Kırık kemikleri olan çocuklar için daha iyi bir tedavi geliştirmek istiyorum. Özellikle, kırık kıkırdak büyüme plakasında kemik oluşumunu önlemek istiyorum çünkü, aksi takdirde. Kırık uzuv normal şekilde uzamaz.
Birinci adımda, yeni tedavileri test etmek ve etki mekanizmasını belirlemek için daha doğru bir fare modeli geliştirmemiz gerekiyordu. Konvansiyonel tedaviler, yaralanmadan sonra kemikli köprünün rezeke edilmesini ve yağ dokusu gibi interpozisyon materyallerinin yerleştirilmesini içerir. Bu yöntemler büyüme plakası kıkırdağını yeniden oluşturmaz ve genellikle ek ameliyatlar gerektirir.
Bununla birlikte, şu anda test etmekte olduğumuz yeni doku mühendisliği yaklaşımları, kemik köprüsü oluşumunu önlerken kıkırdak rejenerasyonunu hızlandırmak için lokalize moleküller içerir. Hayvan modelleri, yaralı büyüme plakası kıkırdak rejenerasyonuna yönelik doku mühendisliği yaklaşımlarını test etmek için gereklidir. Hassasiyet ve maliyet arasında ödünleşimler vardır.
Koyun gibi daha büyük hayvanlar, yaralanma modellemesinde daha yüksek hassasiyet ve tutarlılık sunar, ancak fareler gibi daha küçük hayvanlardan çok daha pahalıdır. Buradaki çabamızın amacı, büyüme plakasının yaralanmasından sonra meydana gelen bu doku yanıtının hücresel temelini anlamaktır. Üç renkli floresan farelerimizi kullanarak, bu renkleri yayan hücreleri, diğer floresan lekeler ve antikorlardan gelen somatik minerallerle birlikte haritalayabiliyor ve bunları tanıdık bir kromojenik lekeye geri eşleştirebiliyoruz.
Bu, onarımın dinamizmini takdir etmemizi ve bu doku tepkisinden sorumlu hücreleri tanımlamamızı sağlar. Bu genç transgenik farelerdeki hipertrofik kondrositlerin doğal floresansı, canlı görüntüleme altındaki araştırmacının, bir çocuğun yaralanmasını taklit eden klinik olarak anlamlı bir büyüme plakası yaralanması oluşturmasına izin verir. Ayrıca, eklem kıkırdağı zarar görmeden kalır ve farelerde mekanik çalışmalar için mevcut olan kapsamlı reaktifler kullanılabilir.
Başlamak için, anestezi uygulanmış üç fareyi X-ışını kabinindeki midelerine paralel olarak yerleştirin. Farelerin bacaklarını yayın, böylece tibial kemikler altlarında gizlenmez. İlk uzuv uzunluğunu kaydetmek için farelerin yanına bir radyoopak ölçek yerleştirin ve tibial görüntülerini yakalamak için 26 kilovolt ve 800 miliamper ile X-ışını görüntüleme gerçekleştirin.
Hayvan ameliyathanesinde, elektronik yüksek hızlı diş delme sistemini monte edin. Elektronik ayak kumandasını ve el aletini kontrol ünitesine bağlayın ve başlık kablosunu dezenfekte edilmiş bir yüzey bariyer tüp çoraplarıyla kapatın. Denetleyiciyi dakikada maksimum 30.000 devir ile bire bir sürücü oranına ayarlayın.
Ardından, dezenfekte edilmiş bir tüp çorapla kaplı esnek izofluran makine hortumunu floresan stereo mikroskop aşamasına yerleştirin. Başlamak için, X-ışını görüntüleme ile farenin ilk uzuv uzunluğunu belirleyin. Steril 0,5 milimetre yuvarlak diş frezini el aletine takın ve gereken diğer cerrahi aletleri seçin.
Hayvanı uyuşturduktan sonra, reçete edilen buprenorfin dozunun yarısını hemen deri altına uygulayın. Farenin gözlerinin kurumasını önlemek için oküler kayganlaştırıcı uygulayın ve fareyi stereo mikroskop sahnesinde sırtüstü pozisyonda aktarın. Sağ arka bacak, pelvik bölge, sol arka bacak ve kuyruğun ön yüzünü sırayla povidon iyot ve ardından% 70 etanol ile dezenfekte edin.
15 numara neşter kullanan parlak ışık aydınlatması altında, sağ tibianın proksimal ucunu ortaya çıkarmak için diz ekleminin hemen altında beş milimetrelik bir cilt kesisi oluşturun. Sol kontralateral tibiayı yaralanmamış halde tutun, böylece iç yaralanmamış kontrol görevi görür. Daha sonra, 15 numaralı neşter bıçağının arka tarafını kullanarak, proksimal tibiadaki üstteki kas boyunca dikey bir künt diseksiyon yapın ve tibial başın net bir şekilde ortaya çıkması için yumuşak dokuyu çıkarın.
Ameliyathane ışıklarını kapattıktan sonra, büyüme plağının istenen bölgesini aydınlatmak için doğru floresan kanalını seçin. Ardından, femur büyüme plakasının değil, tibial büyüme plakasının hipertrofik büyüme plakası alanının göründüğünden emin olmak için farenin cilt açıklığını biraz daha proksimal ve ardından distal olarak ayarlayın. Salter-Harris Tip II benzeri bir lezyon oluşturmak için, 0,5 milimetrelik diş matkabı frezini hipertrofik büyüme plakası bölgesinin ortasına yerleştirin.
Frez ve uzuvları çalışma yüzeyine paralel tutun, böylece frez giriş yolu epifize açı yapmaz veya tüm yumuşak büyüme plakasından geçmez. Frez dönüşünü başlatmak için matkap pedalına baskı uygulayın ve frezi büyüme plakasına hafifçe bastırın, kusur frez çapından daha derine inmeden önce durun. Herhangi bir kalıntıyı temizlemek için lezyon bölgesini bir damla steril PBS ile sulayın.
Bir periodontal prob kullanarak, kusur derinliğinin 0,5 milimetre olduğunu onaylayın. Ardından, cilt kenarlarını dikkatlice yeniden hizalayın. Ardından, cilt kesisini kapatmak için 5-0 poliglikolik asit sütürlerle kesintili bir dikiş tekniği kullanın.
Doku diseksiyonu için, her iki sağlam arka bacakları ötenazi yapılan hayvandan izole edin ve cildi ve kası kemik ve diz kapsüler bölgesinden çıkarın. Ardından, mikro diseksiyon makası kullanarak patellayı dikkatlice çıkarın. Soğuk% 10 tamponlu formalini diz boşluğunun tüm bölgelerine iyice dağıtmak için 29 gauge insülin şırıngası kullanın.
Son olarak, kemik iliği boşluğuna fiksatif erişimi iyileştirmek için femur ve tibianın diyafiz bölgesini kesin. Eklem dokusunu gazlı bezle ince bir dübelin üzerine bağlayın. Arka bacakları fiksatifin içine koyun ve dokuyu 24 ila 36 saat boyunca tamamen uzatılmış bir pozisyonda tutmak için dört santigrat dereceye yerleştirin.
Yaralı tibialar, kemiğin 2D kesitlerinde ameliyattan üç hafta sonra yaralanmamış kontrollere kıyasla uzunlukta daha az bir büyüme gösterdi. Yaralı büyüme plakaları, hipertrofik zonda bozulma ve proliferatif bölgede sadece hafif bir rahatsızlık ile geçici olarak kalsifiye tabaka gösterdi. Yaralı büyüme plakaları içindeki kemik köprüsü oluşumu, altı farenin hepsinde tutarlı bir şekilde gözlendi ve çoğu, yanal yaklaşıma rağmen, büyüme plakasının ortasına yakın bir yerde oluştu.
Çok renkli floresan yaklaşımı, kemikli köprü alanındaki kondrosit farklılaşmasının ayrıntılı bir şekilde incelenmesini sağlamıştır.
