Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

אנו מודים לפרופ' סילביה בלמקר על השימוש באינסטרון שלה ולפרופ' ג'ורג' כריסט על השימוש בחלל הניתוח שלו, כמו גם במחזיק ובידית האחיזה המודפסים בתלת מימד. עבודה זו נתמכה על ידי UVA-Coulter Translational Research Partnership ומשרד ההגנה האמריקאי (W81XWH-19-1-0157).

למחברים אין מה לחשוף.

הפרוטוקול בולט במספר יתרונות. למיטב ידיעתנו, זהו התיאור הראשון שפורסם של USLS במודל החולדות והוא יספק לחוקרים עתידיים צעדים הניתנים לשחזור לביצוע הליך זה במסגרת המחקר. שנית, אנו כוללים פרוטוקול חדשני לבדיקת מתיחה של הממשק המקורי והכירורגי של USL. פרוטוקול בדיקת המתיחה יכול לשמש במחקרים דומים החוקרים גישות חדשות להנדסת רקמות להגברת תיקוני רקמות מקוריים כגון USLS. יתר על כן, מודל החולדות עצמו שימושי לחקר הפרעות ברצפת האגן בשל קלות הטיפול/עלייה למטוס, תוחלת חיים קצרה ויעילות כלכלית בהשוואה למודלים גדולים יותר של בעלי חיים. מגבלות הפרוטוקול כוללות חוסר יכולת להעריך את אחד הסיבוכים העיקריים של USLS, קימוט השופכה. למרות זאת, לא היו לנו מקרים של פגיעה משוערת בשופכה במחקר זה. שיקול נוסף הוא שהכיוון האופקי של האגן, יחס תעלת ראש ללידה עוברית קטנה והיעדר צניחה ספונטנית במודל החולדה אכן מגבילים חלק מהישימות של התוצאות לבני אדם. עם זאת, השימוש בחולדות מרובות הוא חוזקו של מחקר זה מכיוון שהוא מהווה את גורם הסיכון המוביל בהתפתחות POP3.
קביעת פרוטוקול מוצלח לכריתת רחם ו-USLS בחולדת לואיס תהיה כלי שימושי לחוקרים עתידיים שיחקרו רכיבים כירורגיים של POP, תוך מזעור השונות בבדיקת ההתנהגות המכנית של USL. מודלים כירורגיים של בעלי חיים מועילים בכך שהם מאפשרים לחוקרים לתכנן ניסויים רלוונטיים מבחינה קלינית השולטים בזוגיות, מסת גוף, מחלות ותזונה34 תוך הפחתת הסיכון האתי של מחקר ראשוני בבני אדם. יתר על כן, מודלים סטנדרטיים עבור POP מאפשרים לחוקרים לעקוף את המגבלות של איסוף רקמות אנושיות. בפרט, שיטות בדיקת המתיחה המתוארות בפרוטוקול זה יאפשרו עקביות בין המחקרים. מודלים קודמים של מכרסמים בדקו את התכונות המכניות של אזור האגן כולו, הכולל את צוואר הרחם, הנרתיק, ורצועות התמיכה המרובות של האגן29,42. השיטות המתוארות כאן מאפשרות מדידה של USL באופן השומר על החיבורים הטבעיים של עמוד השדרה וצוואר הרחם. יש לציין כי שיטות בדיקת המתיחה אינן מעריכות את ה-USL בלבד, אלא את ה-USL בשילוב עם הכנסתו לעצם העצה וצוואר הרחם. זהו חוזקו של המחקר שכן הוא משקף את הכוחות הרגילים באתרם אליהם נתונה הרצועה. אנו מכירים בכך שההתנהגות המכנית של הרצועה המבודדת הייתה שונה אם היא הייתה נבדקת ex vivo ללא החיבורים המקוריים שלה. הדבר נכון במיוחד מכיוון שמבני החולדות קטנים ומגבילים את הכדאיות של איסוף דגימה המתאימה לבדיקת ex vivo. ה-USLs אכן חווים טעינה במספר כיוונים באתרם, כך שהאופי החד-צירי של הבדיקה מהווה מגבלה, אך שימוש בשיטה זו מאפשר השוואה משמעותית בין מחקרים קודמים של מכניקת USL של חולדות29,42. אמנם אין כיום פרוטוקול בדיקה מכני סטנדרטי מקובל, אך מודל זה יהווה כלי שימושי ללימודי הנדסת רקמות עתידיים בתחום.
מספר צעדים המתוארים בפרוטוקול זה הם קריטיים לבריאותם ולרווחתם של בעלי החיים, כמו גם ליכולת השחזור של ניתוח USLS ובדיקות המתיחה שלאחר מכן. ראשית, חיוני להשיג הן את משכך הכאבים והן את התרופות האנטי דלקתיות המתוארות כמשכך כאבים בלבד נמצא כבלתי מספק לטיפול בכאב. האנטיביוטיקה המניעתית מפחיתה את הסיכון לזיהום באתר הניתוח והיא הטיפול הסטנדרטי בניתוחים בבני אדם. לגבי ההליך הכירורגי USLS, הימנעות מנזק לשחלות ומזעור איבוד הדם חיוניים לניתוח מוצלח. שלבים 1.3.3 ו-1.3.4 מתארים הפרדה בין החלק העליון של קרן הרחם לבין השחלה הסמוכה; יש להקפיד לשמור על דיסקציה זו בצד קרן הרחם כדי למנוע הפרעה של כלי דם עדינים סביב השחלה, אשר יכול לגרום לדימום מוגזם. יש לציין כי חוקרים אחרים הראו כי תפקוד השחלות נשמר לאחר הסרת קרני הרחם43. יתר על כן, אם השחלות משובשות או מוסרות, ארכיטקטורת סיבי הקולגן הכוללת תופרע, ותשנה את התכונות המכניות של רקמותיו44,45. ברגע שקרן הרחם מופרדת בבטחה מהשחלה, קיים מישור ברור של דיסקציה המאפשר בידוד של קרן הרחם מכריות השומן וכלי הדם שמסביב. למרות המישור הברור של דיסקציה, יש לאבטח את הפדיקרים לאורך קרן הרחם עם מהדק לפני הטרנסקציה עם מספריים מיקרו. בניגוד לפרקטיקה הכירורגית בבני אדם, מצאנו כי קשירת תפרים של פדיקור כריתת הרחם מיותרת, שכן הידוק הפדיקל לפני הטרנסקציה מבטיח המוסטאזיס נאות. שלב 1.3.6 של הפרוטוקול מתאר תהליך זהיר זה כדי למזער את איבוד הדם. בעת ביצוע כריתת הרחם, יש להקפיד מאוד על זיהוי השופכנים כאמור בשלבים 1.3.6 ו-1.3.8. הבנת הקרבה האנטומית של השופכן היא קריטית, שכן אחד הסיבוכים הנפוצים ביותר הקשורים USLs בבני אדם הוא פגיעה בשופכה46.
לסיכום, אנו מציגים פרוטוקול חדשני לביצוע כריתת רחם, מתלה רצועה רחמית ובדיקת מתיחה של USL במודל חולדה. אנו צופים כי ממצאינו יסייעו לחוקרים מדעיים בסיסיים עתידיים על ידי מתן תיאור ברור וניתן לשחזור של הליכים אלה ובכך יאפשרו לקדם את המחקר בצניחת איברי האגן.

צניחת איברי האגן (POP) היא הפרעה נפוצה ברצפת האגן המשפיעה על מיליוני נשים ברחבי העולם עם פוטנציאל להשפיע באופן משמעותי על היבטים רבים בחיי האישה, במיוחד עם גילשנה. יש לציין כי כ-13% מהנשים בארה"ב יעברו ניתוח לצניחה או בריחת שתן2. מצב שכיח ביותר לאחר הריון ולידה, צניחה מאופיינת בירידה של איברי האגן, בעיקר את המדורים השונים של הנרתיק ו/או הרחם, מעבר למיקומם הרגיל בחלל הצפק. זה מוביל לתסמינים מטרידים של בליטה או לחץ בנרתיק, מעיים, שלפוחית השתן ותפקוד מיני, וירידה כללית באיכות החיים. גורמי סיכון אחרים ל-POP כוללים השמנת יתר, שימוש בטבק, שיעול כרוני ועצירות3.
אצל נשים בריאות, איברי רצפת האגן נתמכים על ידי שרירי הלבטור, רצועות הרחם (USLs), רצועות קרדינליות, חיבורי רקמות חיבור לדופן האגן והמבנים הדיסטליים של גוף הפרינאום 4,5. ה-USLs הם בין המבנים התומכים האפיקליים החשובים ביותר הן עבור הרחם והן עבור הנרתיק האפיקאלי, ולכן הם משמשים לעתים קרובות לתיקון כירורגי של POP (איור 1). התמיכה המבנית של USL נובעת מרקמת החיבור הקולגן הצפופה באזור העצה שהופכת לשריר חלק צפוף. בשל שיפוע הרכב זה, USL הופך להיות שזור עם שרירי הרחם והנרתיק כדי לספק תמיכה יציבה לאברי האגן 6,7. במתלה הרצועה הרטוסאקרלית (USLS), ה-USL מאובטחים לקמרון הנרתיק לאחר כריתת רחם, ומחזירים את הנרתיק ואת המבנים הסובבים אותו למיקומם האנטומי בתא הבטן. עם זאת, ללא קשר למסלול טרנס-וגינלי או לפרוסקופי, הליך USLS סובל משיעור כישלון גבוה יחסית של עד 40% בחלק מהמחקרים 8,9. שיעור ההישנות של תסמיני בליטה נרתיקית מטרידים 5 שנים לאחר התיקון לצניחת תא אפיקלי, כגון USLs, היה כ -40% בניסוי אקראי מבוקר רב מרכזי גדול9. באותו ניסוי, טיפול חוזר בצניחה חוזרת לאחר 5 שנים היה כ -10%. המנגנון של שיעור כישלון גבוה זה לא נחקר, אך החזרת הנרתיק והמבנים הסובבים אותו למיקומם האנטומי דורשת מיקום תפרים באזור הקולגן הצפוף של USL10,11 ולא באזור השריר החלק. לכן, שיעור הכישלון הגבוה יכול לנבוע מאי התאמה מכנית וקומפוזיציונית של ממשק הנרתיק-USL שנוצר בניתוח בהשוואה לאינטגרציה המלאה שנראתה בחיבור הצווארי-USL המקורי.
ההשפעה הכלכלית של הטיפול בהפרעות אלה בולטת גם היא, כאשר כ-300 מיליון דולר מוציאים מדי שנה בארה"ב על טיפול אמבולטורי12, ויותר ממיליארד דולר מוציאים מדי שנה בעלויות ישירות עבור הליכים כירורגיים13. למרות המשאבים הכלכליים העצומים המוקדשים לטיפול במצבים אלה, הסיבוכים הנובעים מניתוחי צניחה רבים נותרו מייאשים. לדוגמה, תיקוני צניחה אפיים מבוססי רשת פוליפרופילן, כגון סקרוקולפופקסי, מציעים שיעורי הצלחה גבוהים יותר בהשוואה לתיקוני רקמות מקומיים14, אך במחיר של סיבוכים פוטנציאליים כגון חשיפה לרשת או שחיקה. ה-FDA קיבל כמעט 3,000 תלונות הקשורות לסיבוכי רשת בין השנים 2008 ל-2010 בלבד. זה הגיע לשיאו בהוראה של ה- FDA לעצור את הייצור והמכירה של כל מוצרי הרשת הממוקמים טרנס-וגינלית עבור POP באפריל 201915. לכן, קיים צורך קליני חזק בחומרים שאינם פוליפרופילן, ובמודלים שבעזרתם ניתן לבדוק אותם, שעשויים להגביר את תיקוני צניחת הרקמה הטבעית ולהגדיל את אחוזי ההצלחה בהשוואה לטכניקות מסורתיות עם תפר בלבד.
מאז הודעת ה- FDA בשנת 2019, רוב מנתחי האגן הפסיקו להשתמש ברשת הממוקמת טרנס-וגינלית לתיקוני צניחה, מה שגרם לחוקרים לחפש גישות חדשות להנדסת רקמות כדי להגדיל את תיקוני הרקמות המקוריים16,17,18 כגון עם תאי סטרומה מזנכימליים (MSCs)9,20 . עם שינוי זה במיקוד, יש צורך דחוף בשכלול מודלים של בעלי חיים שיכולים לסייע בפיתוח חומרים חדשים; האתגר בתהליך זה הוא לאזן בין רלוונטיות קלינית לעלות. לשם כך, חוקרים מדעיים בסיסיים וקליניים החוקרים צניחת איברי אגן ניצלו עד כה מספר מודלים של בעלי חיים, כולל חולדות, עכברים, ארנבות, כבשים, חזירים ופרימטים לא אנושיים19. תהליך זיהוי מודל אופטימלי של בעלי חיים הוא מאתגר, שכן בני האדם הם דו-רגליים, אין להם זנב והם עוברים תהליך לידה טראומטי בהשוואה למיני יונקים אחרים20. חזירים21 שימשו להדמיית סקרוקולפופקסיה רובוטית, ואילו כבשים שימשו להדמיית תיקוני צניחת נרתיק22. מודלים אלה של בעלי חיים, למרות שהם רלוונטיים מבחינה קלינית, מוגבלים בהיתכנות על ידי עלות ותחזוקה. פרימטים לא אנושיים שימשו לחקר הפתוגנזה של צניחה; קופי סנאי בפרט הם אחד המינים היחידים מלבד בני אדם שיכולים לפתח צניחה ספונטנית, מה שהופך אותם לאחד המודלים הרלוונטיים ביותר לבעלי חיים20. פרימטים לא אנושיים שימשו גם לחקר הליכים כירורגיים גינקולוגיים כגון sacrocolpopexy23 והשתלת רחם24. בדומה לעמיתיהם הכבשים והחזירים, המגבלה העיקרית של פרימטים לא אנושיים כמודל חייתי לצניחה היא עלות התחזוקה, הטיפול והעלייה למטוס19.
למרות שאגן המכרסם מכוון אופקית עם יחס גודל תעלת ראש ללידה קטן בהרבה בהשוואה לבני אדם19, חולדות מתאימות למחקרים בבעלי חיים קטנים של ניתוחי USLS מכיוון שיש להן אנטומיה USL, תא, ארכיטקטורה היסטולוגית והרכב מטריצה דומים בהשוואה ל- USL25 האנושי. יתר על כן, הם מועילים מבחינת תחזוקה ועלייה למטוס. למרות תכונות מועילות אלה, אין דיווחים שפורסמו על מודל חולדה של תיקון USLS. לכן, המטרה היא לתאר פרוטוקול לכריתת רחם ו-USLS בחולדת לואיס מרובת המשתתפים. פרוטוקול זה יועיל לחוקרים שמטרתם לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת המרכיבים הכירורגיים של POP באמצעות מודל נגיש זה של בעלי חיים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> איור 1: צניחת איברי האגן . (A) הכיוון הנורמלי של איברים בחלל הצפק ו-(B) הירידה הדרמטית של האיברים כאשר מתרחשת צניחה. לאחר כריתת רחם, (C) מתלה הרצועה הרחם מחזיר את הנרתיק ואת המבנים הסובבים אותו למקומם האנטומי הנכון. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

צניחת איברי האגן (POP) היא הפרעה נפוצה ברצפת האגן (PFD) עם פוטנציאל להשפיע באופן משמעותי על איכות החיים של האישה. כ-10%-20% מהנשים עוברות ניתוח לתיקון רצפת האגן לטיפול בצניחה בארצות הברית. מקרי PFD גורמים לעלות שנתית כוללת של 26.3 מיליארד דולר בארצות הברית לבדה. למצב רב-גורמי זה יש השפעה שלילית על איכות החיים ובכל זאת אפשרויות הטיפול רק הידלדלו בעבר הקרוב. אפשרות ניתוחית נפוצה אחת היא מתלה רצועה רחמית (USLS), המבוצעת בדרך כלל על ידי הצמדת קמרון הנרתיק לרצועה הרחם באגן. לתיקון זה שכיחות נמוכה יותר של סיבוכים בהשוואה לאלו עם הגדלת רשת, אך הוא בולט בשיעור כישלון גבוה יחסית של עד 40%. בהתחשב בהיעדר מודלים סטנדרטיים של בעלי חיים לחקר תפקוד לקוי של רצפת האגן, קיים צורך קליני דחוף בחדשנות בתחום זה תוך התמקדות בפיתוח מודלים חסכוניים ונגישים לבעלי חיים. בכתב יד זה, אנו מתארים מודל חולדה של USLS הכולל כריתת רחם מלאה ואחריה קיבוע של קמרון הנרתיק שנותר לרצועה הרחם. מטרת מודל זה היא לחקות את ההליך המבוצע על נשים כדי להיות מסוגלות להשתמש במודל כדי לחקור אסטרטגיות תיקון המשפרות את השלמות המכנית של חיבור הרצועה. חשוב לציין, אנו מתארים גם את הפיתוח של הליך בדיקת מתיחה באתרו כדי לאפיין את שלמות הממשק בנקודות זמן נבחרות לאחר התערבות כירורגית. בסך הכל, מודל זה יהיה כלי שימושי למחקרים עתידיים שיחקרו אפשרויות טיפול לתיקון POP באמצעות USLS.

היתכנות ניתוחית ומיקום תפר הרחם לא היו סיבוכים תוך ניתוחיים הקשורים לכריתת רחם או מתלה רצועה רחמית באף אחד מהחיות. היה דימום מינימלי במהלך הסרת קרני הרחם, בתנאי שהווסקולטורה הסמוכה הודקה לפני ההסרה. דימום מוגבל איפשר הדמיה טובה של רצועות הרחם למיקום התפרים ומנע פגיעה תוך ניתוחית במעי, פי הטבעת, בשופכה או בשלפוחית השתן. לאחר מיקום התפרים, צומת הקמרון USL-נרתיק שזה עתה נוצר מנע תזוזה של גדם צוואר הרחם כפי שמוצג באיור 5C. במהלך שלושת הימים הראשונים שלאחר הניתוח, בעלי החיים נבדקו על בסיס יומי, ולאחר מכן על בסיס דו-שבועי עד סוף הניסוי. עם משככי הכאבים אופיואידים ונוגדי דלקת NSAID שניתנו בשחרור מורחב בזמן הניתוח, נמצאו משככי כאבים נוספים כמיותרים. בהתבסס על הניסיון שלנו עם 16 ניתוחים בבעלי חיים (n = 8 הן עבור קבוצת הביקורת והן עבור קבוצת USLS), יש לצפות לירידה במשקל בשבוע הראשון לאחר הניתוח עם ירידה ממוצעת של 5.7 ± 1.4% ממשקל יום הניתוח. כצפוי, החולדות עלו במשקל באיטיות במהלך 23 השבועות שלאחר מכן, עם עלייה ממוצעת במשקל של 15.1 ±-4.5% במהלך הניסוי.
בדיקות מכניות של תיקון USLS כדי להדגים את הפונקציונליות של תיקון USLS, בוצעה בדיקת מתיחה חד צירית. לאחר המתת חסד של בעל החיים בנקודת הזמן שנבחרה לאחר הניתוח, 24 שבועות במחקר זה, יש לנתח בזהירות את אזור הניתוח כדי להמחיש את צומת הקמרון USL-הנרתיק כפי שמוצג באיור 6A. בהשוואה למתודולוגיות אחרות לבדיקת USL של חולדות יחד עם מבנים תומכים אחרים ואיברי אגן29,42, השיטה המתוארת כאן היא הראשונה שבודקת את USL החולדה באופן מבודד. סרט הטבור ששימש במחקר זה נבחר אסטרטגית בשל גמישותו מכיוון שהתאמת הסרט אפשרה הפרעה מינימלית של הרקמה במהלך הכנת בדיקת המתיחה. לפיכך, יש להתאים את נתוני תזוזת העומסים כדי לקחת בחשבון את כמות המתיחה הקטנה שנתרמה על ידי סרט הטבור. איור 9 מספק דוגמה לנתונים שהתקבלו באמצעות בדיקות מתיחה, כאשר איור 9A מספק דוגמה לתרשים טיפוסי של מתח מתח. דיווח על נתוני מתח מאמץ מומלץ מכיוון שמידע זה מנורמל ובלתי תלוי בגודל הדגימות34 וניתן להשוות אותו טוב יותר בין מחקרים. עבור הרצועה הטרוסאקרלית התקינה, אנו מדווחים על תכונות מבניות כגון עומס אולטימטיבי (2.9 ± 0.5 N) ונוקשות (0.4 ± 0.1 N/mm) כמו גם תכונות חומר מנורמלות כגון מתח אולטימטיבי (2.1 ± 0.4 MPa), מאמץ אולטימטיבי (1.6 ± 0.5) ומודולוס משיק (4.0 ± 1.1 MPa). בבדיקות החד-ציריות שבוצעו על איברי הרבייה של החולדות ועל כל קשרי הרקמות התומכות שלהן על ידי Moalli et al., הם דיווחו על עומס אולטימטיבי בעת כישלון (13.2 ± 1.1 N) ונוקשות (2.9 ± 0.9 N/mm) גבוה יותר מאשר USL29 המבודד. העבודה שנעשתה על ידי Moalli et al. וספרות אחרת34,35 מציינת את השונות הגבוהה בין הדגימות שנבדקו כפי שמוצג בנתונים המוצגים כאן. עבור תיקון מתלה הרצועה הרחם, מצאנו שכל תכונות החומר המבני (קשיחות, 0.33 ± 0.13 N/mm; עומס אולטימטיבי, 2.6 ± 1.3 N) ותכונות החומר המנורמלות (מתח אולטימטיבי, 1.8 ± 0.7 MPa; זן אולטימטיבי 1.3 ± 0.3; מודולוס משיק, 3.0 ± 0.9 MPa) היו נמוכות יותר מאלו של USL המקורי.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

צניחת איברי האגן משפיעה על מיליוני נשים ברחבי העולם, ובכל זאת כמה התערבויות כירורגיות נפוצות יש שיעורי כישלון גבוהים עד 40%. היעדר מודלים סטנדרטיים של בעלי חיים כדי לחקור מצב זה מעכב את ההתקדמות. אנו מציעים את הפרוטוקול הבא כמודל להשעיית רצועות הרחם ולבדיקת מתיחה in vivo .

פיתוח מודל חולדה של תרחיף רצועה רחמית

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

הפרוטוקול שלנו הוא אחד הראשונים המשתמשים במודל חולדה כדי לתאר את ניתוח מתלה הרצועה הרחם, ולכן יכול באמת לשמש כתוכנית לחוקרים עתידיים לחקור תוצאות פרה-קליניות ושינויים של הניתוח. הרצועה הראוסאקרלית דומה באנטומיה, בתא, בארכיטקטורה היסטולוגית ובהרכב בהשוואה לרצועה הרחם האנושית. רכיבים אלה, בשילוב עם העלות, היתרונות וההיתכנות הופכים אותו למודל נהדר באמת לחקר הגדלה ותוצאות של ניתוח מתלה הרצועה הרחם.שיטת בדיקת המתיחה יכולה להיות מותאמת לשימוש במודלים אחרים של בעלי חיים ברצפת האגן. בנוסף, חוקרים עתידיים יוכלו להשתמש במערך ניתוח כללי כדי ליידע ניתוחי צניחה אחרים ומכרסמים כמו סקרוקולפופקסי. כדי להתחיל, ללבוש חלוק כירורגי, כיסוי ראש, מסכה, וכפפות סטריליות.עטפו את החיה בשדה סטרילי והותירו רק את הבטן חשופה. ייתכן שיש דימום מסוים עקב טראומה מחיתוך סביב זוג הפטמות הקאודליות. במידת הצורך, זה יכול להיעשות המוסטטי עם לחץ או כסף חנקתי.בצע חתך של שבעה סנטימטרים במורד linea alba ממש מתחת לתהליך xiphoid לקו הפטמה התחתון באמצעות להב אזמל. החתך צריך להסתיים 0.5 עד סנטימטר אחד rostro מן פתח השופכה. לאחר מכן בצע חתך דרך שכבת השריר שמתחת.להרכיב את retractor הבטן ולבדוק את חלל הבטן. באמצעות מלקחיים הקשתית, אתר בעדינות את קרן הרחם השמאלית. הרימו בעדינות את קרן הרחם השמאלית בעזרת גרזן או מהדק יתושים.התחל כריתת רחם על ידי קשירת הקרן מתחת לשחלה ו oviduct באמצעות מהדק יתוש. כדי להמשיך את כריתת הרחם, מהדקים וחותכים את כלי הדם, רקמת החיבור והשומן הסמוכים מקרן הרחם באמצעות מספריים זעירים. זכור להדק את רקמת החיבור לפני ההסרה כדי להפחית את הדימום.הניחו את המהדקים קרוב ככל האפשר לממשק הרחם, ועד לצומת הרחם. מהדקים את קרן הרחם בסמוך לנקודת הביפורקציה באמצעות מלקחיים של יתושים. הבלו את הקרן ipsilateral רק cephalad למהדק כדי למנוע דימום.בשל הקליבר הקטן של כלי החולדה, קשירת גדמי הרחם עם מהדק זמני הספיקה לניתוח זה. עם זאת, טכניקה זו יכולה להשתנות לפי הצורך על ידי איטום הפדיקלים עם electrocautery או קשירת תפרים. כוונן את משענת הבטן כדי לחשוף את האגן התחתון.יש לבדוק את קמרון הנרתיק החשוף ואת רצפת האגן התומכת ברקמות רצועה וחיבור המחוברות לנרתיק ולצוואר הרחם. זהה את השופכן דו צדדי, שהוא רק מדיאלי לשחלות. זהה את הרצועות הרחם אשר ניתן למצוא מחובר צוואר הרחם ממש מתחת לגדם הנותרים של קרני הרחם.הרצועה נעוצה בכיוון המדיאלי של הצפלד לכיוון העצה. שים תפר שלושה אפס פולידיוקסאנון על מחט מחודדת קטנה ומניחים תפר דרך הרצועה הרחם השמאלית הממוקמת גבוה על הרצועה וקרוב לעצה. משכו בתפר כדי לוודא שהוא תפס את הרצועה הרחם, וודאו שמבנה הרצועה נכנס לצוואר הרחם כאשר המקור מתחלק מאחורי פי הטבעת, שם הוא מתחבר לעצה.שוב, זהה את השופכן כדי לוודא שהוא לא שולב או עוקם בתפר הרחם. לאחר מכן להעביר את תפר הפולידיוקסאנון השמאלי דרך האספקט השמאלי של קמרון הנרתיק תוך שילוב ההיבטים הקדמיים והאחוריים של השרוול הנרתיקי. חזור על שלבים אלה כדי להשלים את הליך השעיית הרצועה הרחם בצד ימין.לאחר שהתפרים הרחםיים ממוקמים באופן דו צדדי, קשרו היטב את התפר באמצעות קשר מרובע כך שהקמרון הנרתיקי מוגבה לכיוון העצה. ראשית, יש לנתח את רקמת השומן עד להופעת קמרון הנרתיק. המשך להסיר את רפידות שומן הבטן עד שהרצועה הרחם השלמה נראית בבירור או בצומת שבין הרצועה הרחם לקמרון הנרתיק גלויה.באמצעות סרגל גמיש, למדוד את המרחק בין החדרת הרחם לבין קמרון הנרתיק כדי להעריך את האורך המקורי של הרקמה. חוט סרט טבור מאחורי הרצועה הטרוסאקרלית השלמה או צומת ההשעיה של הרצועה הרחם כך שהרקמה ממורכזת בסרט הטבור. מדוד את הגובה והרוחב של הרקמה במקום שבו היא מצטלבת עם סרט הטבור באמצעות קליפר דיגיטלי.כדי להעריך את הערכים, משמש לחישוב שטח חתך. לבדיקת מתיחה, מקמו את בעל החיים כך שהדגימה תהיה ממורכזת מתחת לאחיזה. לשתק את אזור האגן המקיף את הדגימה על ידי אבטחת החיה לצלחת.הנמיכו את תאי העומס כך שהזנבות של סרט הטבור יגיעו בקלות לאחיזה. אבטח את סרט הטבור באחיזה והשאיר את הסרט רפוי כדי למנוע מניפולציה של הדגימה. לאחר מכן פתח את בדיקת ההתניה מראש בממשק התוכנה ותייג את הבדיקה בשם המדגם.ודא ששיטת ההתניה מראש כוללת את שלב הטעינה מראש. לחץ כדי להתחיל את בדיקת ההתניה המוקדמת אשר תעמיס מראש את הדגימה ב 0.015 ניוטון. לאחר שכוח ההעמסה מראש יציב, הבדיקה תתנה את הדגימה בקצב התארכות של 0.1 מילימטרים לשנייה למשך 30 שניות.לאחר 30 שניות, לאפשר את הרקמה לנוח במשך דקה אחת. בינתיים, לטעון את המשיכה למשטר בדיקות כישלון. תייג את הבדיקה בשם הדוגמה ולחץ על הבא כדי להגיע לחלון הבא.הזן את אורך המד של הדגימה ולאחר מכן לחץ על הבא כדי לעבור לדף הבדיקה. אזנו הכל ולחצו על התחל. אפשר לבדיקה לרוץ בקצב התארכות של 0.1 מילימטר לשנייה עד שהרקמה נמשכה לכישלון.הבדיקה תפיק נתוני תזוזת עומס. לאחר מיקום התפרים בפרוטוקול זה, הצומת החדש שנוצר בין הרצועה הרחם לקמרון הנרתיק הוגבה לכיוון עצם העצה ומנע תזוזה של גדם צוואר הרחם. עבור דגימת תרחיף רצועה ורצועה אוטרוסקרלית תקינה, בדיקת מתיחה הוערכה על ידי חלקות כגון עקומת תזוזת עומס, ניתוח מאמץ ומשוואת התאמת עקומת הקו.הנתונים הראו כי כל תכונות החומר המבני של מדגם התיקון היו נמוכות יותר מאלו של הרצועה הרחם המקומית. המבנים קטנים, ולכן זיהויים דורש תרגול של דיסקציה קפדנית. תיאטרון ספציפי יכול להיות מאתגר לזיהוי, ולכן היקף ניתוח עשוי להיות שימושי.היינו מציעים גם להתאמן עם ניתוחי גופות לפני ניתוחי הישרדות. אנו מתארים מסלול להגדלת מתלה הרצועה הרחם וכן מתודולוגיה חדשנית לבדיקה מכנית של הרצועה. המטרה היא שההגדלה המתוארת בפרוטוקול שלנו תהפוך את ניתוח הצניחה למוצלח יותר בעתיד, ולכן טוב יותר למטופלים.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

פיתוח מודל חד צדדי, lesioned מאוס 6-OHDA של מחלת פרקינסון

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

מודל עכברים של שיבוש מחסום דם מוח כדי לאפשר ממוקד Therapeutics Neurovascular

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

דגם של עירוי מזין כרוני בחולדה

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

פיתוח של מודל עכברוש מבוסס אלפא-synuclein עבור מחלת פרקינסון באמצעות הזרקת stereotactic של וקטור ויראלי הקשורים מוקטורים

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

מודל הפיברוזיס Dimethylnitrosamine מושרה בחולדה

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

כירורגיה שאנט, צנתור לב ימני, וכלי הדם Morphometry במודל חולדה עבור נגרמת זרימה ריאתי עורקי יתר לחץ דם

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

דיקור במודל עכברוש של אסטמה

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

שיטה לא פולשנית ליצירת מודל סחוס תוך מפרקי הנגרם על ידי העמסה מחזורית של ברך החולדה

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...