Denne studien beskriver en reproduserbar stor dyremodell av nyre iskemi reperfusjonsskade, som kan brukes til å studere patofysiologien til akutt nyreskade, og utforske potensielle terapeutiske modaliteter. Denne metoden er svært reproduserbar og minimerer virkningen av inflammatorisk respons ved å begrense mengden fornærmelse mot kroppen sammenlignet med en åpen tilnærming. Denne prekliniske modellen etterligner kliniske scenarier, for eksempel nyretransplantasjon, nyrehyperfusjon etter kardiogent sjokk, transkateterprosedyrer som resulterer i nyre iskemi og kardiovaskulære prosedyrer med langvarige kardio-sirkulasjonsstanstider.
Til å begynne med desinfiserer du høyre sideområde av nakken ved å bruke betadin og deretter 95% etanol tre ganger. Draper dyret på en steril måte. Utfør en nedskjæring for kateterisering av riktig halspulsåre og høyre jugulær vene.
Trekk tilbake sternocleidomastoid muskelen lateralt, og disseker den ned til høyre halspulsåre og høyre jugular vene. Sett inn en 5F angiografihylse i både arterien og venen. Fest den med en silke 2-0 sutur.
Sett inn en 5F angiografihylse ved hjelp av Seldinger-teknikken i venstre lårarterie ved å punktere arterien med en hul nål. Sett inn en soft-tip ledevaier gjennom lumen og før den inn i lårbensarterien. Hold ledevaieren godt fast med en hånd mens du fjerner kanylen.
Før angiografihylsen over ledevaieren inn i lårarterien og trekk ledevaieren tilbake ved hjelp av ultralydveiledning om nødvendig. Intravenøst administrere 200 IE per kilo natrium heparin for å oppnå systemisk antikoagulasjon. For å utføre angiografi, injiser et jodet kontrastmiddel under fluoroskopi for å identifisere nyrearteriene.
Identifiser nyrearteriene og før ledevaieren manuelt i ledekateteret. Plasser 5F JL4 ledekateteret i venstre nyrearterie gjennom høyre halspulsåre. Plasser det andre 5F JL4 ledekateteret i høyre nyrearterie gjennom venstre lårarterie.
Bruk ledevaierne til å dirigere en 5F perkutan transluminal angioplastikk, eller PTA-dilatasjonskateter, i hver nyrearterie. Plasser hvert ballongkateter på plass, og koble en trykkledning til hvert kateter. Kontroller tilstedeværelsen av arterielle pulsbølgeformer i trykkmonitoren for å sikre riktig posisjonering av kateteret.
Blås opp hver ballong og sikt på et trykk på ca. 2,5 atmosfærisk trykk inne i ballongen. For å bekrefte opphør av blodstrømmen til nyrene, observere sammenslåingen av pulsbølgeformen på spissen av ballongkateteret. Injiser jodkontrastmedium i en 1:1 fortynning med saltvann og kontroller om nyrefartøyene er opacification.
Etter 60 minutter med okklusjon, tøm forsiktig og fjern ballongkateterene fra nyrearteriene. Utfør en angiografi ved hjelp av et 1:1 fortynnet kontrastmedium for å bekrefte nyrearterie patency og etablering av nyrereperfusjon. Fjern 5F-angiografihylsen fra venstre lårarterie.
Påfør fra trykk på kateteriseringsstedet i 30 minutter. Reverser effekten av heparin ved administrering av tre milligram per kilo protamin til normalisering av aktiv koaguleringstid. For å prøve urin i den postoperative perioden, fest et rør til Foley-kateteret med en silke 2-0 sutur ved hjelp av en avbrutt maske på huden.
For blodprøvetaking, la angiografihylsene i riktig halspulsåre og høyre jugularvene være på plass, og sikre dem med en silke 2-0 sutur. administrer tre milligram per kilo bupivacaine på snittstedet for å minimere smerte. Fortsett å hydrere dyret med 0,9 natriumklorid i totalt to timer etter slutten av iskemi.
Lukk nakkesnittet med en silke 2-0 sutur ved hjelp av en avbrutt søm i to lag. Plasser en fentanylplaster på 25 til 50 mikrogram i timen på baksiden av dyret for å minimere postoperativ smerte, og overvåk dyret på mekanisk ventilasjon til det våkner. Samle de endelige blod- og urinprøvene og beregn urinutgangen.
Utfør et midline laparotomi snitt ved hjelp av et størrelse-10 blad fra xiphoid ned til midt bekkenet. Bruk en rett lateral retraktor for å trekke tilbake bukhuden. Disseker de laterale bukalfestene på bukveggen for å eksponere høyre og venstre retroperitoneum.
Identifiser og disseker både nyrearterier og årer. Ligate både nyrearterier og årer med en 2-0 silke sutur og utføre bilaterale nephrectomies å samle hele vev prøver for histologisk og metabolsk analyse. Nyrefunksjonen ble vurdert ved å bestemme urinutgangen, eGFR, plasmakreatin og BUN.
Etter 60 minutter med bilateral nyrearterie okklusjon, urinproduksjonen ble betydelig redusert og forble på denne måten på seks og 24 timer etter reperfusjon. Tilsvarende ble det observert en betydelig reduksjon i eGFR, som falt fra baseline sammenlignet med slutten av iskemi på to timer, seks timer og 24 timers reperfusjon. Plasmakreatinin ble signifikant økt ved to, seks og 24 timer reperfusjon sammenlignet med baseline.
BUN ble økt sammenlignet med baseline ved seks og 24 timers reperfusjon. Tydelige nekrotiske og hemorragiske områder ble ujevnt fordelt i begge nyrene på slutten av de 60 minuttene med bilateral nyre iskemi og 24 timers reperfusjon. Massons trichrome farging avslørte konfluent coagulativ nekrose, som lå ved proksimale tubuli av nyrebarken.
Plastinnbygde seksjoner ble også vurdert. Alle Massons trichrome lysbilder ble evaluert for cellenekrose, tap av børstekant, støpt formasjon og tubule dilatasjon. Akutt rørformet nekrose, eller ATN-skåring, viste betydelig skade på nyrebarken og medulla.
Når du utfører denne protokollen, kontroller plasseringen av ballongstedene på nærhet av RC, og fullstendig okkluder strømmen til nyrene. Pass på at den ikke knekker i vannet. Etter denne prosedyren kan endovaskulære kateterstrømsonder settes inn i nyrearteriene for å vurdere nyreblodstrøm, eller nyrebiopsier kan utføres for å vurdere nyrevevsskade.
