Dartmouth College'ın Karşılaştırmalı Tıp ve Araştırma Merkezi'ne bu protokolde kullanılan hayvanlar için günlük yetiştiricilik sağladığı için teşekkür ederiz. Ayrıca protokolün test edilmesindeki ve hayvanların fotoğraflanmasındaki yardımları için Leah Jacob ve Adwaita Bose'a da teşekkür ederiz. Son olarak, dövme pratiği eğitimi için Ann Miller'ın laboratuvarına teşekkür ederiz. Bu çalışma, NIH hibesi R00 GM147826 JL'ye tarafından desteklenmiştir.

Açıklanan tüm hayvan prosedürleri, Dartmouth College'ın Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Ekipman kurulumu
NOT: Prosedür için bir iş akışı ve örnek bir tezgah kurulumu dahildir (Şekil 1).
<ol><li>Dövme tabancasını ve ayak pedalını güç kaynağına bağlayın. Ayak pedalını çalışma yüzeyinin altına yerleştirin.</li>
	<li>Dövme tabancasının montajı<ol><li>Bir Alyan anahtarı veya altıgen tornavida kullanarak tutamaktaki vidaları gevşetin (Şekil 2A, kırmızı daire içine alınmış).</li>
		<li>Plastik ucu tutamağın içine sonuna kadar sokun. Yerinde tutmak için vidayı sıkın.</li>
		<li>Metal boruyu tutamağın arkasına yerleştirin (Şekil 2A). Bu ayarlanacaktır, bu nedenle uzunluğunun yarısına kadar yerleştirin. Yerinde tutmak için vidayı sıkın.</li>
		<li>Tutamağın ön tarafındaki plastik uca rahatça oturması için tutamağın arkasından bir dövme iğnesi sokun (Şekil 2B).</li>
		<li>İğnenin ve metal borunun arkasını tüp kelepçesinden kaydırın. Metal boruyu, iğne plastik uca rahatça oturacak şekilde ayarlayın (Şekil 2B). Boru cl'yi elle sıkınamp tüp hareket edemeyecek duruma gelene kadar (Şekil 2C).</li>
		<li>Siyah O-ringi çıkarın ve iğneyi rotor koluna asın; iğneyi yerine sabitlemek için O-ringi değiştirin (Şekil 2C).</li>
	</ol></li>
	<li>Güç kaynağındaki voltajı, cildi delmek için yeterli güç olacak, ancak kontrol edilmesi zor olacak kadar güçlü olmayacak şekilde ayarlayın. Güç kaynağı prize takılıp bağlandıktan sonra, makinenin çalıştığından emin olmak için ayak pedalına basın. İğneyi kendinize veya diğer personele doğrultmamaya dikkat edin. NOT: Bu protokolde kullanılan dövme makinesi en iyi 6.0 ile 9.0 V arasında çalışır, ancak bu, dövme makineleri ve voltaj kaynakları arasında değişebilir ve ampirik olarak belirlenmelidir.</li>
	<li>1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünün kapağını veya sağlanan plastik bir mürekkep kabını siyah dövme mürekkebi ile yaklaşık dörtte üçü kadar doldurun.</li>
</ol>2. Anestezi
<ol><li>Anesteziyi, bir yetişkin dişi X. laevis kurbağasını batıracak kadar büyük bir tankta hazırlayın.<ol><li>Kurbağa için güvenli (klorsuz) su kullanarak, 1,5 g / L'lik son konsantrasyona trikserin ve 3,5 g / L'lik son konsantrasyona sodyum bikarbonat ekleyin. Çözünmesi için karıştırın. Bu çözeltinin pH'ı 7.15'tir. DİKKAT: Trikain tahriş edicidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Bir kurbağayı anestezi tankına batırın. Kurbağanın anestezi uygulanana kadar (7-8 dakika) tricaine solüsyonuna batırılmış halde kaldığından emin olun.<ol><li>Kurbağanın tam olarak uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol etmek için onu kaldırın, baş aşağı tutun ve tek ayağını sıkıca sıkın. Kurbağa ürkmezse veya tepki vermezse, dövme yapılabilir.</li>
		<li>Kurbağaların anestezi alması sürekli olarak 10 dakikadan fazla sürerse, sodyum bikarbonat ile tamponlanmış taze trikain çözeltisi hazırlayın. NOT: Kurbağalar tricaine solüsyonu15'te 30 dakikadan fazla zaman geçirmemelidir.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Dövme
NOT: Canlı bir hayvana dövme yaptırmadan önce, sert bir kabuğu olan bir meyve parçası (limon veya muz gibi) üzerinde pratik yapmak faydalı olabilir.
<ol><li>Dövme yapmadan önce kurbağalar için bir kurtarma tankı hazırlayın. Bir depoyu 10-15 L taze kurbağa için güvenli su ile doldurun ve bir Strafor adası ekleyin. Bu, kurbağanın boğulmadan uyanması için bir yüzey sağlayacaktır. NOT: Fermuarlı bir torba içine yerleştirilmiş bir strafor soğuk nakliye konteynerinin kapağı kullanılarak bir strafor adası yapılabilir.</li>
	<li>Anestezi uygulanmış kurbağayı kuru bir kağıt havlu veya tezgah kağıdı üzerine sırt üstü koyun (Şekil 3A). Kurbağalarla ilgili tüm işler için ağartılmamış (kahverengi) kağıt havlu kullanın.</li>
	<li>Kuru, tüy bırakmayan bir mendil kullanarak kurbağanın göğsündeki suyu ve mukusu silin.</li>
	<li>Kurbağanın göğsünün ortasındaki sternumu parmaklarınızla bulun ve baskın olmayan elinizi kullanarak cildi gergin tutun.</li>
	<li>Kurbağayı işaretlemek<ol><li>Monte edilmiş dövme tabancasını çalışma yüzeyine göre dikey olarak tutun ve iğneyi mürekkebe batırın (Şekil 3B).</li>
		<li>Monte edilmiş dövme tabancasını dikey tutarak, ayak pedalına basmadan önce iğnenin ucunu kurbağanın derisine bastırın. Eşit basınç uygularken kurbağanın derisine çizgiler çizin. NOT: Bazı küçük kanama veya kızarıklıklar, küçük cilt dökülmesi gibi normaldir.</li>
		<li>İğne kurbağanın derisine takılıyorsa, iğnedeki fazla mürekkebi veya cildi bir mendille temizleyin. Dövme sırasında fazla mürekkep olması normaldir.</li>
		<li>Kurbağanın göğsü, işaretlenen alanı net bir şekilde göremeyecek kadar fazla mürekkeple kaplıysa (Şekil 3C), fazla mürekkebi kurbağa için güvenli su ve bir mendille temizleyin (Şekil 3C'). Ardından kuru bir mendille nemi çekin ve mürekkeplemeye devam edin. NOT: Dövme yapmadan önce bir şişe kurbağa için güvenli su hazırlanabilir.</li>
		<li>Fazla mürekkebi sildikten sonra koyu, okunaklı sayılar kalana kadar aynı alanı mürekkeplemeye devam edin (Şekil 3D). Tüm işareti veya sayıyı tek bir vuruşta çizmek yerine, özellikle eğriler için art arda daha küçük vuruşlar yapın.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Kurtarma
<ol><li>Bir kağıt havluyu kurbağa için güvenli suyla ıslatın ve strafor adanın üzerine düz bir şekilde yerleştirin (Şekil 4A).</li>
	<li>Kurbağaların ayakta duran tanklara geri döndürülmesi<ol><li>Kurbağayı suya bakacak şekilde havlunun üzerine göbeği yatırın (Şekil 4B). Kağıt havlunun yarısını kurbağanın arka yarısının üzerine katlayın ve ellerinizi kaplayarak kurbağanın üstünü ıslatın. Bir kurbağa anesteziden çıktığında (dövmeden yaklaşık 1 saat sonra), bağımsız olarak suya girecek ve normal şekilde yüzecektir.</li>
		<li>Dövme tamamen iyileştikten sonra kurbağaları 24 saat sonra uzun süreli konutlara geri koyun.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Temizlik ve ekipman bakımı
<ol><li>Dövme iğnelerinin yeniden kullanılması ve otoklavlanması<ol><li>Mürekkebi gevşetmek için iğneleri %100 izopropanol ve deiyonize suda durulayın ve çözünmemiş kalan mürekkebi ovalayın.</li>
		<li>Fırçaladıktan sonra, iğneleri metal bir otoklav kutusuna yerleştirin veya alüminyum folyo ile sarın ve kuru bir döngüde 30 dakika boyunca otoklavla sarın.</li>
	</ol></li>
	<li>Dövme makinesinin veya diğer ekipmanın parçalarında mürekkep varsa,% 100 etanol ve bir kağıt havluyla silin.</li>
	<li>Anestezik çözelti, yaklaşık% 0.5'lik bir nihai trikin konsantrasyonuna sahiptir. Bunu kurumsal tehlikeli atık yönetimi yönergelerine göre atın.</li>
	<li>Ekipman depolama ve bakımı<ol><li>Mümkünse, dövme makinesini kuru bir odada saklayın. Aşırı nem, elektrikli bileşenlere zarar verir ve makinenin ömrünü kısaltır.</li>
		<li>Dövme makinesini iyi çalışır durumda tutmak için, titreşimlerden22 gevşemediğinden emin olmak için rotor üzerindeki yatağı (Şekil 2C) kontrol edin. Bu, bir Alyan anahtarı veya altıgen tornavida ile sıkılabilir.</li>
		<li>Ayda yaklaşık bir kez, rotor kolundaki yatağı kalın bir yağlama gresi22 kullanarak yağlayın.</li>
		<li>Bazı dövme makinelerinde rotor kolu sıkışabilir ve titremez. Bunu düzeltmek için rotor kolunu çevirin veya yayı iğne alçaltılmış konumda olacak şekilde sıkıştırın (Şekil 2C).</li>
	</ol></li>
</ol>

Amfibi İşaretlemeyi Optimize Etme: Xenopus Dövme Rehberi

<ol>
	<li>Hubrecht, R. C., Carter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3Rs+and+humane+experimental+technique:+Implementing+change.">The 3Rs and humane experimental technique: Implementing change.</a> Animals (Basel). 9 (10), 754 (2019).</li><li>Elkan, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Xenopus+pregnancy+test.">The Xenopus pregnancy test.</a> British Med J. 2, 1253-1256 (1938).</li><li>Vize, P. D., Zorn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+genomic+data+and+browser+resources.">Xenopus genomic data and browser resources.</a> Dev Biol. 426 (2), 194-199 (2017).</li><li>Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Xenopus: A Laboratory Manual. , (2023).</li><li>Borodinsky, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+laevis+as+a+model+organism+for+the+study+of+spinal+cord+formation,+development,+function+and+regeneration.">Xenopus laevis as a model organism for the study of spinal cord formation, development, function and regeneration.</a> Front Neural Circuits. 11, 90 (2017).</li><li>Hoppler, S., Conlon, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus:+Experimental+access+to+cardiovascular+development,+regeneration+discovery,+and+cardiovascular+heart-defect+modeling.">Xenopus: Experimental access to cardiovascular development, regeneration discovery, and cardiovascular heart-defect modeling.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 12 (6), a037200 (2020).</li><li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenbase:+key+features+and+resources+of+the+Xenopus+model+organism+knowledgebase.">Xenbase: key features and resources of the Xenopus model organism knowledgebase.</a> Genetics. 224 (1), 018 (2023).</li><li>Slater, P. G., Hayrapetian, L., Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+laevis+as+a+model+system+to+study+cytoskeletal+dynamics+during+axon+pathfinding.">Xenopus laevis as a model system to study cytoskeletal dynamics during axon pathfinding.</a> Genesis. 55 (1-2), 22994 (2017).</li><li>Bermudez, J. G., Chen, H., Einstein, L. C., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+biology+of+cell+boundary+conditions+through+confinement+of+Xenopus+cell-free+cytoplasmic+extracts.">Probing the biology of cell boundary conditions through confinement of Xenopus cell-free cytoplasmic extracts.</a> Genesis. 55 (1-2), 23013 (2017).</li><li>Stooke-Vaughan, G. A., Davidson, L. A., Woolner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+as+a+model+for+studies+in+mechanical+stress+and+cell+division.">Xenopus as a model for studies in mechanical stress and cell division.</a> Genesis. 55 (1-2), 23004 (2017).</li><li>Blackburn, A. T. M., Miller, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+congenital+kidney+diseases+in+Xenopus+laevis.">Modeling congenital kidney diseases in Xenopus laevis.</a> Dis Model Mech. 12 (4), 038604 (2019).</li><li>Tandon, P., Conlon, F., Furlow, J. D., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+the+genetic+toolkit+in+Xenopus:+Approaches+and+opportunities+for+human+disease+modeling.">Expanding the genetic toolkit in Xenopus: Approaches and opportunities for human disease modeling.</a> Dev Biol. 426 (2), 325-335 (2017).</li><li>Wheeler, G. N., Br&#228;ndli, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+vertebrate+models+for+chemical+genetics+and+drug+discovery+screens:+Lessons+from+zebrafish+and+Xenopus.">Simple vertebrate models for chemical genetics and drug discovery screens: Lessons from zebrafish and Xenopus.</a> Dev Dyn. 236 (6), 1287-1308 (2009).</li><li>Carron, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+origin+of+Hox13-dependent+skin+appendages+in+amphibians.">Evolutionary origin of Hox13-dependent skin appendages in amphibians.</a> Nat Commun. 15 (1), 2328 (2024).</li><li>Schultz, T. W., Dawson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Housing+and+husbandry+of+Xenopus+for+oocyte+production.">Housing and husbandry of Xenopus for oocyte production.</a> Lab Animal. 32 (2), 34-39 (2003).</li><li>Cadillac, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Animal identification systems used for mice. , (2006).</li><li>Donnelly, M. A., Guyer, C., Juterbock, J. E., Alford, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+marking+amphibians.">Techniques for marking amphibians.</a> Meas Monitor Biol Div: Std Meth Amphibians. , 277-284 (1994).</li><li>Hutchens, S. J., Deperno, C. S., Matthews, C. E., Pollock, K. H., Woodward, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visible+implant+fluorescent+marker:+A+reliable+marking+alternative+for+snakes.">Visible implant fluorescent marker: A reliable marking alternative for snakes.</a> Herpetol Rev. 39 (3), 301-303 (2008).</li><li>Hoogstraten-Miller, S., Dunham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+identification+methods+for+African+clawed+frogs+(Xenopus+laevis).">Practical identification methods for African clawed frogs (Xenopus laevis).</a> Lab Animal. 26 (7), 36-38 (1997).</li><li>Loopstra, J. A., Zwart, P., Verhoeff-de Fremery, R., Vervoordeldonk, F. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marking+of+African+clawed+toads+(Xenopus+laevis).+Improvement+of+a+skin+autograft+technique.">Marking of African clawed toads (Xenopus laevis). Improvement of a skin autograft technique.</a> New Dev Biosci: Their Implicat Lab Animal Sci. , 311-316 (1988).</li><li>Rodel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+tropicalis.">Xenopus tropicalis.</a> AmphibiaWeb. , (2001).</li><li>Worldwide Tattoo Supply. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stealth+2+Rotary+Tattoo+Machine+Intro+&amp;+Maintenance.">Stealth 2 Rotary Tattoo Machine Intro &amp; Maintenance.</a> Worldwide Tattoo Supply. , (2015).</li><li>Khan, S. U., Mufti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hot+history+and+cold+future+of+brands.">The hot history and cold future of brands.</a> J Manager Sci. 1 (1), 75-84 (2007).</li><li>Catlett, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+About+Lip+Tattoo:+what+to+Expect,+Cost,+Risks,+Touch-ups+&amp;+More.">All About Lip Tattoo: what to Expect, Cost, Risks, Touch-ups &amp; More.</a> Healthline. , (2019).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rekabet çıkarı beyan etmezler.

İnsanları dövmek binlerce yıl öncesine dayanan bir sanattır ve insanlar kendilerini dövme yaptıkları sürece hayvanları da dövme yapmışlardır veya markalamışlardır23. Hayvanları, özellikle memelileri işaretlemek için ekipman ve teknikler iyi kurulmuş, iyi belgelenmiş ve geniş çapta erişilebilirdir. Hayvanları işaretlemek başlangıçta hayvancılık ve hırsızlık caydırıcılarını ayırt etmek için23 olsa da, biyomedikal araştırmalardaki ...

Hayvan modelleri, insan sağlığı ile ilgili soruları araştırmak için yararlı araçlardır. Uygulamada, hayvan modellerini kullanan biyomedikal araştırmalar, sağlıklı bir hayvan kolonisinin dikkatli bir şekilde düzenlenmesini ve sürdürülmesini gerektirir. Etik hayvan muamelesi ve yetiştiriciliği için en iyi uygulamalar, deney için gereken hayvan sayısını azaltmayı ve hayvan refahını sağlamak için uygulamaları iyileştirmeyi amaçlamaktadır1. Pençeli kurbağa cinsi, Xenopus laevis (X. laevis; Afrika pençeli kurbağası) ve Xenopus tropicalis (X. tropicalis; Batı pençeli kurbağa), X. laevis'in Güney Afrikalı doktorlar tarafından ilk gebelik testlerini yapmak için kullanıldığı 1930'lardan beri biyomedikal araştırmalarda kullanılmaktadır2. Modern hamilelik testleri artık kurbağa gerektirmese de, Xenopus araştırmasının rolü devam ediyor. Biyomedikal araştırmalar için Xenopus kullanmanın avantajları arasında iyi açıklamalı genomları3, büyük yumurta kavramalarının yıl boyunca indüklenebilir yumurtlaması4 ve in vitro fertilizasyona uygun harici olarak bırakılan yumurtalar yer alır. Bu özellikler onları omurgalı embriyolojisi ve gelişimi 5,6,7, temel moleküler ve hücresel biyoloji 7,8,9,10 ve insan hastalıklarının modellenmesi 7,11,12,13 için yararlı bir varlık haline getirir.
Bireysel Xenopus hayvanlarını izlemek için güvenilir yöntemler, biyolojik kopyaları kaydetmek ve araştırmada titizliği ve tekrarlanabilirliği geliştirmek için gereklidir. Xenopus sıklıkla gruplar halinde barındırıldığından, hayvan işaretlemesi araştırmacıların bireysel hayvanları kolayca izlemesine olanak tanır4. Hayvanların doğru bir kaydını tutmak, zamandan ve kaynaklardan tasarruf sağlayabilir ve hayvanların sağlığını takip etme yeteneğini geliştirebilir. Örneğin, hayvanların bireysel olarak tanımlanması, transgenik Xenopus hatları oluşturmak için organizasyon iş akışlarını iyileştirebilir, çünkü bu, hayvanların organizasyonunu ve bireysel olarak tanımlanmasını gerektiren14 dizileme ile doğrulanan belirli genotiplere sahip birden fazla kurbağa nesli gerektirir. Bu, özellikle bu mutasyonlar kolayca ayırt edilebilir yetişkin fenotiplerinden yoksun olduğunda geçerlidir. Benzer şekilde, temel hücresel ve gelişimsel biyolojiyi incelemek için Xenopus oositlerinin ve embriyolarının kullanılması, bireysel hayvanların izlenmesinden fayda sağlar. Yumurtlamayı indükledikten sonra, hiper yumurtlama sendromu gibi sağlık komplikasyonlarını önlemek için hayvanların en az 3 ay dinlenmesi gerekir15. Bireysel tanımlama yöntemleri, hayvanların çok sık yumurtlamaya teşvik edilmemesini sağlar.
Hayvanların işaretlenmesi ve izlenmesi, laboratuvar personelinin hayvanların sağlık sorunlarını izlemesine de olanak tanır. Aynı genotipteki hayvanların hastalanması, transgen ile ilişkili aşırı akrabalı yetiştirme veya beklenmeyen sağlık sorunlarını gösterebilir. Benzer şekilde, son yumurtlamadan sonra hastalanan hayvanlar, reaktifler, malzemeler veya tekniklerle ilgili sorunları gösterebilir. Hayvanları ve sağlıklarını izlemek, laboratuvar personelinin ve veteriner hekimlerin, endişeler yeniden ortaya çıktığında takip etmelerini ve gelecekteki hastalıkları önlemek için önleyici tedbirler almalarını sağlar. Memelilerde çok sayıda tanımlama yöntemi vardır. Fareler için kalıcı yöntemler arasında kulak delme, kulak küpeleri, dövme ve deri altı mikroçipler bulunur16. Bunlar, bir koloni veya kafes içindeki hayvanları net ve güvenilir bir şekilde ayırt edebilir ve laboratuvar personeli tarafından kolayca uygulanabilir. Kulak delme gibi yöntemler minimal invazivdir, yalnızca bir parça özel ekipman gerektirir ve çoğu yaştaki hayvanlar için işe yarar. Bu sistemler fareler için basit ve kullanışlı olsa da, kurbağalarda kullanımları benzersiz bir dizi zorluk sunar. Kurbağalar ve diğer amfibiler bir kulak kepçesinden (dış kulak yapısı) yoksundur. Bazı araştırmacılar hayvanın çenesine, ayak parmağına veya arka bacağına etiketler yapıştırmıştır17,18. Bu yaklaşım çeşitli sorunlara yol açtı: çene etiketleri tahrişe neden oldu ve ajite kurbağalar ön ayaklarıyla etiketleri çıkarmaya çalıştı17. Ayak etiketleri, ayak parmakları arasındaki dokumayı delerek hareketi bozdu ve kaybolma riskini taşıdı. Bu nedenle, amfibiler tanımlama için kendi yöntemlerine ihtiyaç duyarlar. Tarihsel olarak, amfibileri işaretlemek için ayak parmağı kırpma da kullanılmıştır17,19. Ayak parmağı keskin bir makasla kırpılır ve hayvan, ön ayaklardaki ve arka ayaklardaki ayak parmaklarının uzunluğu veya ayak parmağının geriye doğru uzadığı açı (semenderlerde) ile tanımlanabilir. Bununla birlikte, bu yöntem, ayak parmağının kırpılmasının hayvanın hareketini bozabileceğine dair etik kaygıyı ortaya çıkarmaktadır17. Ek olarak, bu kanamaya neden olabilir ve enfeksiyon riski oluşturabilir. Kurulan bir diğer işaretleme sistemi, kurbağanın bir kısmından derinin alındığı ve cerrahi olarak başka bir kısmına tutturulduğu deri otogreftleridir. Örneğin, bir kurbağanın sırtını veya omzunu göğsünden20 açık renkli bir deri grefti kullanarak işaretlemek için bir yöntem tarif edilmiştir. Deri greftleri ayrıca sınırlamalar ve risklerle birlikte gelir: prosedür invazivdir ve potansiyel olarak ölümcül bir rahatsızlık olan Aeromonas hydrophila enfeksiyonu veya kırmızı bacak riskini ortaya çıkarır; otogreftin tamamen iyileşmesi 6 haftaya kadar sürer; Ve açıklanan yöntemlerle, bir otogreft20 koymak için sınırlı yerler nedeniyle sadece 6 kurbağa bir arada barındırılabilir.
Daha az invaziv markalama yaklaşımları arasında cam boncuklar ve transponder yongalarıbulunur 17,19. Cam boncuk yönteminde, cam boncuklar küçük bir dikişe geçirilir ve kurbağanın derisine dikilir. Bu, en az 60 farklı renk kombinasyonu ile deri otogreftlerinden daha fazla değişkenlik sağlar. Bununla birlikte, dikişin dışarı çıkma ve boncukların kaybolmasına neden olma riski vardır. Alternatif olarak, kurbağanın dorsal lenf kesesinde deri altına bir mikroçip transponder implante edilebilir. Bu, en kalıcı işaretleme yöntemi olarak kabul edilir ve potansiyel olarak sonsuz sayıda hayvanın ayrı ayrı tanımlanmasını ve kataloglanmasını sağlar. Bununla birlikte, bu aynı zamanda en pahalı yöntemdir, çünkü bireysel mikroçipler pahalıdır ve büyük bir koloninin işaretlenmesi maliyetli olacaktır. Mikroçipler ayrıca19'u okumak için özel bir tarayıcı gerektirir. Xenopus tanımlaması için yaygın bir yaklaşım, hayvanların doğal renklendirmesine ve desenlerine atıfta bulunmaktır. Bu, özellikle yetişkinlik boyunca kalan farklı desenlere sahip olan X. laevis gibi kurbağalar için iyi çalışır. Bununla birlikte, bu desenler zamanla stresle değişebilir ve kurbağalar şeffaf ve renkli kaplar arasında hareket ettirildiğinde renklenme farklı görünebilir15. Ek olarak, bu tanımlama yöntemi, X. laevis'e kıyasla daha az belirgin işaretleme desenlerine sahip olan X. tropicalis veya renk işaretlemesi olmayan albino hayvanlar için daha az kullanışlıdır21. Farklı işaretlere sahip türler için bile, laboratuvar personeli işaretlerin yerleşimini ve boyutunu farklı şekilde yorumlayabilir ve bu da tanımlamada hatalara neden olabilir. Bu nedenle, hayvanları fotoğraflamak, ek bir tanımlama yöntemiyle birlikte en güvenilir olanıdır. Bu nedenle, Xenopus hayvanlarını kolayca ayırt edilebilir, kalıcı ve minimal invaziv bir teknik kullanarak işaretlemeye ve tanımlamaya çalışıyoruz.
Amfibilere dövme yapma yöntemlerini açıklayan sınırlı sayıda yayınlanmış kaynak vardır. Dövme, ısı markaları, gümüş nitrat markaları ve donma markaları dahil olmak üzere diğer markalama teknikleriyle birlikte tanımlanmıştır17. Aynı kaynakta, 27G hipodermik iğne ile rakamlar çizilerek dövme yapıldı ve işlemin, bir rakam veya başka bir işaret şeklinde bir tel kullanan diğer markalama tekniklerinin aksine, enfeksiyona neden olmadığı not edildi. Başka bir kaynakta, kurbağaları işaretlemek için bir elektrikli dövme makinesi (titreşimli bir iğne olarak tanımlanır) kullanıldı, ancak teknik hakkında çok az ayrıntı verildi 17,19. Yazarlar, kurbağanın koruyucu balçık tabakasını rahatsız ederek bu prosedürün kırmızı bacak riskini artırdığı konusunda uyarıyorlar. Hem tamamen noninvaziv (fotoğraflar gibi) hem de kalıcı (mikroçipler gibi) bir işaretleme veya tanımlama yöntemi olmasa da, dövme etkili bir uzlaşma sağlar. Dövme, deri otogreftleri gibi diğer tekniklere kıyasla nispeten basittir. Ek avantajlar arasında daha küçük bir öğrenme eğrisi ve nispeten ucuz ekipman bulunur. Sucul amfibileri dövmek, araştırmacıları korkutabilecek ve başarılı hayvan işaretlemesini bozabilecek bazı zorluklarla birlikte gelir. Bu makale, araştırmacılara yetişkin Xenopus'u döner bir dövme makinesiyle dövme yapmak için iyi belgelenmiş yöntemler sağlamayı amaçlamaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 needle round liners</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>1203RLB</td>
			<td>Packaged sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 Needle Round Disposable ULTRA</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>HTIPRS5-U</td>
			<td>Packaged sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 needle round liners</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>1205RLB</td>
			<td>Packaged sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7 needle round liners</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>1207RLB</td>
			<td>Packaged sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Cord</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foot pedal</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inkpots</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes, delicate task wipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RCA Connection</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scream Ink Pitch Black, 1oz</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>SI101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel grips</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine Box Set</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>STEALTH2-SET</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam island</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This is the lid of a styrofoam cold shipping container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (ethyl 3-aminobenzonate methanesulfate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td>CAUTION: IRRITANT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unbleached paper towels</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>2U229</td>
			<td>Paper towels MUST be unbleached, bleach is toxic to amphibians</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Voltage Supply</td>
			<td>Worldwide Tattoo Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash bottle (with frog-safe water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0340923T</td>
			<td>Frog safe water is dechlorinated, pH 7.0-8.5, conductivity 1200-1800 uS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X. laevis adult female</td>
			<td>Xenopus1</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zip-top plastic bag</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This bag should be large enough to hold the styrofoam island</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for tattooing xenopus laevis with a rotary tattoo machine

Hayvan modelleri, biyomedikal araştırmaların kapsamını genişleterek gelişimsel, moleküler ve hücresel biyoloji anlayışımızı geliştirir ve araştırmacıların insan hastalıklarını modellemesine olanak tanır. Bireysel hayvanları kaydetmek ve izlemek, araştırmacıların çalışma için gereken hayvan sayısını azaltmasına ve hayvan refahını iyileştirmek için uygulamaları iyileştirmesine olanak tanır. Memelileri işaretlemek ve izlemek için kulak delme ve kulak küpeleri de dahil olmak üzere iyi belgelenmiş birkaç yöntem mevcuttur. Bununla birlikte, sucul amfibi türlerini işaretleme yöntemleri sınırlıdır, mevcut kaynaklar modası geçmiş, etkisiz veya aşırı derecede maliyetlidir. Bu el yazmasında, Xenopus laevis'i döner bir dövme makinesiyle işaretlemek için yöntemleri ve en iyi uygulamaları özetliyoruz. Doğru dövme, yüksek kaliteli dövmelerle sonuçlanır, bireyleri araştırmacılar için kolayca ayırt edilebilir hale getirir ve hayvanların sağlığı için minimum risk oluşturur. Ayrıca, hızla solan ve hayvanlara gereksiz yere zarar veren dövmelere neden olabilecek düşük kaliteli dövmelerin nedenlerini de vurguluyoruz. Bu yaklaşım, araştırmacıların ve veteriner hekimlerin amfibileri işaretlemelerine, biyolojik kopyaları ve transgenik çizgileri izlemelerine ve hayvan sağlığının doğru kayıtlarını tutmalarına olanak tanır.

Yüksek kaliteli dövmeler, kurbağanın göğsünde koyu, okunaklı vuruşlara sahip olacak ve birkaç metre uzaklıktan net bir şekilde ayırt edilebilecektir (Şekil 5A). Genel olarak, daha büyük sayılar ve işaretler okunabilirlik için daha iyidir, ancak daha uzun adlar ve sayılar kurbağanın göğsüne rahatça sığacak şekilde küçültülebilir. Dövmenin uzun ömürlülüğünü değerlendirmek daha zordur, ancak yüksek kaliteli kurbağa dövmeleri en az 3-6 ay boyunca kara...

Yazar Spot Işığı: Biyomedikal Çalışmalar için Xenopus laevis İşaretleme Tekniklerinin Rafine Edilmesi

Burada, yetişkin Xenopus laevis'i (Afrika pençeli kurbağası) döner bir dövme makinesi ile dövme yöntemlerini açıklıyoruz. Doğru dövme, birkaç ay süren ve hayvanları araştırma ve kayıt tutma amaçları için kolayca ayırt edilebilir hale getiren koyu, kolay okunabilir rakamlarla sonuçlanır.

Xenopus laevis'i Döner Dövme Makinesi ile Dövme Yöntemleri

Animal models expand the scope of biomedical research, furthering our understanding of developmental, molecular, and cellular biology and enabling ...

methods-for-tattooing-xenopus-laevis-with-a-rotary-tattoo-machine

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Tattooing Xenopus laevis with a Rotary Tattoo Machine

548 Görüntüleme.  Dartmouth College. Araştırmamız, Xenopus yumurta özleri ve desteklenen lipid çift katmanları kullanarak hücre korteksinin organizasyonunu araştırmaya odaklanmıştır. Dinamik hücre iskeleti modellerinin korteks içinde nasıl düzenlendiğini ve bu modellerin hücre bölünmesi gibi temel hücre fonksiyonlarını nasıl desteklediğini anlamaya çalışıyoruz. Bu protokol, Xenopus laevis'i işaretlemek için etkili ve güvenli bir yöntemin ana hatlarını çizmekte...

Video: Yazar Spot Işığı: Biyomedikal Çalışmalar için Xenopus laevis İşaretleme Tekniklerinin Rafine Edilmesi

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic sections maintain true tissue morphology in thin sections of tissue that can be immunostained with fluorescent secondary antibodies, making this method more useful than paraffin-embedded or frozen sections for many types of tissue. The method for staining, plastic embedding, and sectioning is demonstrated in this video.

Plastik gömülmesi ve Xenopus laevis Embriyolar Kesit

Biyoloji

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Xenopus laevis Yumurta hazırlanması ve Fraksiyonu ayıklar.

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic transport. Because of its large nucleus and high density of nuclear pore complexes (NPCs), nuclear transport can be easily visualized in the Xenopus oocyte. Much insight into the mechanisms of nuclear import and export has been gained through use of this system (reviewed by Pant&eacute;, 2006). In addition, we have used microinjection of Xenopus oocytes to dissect the nuclear import pathways of several viruses that replicate in the host nucleus. 
Here we demonstrate the cytoplasmic microinjection of Xenopus oocytes with a nuclear import substrate. We also show preparation of the injected oocytes for visualization by thin-sectioning EM, including dissection, dehydration, and embedding of the oocytes into an epoxy embedding resin. Finally, we provide representative results for oocytes that have been microinjected with the capsid of the baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) or the parvovirus Minute Virus of Mice (MVM), and discuss potential applications of the technique.

Here we demonstrate cytoplasmic microinjection of Xenopus laevis oocytes with a nuclear import substrate, as well as preparation of the injected oocytes for visualization by thin-sectioning electron microscopy.

Xenopus laevis Oosit, Mikroenjeksiyon

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development of a larger region of the embryo. This makes defining its role in a particular tissue difficult to analyze. For example, noggin overexpression in Xenopus laevis embryos causes the expansion of the entire anterior region, including the eye1,2. From this result, it is not known if Noggin plays a direct role in eye determination or that by causing an expansion of neural tissue, Noggin indirectly affects eye formation. Having this complex phenotype makes studying its eye-specific role in cell fate determination difficult to analyze. We have developed an assay that overcomes this problem. Taking advantage of the pluripotent nature of the Xenopus laevis animal cap 3, we have developed an assay to test the ability of gene product(s), like noggin or the eye field transcription factors (EFTFs), to transform caps into particular tissue or cell types by transplanting this tissue onto the side of the embryo 4. While we have found either Noggin protein treatment or a collection of transcription factors can determine retinal cell fate in animal caps, this procedure could be used to identify gene product(s) involved in specifying other tissues as well.

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Animal caps overexpressing gene product(s) are transplanted to the flank of developing Xenopus laevis embryos in order to establish whether tissue is determined.

Doku belirlenmesi Hayvan Cap Nakli (ACT) Testi Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes in cell surface area and cell height, and where cells undergo mitosis and migrate. Furthermore, epithelial cells can also regulate morphogenetic movements in adjacent tissues1. A traditional method to study epithelial cells and tissues involve chemical fixation and histological methods to determine cell morphology or localization of particular proteins of interest. These approaches continue to be useful and provide "snapshots" of cell shapes and tissue architecture, however, much remains to be understood about how cells acquire specific shapes, how various proteins move or localize to specific positions, and what paths cells follow toward their final differentiated fate. High resolution live imaging complements traditional methods and also allows more direct investigation into the dynamic cellular processes involved in the formation, maintenance, and morphogenesis of multicellular epithelial sheets. Here we demonstrate experimental methods from the isolation of animal cap tissues from Xenopus laevis embryos to confocal imaging of epithelial cells and simple measurement approaches that together can augment molecular and cellular studies of epithelial morphogenesis.

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonic epithelia are an ideal model system to study cell behaviors such as polarity development and shape change during epithelial morphogenesis. Traditional histology of fixed samples is increasingly being complemented by live-cell confocal imaging. Here we demonstrate methods to isolate frog tissues and visualize live epithelial cells and their cytoskeleton using live-cell confocal microscopy.

Canlı hücre Görüntüleme ve Kantitatif Analiz Embriyonik Epitel Hücreleri Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. To identify where signaling pathways and tissues act during patterning of the developing face, a 'face transplant' technique has been developed in embryos of the frog Xenopus laevis. A region of presumptive facial tissue (the "Extreme Anterior Domain" (EAD)) is removed from a donor embryo at tailbud stage, and transplanted to a host embryo of the same stage, from which the equivalent region has been removed. This can be used to generate a chimeric face where the host or donor tissue has a loss or gain of function in a gene, and/or includes a lineage label. After healing, the outcome of development is monitored, and indicates roles of the signaling pathway within the donor or surrounding host tissues. Xenopus is a valuable model for face development, as the facial region is large and readily accessible for micromanipulation. Many embryos can be assayed, over a short time period since development occurs rapidly. Findings in the frog are relevant to human development, since craniofacial processes appear conserved between Xenopus and mammals.

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

A technique for transplanting "Extreme Anterior Domain" facial tissue between Xenopus laevis embryos has been developed. Tissue can be moved from one gene expression background into another, allowing the study of local requirements for craniofacial development and for signaling interactions between facial regions.

Yüz Nakli<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyolar

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of neurulation, migrates extensively towards various organs, and differentiates into many types of derivatives (neurons, glia, cartilage and bone, pigmented and endocrine cells). In this protocol, we describe how to dissect the premigratory cranial NC from Xenopus laevis embryos, in order to study NC development in vivo and in vitro. The frog model offers many advantages to study early development; abundant batches are available, embryos develop rapidly, in vivo gain and loss of function strategies allow manipulation of gene expression prior to NC dissection in donor and/or host embryos. The NC explants can be plated on fibronectin and used for in vitro studies. They can be cultured for several days in a serum-free defined medium. We also describe how to graft NC explants back into host embryos for studying NC migration and differentiation in vivo.

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

This protocol describes how to dissect premigratory cranial neural crest (NC) from Xenopus laevis neurulas. These explants can be plated on fibronectin and cultured in vitro, or grafted back into host embryos. This technique allows studying the mechanisms of NC epithelium-to-mesenchyme transition, migration, and differentiation.

Diseksiyonu<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Sinir Crest için<em&gt; In vitro</em&gt; Eksplantasyon Kültür veya<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantasyon

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and widely-utilized +TIPs for analyzing MT dynamics is the End-Binding protein, EB1, which binds all growing MT plus-ends, and thus, is a marker for MT polymerization1. Many studies of EB1 behavior within growth cones have used time-consuming and biased computer-assisted, hand-tracking methods to analyze individual MTs1-3. Our approach is to quantify global parameters of MT dynamics using the software package, plusTipTracker4, following the acquisition of high-resolution, live images of tagged EB1 in cultured embryonic growth cones5. This software is a MATLAB-based, open-source, user-friendly package that combines automated detection, tracking, visualization, and analysis for movies of fluorescently-labeled +TIPs. Here, we present the protocol for using plusTipTracker for the analysis of fluorescently-labeled +TIP comets in cultured Xenopus laevis growth cones. However, this software can also be used to characterize MT dynamics in various cell types6-8.

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

The MATLAB-based, open source software package, plusTipTracker, can be used to analyze image series of fluorescently-labeled +TIPs to quantify microtubule dynamics.

Içinde Mikrotubul Dynamics Tedbir plusTipTracker Yazılım Kullanma<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Büyüme Konileri

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The initiation step, which involves the assembly of the ribosomal subunits at the mRNA initiation codon, involved initiation factor including eIF4G1. Defects in this rate limiting step of translation are linked to diverse disorders. To study the potential consequences of such deregulations, Xenopus laevis oocytes constitute an attractive model with high degrees of conservation of essential cellular and molecular mechanisms with human. In addition, during meiotic maturation, oocytes are transcriptionally repressed and all necessary proteins are translated from preexisting, maternally derived mRNAs. This inexpensive model enables exogenous mRNA to become perfectly integrated with an effective translation. Here is described a protocol for assessing translation with a factor of interest (here eIF4G1) using stored maternal mRNA that are the first to be polyadenylated and translated during oocyte maturation as a physiological readout. At first, mRNA synthetized by in vitro transcription of plasmids of interest (here eIF4G1) are injected in oocytes and kinetics of oocyte maturation by Germinal Vesicle Breakdown detection is determined. The studied maternal mRNA target is the serine/threonine-protein-kinase mos. Its polyadenylation and its subsequent translation are investigated together with the expression and phosphorylation of proteins of the mos signaling cascade involved in oocyte maturation. Variations of the current protocol to put forward translational defects are also proposed to emphasize its general applicability. In light of emerging evidence that aberrant protein synthesis may be involved in the pathogenesis of neurological disorders, such a model provides the opportunity to easily assess this impairment and identify new targets.

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Protein synthesis control occurs mainly at the translation initiation step, deficiencies in which are linked to diverse disorders. To better understand their etiology, we described here a protocol using Xenopus laevis oocytes assessing the translation of mos transcript in the presence of a mutant of translation initiation factor eIF4G1.

Ksenopus Translation Düşüklüğü Belirlemek için Bir Model Olarak laevis

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The ...

Methods Article

Xenopus laevis'i Döner Dövme Makinesi ile Dövme Yöntemleri