents+thalamic+secondary+neuronal+loss+caused+by+excitotoxicity+after+cortical+stroke.">Low oxygen post conditioning prevents thalamic secondary neuronal loss caused by excitotoxicity after cortical stroke.</a> Sci Rep. 9 (1), 4841 (2019).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+subtype-dependent+synapse+elimination+by+reactive+gliosis+in+mice.">Stroke subtype-dependent synapse elimination by reactive gliosis in mice.</a> Nat Commun. 12 (1), 6943 (2021).</li><li>Chen, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aryl+hydrocarbon+receptor+modulates+stroke-induced+astrogliosis+and+neurogenesis+in+the+adult+mouse+brain.">Aryl hydrocarbon receptor modulates stroke-induced astrogliosis and neurogenesis in the adult mouse brain.</a> JNeuroinflammation. 16 (1), 187 (2019).</li></ol>

Yazarların ifşa edecek çatışan çıkarları yoktur.

Kraniyotomi elektrokoagülasyon dMCAO modelinin mevcut protokolünde, cerrahi prosedürler minimal invazivlik ile gerçekleştirilir, burada çiğneme fonksiyonu üzerindeki olumsuz etkileri azaltmak için temporalis kasının sadece bir kısmı ayrılır. Farelerin tümü işlemden sonra iyi bir şekilde iyileşti ve gözlemlenen herhangi bir beslenme güçlüğü vakası olmadı. MCA, farenin temporal kemiğinde kolayca ayırt edilebilir, böylece uygun kraniyotomi konumlarının hassas bir şekilde tanımlanmasını k...

İnme, yüksek sakatlık ve mortalite insidansı ile karakterize yaygın bir akut serebrovasküler hastalıktır1. Tüm inme vakalarının yaklaşık %80'i iskemik inme2'ye aittir. Şimdiye kadar, intravenöz tromboliz, akut iskemik inme tedavisinde sınırlı sayıda üretken yaklaşımdan biri olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, trombolitik tedavinin etkinliği, dar etkili zaman penceresi ve hemorajik dönüşümün ortaya çıkması ile sınırlıdır3. İskemik inmeyi takiben uzun süreli rehabilitasyon aşamasında, önemli sayıda hastanın kalıcı nörolojik işlev bozuklukları yaşaması muhtemeldir4. İskemik inmenin altta yatan patofizyolojik mekanizmalarını ortaya çıkarmak ve iskemik inmeyi hedefleyen yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesini kolaylaştırmak için acilen daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Güvenilir ve tekrarlanabilir bir iskemik inme modelinin oluşturulması, temel araştırmaların yanı sıra iskemik inme alanındaki müteakip translasyonel araştırmalar için çok önemlidir.
1981'de Tamura ve ark. orta serebral arterin (MCA) proksimal bölgesinde transkraniyal elektrokoagülasyon kullanarak bir fokal serebral iskemi modeli geliştirdi5. O zamandan beri, çok sayıda araştırmacı, geçici veya kalıcı iskemik inme modelleri oluşturmak için distal MCA oklüzyonunu (dMCAO) indüklemek için ligasyon, kompresyon veya kırpma gibi çeşitli metodolojiler kullanmıştır 6,7,8. Filament modeliyle karşılaştırıldığında, dMCAO modeli, daha küçük enfarktüs boyutu ve daha yüksek sağkalım oranı gibi dikkate değer avantajlar sergiler ve bu da onu iskemik inme9'u takiben uzun vadeli fonksiyonel iyileşmeyi araştırmak için daha uygun hale getirir. Ek olarak, dMCAO modeli, filament modeline kıyasla yaşlı kemirgenlerde daha yüksek bir hayatta kalma oranı gösterir, bu da onu yaşlı ve komorbid hayvan modellerinde iskemik inmeyi araştırmak için avantajlı bir araç haline getirir10. Fototrombotik (PT) inme modelinin daha az cerrahi invazivlik ve önemli ölçüde düşük mortalite oranı özelliklerine sahip olduğu gösterilmiştir. Bununla birlikte, PT modeli, dMCAO modeline kıyasla daha fazla hücresel nekroz ve doku ödemi sergiler ve bu da kollateral dolaşımın olmamasına yol açar11. Ayrıca, PT modelinde gözlenen iskemik lezyonların ağırlıklı olarak mikrovasküler oklüzyondan kaynaklandığı ve dMCAO model12'deki büyük damar embolisinin neden olduğu serebral iskemiden önemli ölçüde farklı olduğu dikkat çekicidir.
Bu yazıda, küçük kemik penceresi kraniyotomi ile distal MCA'yı koagüle ederek murin dMCAO modelini indükleme metodolojisini sunuyoruz. Ek olarak, bu deneysel modelde iskemik hakaretleri ve inme sonuçlarını kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için histolojik incelemeler ve davranışsal değerlendirmeler yaptık. Amacımız, araştırmacıları bu model hakkında bilgilendirmek ve iskemik inmenin patolojik mekanizmaları hakkında daha fazla araştırma yapılmasını kolaylaştırmaktır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium 
			Chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>108380</td>
			<td>Dye for TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well culture plate</td>
			<td>Corning (USA)</td>
			<td>CLS3527</td>
			<td>Vessel for TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology 
			Co., Ltd.</td>
			<td>G1101</td>
			<td>Tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% bovine serum albumin</td>
			<td>Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd.</td>
			<td>AR004</td>
			<td>Non-specific antigen blocking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 Polyglycolic acid suture</td>
			<td>Jinhuan Medical Co., Ltd</td>
			<td>KCR531</td>
			<td>Material for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Midmark Corporation</td>
			<td>VMR</td>
			<td>Anesthetized animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade mounting medium</td>
			<td>Beyotime Biotech</td>
			<td>P0131</td>
			<td>Seal for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automation-tissue-dehydrating&#160; 
			machine</td>
			<td>Leica Biosystems (Germany)</td>
			<td>TP1020</td>
			<td>Dehydrate tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet (France)</td>
			<td>20220328</td>
			<td>Material for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diclofenac&#160;sodium&#160;gel</td>
			<td>Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical 
			&#160;Co., Ltd.</td>
			<td>H10950214</td>
			<td>Analgesia for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill tip (0.8 mm)</td>
			<td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>Equipment for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin staining solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology 
			Co., Ltd.</td>
			<td>G1001</td>
			<td>Dye for H&#38;E staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>H44023098</td>
			<td>Material for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus (Japan)</td>
			<td>BX51</td>
			<td>Image acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Mouse monoclonal antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology Inc. 
			(Danvers, MA, USA)</td>
			<td>3670</td>
			<td>Primary antibody for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse Alexa 
			488-conjugated IgG</td>
			<td>Cell Signaling Technology Inc. 
			(Danvers, MA, USA)</td>
			<td>4408</td>
			<td>Second antibody for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Alexa 
			594-conjugated IgG</td>
			<td>Cell Signaling Technology Inc. 
			(Danvers, MA, USA)</td>
			<td>8889</td>
			<td>Second antibody for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grip strength meter</td>
			<td>Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.</td>
			<td>XR501</td>
			<td>Equipment for behavioral test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin staining solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology 
			Co., Ltd.</td>
			<td>G1004</td>
			<td>Dye for H&#38;E staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iba1 Rabbit monoclonal antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab178846</td>
			<td>Primary antibody for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td>Anesthetized animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser doppler blood flow meter</td>
			<td>Moor Instruments (UK)</td>
			<td>moorVMS</td>
			<td>Blood flow monitoring</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Boehringer-Ingelheim</td>
			<td>J20160020</td>
			<td>Analgesia for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>78001</td>
			<td>Equipment for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical instruments set</td>
			<td>Rwd Life Science Co., Ltd.</td>
			<td>SP0009-R</td>
			<td>Equipment for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td>
			<td>HM325</td>
			<td>Tissue section production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica Biosystems (Germany)</td>
			<td>819</td>
			<td>Tissue section production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopolar electrocoagulation generator</td>
			<td>Spring Scenery Medical Instrument 
			Co., Ltd.</td>
			<td>CZ0001</td>
			<td>Equipment for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mupirocin ointment</td>
			<td>Tianjin Smith Kline &#38; French 
			Laboratories Ltd.</td>
			<td>H10930064</td>
			<td>Anti-infection for animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeuN Rabbit monoclonal antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology Inc. 
			(Danvers, MA, USA)</td>
			<td>24307</td>
			<td>Primary antibody for IF staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral balsam</td>
			<td>Absin Bioscience</td>
			<td>abs9177</td>
			<td>Seal for H&#38;E staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding center</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td>
			<td>EC 350</td>
			<td>Produce paraffin blocks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3761</td>
			<td>Euthanized animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd</td>
			<td>C0221A</td>
			<td>Rinsing for tissue section</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Shenzhen Codos Electrical Appliances 
			Co.,Ltd.</td>
			<td>CP-9200</td>
			<td>Equipment for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate solution</td>
			<td>Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.</td>
			<td>P0083</td>
			<td>Antigen retrieval for IF staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of acute ischemic stroke in mice using the distal middle artery occlusion technique

İskemik inme, tüm dünyada erişkin popülasyonlar arasında mortalite ve fonksiyonel bozukluğun baskın nedeni olmaya devam etmektedir. İskemik inme hastalarının sadece küçük bir kısmı en uygun zaman aralığında intravasküler tromboliz veya mekanik trombektomi tedavisi almaya uygundur. İnme geçirenler arasında, yaklaşık üçte ikisi uzun bir süre boyunca nörolojik işlev bozukluklarından muzdariptir. İskemik inme için patofizyolojik mekanizmaların daha fazla araştırılması ve etkili terapötik stratejilerin geliştirilmesi için stabil ve tekrarlanabilir bir deneysel iskemik inme modelinin oluşturulması son derece önemlidir. Orta serebral arter (MCA), insanlarda iskemik inmenin baskın lokalizasyonunu temsil eder ve MCA oklüzyonu, fokal serebral iskeminin sık kullanılan modeli olarak hizmet eder. Bu protokolde, C57BL/6 farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal MCA oklüzyonu (dMCAO) modelinin kurulması metodolojisini açıklıyoruz. Oklüzyon bölgesi MCA'nın kortikal dalında yer aldığından, bu model korteksle sınırlı orta derecede enfarktüslü bir lezyon oluşturur. Nörolojik davranışsal ve histopatolojik karakterizasyon, bu modelde görünür motor disfonksiyon, nöron dejenerasyonu ve mikroglia ve astrositlerin belirgin aktivasyonunu göstermiştir. Bu nedenle, bu dMCAO fare modeli, iskemi inmeyi ve popülerleşmenin değerini araştırmak için değerli bir araç sağlar.

Stroke is a common acute cerebrovascular disease characterized by high incidences of disability and fatality1. Of all stroke cases, nearly 80% belong to ischemic stroke2. Up to now, intravenous thrombolysis remains one of a limited number of productive approaches for the treatment of acute ischemic stroke. However, the effectiveness of thrombolytic treatment is restricted by the narrow effective time window and the occurrence of hemorrhagic transformation3. In the long-term rehabilitation phase following an ischemic stroke, a considerable number of patients are likely to experience durable neurological dysfunctions4. Further investigation is urgently required to unravel the underlying pathophysiological mechanisms of ischemic stroke, as well as to facilitate the development of novel therapeutic strategies targeting ischemic stroke. The establishment of a dependable and replicable model of ischemic stroke is crucial for basic research as well as subsequent translational research in the field of ischemic stroke.
In 1981, Tamura et al. developed a focal cerebral ischemia model by employing transcranial electrocoagulation at the proximal site of the middle cerebral artery (MCA)5. Since then, numerous researchers have utilized various methodologies such as ligation, compression, or clipping to induce distal MCA occlusion (dMCAO) for establishing transient or permanent ischemic stroke models6,7,8. Compared to the filament model, the dMCAO model exhibits notable advantages such as smaller infarct size and higher survival rate, rendering it more suitable for investigating long-term functional recovery subsequent to ischemic stroke9. In addition, the dMCAO model demonstrates a higher survival rate in aged rodents compared to the filament model, making it an advantageous tool for investigating ischemic stroke in elderly and comorbid animal models10. The photothrombotic (PT) stroke model has been demonstrated to possess the characteristics of less surgical invasiveness and a significantly low mortality rate. However, the PT model exhibits a greater degree of cellular necrosis and tissue edema compared to the dMCAO model, leading to the absence of collateral circulation11. Furthermore, it is noteworthy that the ischemic lesions observed in the PT model predominantly arise from microvascular occlusion, which differs substantially from the cerebral ischemia induced by large vessel embolism in the dMCAO model12.
In this paper, we present the methodology for inducing the murine dMCAO model by coagulating the distal MCA via small bone window craniotomy. Additionally, we conducted histological examinations and behavioral evaluations to comprehensively characterize the ischemic insults and stroke outcomes in this experimental model. We aim to acquaint researchers with this model and facilitate further investigations into the pathologic mechanisms of ischemic stroke.

Yazar Spotlight: İnme Araştırmaları için Farelerde Güvenilir Bir Distal MCA Oklüzyon Modeli Oluşturma

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

DMCAO'yu gerçekleştirmek için kullanılan temel aletler, mikrocerrahi aletler seti, izofluran buharlaştırıcı ve Şekil 1'de gösterilen monopolar mikrocerrahi elektrokoagülasyon jeneratörüdür. Bu çalışmanın deneysel prosedürü Şekil 2'de gösterilmiştir. Kısacası, distal MCA'yı ortaya çıkarmak için küçük bir kemik penceresi kraniyotomisi kullanıldı ve daha sonra C57BL / 6 farelerinde kalıcı fokal serebral iskemiyi indüklemek içi...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique at JoVE.com

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...

Bu çalışmada, transkraniyal elektrokoagülasyon kullanılarak C57BL/6J farelerde orta serebral arter oklüzyonu modeli oluşturmak için kapsamlı ve ayrıntılı bir protokol sunmayı amaçladık ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirdik. Orta serebral arter veya MCA, insanlarda iskemik inmenin birincil bölgesi olarak kabul edilmektedir. Teknik, fotokimyasal giriş ve oklüzyon dahil olmak üzere MCA oklüzyon yöntemleri, kemirgenlerde fokal serebral iskemiyi indüklemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.Diğer iskemi inme modelleriyle karşılaştırıldığında, bu model daha az cerrahi invazivlik, daha küçük enfarktüs boyutu ve daha yüksek sağkalım oranı avantajına sahiptir ve bu da onu iskemik inme sonrası uzun vadeli fonksiyonel iyileşmeyi araştırmak için daha uygun hale getirir. Genel olarak, mevcut yaklaşım, yüksek hayatta kalma ve mükemmel tekrarlanabilirlik sergileyen güvenilir bir deneysel iskemik inme modelini etkili bir şekilde üretir. Sonuç olarak, bu metodoloji inme alanında hem temel hem de translasyonel araştırmalar için paha biçilmez bir araç olarak hizmet eder.Gelecekte, distal MCA ile tıkanmış fareler arasında uzun süreli öğrenme ve hafıza yeteneklerindeki dinamik değişiklikleri araştırmak için yeni nesne tanıma ve su labirenti gibi davranış paradigmalarını kullanacağız. Bu, inme sonrası biliş bozukluğu çalışmaları için onları hayvan modeli olarak kullanmanın uygulanabilirliğini tespit etmemizi sağlayacaktır.

induction-acute-ischemic-stroke-mice-using-distal-middle-artery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

1.3K Görüntüleme.  Jianghan University. Bu çalışmada, transkraniyal elektrokoagülasyon kullanılarak C57BL/6J farelerde orta serebral arter oklüzyonu modeli oluşturmak için kapsamlı ve ayrıntılı bir protokol sunmayı amaçladık ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirdik. Orta serebral arter veya MCA, insanlarda iskemik inmenin birincil bölgesi olarak kabul edilmektedir. Teknik, fotokimyasal giriş ve oklüzyon dahil olmak üzere MCA oklüzyon yöntemleri, kemirgenlerde fokal se...

Video: Yazar Spotlight: İnme Araştırmaları için Farelerde Güvenilir Bir Distal MCA Oklüzyon Modeli Oluşturma

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic stroke patients are eligible to receive intravascular thrombolysis or mechanical thrombectomy therapy within the optimal time window. Among those stroke survivors, around two-thirds suffer neurological dysfunctions over an extended period. Establishing a stable and repeatable experimental ischemic stroke model is extremely significant for further investigating the pathophysiological mechanisms and developing effective therapeutic strategies for ischemic stroke. The middle cerebral artery (MCA) represents the predominant location of ischemic stroke in humans, with the MCA occlusion serving as the frequently employed model of focal cerebral ischemia. In this protocol, we describe the methodology of establishing the distal MCA occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6 mice. Since the occlusion site is located at the cortical branch of MCA, this model generates a moderate infarcted lesion restricted to the cortex. Neurological behavioral and histopathological characterization have demonstrated visible motor dysfunction, neuron degeneration, and pronounced activation of microglia and astrocytes in this model. Thus, this dMCAO mouse model provides a valuable tool for investigating the ischemiastroke and worth of popularization.

Here, we present a protocol to establish a distal middle cerebral artery occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6J mice and evaluate the subsequent neurological behavior and histopathological features.